Abstrakt

Maqsad: Sistanche o'z ichiga olgan formulaning (asl qonni oziqlantiruvchi va buyrakni tonlaydigan o'simliklarni almashtirish) o'sish omili- 2 (TGF- 2) ifodasini o'zgartirishga, sklera remodelatsiyasiga va shaklsiz miyopiya (FDM) kalamushlari kaolin1kva1) kalamushlarni qayta tiklashga ta'sirini o'rganish. (AQP1) yo'li.

Usullari: Qirqta SPF darajasidagi erkak SD kalamushlari tanlab olindi, ulardan 30 tasi FDM modelini yaratish uchun ishlatilgan. Muvaffaqiyatli modellashtirishdan so'ng, kalamushlar FDM guruhiga, pirenzepin (PIR) guruhi va Cistanche formula guruhiga bo'lingan, har bir guruhda 10 ta kalamush. Qolgan 10 ta modellashtirilmagan kalamush oddiy guruh bo'lib xizmat qildi. Oddiy guruh va FDM guruhi hech qanday aralashuvni olmagan. PIR guruhi kuniga ikki marta (ertalab va kechqurun) PIR ko'z tomchilari bilan davolandi, Cistanche formula guruhiga esa Cistanche o'z ichiga olgan formulani intragastral yuborish berildi. Retinoskop va diagnostika asbobi yordamida kalamushlarning sinishi xatosi va eksenel uzunligi aniqlandi. HE bo'yash sklera to'qimalarining morfologik o'zgarishlarini kuzatish uchun ishlatilgan. Sklera to'qimalarida TGF- 2 ifodasini aniqlash uchun immunohistokimyoviy bo'yash qo'llanildi. Western blot sklera to'qimalarida AQP1 va CAV1 oqsillarining nisbiy ifoda darajasini aniqlash uchun ishlatilgan. Sklera to'qimalarida glutamat-aspartat tashuvchisi (GLAST) va glutamat tashuvchisi 1 (GLT-1) mRNKning nisbiy ifoda darajasini o'lchash uchun RT-PCR o'tkazildi. Natijalar: Oddiy guruh bilan solishtirganda, FDM guruhi, Cistanche formula guruhi va PIR guruhidagi AQP1 va CAV1 oqsillarining sinishi xatosi, TGF- 2 ifoda darajasi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada kamaydi, GLAST mRNA va GLT-1 mRNKning eksenel uzunligi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada oshdi (P <05). FDM guruhi bilan taqqoslaganda, Cistanche formulalar guruhi va PIR guruhidagi AQP1 va CAV1 oqsillarining sinishi xatosi, TGF- 2 ifoda darajasi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada oshdi, GLAST mRNK va GLT-1 mRNK ning eksenel uzunligi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada kamaydi (barchasi P <005). Cistanche formula guruhi bilan taqqoslaganda, PIR guruhidagi AQP1 va CAV1 oqsillarining sinishi xatosi, TGF- 2 ifoda darajasi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada kamaydi, GLAST mRNK va GLT-1 mRNK ning eksenel uzunligi va nisbiy ifoda darajalari sezilarli darajada oshdi (barchasi P <0,05). HE bo'yash natijalari normal guruhdagi har bir retinal qatlamning tuzilishida g'ayritabiiy o'zgarishlar yo'qligini ko'rsatdi; FDM guruhining to'r pardasi yupqalashgan va ganglion hujayra qatlamida og'ir vakuolyar o'zgarishlar paydo bo'lgan; Cistanche formula guruhi va PIR guruhining retinal qalinligi oshirildi, hujayra tuzilishi asosan muntazam edi, ganglion hujayralari soni ko'paydi va har bir qatlamdagi hujayralar zich joylashgan bo'lib, Cistanche formula guruhida eng muhim ko'rsatkichga ega. Xulosa: Cistanche o'z ichiga olgan formula FDMni davolashga ma'lum ijobiy ta'sir ko'rsatadi va uning mexanizmi CAV1, AQP1 va TGF- 2 ifodasini tartibga solish, shuningdek, sklerani qayta qurish va suv tashish funktsiyalarini muvozanatlash va yaxshilash bilan bog'liq bo'lishi mumkin.

 

 

BUYRAK FUNKSIYASINI YAXSHIRISH UCHUN CISTANCHE O'TLARI QO'SHIMASI

 

 

Kalit so'zlar

Shakldan mahrum bo'lgan miyopi; Cistanche o'z ichiga olgan formula; Transformatsion o'sish omili- 2; Aquaporin 1; Kaveolin-1; Sklerani qayta qurish; Suv transporti

 

So'nggi yillarda odamlarning turmush tarzidagi o'zgarishlar va elektron qurilmalarning uzluksiz rivojlanishi bilan miyopi bilan kasallanish ko'paymoqda. Umumiy kasallik sifatida u global sog'liq muammosiga aylandi. Shakldan mahrum bo'lgan miyopi (FDM) - bu miyopining maxsus turi bo'lib, u odatda ko'zlarning vizual stimulyatsiyasini yo'qotish yoki kamaytirish natijasida yuzaga keladi. FDM nafaqat sklerani qayta qurish jarayoniga xalaqit beradi, balki ko'z olmasining shaklidagi g'ayritabiiy o'zgarishlarga va suv tashish funktsiyasining buzilishiga olib keladi, bu esa sklera to'qimalarining shikastlanishi va deformatsiyasini yanada kuchaytirishi mumkin. Aquaporin 1 (AQP1) keng tarqalgan protein bo'lib, uning asosiy vazifasi suv molekulalarining hujayra membranalari orqali tez o'tkazilishini ta'minlashdir. Ko'zda AQP1 ning tarqalishi va funktsiyasi ko'z ichi suyuqligining dinamik muvozanati bilan bog'liq. Kaveolin-1 (CAV1) hujayra membranalarining mikro tuzilmalarini shakllantirish va signal uzatishda ishtirok etadigan oqsildir. Ko'zda CAV1 asosan retinal pigment epiteliya hujayralarida va fotoreseptor hujayralarida mavjud bo'lib, vizual signallarning uzatilishi va ko'z ichi muhitining barqarorligi bilan bog'liq. Transformatsiya qiluvchi o'sish omili- 2 (TGF- 2) pleiotropik sitokin bo'lib, hujayra proliferatsiyasi, differentsiatsiyasi va migratsiyasini rag'batlantirish kabi bir nechta biologik ta'sirga ega. Ko'z ichi muhitida TGF- 2 shox parda va skleraning rivojlanishi va saqlanishida muhim rol o'ynaydi. Hozirgi vaqtda FDM uchun asosiy davolash dori terapiyasi hisoblanadi.

An'anaviy xitoy tibbiyotida (TCM) miyopi shakllanishi qi va qonning etarli emasligi va buyrak mohiyati etishmovchiligi kabi omillar bilan bog'liq deb hisoblanadi. Buyrak "tug'ma asos" sifatida qaraladi va ko'zning funktsiyasi bilan chambarchas bog'liq. TCM "buyrak mohiyatni boshqaradi, mohiyat esa ko'zni oziqlantiradi; jigar ko'zlarga ochiladi va etarli miqdorda jigar qoni aniq ko'rishni ta'minlaydi" deb ta'kidlaydi. Shu sababli, buyrakni tonlash va qonni oziqlantirish har doim TCMdagi etishmovchilik sindromlari tufayli kelib chiqqan ko'z kasalliklari uchun muhim terapevtik tamoyil bo'lib kelgan.

"Cho'l jenshen" sifatida tanilgan va TCMda "to'qqizta o'lmas dori" dan biri bo'lgan Cistanche dorivor tarkibiy qism sifatida 2000 yildan ortiq tarixga ega. Qadimgi TCM klassikalarida yuqori darajadagi oziqlantiruvchi dorivor material sifatida qayd etilgan Cistanche buyrakni tonlash, mohiyatini to'ldirish, qonni oziqlantirish va quruqlikni namlash ta'siri uchun juda qadrlanadi. Boshqa ko'plab TCM o'tlaridan farqli o'laroq, Cistanche faqat cho'llarda o'sadi, asosan Xitoyning Shinjon, Ichki Mo'g'uliston va Gansu kabi hududlarida Tamarix ramosissima ildizlarida parazitlik qiladi. Noyob cho'l muhiti uni boy faol moddalar, jumladan, kuchli antioksidant xususiyatlarga ega ekanligi, hujayra apoptozini kamaytirishi va hujayra proliferatsiyasini rag'batlantirishi ilmiy jihatdan isbotlangan echinacoside, verbascoside va flavonoidlar bilan ta'minlaydi.

Zamonaviy tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, Cistanche buyrakni oziqlantiruvchi ta'sirga ega. Buyrak hujayralari apoptozini kamaytiradi, buyrak hujayralarining ko'payishini rag'batlantiradi, shikastlangan buyrak hujayralarini tiklaydi va buyrak qon tomirlarini kengaytiradi va shu bilan buyraklar faoliyatini yaxshilaydi. Bundan tashqari, Cistanche limfotsitlar ko'payishini rag'batlantirish orqali immunitetni oshirishi, jigarda glikogen ishlab chiqarishni ko'paytirish orqali charchoqqa qarshi turishi va erkin radikallarni tozalash orqali qarishga qarshi ta'sir ko'rsatishi mumkin. Ushbu biologik faoliyatlar TCMning "buyrakni tonlash va oziqlantiruvchi mohiyat" nazariyasiga juda mos keladi va uni ko'z kasalliklarini davolashda qo'llash uchun ilmiy asos yaratadi. Buyrakni tonlash va qonni oziqlantirish TCM terapevtik printsipiga asoslanib, va Cistanche zamonaviy farmakologik xususiyatlarini uyg'unlashtirgan holda, ushbu tadqiqot asl qonni oziqlantiruvchi va buyrakni tonlaydigan o'tlarni Cistanche bilan almashtirib, yangi Cistanche o'z ichiga olgan formulani hosil qildi va uning samaradorligi va mexanizmini o'rganib chiqdi. miyopi.

1 Materiallar va usullar

1.1 Eksperimental hayvonlar

Og'irligi 180-200 g va yoshi 6-8 haftalik bo'lgan qirqta SPF sinfidagi erkak SD kalamush Pekin Keyu hayvonlarni ko'paytirish markazidan sotib olindi [Litsenziya №: SCXK (Jing) 2022-0004] va Xitoy Tibbiyot fanlari akademiyasi akademiyasi hayvonot laboratoriyasida muntazam ravishda boqiladi. Ushbu tajriba "Tajribaviy hayvonlarni boshqarish to'g'risidagi Nizom" ning tegishli qoidalariga mos keladi va Xitoy Tibbiyot fanlari akademiyasi Xitoy Ko'z kasalxonasining Tibbiy etika qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (To'plam raqami: YKEC-KT-2024-017-P001).

1.2 Asosiy reaktivlar va asboblar

Dorivor material sifatida Cistanche tubulosa (Chengdu WeCistanche Bio-Tech. Co., Ltd.dan sotib olingan, faol moddalar, jumladan, echinacoside 30,0% dan katta yoki teng, verbascoside 12,0 dan katta yoki teng va umumiy fenetil spirt glikozidlari 75,0% dan katta yoki teng) ishlatilgan. Pirenzepin (PIR, Suzhou Hongsen Pharmaceutical Co., Ltd.); Murakkab tropikamid ko'z tomchilari (Hebei Jinyao Yongguang Pharmaceutical Co., Ltd., spetsifikatsiyasi 5 ml); 4 g·L⁻¹ Oksibuprokain gidroxlorid ko'z tomchilari (Shandong Bausch & Lomb Freda Pharmaceutical Co., Ltd.); AQP1 antikori (Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.); CAV1 antikorlari (Wuhan Botu Biotechnology Co., Ltd.); -aktin antikorlari (Shanghai Jingke Chemical Technology Co., Ltd.); Echki quyonga qarshi IgG (Wenzhou Kemiao Biotechnology Co., Ltd.); HE binoni to'plami (Shanghai Zeye Biotechnology Co., Ltd.).

1.3 Modellashtirish usuli va guruhlash

FDM modelini yaratish uchun o'ttizta kalamush ishlatilgan. Kalamushlar pentobarbital natriyni (30 mg·kg⁻¹) qorin bo'shlig'iga yuborish orqali behushlik qilishdi. O'ng ko'zni povidon-yod bilan tozalash va dezinfektsiyalashdan so'ng, o'ng ko'zga shaffof bo'lmagan ko'z niqobi yopishtirilgan. Ko'z niqobi har kuni ajratilgan yoki yorug'lik oqmasligi uchun tekshirilgan va agar bo'shashgan bo'lsa, qayta yopishtirilgan. Chap ko'z davolanmasdan qoldi. 4 haftalik monokulyar shakldan mahrum bo'lgandan so'ng, kalamushlarda binokulyar retinoskopiya va eksenel uzunlikni o'lchash amalga oshirildi. Modellashtirishning muvaffaqiyat mezonlari: sikloplejidan so'ng sinishi xatosi retinoskop yoki avtomatik refraktometr yordamida o'lchandi va mahrum ko'z sinishi holatida sezilarli miyopik siljishni ko'rsatdi [ya'ni binokulyar sinishi xatosi 2 D dan katta yoki unga teng bo'lgan farq muvaffaqiyatli modellashtirish deb hisoblandi va nazoratsiz ko'zning o'rtacha miyopik siljishi taxminan ± 2 ). D]. Barcha 30 kalamush muvaffaqiyatli modellashtirildi va har bir guruhda 10 ta kalamush bilan FDM guruhi, PIR guruhi va Cistanche formula guruhiga bo'lingan. Qolgan 10 ta modellashtirilmagan kalamush oddiy guruh bo'lib xizmat qildi.

1.4 Interventsiya usullari

Oddiy guruh va FDM guruhi hech qanday aralashuvni olmagan. PIR guruhiga kuniga ikki marta (ertalab va kechqurun) 15 kun davomida 2 daqiqalik interval bilan o'ng ko'ziga 5 tomchi PIR ko'z tomchilari berildi. Cistanche formulalar guruhiga Cistanche o'z ichiga olgan formulalar aralashdi. Cistanche tubulosa (50 g, asosiy tarkibiy qism) suv bilan qaynatiladi va 1000 g·L⁻¹ konsentratsiyasi bo'lgan dorivor eritmaga konsentratsiyalanadi. Kalamushlarga 15 kun davomida kuniga bir marta 12,70 g kg⁻¹ dozada oshqozon ichiga yuborildi. Cistanche dozasi uning klinik qo'llash tajribasi va zamonaviy farmakologik tadqiqotlar asosida aniqlandi, bu echinacoside va verbascoside kabi faol moddalarning samarali kontsentratsiyasini ta'minlaydi.

1.5 Aniqlash usullari

1.5.1 Sinishi xatosi va eksenel uzunlikdagi o'zgarishlarni baholash

Morfologik va sinishi xatolarini aniqlash: Shaklni yo'qotish tugaganidan yigirma to'rt soat o'tgach, aniqlash uchun har bir guruhdan tasodifiy 3 ta kalamush tanlab olindi. Tajribadan oldin kalamushlar 30 daqiqa davomida qorong'i muhitga joylashtirildi, so'ngra izofluran inhalatsiyasi bilan behushlik qilindi va hayvonlar uchun maxsus qavsga o'rnatildi. Ko'z olmasini panoramik skanerlash uchun yuqori aniqlikdagi OKT tasvirlash tizimi ishlatilgan. Skanerlash vaqtida zond retinaning va linzalarning aniq tasavvurlar tasvirini olish uchun shox pardaga perpendikulyar qilib o'rnatildi. Har bir ko'z ketma-ket 3 marta skanerdan o'tkazildi va sferik ekvivalent sinishi xatosini hisoblash uchun tizimning o'rnatilgan dasturiy ta'minoti orqali shox pardaning oldingi yuzasidan to'r pardasi pigment epiteliy qatlamigacha bo'lgan eksenel masofa (ya'ni, eksenel uzunlik) avtomatik ravishda o'lchandi. Ma'lumotlarning to'g'riligini ta'minlash uchun ikkita professional tayyorgarlikdan o'tgan tadqiqotchi rasmlarni ko'r-ko'rona mustaqil ravishda tahlil qildilar. Agar ikkita o'lchov natijalari orasidagi farq 0,50 D dan katta bo'lsa, ma'lumotlar o'chirildi va qayta o'lchandi. Eksenel uzunlikni tasdiqlovchi aniqlash: OKT o'lchov natijalarini tekshirish uchun A-skanerlash ultratovush diagnostikasi vositasi ham ishlatilgan. Birinchidan, oksibuprokain gidroxlorid ko'z tomchilari topikal behushlik uchun kalamushlarning ikkala ko'ziga tomizildi, so'ngra A-skanerlash probi muloyimlik bilan shox parda bilan aloqa qildi. Asbob qo'lda rejimga o'rnatildi va aniq ultratovushli tarqalish tezligi ko'z ichi muhitiga qarab o'rnatildi: old kamera va vitreus uchun 1540 ms⁻¹. Ishlash vaqtida har bir interfeys qo'lda belgilash orqali joylashgan va har bir ko'z o'rtacha qiymatni olish uchun 3 marta takroriy o'lchangan. Ushbu tajriba ko'r-ko'rona amalga oshirildi va barcha operatorlar izchil o'lchash texnikasini ta'minlash uchun yagona treningdan o'tdilar. Asbob o'lchashdan oldin kalibrlangan va sinf ichidagi va sinflararo korrelyatsiya koeffitsientlarini (ICC) baholash uchun takroriylik sinovi uchun ba'zi namunalar tasodifiy tanlangan. Eksperiment davomida ma'lumotlarning ilmiyligi va ishonchliligini ta'minlash uchun qat'iy standartlashtirilgan ish tartib-qoidalariga rioya qilindi.

1.5.2 HE bo'yash

Sinishi xatosi va eksenel uzunlikni aniqlagandan so'ng, kalamushlar haddan tashqari behushlik bilan qurbon qilindi. Ikkala ko'zning qovoqlari va uning atrofidagi to'qimalar dezinfektsiya qilindi, shox pardaning o'rta nuqtasiga perpendikulyar bo'lgan burun va temporal limbus belgilandi. Belgilar bo'yicha kon'yunktiva kesilgan va ko'z olmasi enukleatsiya qilingan. Oldingi segment to'qimasini va shishasimonni olib tashlash uchun limbus kesilgan va sklera to'qimasi saqlanib qolgan. Sklera to'qimasi 24 soat davomida 40 g L⁻¹ paraformaldegid bilan fiksatsiya qilindi, gradient etanol bilan suvsizlandi, muntazam ravishda kerosinga solingan, ksilen bilan tozalangan, neytral balzam bilan o'rnatilgan, 5 mkm bo'laklarga bo'lingan, HE bilan bo'yalgan va skleral mikroskop ostida morfologik o'zgarishlar kuzatilgan.

1.5.3 Sklera to'qimasida TGF- 2 ifodasini immunohistokimyoviy bo'yash

Har bir guruhdan ikkita kalamush tanlab olindi. Sklera to'qimalarining bo'limlari antigen olish va blokirovka qilishdan o'tkazildi, 24 soat davomida sichqoncha anti-TGF- 2 (1:3000) bilan inkubatsiya qilindi, yuvildi, ikkilamchi antikor (1:2000) bilan 1 soat davomida inkubatsiya qilindi, muntazam ravishda ishlab chiqilgan va qarama-qarshi bo'yalgan, neytral to'qimalarga o'rnatilgan, optik balzam33 ostida olingan tasvirlar olingan. o'zgarishlar. Ijobiy qismning kulrang qiymati tasvirni tahlil qilish tizimi tomonidan aniqlandi.

1.5.4 Sklera to'qimalarida AQP1 va CAV1 oqsillarini ifodalash darajasini Western Blot yordamida aniqlash

Har bir guruhdan ikkita kalamush tanlab olindi. Sklera to'qimasi kesildi, homogenlashtirildi va RIPA lizis tamponini qo'shish orqali umumiy protein ajratildi. Proteinning denatüratsiyasi, miqdorini aniqlash, elektroforez, membranani o'tkazish va blokirovka qilish amalga oshirildi. Birlamchi antikorlar AQP1 (1:1000), CAV-1 (1:3000) va -aktin antikorlari (1:2000) qo'shildi va bir kechada 4 daraja haroratda inkubatsiya qilindi. Ikkilamchi antikor (1:2000) qo'shildi va xona haroratida 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. ECL reaktivi qo'shildi va oqsilning kulrang qiymati Image Lab dasturi bilan tahlil qilindi. Maqsadli bandning kulrang qiymatining -aktinga nisbati uning nisbiy ifoda darajasi edi.

1.5.5 Sklera to'qimasida GLAST va GLT-1 mRNK ifodasini RT-PCR yordamida aniqlash

Sichqonlarning qolgan sklera to'qimalari olindi va umumiy RNK Trizol usuli bo'yicha ajratildi. Umumiy RNK spektrofotometr bilan o'lchandi va cDNK to'plamdagi ko'rsatmalarga muvofiq teskari transkripsiya qilindi. RT-PCR reaktsiya tizimi quyidagi reaksiya sharoitlari bilan tayyorlangan: 30 s uchun 75 daraja, 60 s uchun 85 daraja, 30 s uchun tavlanish uchun 80 daraja, 30 s uchun uzaytirish uchun 65 daraja, jami 40 tsikl. Ichki mos yozuvlar sifatida -aktin bilan glutamat-aspartat tashuvchisi (GLAST) va glutamat tashuvchisi 1 (GLT-1) ning nisbiy ifoda darajalari 2⁻DDCt usuli bilan hisoblab chiqilgan. Primer ketma-ketliklari 1-jadvalda ko'rsatilgan. Guruhlar o'rtasidagi taqqoslash uchun bir tomonlama dispersiya tahlili, guruhlar o'rtasida juftlik bilan taqqoslash uchun LSD-t testi qo'llanilgan. Sinov darajasi:=0.05.