Sichqonlarda deksametazondan kelib chiqqan sarkopeniyaga Cistanche Deserticola ekstraktining terapevtik ta'siri va mexanizmlarini o'rganish

Annotatsiya:Ushbu tadqiqot o'rganildiCistanche deserticola ekstraktining terapevtik ta'siri (CdE)sichqonlarda deksametazon (Dex) keltirib chiqaradigan sarkopeniya va ta'sir qilishning mumkin bo'lgan mexanizmi bo'yicha.Birinchi navbatda, Cistanche ning farmakodinamik komponentlari va muhim maqsadlari tarmoq farmakologiyasi tomonidan o'rganildi va CdE ta'sir mexanizmini bashorat qilish uchun yo'llar boyitilgan. Hayvonlar tajribalarida 50 KM sichqonlari tasodifiy 5 guruhga bo'lingan (nazorat guruhi, Dex model guruhi, CdEhigh-dose guruhi, CdE o'rta dozali guruh va CdE past dozali guruh). Nazorat guruhidan tashqari, boshqa guruhlar 42 kundan keyin sarkopeniyani qo'zg'atish uchun teri ostiga AOK qilindi va uchta davolash guruhiga bir vaqtning o'zida og'iz orqali CdE ning turli dozalari berildi. Tajriba davomida hayvonlarning vazni, mashq qilish qobiliyati va tana tuzilishi muntazam ravishda tekshirildi. Hayvonlar qurbon bo'lgandan so'ng, orqa oyoq-qo'llarining mushak koeffitsienti hisoblab chiqildi, gistologiya va tegishli gen ekspresyon testlari o'tkazildi. Tarmoq farmakologiyasi natijalari shuni ko'rsatadiki, CdE sarkopeniyani IGF-1-qayta bog'langan signal yo'llarini tartibga solish orqali davolashi mumkin. Hayvonlarda o'tkazilgan tajribalar natijalari shuni ko'rsatadiki, CdE Dex tufayli kelib chiqqan yog'siz go'sht miqdori va mushak koeffitsientining pasayishini sezilarli darajada kamaytiradi, mashqlar qobiliyatini yaxshilaydi, yog 'miqdorini kamaytiradi, mushaklarning gistologik holatini yaxshilaydi, IGF-1, MyoD va MyoGni yuqori tartibga soladi va Atrogin-1 va MuRF-1 ifodasini pasaytiradi. CdE Deks bilan qo'zg'atilgan mushak atrofiyasiga terapevtik ta'sir ko'rsatadi va mushaklarning gistologik morfologiyasini yaxshilashi mumkin va uning ta'sir qilish mexanizmi IGF-1 signal yo'lining faollashuvi bo'lishi mumkin.

Kalit so‘zlar: Cistanche deserticola ekstrakti; deksametazon; sarkopeniya; tarmoq farmakologiyasi; IGF-1 yoʻli

 

 

echinacoside foydasi

 

1. Materiallar va usullar

1.1 Reaktivlar

Ushbu tadqiqotda quyidagi reagentlar ishlatilgan:

Deksametazon natriy fosfat in'ektsiyasi(To'plam raqami. 040191147) – Shanxi Ruicheng Kelong Veterinariya Medicine Co., Ltd.

Oddiy sho'r suv(Paket raqami L220092407) – Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.

Suvsiz etanol, ksilen, paraformaldegid, vaglutaraldegid- Xitoy milliy farmatsevtika guruhi

Xlorid kislotasi(CAS: 7647-01-0) – Chengdu Kelon Chemicals Co., Ltd.

Gematoksilin bilan bo'yash uchun eritma– Wuhan Servicebio Biological Technology Co., Ltd.

Eozin bo'yoq eritmasi– Hefei Bomei Biological Technology Co., Ltd.

812 epoksi qatronini o'rnatish to'plami, uranil asetat- SPI kompaniyasi

Molpure® RNK ekstraktsiyasi to'plami, PrimeScript RT to'plami, TB Green™ Premix Ex Taq™ II– YEASEN Biotechnology and Takara Biomedical Technology Co., Ltd.

Cistanchening 3 ta faol moddasi

 

1.2 Asboblar

Ishlatilgan asosiy uskunalar:

NK-10 analog surish o'lchagich– Wenzhou Weidu Instrument Co., Ltd.

QMR06-060H tana tarkibi analizatori- Niumag korporatsiyasi

BA 210 raqamli trinokulyar mikroskop- Motic guruhi

JEM-1400 FLASH uzatuvchi elektron mikroskopi- JEOL, Yaponiya

QuantStudio™ 3 real vaqtda PCR tizimi- ThermoFisher Scientific

 

1.3 Tarmoq farmakologiyasi tahlili

ning faol birikmalari va potentsial mexanizmlarini o'rganishCistanche tubulosadavolashdasarkopeniya, a tarmoq farmakologiyasiyondashuv qo'llanildi:

Faol birikmalarningCistanche tubulosayordamida skrining qilindiAn'anaviy xitoy tibbiyoti tizimlari farmakologiya ma'lumotlar bazasi (TCMSP), chegaralari bilan:

Og'iz orqali qabul qilinganda bioavailability (OB) 30% dan yuqori yoki teng

Giyohvand moddalarga o'xshashlik (DL) 0,18 dan katta yoki teng

Qo'shimcha birikma vamaqsadli ma'lumotdan olindi:

PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)

SwissTarget Prediction(http://www.swisstargetprediction.ch)

Sarkopeniya uchun kasallik bilan bog'liq genlardan olingan:

DisGeNET(http://www.disgenet.org)

Genekartalar(https://www.genecards.org)

Protein-oqsil o'zaro ta'siri (PPI) tahliliorqali amalga oshirildiSTRING maʼlumotlar bazasi(https://string-db.org).

A birikma-maqsad-gen o'zaro ta'sir tarmog'iyordamida qurilganCytoscape 3.2.1.

Funktsional boyitishyordamida amalga oshirildi:

DAVID(https://david.ncifcrf.gov) uchunGen ontologiyasi (GO)

KEGG(https://www.kegg.jp/kegg/pathway.html) yo'lni tahlil qilish uchun

Natijalar orqali inglBioinformatika onlayn vositasi(https://www.bioinformatics.com.cn/)

tsistanche tubulosa

1.4 TayyorlanishiCistanche tubulosaEkstrakt (CdE)

TheCistanche tubulosaEkstrakt quyidagicha tayyorlanadi:

Xom o't bo'laklari (To'plam No Y221217) dan sotib olindiSichuan TCM Decoction Pieces Co., Ltd., va Xixua universiteti professori Yang Venyu tomonidan tasdiqlangan.

1 kg quritilganCistanche tubulosamaydalangan va a orqali o‘tkazilgan40 ko'zli elak.

A 1:20 material-suyuqlik nisbatibilan ishlatilgan50% etanol-suv eritmasi.

Aralash edi30 daqiqa davomida namlanadi, dan so'ngultratovushli ekstraktsiyada55 daraja, 250 W, uchun40 min.

Ekstraktlar edisantrifüjlanadi, filtrlanadi va past bosim ostida konsentratsiyalanadi60 gradusda aylanadigan evaporatator yordamida qalin xamirga (zichlik 1,2).

konsentrlangan ekstrakti edivakuum ostida muzlatilgan quritilgan, yakuniy natija beradiqazib olish samaradorligi 40%.

 

1.5 Hayvonlarning eksperimental loyihasi

Jami50 SPF darajasidagi erkak KM sichqonlari, 6 haftalik va vazni(22 ± 2) g, ushbu tadqiqotda foydalanilgan (Hayvon litsenziyasi №.SCXK [Chuan] 2023-030). Hayvonlarning barcha protseduralari quyidagicha amalga oshirildiLaboratoriya hayvonlarini boshqarish to'g'risidagi nizomXitoy Xalq Respublikasi Fan va Texnologiya Vazirligi tomonidan chiqarilgan va ediXihua universitetining Hayvonlar etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan(Tasdiqlash raqami: XH-2023-02-01).

Uy-joy sharoitlari:Harorat (26 ± 1 daraja), namlik (50 ± 10%), 12 soat yorug'lik / qorong'u tsikl, oziq-ovqat va suvga erkin kirish.

7 kunlik akklimatizatsiyadan so'ng, sichqonlar editasodifiy 5 guruhga ajratilgantana vazniga asoslangan.

Tana vazni har kuni qayd etilgan va xulq-atvor, mo'yna holati va oziq-ovqat iste'moli kabi umumiy salomatlik holati kuzatilgan.

Davolash guruhlari va dozalarida batafsil keltirilgan1-jadval.

Yoniq40-42 kun, motor funktsiyasi testlari(ushlash kuchi va suzish) o'tkazildi.

Yoniq43-kun, 12 soatlik ochlikdan so'ng tana vazni va tana tuzilishi qayd etilgan. Keyin sichqonlar efir bilan behushlik qilindi va qurbonlik qilindi. Ikki tomonlama orqa oyoq-qo'llarining skelet mushaklari tezda ajratildi va tortildi.

Thechap gastroknemiusuzunlamasına kesilgan va o'rnatilgan3% glutaraldegidva4% paraformaldegid, mos ravishda.

Theo'ng gastroknemiusuchun -80 daraja muzlatilganqPCR tahlili.

SEO kalit so'zlari:Sarkopeniyaning hayvon modeli, KM sichqonlari, mushaklar atrofiyasi tajribasi, mushaklarning funktsiyasini baholash, hayvonlarning axloqiy tadqiqotlari

akteozid foydalari

1.6 Tana tarkibi va mushaklar indeksini o'lchash

Tana vaznitajriba davomida har kuni qayd etilgan.

Qurbonlik qilishdan oldin,tana tarkibi(yog'siz massa va yog' massasi) o'lchandiikki marta, vao'rtacha qiymatqayd etildi.

Qurbonlikdan keyin,orqa oyoq skelet mushaklaritortildi.

Themushak massasi indeksiyordamida hisoblab chiqilganKuadros formulasi [11]:

Mushaklar indeksi (%)=Mushak massasi / tana vazni × 100
(1- tenglama)

SEO kalit so'zlari:sichqonlarda ozg'in tana massasi, mushaklar indeksini hisoblash, tana tarkibi analizatori, sarkopeniya biomarkerlari

 

1.7 Dvigatel funktsiyasi testlari

Baholash uchunmushak funktsiyasi, quyidagi testlar 40 va 42 kunlar orasida o'tkazildi:

Suzish testi:

Har bir sichqoncha editortilgan, va ayuk (qo'rg'oshin folga ichida 5% tana vazni)dumning distal uchdan bir qismiga mahkamlangan edi.

Sichqonchalar a.ga joylashtirildi25 daraja suv bilan idish, 30 sm dan katta yoki teng chuqurlikda.

Suzish vaqtikirgandan sichqonchani suzolmay, cho'kib ketgunga qadar yozib olingan.

Har bir sichqon kuniga bir marta sinovdan o'tkazildi3 kun ketma-ket, vao'rtachayakuniy natija sifatida qabul qilindi.

Tutqich kuchi sinovi:

a yordamida amalga oshiriladiqo'lda surish o'lchagich.

Har bir sichqoncha sinovdan o'tkazildibesh marta, a bilan150 soniya dam olishtestlar orasida.

Theushlash kuchi koeffitsientiTana vaznini normallashtirish uchun hisoblangan:

Tutish kuchi koeffitsienti=Tutish kuchi / Tana vazni (N/kg)
(2-tenglama)

SEO kalit so'zlari:suzish chidamliligi testi, kemiruvchilarda ushlash kuchi, mushaklarning ishlash ko'rsatkichlari, sarkopeniya sichqonchasi modeli

 

1.8 Gistologik tahlil

baholash uchunmushak to'qimalarida morfologik o'zgarishlarbilan davolashdan keyinCistanche tubulosaekstrakti (CdE):

Gematoksilin va eozin (H&E) bilan bo'yashmahkamlangan to'qimalarda amalga oshirildi4% paraformaldegid.

a ostida bo'limlar kuzatilganyorug'lik mikroskopi, vamushak tolasining tasavvurlar maydoniyordamida tahlil qilindiRasmJdasturiy ta'minot.

uchunultrastruktura tahlili, muskullar mahkamlanadi3% glutaraldegidkeyin o'rnatildi1% osmiy tetroksid, asetonda suvsizlanadi va ichiga kiritiladiEp812 qatroni.

Semitin bo'limlaribilan bo'yalgantoluidin ko'kjoylashtirish uchun.

Ultra yupqa qismlarbilan bo'yalganuranil asetat va qo'rg'oshin sitrat, va a bilan kuzatilganJEM-1400FLASH uzatuvchi elektron mikroskopi.

Mushak tolasi kengligiImageJ yordamida o'lchandi.

SEO kalit so'zlari:skelet mushaklari gistologiyasi, HE bo'yash protokoli, mushaklarni tadqiq qilishda elektron mikroskopiya, mushak tolasi morfologiyasi tahlili

cistanche imtiyozlari ro'yxati

1.9 Gen ekspressiyasini tahlil qilish

ni tekshirish uchunmolekulyar mexanizmlarSarkopeniyada CdE:

Muzlatilgan mushak to'qimalarisuyuq azot ostida mexanik ravishda buzildi.

Umumiy RNK yordamida olinganTRIpure reagentiishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq.

cDNK a bilan sintez qilinganteskari transkripsiya to'plami, vaqPCRa yordamida amalga oshirildiTermo Scientific PikoRealtizimi.

GAPDHichki mos yozuvlar gen sifatida ishlatilgan.

Primer ketma-ketliklar uchunmushaklar bilan bog'liq genlarro'yxatga kiritilgan2-jadval.

SEO kalit so'zlari:Mushak atrofiyasi genlari uchun qPCR, GAPDH mos yozuvlar geni, mushakdan RNK ekstraktsiyasi, sarkopeniyada gen ifodasi

 

1.10 Statistik tahlil

Eksperimental ma'lumotlar yordamida tahlil qilindibir tomonlama ANOVA, dan so'ngDunnettning ko'p taqqoslash testi.

A P-qiymati < 0,05statistik jihatdan ahamiyatli deb topildi.

Barcha statistik tahlillar yordamida amalga oshirildiSPSS 23.0.

Histomorfometrik ma'lumotlaryordamida tahlil qilindiRasmJdasturiy ta'minot.

SEO kalit so'zlari:farmakologik tadqiqotlarda statistik tahlil, biotibbiyot tadqiqotlarida SPSS, hayvonlarni o'rganishda ANOVA, ImageJ mushaklar tahlili