3-O'simta infiltratsiya qiluvchi limfotsitlardagi adrenergik retseptorlari IFN- -bog'liq PD-L1 ifodasini ushlab turadi va neyroblastomada o'smaga qarshi immunitetni buzadi
Oct 19, 2023
Neyroblastoma (NB) bolalik davrida yuzaga keladigan heterojen ekstrakranial o'smadir. NB o'smalarining o'ziga xos xususiyati neyroendokrinning katexolaminlarni ajratish qobiliyatidir, bu esa o'z navbatida -adrenergik retseptorlarni bog'lash orqali o'simta mikromuhitidagi (TME) turli signal yo'llariga ta'sir qilishi mumkin. Ilgari NB o'simta hujayralarida 3-adrenergik retseptorlarning (3- AR) o'ziga xos antagonizmi o'simta o'sishi va rivojlanishiga ta'sir qilgani ko'rsatilgan. Bu erda NB ning sichqoncha singenik modelida biz 3-AR modulyatsiyasi o'simtaga qarshi xost immun tizimining javobiga ta'sir qilganligini tekshirishni maqsad qilgan edik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, 3-AR antagonizmi qisman PD-1/PD-L1 signalizatsiya o'qi ishtirokiga bog'liq bo'lgan immun javobning qayta faollashishiga olib keladi. Haqiqatan ham, o'simta infiltratsiya qiluvchi limfotsitlar (TIL) ustidan 3- AR blokadasi ularning IFN-ni ajratish qobiliyatini susaytirdi, bu esa o'z navbatida NB o'simta hujayralarida TIL infiltratsiyasidan kelib chiqqan PD-L1 ifodasini kamaytiradi. NB bemorlarida genomik tahlil o'tkazish orqali keyingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ADRB3 genining yuqori ekspressiyasi past ifoda guruhiga nisbatan yomonroq klinik natijalar bilan bog'liq va ADRB3 genining ekspressiyasi immunitet bilan bog'liq turli yo'llarga ta'sir qiladi. Umuman olganda, natijalar shuni ko'rsatadiki, NB TMEdagi 3-AR o'simta va xost immun tizimi o'rtasidagi o'zaro ta'sirni modulyatsiya qila oladi va uning antagonizmi bir nechta pro-tumoral signalizatsiya yo'llariga ta'sir qiladi.
Grafik abstrakt
KIRISH
Neyroblastoma (NB) murakkab va heterojen kasallik bo'lib, hayotning birinchi yilida tashxis qo'yilgan saratonning eng keng tarqalgan turi. NB neyroendokrin o'simta bo'lib, simpatik asab tizimining (SNS) rivojlanishi paytida asab tolasining prekursor hujayralaridan kelib chiqadi. Bu o'ziga xos kelib chiqishi odatda buyrak usti bezida va / yoki simpatik ganglionlarda paydo bo'ladigan o'smaning lokalizatsiyasini aniqlaydi [1]. NB ning klinik xatti-harakati juda o'zgaruvchan bo'lib, o'z-o'zidan regressga uchragan o'smalardan tortib, barcha mavjud davolash usullariga, shu jumladan intensiv kimyoterapiya, jarrohlik, radiatsiya terapiyasi, ildiz hujayralarining otolog transplantatsiyasi va retinoidlarni (13-cis-retinoik) qo'llashga chidamli bo'lgan o'smalargacha. kislota) [2]. Shuning uchun bu javob bermaydigan o'smalar uchun muqobil terapevtik maqsadlar kerak. Immunitetni nazorat qilish punkti ingibitorlariga (ICIs) asoslangan immunoterapiya bir nechta qattiq shishlar uchun eng istiqbolli strategiya hisoblanadi [3]. Boshqalar qatorida, dasturlashtirilgan oʻlim ligandlari-1/dasturlashtirilgan oʻlim-1 (PD-L1/PD-1) signalizatsiya oʻqi effektor T-hujayralarining immunitetini susaytiradi va oʻsimta hujayralarining immun tolerantligini kuchaytirib, hal qiluvchi rol oʻynaydi. Sichqoncha va inson saratonida o'simtaga qarshi javoblarni susaytirishdagi roli [4, 5]. Biroq, ko'plab tadqiqotlar kattalar saratonida PD-1/PD-L1 signalizatsiyasi asosida yotgan mexanizmlarni allaqachon o'rgangan bo'lsa-da, bolalar o'smalarida kam narsa ma'lum. SNS va immunitet tizimi o'rtasidagi murakkab o'zaro bog'liqlik, katexolaminning chiqarilishi va -adrenergik retseptorlarning signalizatsiyasini faollashtirish orqali ko'plab o'smalarda o'simta rivojlanishining taqdirini aniqlashga qodir [6]. Bu, ayniqsa, katexolaminlarning yuqori darajalari malign o'smaning og'irligini aks ettiradigan NB bemorlariga to'g'ri kelishi mumkin [7]. 3-adrenergik retseptorlari (3-AR) kichik turi yaqinda saraton kasalligining muhim regulyatori sifatida aniqlangan [8-10]. Xususan, uning o'simta va o'simta mikro muhitining (TME) stromal hujayralarida ifodalanishi va faollashishi turli klinikagacha bo'lgan modellarda o'simta rivojlanishi uchun mas'ul bo'lgan pro-tumoral signalizatsiya yo'llarini keltirib chiqardi [11-14]. Bu erda NB ning singenik sichqoncha modelida biz o'simtaga infiltratsiya qiluvchi limfotsitlardagi (TIL) 3-AR o'simta hujayralarida IFN- - ga bog'liq bo'lgan PD-L1 regulyatsiyasini saqlab turishini ko'rsatdik, bu esa o'z navbatida o'smaga olib keladi. o'simtaning qochishi uchun javob beradigan immunitetni bostiruvchi TME. Bundan tashqari, 3-AR antagonizmi immun-reaktiv CD8+, tabiiy qotil (NK) va dendritik hujayralar (DC) sonini ko'paytirishga va immunitetni bostiruvchi tartibga soluvchi hujayralar sonini kamaytirishga muvaffaq bo'ldi. TMEda T hujayralari (Treg) va miyeloiddan kelib chiqqan bostiruvchi hujayralar (MDSC). Bundan tashqari, Kaplan-Meier tahlili shuni ko'rsatdiki, yuqori ADRB3 gen ekspresyonu NB bemorlarining yomon yashashi bilan bog'liq va NB ifodasining turli mavjud ommaviy ma'lumotlar to'plamlari tahlillari ADRB3 genini ifodalash darajasi va signalizatsiya yo'llari bilan bog'liq genlar o'rtasida muhim korrelyatsiyani aniqladi. immunitet tizimi / o'smaning o'zaro ta'siri.
Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari
USULLARI
Hujayra madaniyati
Neyro-2Sichqoncha NB saraton hujayralari ATCC (CCL-131) dan olindi va DMEMda 10% FBS, 2 mM L-glutamin, 100 U·ml-1 penitsillin va 100 ta o'stirildi. ug · ml-1 streptomitsin 37 daraja suv bilan to'yingan, 5% CO2 atmosferasida. Neyro{13}}hujayralar mikoplazma bilan ifloslanish uchun muntazam ravishda tekshirildi.
O'simta singenik sichqon modeli
4 haftalik ayol NCI A/JCr sichqonlari Charlz River Laboratories (Frederik) dan sotib olingan. Neyro{1}}a hujayralari (N2A) o'ng qanotdagi 100 ul PBSga 1 × 106 hujayra kiritish orqali A/J qabul qiluvchi sichqonlarga teri ostiga implantatsiya qilindi. N2A hujayralari palpatsiya qilinadigan o'simta hosil qilganda (taxminan 8 kun), davolash boshlandi. SR59230A (Tocris Bioscience) va transport vositasi (fiziologik eritma) uchun kuniga ikki marta, PD-L1 antikori (InVivoMAb sichqonchaga qarshi PD-L1 (B7-xhH1) #BE0101 uchun 8 va 12-kunlarda muolajalar amalga oshirildi. , Bio X Cell) va izotip nazorati (InVivoMAb kalamush IgG2b izotip nazorati # BE0090, Bio X Cell). IgG2b izotipini boshqarish ma'muriyati transport vositalarining bir xil natijalarini berdi, shuning uchun raqamlarda faqat avtomobil holati ko'rsatilgan. SR59230A intraperitoneal (ip) orqali fiziologik eritmada 10 mg / kg ga yetkazildi; 250 mkg PD-L1 100 µl InVivoPure™ pH 6,5 suyultirish buferida (#IP0065) ip orqali yuborildi; 250 mkg IgG2b izotipli boshqaruv sichqonchasi 100 µl InVivoPure™ pH 7.0 suyultirish buferida (#IP0070) ip orqali yuborildi. FTY720 (#6176, Tocris Biotechne) bilan davolash 6-kundan boshlab 2 mg/kg boshiga os (po) da qo'llanildi. O'simta o'sish tezligi kalibrli o'simta massasini o'lchash yo'li bilan baholandi va o'simta massasi hajmi hajm sifatida hisoblandi {{ 41}} [(uzunlik × kenglik)2 /2]. Sichqonlar 8 kunlik davolanishdan keyin qurbon qilindi.
Western blot tahlili
Hujayralar to'plangan va proteaz inhibitori kokteylini o'z ichiga olgan RIPA buferida lizislangan. Miqdori aniqlangandan so'ng, SDS-PAGE va WB tahlilini o'tkazish uchun 20 ug jami oqsillar ishlatilgan. PVDF membranalari bir kechada birlamchi antikorlar anti-PD-L1 (ab238697, Abcam), fosfo-CREB (ab32096, Abcam), CREB (ab32515, Abcam), p-PKA / / (sc- 32968, Santa bilan inkubatsiya qilindi. Cruz Biotechnology), -aktin (sc-1615, Santa Cruz Biotechnology), 3-AR (ab94506, Abcam) 4 daraja va keyin xona haroratida 1 soat davomida maxsus ikkilamchi antikorlar bilan. Antikorlarning o'ziga xos oqsillar bilan bog'lanishi Clarity Western ECL Substrate (Bio-Rad) yordamida aniqlangan va tasvirlar Chemidoc Imaging System (Biorad®) orqali olingan. ImageJ dasturiy ta'minoti miqdoriy tahlillarni amalga oshirish uchun ishlatilgan va bantlarning signal intensivligi nazorat qiymatlariga nisbatan katlamli o'sish sifatida ifodalangan.
PD-L1 sitofluorimetrik tahlil uchun birgalikda madaniyat
O'simta hujayralari MW24 (45,{2}} hujayralar/quduq) ga ekilgan va 24 soatdan so'ng 2 kun davomida Vehicle yoki SR59230A (T2) bilan oldindan ishlov berilgan sichqonlarning TDLNlaridan olingan limfotsitlar bilan birgalikda kultivatsiya qilingan. urug'lanish nisbati 1:10 (o'simta/limfotsitlar). Umumiy inkubatsiya davrining oxirida (48 soat) limfotsitlar birgalikda kultura muhiti bilan birga yumshoq pipetleme yo'li bilan tortib olindi, so'ngra o'simta hujayralari tripsinizatsiya yo'li bilan ajratildi va anti-PD-L1 antikori bilan belgilandi (CD274 Antikor {). {17}}, eBioscience™) sitofluorimetrik miqdorni aniqlash uchun. Bo'yalgan hujayralar MACSQuant Analyzer 10 Flow Cytometer (Miltenyi Biotec, Gladbach, Germaniya) da olindi va ma'lumotlar Flowlogic dasturi (Miltenyi Biotec, Gladbach, Germaniya) yordamida qayta ishlandi.
PD-L1 immunofluoresans va IFN-miqdori uchun birgalikda madaniyat
O'simta hujayralari Nunc Lab-Tek kamerasi slayd 4da mikroskop slaydlariga (20, 000 hujayralar / quduq) ekilgan va 24 soatdan keyin Vehicle bilan 2 kun davomida davolangan sichqonlarning TDLNlaridan olingan limfotsitlar bilan birgalikda o'stirilgan. yoki SR59230A (T2), ekish nisbati 1:10 (o'simta / limfotsitlar). 48 soatdan so'ng, madaniy muhitdagi limfotsitlar yumshoq pipetleme yo'li bilan yig'ildi va keyin santrifüj orqali tashlanadi; supernatant ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Luminex xMAP texnologiyasi orqali IFN- miqdorini aniqlash uchun ishlatilgan. Qisqacha aytganda, birgalikda madaniyat muhitida IFN miqdorini aniqlash Bio-Plex Pro Mouse Cytokin IFN- Set (#171G5017M, Bio-Rad) yordamida amalga oshirildi va ma'lumotlar MAGPIX tizimida (Luminex, Texas, AQSh) olingan. Tahlil Bio-Plex Manager™ dasturi (BIO-RAD, Kaliforniya, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Mikroskop slaydlaridagi o'simta hujayralari o'rniga PDL1 immunofluoressensiya tahlilini quyidagi tarzda bajarish uchun ishlatilgan. Immunofloresan tahlil qilish uchun hujayralar 20 daqiqa davomida PBSda 3% paraformaldegidda o'rnatildi. O'tkazuvchanlik xona haroratida 30 daqiqa davomida PBS tarkibidagi Tween{25}},5% ni o'z ichiga olgan eritma qo'shilishi orqali erishildi. Keyin hujayralar 3% BSAda 1 soat davomida bloklandi va 2 soat davomida birlamchi antikor anti-PD-L1 (ab238697, Abcam) bilan inkubatsiya qilindi. Keyinchalik, PBS da yuvilgandan so'ng, slaydlar 1 soat davomida Alexa-fluor 488 ikkilamchi antikor bilan inkubatsiya qilindi. Tasvirlar floresan mikroskop (DMi8 - Leica microsystems) yordamida olingan.
Xitoy o'ti cistanche o'simligi - Antitumor
1- 2- va 3-AR ovozini o‘chirish uchun limfotsitlarning siRNK elektroporatsiyasi
TDLNlardan olingan limfotsitlar selektiv 1- (SASI_Mm01_00090154, ketma-ketlik: GUGAUCGUGGCCAUCGCCA, Merck), 2- (SASI_Mm{) uchun siRNKlar bilan transfektsiya qilindi. {5}}, ketma-ketlik: CCAAGUUCGAGCGACUACA, Merck) va 3-AR (SASI_Mm01_00145466, ketma-ketlik: CAGUGGACGUGCUCUGUGU, Merck) o'chirish. Qisqacha aytganda, limfotsitlar 4D-Nucleofector X Unit (Lonza) va P3 Primer Cell 4D-NucleofectorTM X Kit (V4XP-3024, Lonza) yordamida siRNK (100 nM) bilan elektroporatsiya qilindi. Sichqoncha T hujayralari elektroporatsiyasi uchun maxsus DN-100 dasturi bajarildi. Elektroporatsiyadan so'ng, limfotsitlar TexMACS Medium (130-097-196, Miltenyi Biotec) da 24 soat davomida o'stirildi va keyin PD-L1 miqdorini aniqlash uchun yuqorida tavsiflanganidek, 48 soat davomida N2A o'simta hujayralari bilan birgalikda o'stirildi. -Limfotsitlardagi AR larning o'chirish samaradorligi quyidagi tarzda raqamli tomchi PCR orqali baholandi.
-ARs mRNK miqdorini aniqlash uchun raqamli tomchi PCR
RNK iScript Advanced cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad) yordamida teskari transkripsiya qilindi. ddPCR ishlab chiqarish ko'rsatmalariga muvofiq, QX200 tizimi (Bio-Rad) va C1000 Sensorli Termal Cycler (Bio-Rad) da problar uchun ddPCR Supermix (No dUTP) (Bio-Rad) yordamida amalga oshirildi. Ishlatilgan tahlillar quyidagilar edi: Adrb{6}}FAM (dMmuCPE5088688), Adrb2-FAM (dMmuCPE5089938), Adrb1-FAM (dMmuCPE5100184), Rps18-HEX (dMmuC45). ddPCR ma'lumotlari QuantaSoft™ dasturi yordamida tahlil qilindi (versiya 1.7.4, Bio-Rad).
RNK ketma-ketligi
Kesilgan o'smalar RLT buferiga (Qiagen) joylashtirildi va gentleMACS M Tubes (Miltenyi Biotec, Gladbach, Germaniya) yordamida gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, Glad bach, Germaniya) bilan mexanik ravishda homogenlashtirildi. Jami RNK ekstraktsiyasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga rioya qilgan holda RNeasy Plus Mini to'plami (Qiagen) bilan amalga oshirildi. RNK miqdorini aniqlash NanoDrop 2000/2000c spektrofotometrlari (ThermoFisher) va Qubit RNK yuqori sezuvchanligi (HS) (ThermoFisher) yordamida amalga oshirildi. RNK yaxlitligi Agilent Bioanalizatorida Agilent RNA 6000 Pico Kit yordamida baholandi va RNK yaxlitlik raqami (RIN) 6.00 dan past bo'lgan barcha namunalar chiqarib tashlandi. Kutubxonani tayyorlash TruSeq Stranded Total RNK Library Prep Gold Kit (Illumina) yordamida ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq, dastlabki kiritilgan 500 ng umumiy RNK bilan amalga oshirildi. Kutubxona sifati Agilent Bioanalyzerda Agilent DNA 7500 to'plami yordamida baholandi, so'ngra 1X dsDNA High Sensitivity (HS) (ThermoFisher) yordamida kutubxona miqdorini aniqlash amalga oshirildi. Kutubxonalar NextSeq 550 Sequencing System (Illumina) da NextSeq 500/550 v2.5 (150 sikl) yuqori chiqish reagent to'plamlari (Illumina) yordamida ketma-ketlashtirildi. Yugurishlar 2 × 76 bp konfiguratsiyasi bilan amalga oshirildi.
mRNK miqdorini aniqlash va transkriptomik tahlillar
Xaritaga asoslangan rejimda qizil ikra (v. 1.5.1) transkriptlarning miqdorini aniqlash uchun ishlatilgan va muskulusning mos yozuvlar transkriptomasi GRCm38.98. Olingan qf fayllari R statistik tili bilan tahlil qilindi. Tximport paketi Rdagi ma'lumotlarni import qilish uchun ishlatilgan va transkriptlar AnnotationDbi to'plami va org.Mm.eg.db ma'lumotlar bazasi tomonidan genlarga yig'ilgan. Nihoyat, biz DESeq2 bilan statistik tahlillarni o'tkazdik. Biz GO: BP ma'lumotlar bazasini so'rash uchun ClusterProfiler to'plamidan foydalanib, o'zgartirilgan uyali yo'llarni aniqlash uchun statistik tahlillar bilan Over Enrichment Analysis (ORA) o'tkazdik. Boyitish tahlili uchun genlarni tanlash uchun log2FC chegarasini 0.5 (| log2FC|⋝ 0.5) va sozlangan p-qiymatini 0 ga oʻrnatdik.{ {17}}5. Natijalarni p-qiymati 0,05 bo'yicha filtrlagandan so'ng, biz GO: BP ma'lumotlar bazasiga qarshi sinovdan o'tgan 15158 ta jarayondan 45 ta statistik tartibga solinmagan jarayonni oldik.
Luminex sitokinlarining miqdorini aniqlash
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing
【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Sichqonlar Vehicle, SR59230A, PD-L1 va SR59230A + PD-L1 bilan 2 kunlik davolashdan (T2) so'ng qurbon qilindi va o'simta massasi qaychi bilan kesilib, Bio-Plex Cell lizis to'plami (BIO-RAD, Kaliforniya) yordamida homogenlashtirildi. , AQSh) va gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, Germaniya). Keyin o'simta lizatlari Luminex xMAP texnologiyasiga asoslangan Bio-Plex Pro™ tahlillari (BIO-RAD, Kaliforniya, AQSh) orqali ularning sitokin kontsentratsiyasi uchun sinovdan o'tkazildi. IFN- , TNF- , IL-2, IL{16}}, IL-10, GM-CSF, IL-1 va IL-1 darajalari (pg/ml) ) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq o'lchandi. Ma'lumotlar MAGPIX tizimida (Luminex, Texas, AQSh) olingan va tahlil Bio-Plex Manager™ dasturi (BIO-RAD, Kaliforniya, AQSh) yordamida amalga oshirilgan.
Oqimning sitometrik tahlili
Oqim sitometriyasi tahlili o'simta hujayralari va o'simta mikro muhitining immun hujayra subpopulyatsiyalarida quyidagicha o'tkazildi. Qisqacha aytganda, o'simtalar o'simta dissotsiatsiya to'plami sichqonchasi (#130-096-730, Miltenyi Biotec) bilan homogenlashtirildi va o'simta infiltratsiya qiluvchi limfotsitlar CD45 (TIL) MicroBeads sichqonchasi (#130-110- 618) yordamida umumiy hujayra suspenziyasidan ajratildi. Miltenyi Biotec) yoki CD8 (TIL) MicroBeads sichqonchasi (#130-116-478, Miltenyi Biotec) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq avtomatik Pro Separator (Miltenyi Biotec) orqali. Keyin hujayralar inkubatsiya qilindi va turli xil ftorxrom konjugatsiyalangan antikorlarning tegishli ravishda suyultirilgan birikmalari bilan bo'yaldi (qo'shimcha jadval 1). Bo'yalgan hujayralar MACSQuant Analyzer 10 Flow Cytometer (Miltenyi Biotec®) yordamida tahlil qilindi va ma'lumotlar Flowlogic dasturi (Miltenyi Biotec®) yordamida qayta ishlandi.
Hujayralar va to'qimalarning immunofluoresansi
Sichqoncha o'simtasi massasining immunofluoresans tahlili quyidagicha amalga oshirildi. Namunalar tezda kesilib, tamponlangan 4% formaldegidda 24 soat davomida o'rnatildi va kerosin bilan ko'mildi. Namunalardan 5 mkm qalinlikdagi gistologik bo'laklar kesilib, parafinsizlashtirildi va antijen olish uchun natriy sitrat tamponida (10 mM, pH 6,0; Bio-Optica) 10 daqiqa qaynatiladi va bir kechada 4 daraja haroratda birlamchi immuno-bo'yoq bilan bo'yalgan. antikorlar (anti-PD-L1, ab238697, Abcam; anti- 3-AR, ab94506, Abcam; anti-CD4, 14-9766-82, eBioscience; anti-CD8, 14-0808-82, eBioscience; DBH, ab209487, Abcam). Immun reaktsiyasi Alexa Fluor 488- konjugatsiyalangan IgG yoki Alexa Fluor 594-konjugatsiyalangan IgG (1:350; Jekson Laboratoriyasi) ikkilamchi antikorlari bilan inkubatsiya qilingan bo'limlar aniqlandi. 4,{28}}diamidino-2-fenilindol (DAPI) bilan qarama-qarshi bo'lgandan so'ng, tasvirlar CellSens Dimension Imaging Software 1.6 (Olympus) versiyasiga ulangan Olympus BX63 mikroskopi orqali olindi. Qiziqarli oqsilning floresans intensivligi DAPI qiymatlariga normallashtirilgani uchun immunofluoresans bo'yash ImageJ dasturi (NIH, AQSh) orqali baholandi.
Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari
NB bo'lgan bemorlarda Kaplan-Meier va gen korrelyatsiyasini tahlil qilish
ADRB3 genining CD80, CTLA4, CD276, CD226, CD40LG, 4-1BBL immun nazorat nuqtasi genlari bilan korrelyatsiyasi va NB bo'lgan bemorlarning umumiy (OS) va hodisasiz omon qolish (EFS) ehtimoli va ARDB3 darajalari o'rtasidagi korrelyatsiya mRNK ifodasi 44 K oligonukleotid mikroarraylar yordamida hosil qilingan 649 NB namunalarining gen ekspresyon profili yordamida amalga oshirildi. Profillar va klinik ma'lumotlar R2: genomik tahlil va vizualizatsiya platformasidan (http://r2.amc.nl) olingan (Kocak, custom ag44kcwolf, n=649 holat). Tarqatishning so'nggi kvartili Kaplan-Meier tahlilida yuqori va past ADRB3 gen ifodasi uchun ifoda chegarasi sifatida ishlatilgan.
Statistika
Statistik tahlil GraphPad Prism (GraphPad, San-Diego, CA, AQSH) yordamida bir tomonlama yoki ikki tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA), keyin Bonferroni post-hoc testi yoki juftlashtirilmagan talaba t-testi yordamida amalga oshirildi. In vivo tajribalar uchun, xuddi shu hayvon modeli [12] bo'yicha oldingi tadqiqotlarga ko'ra, 80% quvvatni kafolatlash uchun har bir guruhga kamida 6 sichqon kerak edi. Qiymatlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi. P bo'lganida ahamiyati ko'rib chiqildi<0.05 and described in each figure legend. Allocation concealment was performed using a randomization procedure (http:// www.randomizer.org/).
NATIJALAR
3-AR antagonizmi NB ga ega A/J sichqonlarining o‘simta hujayralarida PD-L1 ifodasini kamaytiradi
Oxirgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, NBda PD{0}}/PD-L1 signalizatsiyasi immunitet nazoratini cheklashning muhim mexanizmi va PD-L1 ifodasi o'simta belgilarining yuqori darajasi bilan bog'liqdir [15, 16]. 3-AR blokadasining melanomali sichqonlarda [13] immunitetga ega TME ni keltirib chiqarish qobiliyatini koʻrsatuvchi shu va oldingi maʼlumotlarimizni hisobga olib, biz NB oʻsimtasida 3-AR antagonizm PD-L1 signalizatsiya ishtirokiga bog'liq holda immun javob faollashishiga olib kelishi mumkin. 3-AR antagonisti, SR59230A, NBning sichqoncha singenik modelida qo'llanilishi anti-PD-L1 antikor mAb (PD-L1) bilan davolashdan ko'ra o'simta o'sishini sezilarli darajada kamaytirdi, ammo sinergik ta'sir kuzatilmadi. sichqonlar ikkala dori bilan davolash qilinganida (1A, B-rasm). SR59230A ma'muriyati tomonidan olib kelingan o'simtaga qarshi ta'sir qisman PD-L1 ifoda modulyatsiyasiga tayanganligini tekshirish uchun biz NB sichqonlarining TME-da PD-L1 ifoda darajasini tahlil qildik. Qizig'i shundaki, sichqon o'simtasi massasi bo'yicha immunofluoresans (1C-rasm) va western blot tahlili (1D-rasm) PD-L1 ifodasi avtomobil holatiga nisbatan 3-AR antagonisti bilan davolash qilingan sichqonlarning TME da kamayganini ko'rsatdi. Keng adabiyot ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, TMEda saraton hujayralariga qo'shimcha ravishda antigen taqdim qiluvchi hujayralar (APC), MDSC, DC va makrofaglar kabi stromal hujayralar PD-L1 [17-20] ning asosiy manbalari hisoblanadi. TMEda PD-L1 ifoda darajasi 3-AR blokadasidan keyin qayerda ta'sirlanganligi tekshirildi. Sitofluorometrik tahlil shuni ko'rsatdiki, 3-AR antagonizmi o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasini kamaytirdi (1E-rasm), uning DC va makrofaglarda ifoda darajasini oshirdi (1F, G-rasm). MDSC populyatsiyasida hech qanday o'zgarishlar kuzatilmadi (1H-rasm). Bu birinchi natijalar shuni ko'rsatadiki, 3-AR blokadasi NB sichqonlarining singenik modelida o'simtaga qarshi sezilarli faollikni ta'minlagan va PDL1 antikorining bir vaqtda qo'llanilishi o'simtaga qarshi sinergik ta'sirni keltirib chiqarmagan. Qizig'i shundaki, 3-AR farmakologik antagonizmi TMEda PDL1 ifoda darajasini modulyatsiya qildi, bu 3-AR blokadasi olib kelgan antitumoral ta'sirda PD-L1 signalining ishtirokini ko'rsatadi.
1-rasm SR59230A va PD-L1 muolajalarining NB o'simtasi bo'lgan sichqonlarda o'simta o'sishi va PD-L1 ifodasiga ta'siri
3-AR antagonizmi va PD-L1 ni yuborish NBda immun-reaktiv TMEni rag'batlantiradi.
3-AR antagonizmidan so'ng NB o'simta hujayralarida kuzatilgan PD-L1 ifodasining pasayishi TMEda immun reaktivatsiyasiga olib keldimi yoki yo'qligini tekshirish uchun biz birinchi navbatda PD-1+CD{ tomonidan perforin sonini baholadik. SR59230A-, PD-L1- yoki SR59203A + PD-L1-davolangan sichqonlarning o'simta massasidagi {4}} hujayralar (4A, B-rasm). Bundan tashqari, Ki67 bo'yash tahlili 3-AR antagonisti yoki PD-L1 antikori bilan davolash qilingan sichqonlarning NB o'smalarida CD{15}} T hujayralarining ko'payishini ko'rsatadigan tendentsiyani ko'rsatdi, hatto u sezilarli darajada erisha olmasa ham. farqlar (4C-rasm). Nihoyat, sitokinlar oʻlchovi PDL bilan davolash qilingan sichqonlarning oʻsimta massasida TNF-, IFN- va IL-6 kabi oʻsimtaga qarshi taʼsir koʻrsatishi maʼlum boʻlgan sitokinlar darajasining oshishini va ular bilan birga kelganini koʻrsatdi. immunitetni bostiruvchi sitokin IL ning pasayishi-10. Ajablanarlisi shundaki, 3-AR antagonisti bilan davolash qilingan NB ga ega sichqonlarda immunitetga ko'ra, biz TNF- va IL-6 ko'payishini va IL{31}} darajasining pasayishini kuzatdik. reaktiv holati T hujayralari xususiyatlari tomonidan taklif, lekin IFN- (Fig. 4D) kamayadi darajasi. Boshqa tahlil qilingan sitokinlarda (GMCSF, IL-2, IL-1 va IL-1) sezilarli farqlar topilmadi. Bu maʼlumotlar birgalikda shuni koʻrsatadiki, 3-AR antagonizmi PD-L1 antikorlari qoʻllangandan keyin kuzatilgan bir xil taʼsirlarni takrorlab, NB sichqonlarining TMEʼsida xost immun javobini ishga tushiradi. Xususan, CD{42}} sitotoksik funktsiyalari SR59230A va PD-L1 tomonidan mustahkamlangan. 3-AR antagonisti PD-L1 antikori bilan birgalikda qoʻllanganda sinergik taʼsirlar kuzatilmadi, bu 3-AR blokadasi natijasida yuzaga kelgan immun reaktivlashuvi, hech boʻlmaganda qisman PD-L1 signaliga bogʻliqligini tasdiqlaydi. yo'lning ishtiroki.
2-rasm SR59230A va PD-L1 NBda immun-reaktiv TMEni rag'batlantiradi.
3-rasm. 3-AR antagonizmi va PD-L1 ni yuborishdan keyin TME va TDLNlarda limfotsitlarda immun nazorat nuqtalarining ifodalanishi
Shakl. 4 3-AR blokadasi CD8 funksiyalarini ishga tushiradi va TMEda immun sitokinlar sekretsiyasini tartibga soladi.
3-O'simta infiltratsiya qiluvchi limfotsitlardagi AR IFN- sekretsiyasini modulyatsiya qiladi va NB o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasiga ta'sir qiladi.
PD-L1 ning o'simta hujayralarida namoyon bo'lishi bir necha omillar bilan ta'minlanishi mumkin, ammo boshqalar qatorida TNF- va IFN- turli o'smalarda PD-L1 darajasini oshirishga qodir asosiy sitokinlarni ifodalaydi [23]. Bizning NB o'simta modelimizdagi 3-AR/PD-L1 o'zaro suhbati asosidagi signalizatsiyani qo'shimcha tushuntirish uchun biz TNF- va IFN- davolashdan so'ng N2A o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasini in vitro sinovdan o'tkazdik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, PD-L1 ifodasi 48 soat davomida IFN- bilan davolash qilingan NB hujayralarida yuqori tartibga solingan, ammo TNF- bilan emas. Bundan tashqari, N2A o'simta hujayralarini 3-AR antagonisti SR59230A bilan oldindan davolash IFN bilan davolash natijasida kelib chiqqan PDL1 ko'payishini bekor qila olmadi (5A-rasm). Adabiyot ma'lumotlari TILlarni adaptiv immun javob paytida IFN-ning asosiy hujayrali manbai sifatida tan olganini hisobga olsak [24] va bizning natijalarimiz 3-N2A o'simta hujayralarida AR modulyatsiyasi IFN- -bog'liq PDga ta'sir qilmasligini ko'rsatdi. -L1 ifodasi, biz TILlardagi 3-AR modulyatsiyasi o'zgargan IFN- sekretsiyasi uchun javob beradimi, bu o'z navbatida o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasiga ta'sir qiladimi, deb qiziqdik. Bizning farazimizni isbotlash uchun transport vositasi yoki SR59230A bilan davolash qilingan NB sichqonlarining TDLNlaridan olingan limfotsitlar izolyatsiya qilingan va in vitro o'simta hujayralari bilan birgalikda o'stirilgan. Immunofluoressensiya va oqim sitometriyasi tahlili shuni tasdiqladiki, 3- AR antagonisti bilan davolash qilingan NB sichqonlaridan to'plangan limfotsitlar, ishlov berilmagan limfotsitlarga nisbatan N2A hujayralarida PD-L1 ifodasini ishga tushirish qobiliyatini pasaytirgan (5B, D-rasm). Bundan tashqari, birgalikda madaniyat muhitida IFN darajasini o'lchash SR50230A bilan davolash qilingan sichqonlardan to'plangan limfotsitlar NB o'simta hujayralari bilan birgalikda etishtirilganda IFN-ni ajratish qobiliyatini qisman yo'qotganligini tasdiqladi (5C-rasm). 3-AR bir nechta toʻqimalarda Gs oqsili bilan bogʻlanishi mumkinligi allaqachon koʻrsatilgan va uning faollashishi cAMP/PKA signal yoʻlining faollashishiga olib keladi [25]. Shu bilan birga, tadqiqotlar T hujayralarida IFN- ning ijobiy transkripsiya regulyatori sifatida siklik AMP sezgir element ulanishining (CREB) muhim rolini isbotladi [25-27]. Ushbu kuzatishlardan boshlab biz cAMP/PKA/CREB signalizatsiya yoʻlining TILlarda 3-ARga bogʻliq IFN sekretsiyasida ishtirok etganligini tekshirdik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, 3-CD8+ TILlarning AR antagonizmi PKA /PKA subbirliklari va CREB fosforillanishini kamaytirdi, bu esa CD8+ TILlarda IFN ifodasining kamayishiga olib keldi (Qo'shimcha 1A-rasm). , B). Bu natijalar 3-AR cAMP/PKA/CREB signalizatsiya yoʻlini ishga tushirish orqali NB ning TILlarida IFN- transkripsiyasini saqlab turishi mumkinligini tasdiqladi. Boshqa tomondan, immunosupressiv sitokin IL-10 SR59230A bilan davolash qilingan sichqonlarning Tregida transport vositasiga nisbatan kamaygan (qo‘shimcha 1C-rasm), bu 3-AR antagonisti bilan davolashdan keyin NB TME ning immun reaktivligini tasdiqlaydi. NB saqlovchi sichqonlar. SR59230A antagonizmining 3-AR kichik turiga selektiv ta'sirini tasdiqlash uchun biz 1-, 2- va 3-AR uchun siRNKlar bilan o'chirilgan limfotsitlar bilan birgalikda kultura tahlilini o'tkazdik. kichik turlari. Natijalar shuni ko'rsatdiki, 3-AR uchun jim bo'lgan limfotsitlar, -AR subtiplari orasida, nazorat holatiga nisbatan N2A o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasini qo'zg'atish qobiliyatini qisman yo'qotgan (5E-rasm va qo'shimcha rasm. 1D). Bundan tashqari, NB sichqonlarining sichqon limfotsitlarida 3-AR ning protein ifodasi TDLN lardan olingan limfotsitlarning western blot tahlili (Qoʻshimcha 2A-rasm) va CD4+ va CD{{ immunofluoresansi bilan tasdiqlangan. 90}} T xujayralari o'simta massasi bo'limlarida 3-AR uchun bo'yalgan (Qo'shimcha 2B-rasm). Biz ilgari N2A o'simta hujayralariga SR59230A tomonidan 3- AR ning o'ziga xos antagonizmi o'simta hujayralarining poyasidan farqlanish xususiyatlariga o'tish orqali NB o'sishi va o'simta rivojlanishini inhibe qilishini ko'rsatdik [12]. Bu erda bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, 3-AR antagonisti administratsiyasining o'simtaga qarshi ta'siri, shuningdek, TILlardagi 3-AR signalizatsiya modulyatsiyasiga tayanadi va bu o'z navbatida o'smalarga qarshi immunitetning qayta tiklanishiga olib keldi. Shuning uchun, bizning dissertatsiyamizni in vivo jonli tasdiqlash uchun biz FTY720 ni TDLNlarda T hujayralarini ushlab turish va ularning o'simta massasida infiltratsiyasini kamaytirish uchun qo'lladik. FTY720 sfingozin 1-fosfat (S1P) ning analogi bo‘lib, uni qo‘llash S1P retseptorlarining ichkilashuvi va degradatsiyasini keltirib chiqaradi, shu bilan limfotsitlarning limfa tugunlaridan chiqishini oldini oladi [28]. Taxmin qilinganidek, FTY720-ni oldindan davolash 3-AR antagonisti administratsiyasi tomonidan olib borilgan o'simtaga qarshi ta'sirni kamaytirdi (5F-H-rasm). FTY720 ning TDLNlarda T hujayralarini cheklash samaradorligini tekshirish uchun biz sakkiz kunlik (T8) davolashdan so'ng TDLNdagi T hujayra sonini o'lchadik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CD4+ va CD8+ hujayralar FTY720 bilan oldindan ishlov berilgan sichqonlarning TDLNlarida ishlov berilmagan sichqonlarga (avtomobil) nisbatan ko'paygan (Qo'shimcha rasm. 2C). S1P signalizatsiyasi NB o'simta hujayralarining [12, 29] omon qolishi uchun juda muhim ekanligini ko'rsatadigan bizning va boshqa oldingi natijalarimizga ko'ra, faqat FTY720 bilan davolash o'simta o'sishini sezilarli darajada kamaytirishga muvaffaq bo'ldi (5F-H-rasm). Avtotransport vositasidan va SR59230A bilan davolash qilingan sichqonlardan ajratilgan NB o'simta massalari bo'yicha RNK ketma-ketligi tahlili 5607 genni aniqladi, ularning 267 tasi differentsial ravishda ifodalangan genlar (DEG), SR59230A bilan davolash qilingan o'smalarda 127 tasi yuqori va 140 tasi pastga regulyatsiya qilingan (66-rasm). Xususan, statistik jihatdan differentsial tarzda ifodalangan bir nechta genlar GO: BP ma'lumotlar bazasiga ko'ra immunitet bilan bog'liq yo'llarga tegishli edi (6B-rasm). Bundan tashqari, SR59230A bilan davolash qilingan o'simtada PD-L1 mRNK (CD274 geni) transport vositasi holatiga nisbatan pasaytirish va immunitet bilan bog'liq jarayonlarda ishtirok etuvchi boshqa genlarning yuqori regulyatsiyasi (6C-rasm) 3-AR va AR o'rtasidagi bog'liqlikni tasdiqladi. protein darajasida kuzatilgan immun-nazorat nuqtasi PD-L1. Nihoyat, umumiy ma'lumotlar to'plami (GEO arxividan GSE14880) bo'yicha differensial gen ekspressiyasi tahlili NBs ta'sirlangan 34 bemordan iborat bo'lib, ADRB3 ning kam ifodalangan NB o'simta massalari immun javoblarining ijobiy tartibga solinishini, T hujayralari faollashuvini va immun effektorini ko'rsatdi. ADRB3 ning yuqori darajasiga ega bo'lgan o'simta massasi bilan solishtirganda yo'llar (6D-rasm). Shuni ta'kidlash kerakki, turli xil saratonlarda katexolaminlar saraton bilan bog'liq bo'lgan neyronlar orqali chiqariladi yoki shunchaki qon aylanishi orqali o'simtaga etib boradi, NBda katexolaminlar va ularning metabolitlari (HVA, VMA, dofamin) ning haddan tashqari ko'p bo'lishi, bu malign o'smaning o'ziga xos xususiyati hisoblanadi. boshqa manbadan. Darhaqiqat, NB hujayralarining o'ziga xos kelib chiqishi tufayli (neyronal tepalikning nuqsonli simpatik neyronal differentsiatsiya hujayralaridan) bu o'smalar odatda katexolaminlarni o'z-o'zidan ajratishga qodir. Haqiqatan ham, bizning NB sichqon modelimizda o'simta massalaridagi immunofluoresans NB o'simta hujayralari qanday bo'lishidan qat'i nazar, norepinefrin sintezi uchun mas'ul bo'lgan dopamin-gidroksilaza (DBH) (Qo'shimcha 3A-rasm) fermenti uchun ijobiy ekanligini ko'rsatdi {{153} O'simta yoki uning antagonizmida AR ifodasi. Birgalikda bu ma'lumotlar NB o'smalarida xost immun tizimi va o'simta mikro muhiti o'rtasidagi o'zaro ta'sirda ishtirok etadigan turli biologik jarayonlarni tartibga solishda -adrenergik signalizatsiyaning hal qiluvchi rolini ta'kidlaydi. Sichqoncha singenik modelimizda 3-AR antagonisti qo‘llanilgandan keyin kuzatilgan o‘smaga qarshi effektlar, hech bo‘lmaganda, o‘simta massasiga infiltratsiya qiluvchi limfotsitlarda ifodalangan 3-AR modulyatsiyasiga tayanadi. Xususan, biz TILlarda 3-AR ning selektiv blokadasi IFN- sekretsiyasini kamaytirganini, bu esa o'z navbatida immun-reaktiv TMEni rag'batlantiradigan NB o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasini kamaytirishini ko'rsatdik.
Shakl. 5 3-TILlardagi AR NB o'simta hujayralarida IFN- -bog'liq PD-L1 ifodasini qo'llab-quvvatlaydi. A
ADRB3 gen ifodasi NB bemorlarida yomon prognoz bilan bog'liq
Ba'zi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, {0}}AR mRNK va/yoki oqsil haddan tashqari ifodalangan va ba'zi hollarda turli inson saratonlarida neoplastik proliferatsiya va transformatsiya bilan bog'liq [10, 30-32]. Shunga ko'ra, NB ning singenik sichqon modelida olingan klinikadan oldingi natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, 3-AR signalizatsiyasi o'simta o'sishiga yordam beradigan turli pro-tumoral jarayonlarni saqlab turishi mumkin. Shuning uchun, ADRB3 gen ifodasi NB bemorlarining omon qolishi bilan bog'liqligini tekshirish uchun biz R2: Genomik tahlil va vizualizatsiya platformasi (http://r2.amc.nl) orqali Kocak ma'lumotlar bazasidan foydalangan holda Kaplan-Meier tahlilini o'tkazdik. 649 NB bemorlarining klinik ma'lumotlari haqida to'liq ma'lumot. Natijalar shuni ko'rsatdiki, ADRB3 genining ekspressiyasi NB bo'lgan bemorlarda yomon natijalar bilan bog'liq. ADRB3 genining yuqori ifodalanishi haqiqatan ham hodisasiz (p=3.2e-05) (7A-rasm) va umumiy omon qolish (p=8.4e-0,5) (p=3.2e-05) kamayishi bilan sezilarli darajada bog'liq edi. NB bemorlarining 7B-rasm. Bundan tashqari, ba'zi kogortalarda gen korrelyatsiyasi tahlili ADRB3 va CD80, CTLA4 va CD276 kabi inhibitiv immun nazorat nuqtalari uchun genlar o'rtasida ijobiy korrelyatsiyani va immun tizimini faollashtiruvchi immun nazorat nuqtalari genlari bilan salbiy korrelyatsiyani ko'rsatdi, masalan, CD266, CD40 ligand (CD40LG) va 4-1BB ligand (4-1BBL) (7C-rasm). Umuman olganda, olingan ma'lumotlar ADRB3 geni ekspressiyasining NB bemorlari natijalari bilan salbiy bog'liqligini ta'kidlaydi va 3-ARning ko'plab immun nazorat punktlariga ta'sir ko'rsatish orqali o'simtaga qarshi immun javoblarini susaytirishga qodir bo'lgan molekulyar o'yinchi sifatidagi rolini tasdiqlaydi va kuchaytiradi. signalizatsiya yo'llari.
MUHOKAZA
O'ziga xos neyrogen kelib chiqishi tufayli katexolamin metabolitlarining yuqori darajasi NB o'simta holatini tavsiflaydi [7, 33]. Oldingi ishda biz TMEdagi katexolaminning chiqarilishi -ARlarni faollashtirish orqali saraton hujayralarini nishonga olishi mumkin, bu NB saratonida o'sish va malign o'sishning oldinga siljishini qo'zg'atishi mumkin deb taxmin qilgan edik. Haqiqatan ham, eksperimental ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, 3-AR turli NB o'simta hujayralari liniyalarida va bemorlarning biopsiyalarida ifodalangan va uning modulyatsiyasi NB ning singenik sichqon modelida o'simta o'sishiga sezilarli ta'sir ko'rsatgan [12]. O'simta hujayralarida -AR ifodasiga qo'shimcha ravishda, -ARlar TME ning aksariyat hujayralari, shu jumladan immun hujayralar yuzasida joylashganligi va katexolaminlarning immun hujayralardagi -ARlarga bog'lanishi ham tug'ma, ham adaptiv immunitetni tartibga solishi keng ma'lum. [34]. Shuni ta'kidlash kerakki, fiziologik sharoitda -adrenergik signalizatsiya orqali immun tizimining modulyatsiyasi normal immunitet reaktsiyasini kuchaytiradi, o'zgartirilgan jarayonlarda SNS/katexolaminlar/-ARs-uzoq vaqtli stimulyatsiya turli immun hujayralari, shu jumladan limfotsitlarga zararli ta'sir ko'rsatishi mumkin [35, 36] ]. Ushbu o'zgargan sharoitlarda adrenergik signalizatsiyaning doimiy stimulyatsiyasi patologik jarayonlarga va boshqalar qatorida saraton rivojlanishiga yordam beradi [37]. Yuqorida aytib o'tilgan kuzatishlardan kelib chiqib, bizning tadqiqotimiz NB o'smalarida 3-AR antagonizmi keltirib chiqaradigan o'simtaga qarshi ta'sirlar qisman o'simtaga qarshi immunitetning kuchayishiga tayanishi mumkinmi yoki yo'qligini tekshirishdan iborat. immun nazorat punktlari signalizatsiya yo'llarining modulyatsiyasi. Klinikadan oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, metastatik NBda PD-L1 ifodasi immun nazoratini cheklashning hal qiluvchi mexanizmidir [15] va anti-PD-L1/PD-1 va anti-CD4 antikorlari bilan birgalikda immunoterapiya singenik tarqalgan NBni davolaydi. 38]. Yaqinda PD-L1 ifodasi bir nechta pediatrik o'smalarda baholandi va birinchi navbatda, PD-L1 bo'yalishi NB bo'lgan bemorlarda omon qolishning pastligi bilan bog'liq edi [16, 39]. Bundan tashqari, PD-L1-musbat o'smalar buyrak usti bezlarida PD-L{37}manfiy o'smalariga qaraganda tez-tez joylashishi va katexolamin metabolitlari (NSE, VMA va HVA) moyilligi ko'rsatildi. PD-L1-musbat guruhda PD-L1-salbiy guruhga qaraganda yuqori [16].
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Ushbu dalillar PD-1/PD-L1 signalizatsiya o'qining asosiy va metastatik NBda o'simta immunitetidan qochishni nazorat qilish qobiliyatini ko'rsatdi, ammo ular PD-1/PD- ostida yotgan aniq mexanizmlarni o'rganmaganlar. L1 signalizatsiyasini tartibga solish. 3-AR modulyatsiyasi NBdagi PD-L1 ifodasiga va natijada TMEdagi immun reaktivligiga ta'sir qilishi mumkinligini tekshirish uchun biz singenik N2A NB hujayralari bilan emlangan A/J sichqonlarini 3- bilan davolashdik. AR antagonisti SR59230A, PD-L1 monoklonal antikori (PD-L1) yoki ularning kombinatsiyasi. Birinchidan, biz 3-AR antagonizmi NB o'simtasi o'sishini kamaytirishi va NB saqlovchi sichqonlarning TMEda PD-L1 ifodasini bir vaqtning o'zida kamaytirishi mumkinligini kuzatdik. Oqim sitometriyasi shuni ko'rsatdiki, SR59230A bilan davolash qilingan sichqonlarning o'simta massasida kuzatilgan PD-L1 miqdorining pasayishi asosan o'simta hujayralarining kamaygan ifodasini aks ettiradi. Bundan keskin farqli o'laroq, DC va makrofaglarda PD-L1 ifodasi ko'tarildi. O'simta hujayralarida va APClarda joylashgan PD-L1 ga tayinlangan bir qancha ilmiy dalillar T hujayralari faollashuvini susaytirish qobiliyatiga ega, bu o'simtaga qarshi samarali immun reaktsiyasini qisman to'xtatadi [40]. Biroq, yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, antigenni qabul qilish va o'simta antijenlarining T hujayralariga o'zaro ta'sirida, adaptiv immunitetning hal qiluvchi bosqichi bo'lgan DC va makrofaglar PD-L1 ni tartibga solib, T hujayralarining haddan tashqari faollashuvini cheklaydi va ularni sitotoksik faollikdan himoya qiladi. T hujayralari [41, 42]. Shuning uchun biz PD-L1 ning o'simta hujayralarida kamayishi va uning SR59230A bilan davolash qilingan o'simta massasida APClarda ko'payishi, ehtimol TMEda immunitet tizimining tiklanishini aks ettiradi deb taxmin qildik. Natijalar o'simtaga infiltratsiya qiluvchi immun-reaktiv hujayralar (NK, DC va CD8+) ko'payganini va o'simtani infiltratsiya qiluvchi immun-supressiv hujayralar (Treg va MDSC) kamayganini tasdiqladi. TILlardagi PD-1 immun nazorat punktining ekspressiv tahlili TDLNlarda PD-1+CD4+ va PD- 1+CD8+ T hujayralari soni sezilarli darajada oshganini ko'rsatdi. SR59230A, PD-L1 yoki nazorat bilan solishtirganda 8 kundan (T8) keyin o'simta rivojlanishining dastlabki bosqichi (T2) va PD-1+CD8+. SR59230A, PD-L1 muolajalari va ularning kombinatsiyasi o'smalarida TIM3 yoki LAG3 uchun bo'yalgan CD4+ T hujayralari sonining o'sish tendentsiyasi ham qayd etildi, ammo ular statistik ahamiyatga ega bo'lmadi. TIM3 yoki LAG3 uchun bo'yalgan CD8+ T hujayralari uchun biz katta o'zgaruvchanlikni kuzatdik. Ba'zi adabiyot ma'lumotlari T hujayralarini ifodalovchi PD-1, LAG-3 va TIM-3 charchagan va ishlamay qolganligini ko'rsatgan bo'lsa-da [43-45], boshqalari bu immun nazorat nuqtalari, xususan, PD ekanligini ko'rsatdi. -1, shuningdek, faollashuv va effektor T-hujayralarining differentsiatsiyasidan keyin yuqori tartibga solinadi [46-48] va shuning uchun ifoda o'z-o'zidan charchagan holatni aks ettirmaydi, aksincha, bu markerlar turli o'smalarga infiltratsiya qiluvchi otologik o'simta-reaktiv repertuarni aniqlaydi [46-] 49]. Kelishuvga ko'ra, bizning o'simta modelimizdagi chuqurroq tadqiqotlar shuni tasdiqladiki, 3-AR antagonizmi, anti-PD-L1 mAb bilan davolash, CD8+ ning sitotoksik funktsiyalarini ishga tushirgan, bu PD sonining ko'payishi bilan ko'rsatilgan. Perforin yoki granzim B uchun bo'yalgan 1+CD8+ hujayralari o'simta massasida topilgan PD1+ TILlar funktsional faolligini tasdiqlaydi. O'simtada CD{84}} sitotoksik T hujayralarining yuqori infiltratsiyasi melanoma, bosh va bo'yin, ko'krak, yo'g'on ichak, tuxumdon, prostata va boshqa saraton kasalliklari bo'lgan bemorlarda ijobiy prognoz bilan bog'liqligi ko'rsatildi [50]. NBda yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, o'simta infiltratsiya qiluvchi T hujayralari bilan boyitilgan o'smalar, o'simta bosqichini aniqlash uchun qabul qilingan boshqa joriy ko'rsatkichlardan qat'iy nazar, yaxshi klinik natijaga ega bo'ladi [51]. Bundan tashqari, so'nggi topilmalar o'simta massasida DC va NK hujayralarining mavjudligi T hujayralari infiltratsiyasi va NB bemorlarining ijobiy klinik natijalari bilan ijobiy bog'liqligini ko'rsatdi [52]. Bu klinik dalillarning barchasi bizning klinikadan oldingi natijalarimizga mos keladi, unda NK, DC va CD{89}} T hujayralari bilan boyitilgan TME 3- AR antagonizmi yoki PD-L1 administratsiyasidan keyin kuzatilgan funksional ravishda NB o'simta o'sishini nazorat qilish. Xost immun tizimining o'smalarga qarshi kurashining asosiy jihati TMEda turli xil sitokinlarning chiqarilishi bo'lib, ular o'simtaga qarshi faollikni qo'llab-quvvatlashi yoki susaytirishi mumkin. SR59230A va PD-L bilan davolash qilingan sichqonlarda o'simtadagi sitokinlarni o'lchash tasdiqlandi, bu holat immun-reaktiv TME tomon siljigan. Biroq, antitumoral sitokinlar orasida TNF- va IL{101}} darajalari oshgan bo'lsa-da, 3-AR antagonisti bilan davolash qilingan sichqonlarning o'simta massasida IFN- darajasi pasaygan. Ushbu kuzatishdan kelib chiqib, biz 3-O'simtaga infiltratsiya qiluvchi T hujayralarida, xususan, CD4+ va CD8+da AR signalizatsiyasining modulyatsiyasi IFN-ning o'zgarishiga mas'ul bo'lishi mumkinligini taxmin qildik. sekretsiya, bu o'z navbatida o'simta hujayralarida PD-L1 ifodasiga ta'sir qildi. Natijalar bizning farazimizni tasdiqladi. TILlardagi selektiv 3-AR antagonizmi, haqiqatan ham, bu hujayralarni IFN- sekretsiyasi oʻzgarganligi sababli NB oʻsimta hujayralarida PD-L1 ifodasini qoʻzgʻatishda samarasiz boʻlib, de-fakto adaptiv immun qarshilik paydo boʻlishining oldini oldi. TMEda IFN o'simtaga qarshi va antitumor immun javoblarini tartibga soladi, granzim B va perforin bilan birgalikda o'simta hujayralarini urish uchun sitotoksik sitokin rolini o'ynaydi, shuningdek, immun-supressiv mexanizmlarni rag'batlantiradigan inhibitiv immun nazorat nuqtalarining sintezini qo'zg'atadi [53]. IFN-ning qarama-qarshi ta'sirlarni keltirib chiqarishdagi bu bimodal roli hali to'liq tushunilmagan murakkab mexanizmlarga bog'liq, ammo ajralib chiqadigan IFN miqdori ushbu sitokin ta'sirini aniqlashda hal qiluvchi ko'rinadi [54]. Shunga ko'ra, biz taxmin qilamizki, bizning modelimizdagi 3- AR antagonizmi TILlarda olib kelingan IFN- miqdorining kamayishi, IFN-ga surunkali ta'sir qilish ko'proq immunosupressiv mexanizmlarni kuchaytiradigan nazorat holati bilan solishtirganda immun javoblarini afzal ko'radi. -AR kichik turlari orasida 2-AR turli xil immun hujayralari yuzasida eng ko'p ifodalangan ko'rinadi. Ammo shuni ta'kidlash kerakki, 3-AR, -ARlarning oxirgi aniqlangan a'zosi, hozirgi kunga qadar eng kam o'rganilgan. Shuning uchun, SR59230A administratsiyasi asosan 3-AR kichik turini blokirovka qiluvchi ta'sir ko'rsatishini tasdiqlash uchun biz birinchi navbatda TDLN limfotsitlari va o'simta infiltratsiya qiluvchi T hujayralarida 3-AR oqsili ifodasini tekshirdik va tasdiqladik. Biz 3-AR oqsilining oʻsimta infiltratsiya qiluvchi CD4+ va CD8+ da, soʻngra selektiv 1-, 2- va {{ orqali ifodalanishini koʻrsatdik. 140}}AR ni o'chirishda biz limfotsitlarda joylashgan 3-AR kichik turining NB o'simta hujayralarida IFN- -bog'liq PD-L1 ifodasini boshqarishdagi muhim rolini tasdiqladik. Shuni ta'kidlash kerakki, turli to'qimalar va hujayra modellari bo'yicha keng qamrovli ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, 1- va 2-ARlar endogen katexolaminlarga uzoq vaqt ta'sir qilishdan keyin gomologik desensitizatsiya fenomeniga ko'proq moyil bo'ladi, {{147} }AR kichik turi boʻlmasligi koʻrsatilgan va shunga qaramay, baʼzi hujayralarda 3-AR desensitizatsiyasi sodir boʻlganda, u 1- va 2-ARs [ 55]. Keyin biz taxmin qilamizki, katexolaminlarning surunkali ta'siri bilan tavsiflangan holat bo'lgan NB o'simtasida, fiziologik jihatdan eng ko'p ifodalangan TILlardagi 2-AR kichik turi desensitizatsiyadan keyin pastga regulyatsiyaga uchraydi va aksincha, 3-AR ga olib keladi. katexolamin tomonidan qo'zg'atilgan pro-tumoral ta'sirlarni vositachilik qilishda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Odamlarda 3- AR ifodasining oʻsimtaga moyilligini oʻrganish uchun nihoyat ochiq kirish R2: Genomik tahlil va vizualizatsiya platformasidan foydalangan holda 649 NB bemorida genetik tahlil oʻtkazdik. ADRB3 genining yuqori ifodasi NB bemorlarining eng yomon klinik natijalari (umumiy va hodisalarsiz omon qolish) bilan bog'liq bo'lib, pastroq ifoda bilan solishtirganda; bundan tashqari, CD80, CTLA4 va B{165}}H3 (CD276) kabi turli xil immun supressiv nazorat nuqtalari bilan ADRB3 genining ijobiy korrelyatsiyasi va CD266, CD40LG va 4-1 kabi immun faollashtiruvchi nazorat nuqtalari bilan salbiy korrelyatsiya. BBL NBda immun reaktivligini kompleks tartibga solishda 3-AR ning salbiy rolini tasdiqladi. Xususan, ADRB3 gen ifodasining immun-supressiv nazorat nuqtalari bilan ijobiy korrelyatsiyasi, masalan, CD276, NB bilan bog'liq bo'lgan molekula, javob bermaydigan NB variantlarida topilgan, bu NK hujayra vositachiligidagi lizizdan himoya rolini o'ynaydi [56, 57], yoki CTLA4 bilan, uning inhibisyoni NB [58] da antitumor T hujayralarini o'ldirishni kuchaytirishda ortiqcha emasligi ko'rsatilgan, 3- AR signalining o'simta immunitetidan qochishga yordam beradigan turli mexanizmlarni qo'llab-quvvatlash qobiliyatini ta'kidladi. Biz taxmin qilishimiz mumkinki, yuqori ADRB3 gen ekspresyonu va turli immun nazorat nuqtalarining ortib borayotgan ekspressiyasi o'rtasidagi bog'liqlik 3-ARning haddan tashqari faollashuvi o'simtaga chidamlilikning boshlanishiga yordam beradigan mexanizmlarni qo'llab-quvvatlash qobiliyatiga tayanishi mumkin, masalan, ba'zi prognominallarga surunkali ta'sir qilish. - yallig'lanish sitokinlari. NBda nazorat punktini inhibe qilish bo'yicha dastlabki tadqiqotlar har doim ham muvaffaqiyatli bo'lmagan. Xususan, klinikadan oldingi tadqiqot modellarida ham, odamlarda ham bir nechta ICIlarni qabul qilgan terapevtik strategiyalarda olingan yaxshi javoblar, turli xil immun nazorat nuqtalarini nishonga olish NBda ortiqcha bo'lmagan samarali anti-tumoral yondashuv ekanligini ko'rsatdi [58, 59]. Keyinchalik, turli xil immunosupressiv yo'llarni maqsad qilib qo'yish, bir maqsadli terapiyaning o'simtaga chidamliligini oldini olish uchun eng yaxshi terapevtik variantni ko'rsatishi mumkin. Biroq, bir nechta dori-darmonlarni qo'llash har doim ham muammoli bo'lib, og'ir yon ta'siri va toksikligi tufayli har doim ham kerakli natijalarga olib kelmadi. Shu sababli, yangi immun-onkologik yondashuvlarni ishlab chiqish uchun TME ning immun hamkasbining murakkab tarmog'ini tartibga solishda ishtirok etadigan molekulyar mexanizmlarni chuqurroq bilish kerak. Shu nuqtai nazardan, taqdim etilgan natijalar shuni ko'rsatadiki, NB TME da 3-ARni nishonga olish bir nechta ortiqcha bo'lmagan pro-tumoral signalizatsiya yo'llarini urish uchun mumkin bo'lgan yondashuvni ko'rsatishi mumkin. Xususan, immunitetni nazorat qilish punktlari bilan hamkorlikda yuzaga kelgan to'siqni olib tashlash va o'simta hujayralarining omon qolish yo'llari orqali xostning immun tizimiga ta'sir qilish orqali 3-AR antagonizmi, umid qilamanki, terapevtik ta'sir ko'rsatadigan istiqbolli strategiya bo'lishi mumkin. NB malignitesi bilan kasallangan bemorlar uchun potentsial. NBda xost immun tizimi va o'simta hamkasbi o'rtasidagi murakkab o'zaro ta'sirga asoslangan qo'shimcha mexanizmlarni chuqurlashtirish uchun hali ham ko'proq tadqiqotlar talab etiladi. Shunga qaramay, biz kuzatgan narsalardan kelib chiqqan holda, NB o'smalarining TME-da -adrenergik signalizatsiyasini o'rganish e'tiborga olinishi kerak.
6-rasm NB o'sma massasining transkriptomik tahlillari immunitet bilan bog'liq jarayonlarga ta'sir qilishda 3-AR ning muhim rolini tasdiqlaydi.
7-rasm Kaplan-Meier omon qolish tahlili va NB bemorlarida ADRB3 gen ifodasi bilan immun nazorat nuqtalarining korrelyatsiyasi.
ADABIYOTLAR
1. Cheung NK, Dyer MA. Neyroblastoma: rivojlanish biologiyasi, saraton genomikasi va immunoterapiya. Nat Rev Saraton. 2013;13:397–411.
2. Matthay KK, Maris JM, Gudrun S, Nakagawara A, Mackal CL, Diller L va boshqalar. Neyroblastoma. Nat Rev Dis Prim. 2016;2:16078.
3. Darvin P, Toor SM, Nair SN, Elkord E. Immunitetni nazorat qilish punkti inhibitörleri: so'nggi taraqqiyot va potentsial biomarkerlar. Exp Mol Med. 2018;50:1–11.
4. Pardoll DM. Saraton immunoterapiyasida immun nazorat punktlarining blokadasi. Nat Rev Saraton. 2012;12:252–64.
5. Zou W, Wolchok JD, Chen L. PD-L1 (B7-H1) va PD-1 saraton terapiyasi uchun yo'l blokadasi: mexanizmlar, javob biomarkerlari va kombinatsiyalar. Sci Transl Med. 2016;8:328rv4.
6. Koul SW, Sood AK. Molekulyar yo'llar: saraton kasalligida beta-adrenergik signalizatsiya. Clin Cancer Res. 2012;18:1201–6.
7. Strenger V, Kerlb R, Dornbusch HJ, Ladenstein R, Ambros PF, Ambros IM va boshqalar. Neyroblastomali bemorlarda siydik katekolaminlarining diagnostik va prognostik ta'siri. Pediatr qon saratoni. 2007;48:504–9.
8. Huang XE, Xamajima N, Saito T, Matsuo K, Mizutani M, Iwata H va boshqalar. Beta2- va beta{2}}adrenergik retseptorlari gen polimorfizmlarining ko‘krak bezi saratoniga moyilligi bilan bog‘lanishi mumkin. Ko'krak bezi saratoni Res. 2001;3:264–9.
9. Babol K, Przybylowska K, Lukaszek M, Pertynski T, Blasiak J. Beta{2}}adrenergik retseptorlari genidagi Trp64Arg polimorfizmi va endometrium saratoni va semirish o'rtasidagi bog'liqlik. J Exp Clin Saraton Res. 2004;23:669–74.
10. Perrone MG, Notarnicola M, Karuso MG, Tutino V, Scilimati A. Odamning yo'g'on ichak saratonida beta{1}}adrenergik retseptorlari mRNKni ko'paytirish: dastlabki tadqiqot. Onkologiya. 2008;75:224–9.
11. Magnon C, Hall SJ, Lin J, Xue X, Gerber L, Freedland SJ va boshqalar. Avtonom nervlarning rivojlanishi prostata saratoni rivojlanishiga yordam beradi. Fan. 2013;341:1236361.
12. Bruno G, Centetti F, Pini A, Tondo A, Cuzzubbo D, Fontana F va boshqalar. beta{1}}adrenergik retseptorlarni blokadasi SK2/S1P2 modulyatsiyasi orqali o'simta o'sishini pasaytiradi va neyroblastomada neyronal differentsiatsiyani oshiradi. Onkogen. 2020;39:368–84.
13. Kalvani M, Bruno G, Dal Monte M, Nassini R, Fontana F, Casini A va boshqalar. beta{1}}Adrenoreseptor melanomada potentsial immunosupressor agenti sifatida. Br J Pharm. 2019;176:2509–24.
14. Dal Monte M, Kasini G, Filippi L, Nicchia MG, Svelto M, Bagnoli P. Beta{1}}adrenergik retseptorlarning melanoma o'sishi va qon tomirlanishida funktsional ishtiroki. J Mol Med. 2013;91:1407–19.
15. Dondero A, Pastorino F, Della Chiesa M, Corrias MV, Morandi F, Pistoia V va boshqalar. Metastatik neyroblastomada PDL1 ifodasi immunitetni nazorat qilishni cheklash uchun qo'shimcha mexanizm sifatida. Onkoimmunologiya. 2016;5:e1064578.
16. Zuo S, Sho M, Sawai T, Kanehiro H, Maeda K, Yoshida M va boshqalar. Neyroblastomada PD-L1 ifodasi va o'simtani infiltratsiya qiluvchi limfotsitlarning potentsial roli. Pediatr Surg Int. 2020;36:137–43.
17. Keir ME, Butte MJ, Feeman GJ, Sharpe AH. PD-1 va uning tolerantlik va immunitetdagi ligandlari. Annu Rev Immunol. 2008;26:677–704.
18. Curiel TJ, Wei S, Dong H, Alvarez X, Cheng P, Mottram P va boshqalar. B7-H1 blokadasi miyeloid dendritik hujayra vositachiligida o'smaga qarshi immunitetni yaxshilaydi. Nat Med. 2003;9:562–7.
19. Vu K, Kryczek I, Cheng L, Zou V, Welling TH. Odamning gepatotsellyulyar karsinomasida CD8+ T hujayralarining kupfer hujayralarining bostirilishi B7-H1/dasturlashtirilgan o'lim-1 o'zaro ta'siri orqali amalga oshiriladi. Saraton Res. 2009;69:8067–75.
20. Kuang DM, Zhao Q, Peng C, Xu J, Zhang JP, Vu C va boshqalar. Gepatotsellyulyar karsinomaning peritumoral stromasidagi faollashtirilgan monotsitlar PD-L1 orqali immunitetni va kasallikning rivojlanishini kuchaytiradi. J Exp Med. 2009;206:1327–37.
21. Rotte A, Jin JY, Lemaire V. Saraton immunoterapiyasida ularning kombinatsiyalarining oqilona dizaynini qo'llab-quvvatlash uchun immun nazorat punktlarining mexanik sharhi. Enn Onkol. 2018;29:71–83.
22. Dammeijer F, van Gulijk M, Mulder EE, Lukkes M, Klaase L, van den Bosch T va boshqalar. PD-1/PD-L1 nazorat punkti o'simtani drenajlovchi limfa tugunlarida T-hujayra immunitetini cheklaydi. Saraton hujayrasi. 2020;38:685–700. e8.
23. Cha JH, Chan LC, Li CW, Hsu JL, Hung MC. Saraton kasalligida PD-L1 ifodasini nazorat qiluvchi mexanizmlar. Mol hujayra. 2019;76:359–70.
24. Burke JD, Young HA. IFN-: sitokin to'g'ri vaqtda, to'g'ri joyda. Semin immunol. 2019;43:101280.
25. Shena G, Kaplan MJ. 3-AR* haqida doim bilishni xohlagan hamma narsa (* lekin soʻrashdan qoʻrqdingiz). Hujayralar. 2019;8:357.
26. Liu Y, Guo YL, Zhou SJ, Liu F, Du FJ, Zheng XJ va boshqalar. CREB latent, ammo faol bo'lmagan sil infektsiyalarida gamma-interferonning ijobiy transkripsiya regulyatoridir. Klin va vaktsina Immunol. 2010;17:1377–80.
27. Samten B, Townsend JC, Weis SE, Bhoumik A, Klucar P, Shams H va boshqalar. CREB, ATF va AP{1}} transkripsiya omillari mikobakterial antigenga javoban inson T hujayralari tomonidan IFN-gamma sekretsiyasini tartibga soladi. J Immunol. 2008;181:2056–64.
28. Matloubian M, Lo CG, Cinamon G, Lesneski MJ, Xu Y, Brinkmann V va boshqalar. Limfotsitlarning timus va periferik limfoid organlardan chiqishi S1P retseptoriga bog'liq 1. Tabiat. 2004;427:355–60.
29. Li MH, Hla T, Ferrer F. FTY720 o'simta o'sishini inhibe qiladi va sfingolipid signalizatsiya yo'liga aralashib, neyroblastomada topotekanning o'simtani bostirish ta'sirini kuchaytiradi. Pediatr qon saratoni. 2013;60:1418–23.
30. Chisholm KM, Chang KW, Truong MT, Kwok S, West RB, Heerema-McKenney AE. qon tomir o'smalarida beta-adrenergik retseptorlari ifodasi. Mod Pathol. 2012;25:1446–51.
31. Montoya A, Amaya CN, Belmont A, Diab N, Trevino R, Villanueva G va boshqalar. Selektiv bo'lmagan beta-blokerlardan foydalanish ko'krak bezi saratonining dastlabki bosqichida o'simta proliferativ ko'rsatkichlarining pasayishi bilan bog'liq. Onkotarget. 2017;8:6446–60.
32. Rains SL, Amaya CN, Bryan BA. Beta-adrenergik retseptorlari turli xil saratonlarda namoyon bo'ladi. Onkoscience. 2017;4:95–105.
33. Verly IR, van Kuilenburg ABP, Abeling NGGM, Goorden SMI, Fiocco M, Vaz FM va boshqalar. Tashxisda katexolaminlar profili: neyroblastomali bemorlarda diagnostika sezgirligi va biologik va klinik xususiyatlar bilan bog'liqligi. Evr J Saraton. 2017;72:235–43.
34. Eng JWL, Kokolus KM, Reed CB, Hylander BL, MA WW, Repasky va boshqalar. Asab o'smalari mikro muhiti: adrenergik stressning saraton hujayralariga ta'siri, immunosupressiya va immunoterapevtik javob. Saraton Immunol Immunother. 2014;63:1115–28.
35. Dhabhar FS, McEwen BS. O'tkir stress kuchayadi, surunkali stress esa in vivo jonli ravishda hujayra vositachiligidagi immunitetni bostiradi: leykotsitlar savdosi uchun potentsial rol. Miya xulq-atvori immuniteti. 1997;11:286–306.
36. Dhabhar FS. Stress tufayli immunitet funktsiyasining kuchayishi - stress gormonlari, leykotsitlar savdosi va sitokinlarning roli. Miya xulq-atvori immuniteti. 2002;16:785–98.
37. Qiao G, Chen M, Bucsek MJ, Repasky EA, Hylander BL. Adrenergik signalizatsiya: o'smaga qarshi immunitet reaktsiyasining rivojlanishini cheklaydigan maqsadli nazorat nuqtasi. Old immunol. 2018;9:164.
38. Rigo V, Emionite L, Daga A, Astigiano S, Corrias MV, Quintarelli C va boshqalar. Anti-PDL-1/PD-1 va anti-CD4 antikorlari bilan kombinatsiyalangan immunoterapiya singenik tarqalgan neyroblastomani davolaydi. Sci Rep. 2017;7:14049.
39. Majzner RG, Simon JS, Grosso JF, Martinez D, Pawel BR, Santi M va boshqalar. Bolalar saratoni to'qimalarida dasturlashtirilgan o'lim ligand 1 ifodasini va o'simta bilan bog'liq immun hujayralarini baholash. Saraton. 2017;123:3807–15.
40. Gibbons Jonson RM, Dong H. Immun hujayralari va o'simta hujayralari tomonidan dasturlashtirilgan o'lim ligand 1 (B7-H1)ning funktsional ifodasi. Old immunol. 2017;8:961.
41. Peng Q, Qiu X, Zhang Z, Zhang S, Zhang Y, Liang Y va boshqalar. Dendritik hujayralardagi PD-L1 T hujayralari faollashuvini susaytiradi va immun nazorat nuqtasi blokadasiga javobni tartibga soladi. Nat Commun. 2020;11:4835.
42. Singhal S, Stadanlick J, Annunziata MJ, Rao AS, Bhojnagarwala PS, O'Brien S va boshqalar. Inson o'smalari bilan bog'liq monotsitlar / makrofaglar va o'pka saratonining dastlabki bosqichida T hujayralarining javoblarini tartibga solish. Sci Transl Med. 2019;11:eaat1500.
43. Blackburn SD, Shin H, Haining WN, Zou T, Workman CJ, Polley A va boshqalar. Surunkali virusli infektsiya paytida bir nechta inhibitor retseptorlari tomonidan CD8+ T-hujayralarning charchashini tartibga solish. Nat immunol. 2009;10:29–37.
44. Jin HT, Anderson AC, Tan WG, West EE, Ha SJ, Araki K va boshqalar. Tim-3 va PD-1 ning surunkali virusli infektsiya vaqtida CD8 T-hujayralarining tükenishida hamkorligi. Proc Natl Acad Sci AQSh. 2010;107:14733–8.
45. Sakuishi K, Apetoh L, Sullivan JM, Blazar BR, Kuchroo VK, Anderson AC. T-hujayralarning charchashini qaytarish va o'smaga qarshi immunitetni tiklash uchun Tim-3 va PD-1 yo'llarini maqsad qilib olish. J Exp Med. 2010;207:2187–94.
46. Agata Y, Kawasaki A, Nishimura H, Ishida Y, Tsubata T, Yagita H va boshqalar. Rag'batlantirilgan sichqonchaning T va B limfotsitlari yuzasida PD-1 antijenining ifodalanishi. Int Immunol. 1996;8:765–72.
47. Vibhakar R, Xuan G, Traganos F, Darzinkiewicz Z, Finger LR. T-limfotsitlarda odamning dasturlashtirilgan o'limi-1 genining faollashuvi natijasida yuzaga kelgan ifodasi. Exp Cell Res. 1997;232:25–8.
48. Freeman GJ, Long AJ, Iwai Y, Bourque K, Chernova T, Nishimura H va boshqalar. B7 oilasining yangi a'zosi tomonidan PD-1 immunoingibitor retseptorlarini jalb qilish limfotsitlar faollashuvining salbiy regulyatsiyasiga olib keladi. J Exp Med. 2000;192:1027–34.
49. Gros A, Robbins PF, Yao X, Li YF, Turcotte S, Tran E va boshqalar. PD-1 bemorga xos CD8(+) o'simtaga reaktiv repertuarni inson o'smalariga infiltratsiya qiladi. J Clin Invest. 2014;124:2246–59.
50. Galon J, Kostes A, Sanches-Kabo F, Kirilovskiy A, Mlecnik B, Lagorce-Pages C va boshqalar. Odamning kolorektal o'smalari ichidagi immun hujayralarining turi, zichligi va joylashuvi klinik natijalarni bashorat qiladi. Fan. 2006;313:1960–4.
51. Mina M, Boldrini R, Citti A, Ruminiya P, D'Alicandro V, De Ioris M va boshqalar. O'simta infiltratsiya qiluvchi T limfotsitlari terapiyaga chidamli neyroblastomaning klinik natijalarini yaxshilaydi. Onkoimmunologiya. 2015;4:e1019981.
52. Melaiu O, Chierici M, Lucarini V, Jurman G, Conti LA, De Vito R va boshqalar. O'simta infiltratsiya qiluvchi dendritik hujayralar va tabiiy qotil hujayralarning uyali va gen belgilari neyroblastomaning prognozini taxmin qiladi. Nat Commun. 2020;11:5992.
53. Jorgovanovic D, Song M, Wang L, Zhang Y. IFN-gammaning o'simta rivojlanishi va regressiyasidagi roli: sharh. Biomark Res. 2020;8:49.
54. Chjan J. Yin va Yang yallig'lanish va otoimmün kasalliklarda IFN-gamma bilan o'zaro ta'sir qiladi. J Clin Invest. 2007;117:871–3.
55. Okeke K, Angers S, Bouvier M, Mishel MC. Agonistlar ta'sirida beta{2}}adrenoreseptorlarning desensitizatsiyasi: qayerda, qachon va qanday? Br J Pharm. 2019;176:2539–58.
56. Castriconi R, Dondero A, Augugliaro R, Cantoni C, Carnemolla B, Sementa AR va boshqalar. 4Ig-B7-H3 ni NK hujayra vositachiligidagi lizizdan himoya rolini o'ynaydigan neyroblastoma bilan bog'liq molekula sifatida aniqlash. Proc Natl Acad Sci AQSh. 2004;101:12640–5.
