Avtosomal retsessiv psevdogipoaldosteronizmning sababi sifatida yangi homozigot KLHL3 mutatsiyasiga kech tashxis qo'yilgan II toifa
Nov 02, 2023
Xulosa Kirish:
Psevdogipoaldosteronizm II tip (PHA II) giperkalemik atsidoz va past plazma renin darajasiga ega bo'lgan, odatda gipertenziya bilan bog'liq bo'lgan Mendel kasalligidir. WNK1, WNK4, CUL3 va KLHL3 mutatsiyalari PHA II ni keltirib chiqaradi, WNK1, WNK4 va CUL3da dominant mutatsiyalar va KLHL3da dominant yoki retsessiv mutatsiyalar mavjud. Resessiv KLHL3 mutatsiyasiga ega bo'lgan 14 ta oila haqida xabar berilgan, ular odatda buyrak funktsiyasi normal bo'lgan odamlarda 3 oylikdan 56 yoshgacha bo'lgan davrda tashxis qo'yilgan.
Usullari: Biz giperkalemik gipertenziya bilan og'rigan bemorda klinik va genetik tadqiqotlar o'tkazdik va KLHL3 nomzodi kasalligi mutatsiyasining WNK4 proteini ifodasiga ta'sirini o'rganish uchun molekulyar dinamika simulyatsiyasi, COS7 hujayralarida heterologik ifoda va g'arbiy blotingdan foydalandik.
BUYRAK UCHUN CISTANCHE FORMULASINI OLISH UCHUN SHU YERGA BOSING
Natijalar: Qarindosh oiladan boʻlgan 58- yoshli bemorda gipertoniya, kuchli mushak ogʻrigʻi, nefrolitiaz, surunkali buyrak kasalligi (KKD) va yurak ishemik kasalligi bilan bogʻliq davom etuvchi giperkalemik atsidoz kuzatildi. Gidroklorotiyazid bilan davolash giperkalemiya, gipertenziya va mushak og'rig'ini tuzatdi. Genetik tahlil yuqori darajada saqlanib qolgan KLHL3 pozitsiyasida homozigot p.Arg431Trp mutatsiyasini aniqladi. Simulyatsiyalar mutant oqsilning barqarorligini pasaytirishni taklif qildi, bu Western blot tomonidan tasdiqlangan. Yovvoyi turdagi KLHL3 bilan solishtirganda, p.Arg- 431Trp KLHL3 ning kotransfeksiyasi WNK4 oqsil darajasining oshishiga olib keldi, bu tiazidga sezgir tashuvchi va PHA II orqali NaCl reabsorbtsiyasining oshishiga olib keldi.
Xulosa: Hatto hayotning kech davrida va KKH bor bemorlarda ham, agar renin darajasi past bo'lsa va giperkalemik atsidoz va gipertenziya CKD bosqichi uchun etarli bo'lmasa, ayniqsa, shubhali oila tarixi mavjud bo'lsa, PHA II ga shubha qilish kerak.
Kirish
Tizimli arterial gipertenziya butun dunyo bo'ylab 1,1 milliarddan ortiq kattalarga ta'sir qiladi [1] va butun dunyo bo'ylab barcha sabablarga ko'ra kasallanish va o'lim uchun eng muhim o'zgartiriladigan xavf omili hisoblanadi [2]. Voyaga etgan bemorlarning taxminan 90 foizida birlamchi yoki asosiy gipertoniya deb ataladigan ko'p faktorli gen muhiti etiologiyasi mavjud [2], qolganlarida esa gipertenziyaning asosiy sababini aniqlash mumkin. Ikkilamchi gipertenziyaning keng tarqalgan sabablari birlamchi aldosteronizm, obstruktiv uyqu apneasi, parenximal buyrak kasalligi va buyrak arteriyasi stenozidir [3]. Kamdan kam hollarda gipertenziya monogenik xususiyat sifatida meros bo'lib o'tadi. Ta'sirlangan bemorlarda odatda past plazma renin darajasi kuzatiladi, aldosteron va elektrolitlar darajasi esa asosiy etiologiyaga qarab o'zgaradi [4]. Gipertenziyaning Mendel shakllari ko'pincha bolalik yoki yoshlik davrida namoyon bo'ladi. Kattalar mono-genik gipertenziya uchun kamdan-kam hollarda tekshiriladi; Shunday qilib, uning umumiy aholi orasida tarqalishi noma'lumligicha qolmoqda. Tanlangan kohortda (qo'shilish mezonlari kamida bittasi: boshlang'ich yoshi 35 yoshdan kam yoki unga teng, chidamli gipertenziya, elektrolitlar anormalliklari bilan gipertenziya, gormonal anormallik, anormal tasvir natijalari yoki taxminiy klinik belgilar), 37 nomzod gen skrining qilingan, 1179 holatdan 33 tasida (2,8%) patogen yoki ehtimoliy patogen variantlar aniqlangan [5].
Ushbu tadqiqot giperkalemik atsidoz va past plazma renin darajasiga ega bo'lgan Mendel gipertenziyasining II turi (PHA II) psevdogipoaldosteronizmga qaratilgan [6]. PHA II, shuningdek, oilaviy giperkalemik gipertenziya sifatida ham tanilgan. Bu birinchi marta 1964 yilda Paver va Paulin tomonidan buyrak funktsiyasi normal bo'lishiga qaramay, og'ir gipertenziya va giperkalemiya bilan og'rigan yosh erkakda tasvirlangan [7], uni Stokes va uning hamkasblari [8] va Arnold va Healy [9] qo'shimcha ravishda tavsiflagan va pastligi ko'rsatilgan. plazma renin. 1970 yilda Gordon va boshqalar tomonidan qisqa bo'yli, gipertoniya, og'ir giperkalemiya, engil atsidemiya, davriy falaj va bostirilgan renin bilan og'rigan 10- yoshli qizning hisobotidan keyin. [10], sindrom ba'zan Gordon sindromi deb ham ataladi.
2001 yilda lizinsiz (WNK) serin-treoninkinaz genlari WNK1 va WNK4 mutatsiyalari PHA II [11] va keyingi KLHL3 (kelchga o'xshash 3 kodlovchi) va CUL3 (kodlash) ning sabablari sifatida aniqlandi. cullin 3) genlari 2012 yilda tasvirlangan [12, 13]. WNK1, WNK4 va CUL3 mutatsiyalari natijasida kelib chiqqan PHA II subformalari autosomal-dominant kasalliklardir, KLHL3 mutatsiyalari esa avtosomal-dominant yoki autosomal-retsessiv tarzda meros bo'lishi mumkin [12]. KLHL3 N-terminal BTB domeni, undan keyin BACK domeni va kelchga o'xshash takrorlashlar deb ataladigan C-terminal olti qanotli pervanelli strukturaga ega (1d,2a-rasmda ko'rsatilgan). Dominant KLHL3 mutatsiyalari pervanel pichoqlari ichida yoki ular orasida to'planadi, retsessiv mutatsiyalar esa oqsil bo'ylab tarqaladi [12]. Resessiv holatlar dominant holatlarga qaraganda kamroq uchraydi; retsessiv KLHL3 mutatsiyasiga ega bo'lgan 14 oiladan jami 21 bemor chop etilgan [12-15] (1-jadval).
PHA IIdagi gipertenziyaning asosiy patofiziologiyasi buyrakning distal burmalangan tubulasida tiazidga sezgir tashuvchi (Na-Cl kotransporter, NCCT) orqali NaCl reabsorbtsiyasining kuchayishi hisoblanadi va tiazidlar bilan davolash PHA II bilan og'rigan bemorlarda gipertenziya va elektrolitlar anormalliklarini tuzatadi. [16]. Qisqasi, WNK1 va WNK4 OSR1 (oksidlovchi stressga javob beruvchi gen 1) va SPAK (Ste{8}}bog'langan prolin-alaninga boy kinaz) ni fosforlaydi, keyin esa NCCTni fosforlaydi va faollashtiradi [17, 18]. KLHL3 - ubiquitin ligaza CUL3 ning substrat adapteri; KLHL{15}}CUL3 kompleksi WNK kinazlarini ubiquitinillaydi va shu tariqa ularning degradatsiyasiga yordam beradi [19]. Ubiquitin ligaza funktsiyasining yo'qolishi yoki WNK kinazlari bilan bog'lanishning buzilishi WNK ko'pligining oshishiga, NCCT fosforillanishining kuchayishiga [18] va distal konvolyutsiyalangan tubulada NaCl so'rilishini oshiradi. Nefronning keyingi segmentlarida ENaC (epitelial natriy kanali) orqali NaCl reabsorbtsiyasi va ROMK (buyrak tashqi medullar kaliy kanali) orqali K+ sekretsiyasi kamayadi [20, 21]. KLHL3 nokaut sichqonlari distal konvolyutsiyalangan tubulaning gipoplaziyasini, WNK1 va WNK4 darajasining kuchli oshishini va buyrakda OSR1, SPAK va NCC fosforilatsiyasini oshiradi. Bundan tashqari, ular giperkalemiya, giperxloremiya va metabolik atsidozni ko'rsatadilar [22]. Bu erda biz autosomal-retsessiv PHA II bilan kasallangan bemor haqida xabar beramiz va asosiy genetik mutatsiya va patofiziologiyani tavsiflaymiz.
Materiallar va usullar
DNKni tayyorlash va Sanger sekvensiyasi DNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq QIAamp DNK Blood Maxi Kit (Qiagen) yordamida periferik venoz qon namunasidan tayyorlangan. KLHL3 [13], WNK1 va WNK4 [11] va CUL{5}}F (5'-AGGAGACACTTTCTCAAACCG-3') uchun nashr etilgan primerlar yordamida standart PCR va genomik DNKning to'g'ridan-to'g'ri ikki tomonlama Sanger ketma-ketligi amalga oshirildi. va CUL3 uchun CUL3_9R (5′-TGTTCTTCTCCAAAACAATCTACC-3') primerlari. Sanger sekvensiyasi Eurofins Genomics-da amalga oshirildi.
Ketma-ketlikni tekislash
Gomologik oqsil ketma-ketligi NCBI Protein BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) va eggNOG ma'lumotlar bazasi (http://eggnogdb.embl.de) yordamida aniqlandi. Koʻrsatilgan ketma-ketliklarga inson KLHL3 va uning ortologlari kiradi: Homo sapiens (NP_059111.2), Mus musculus (NP_001349344.2), Gallus gallus (XP_015149442.1), Danio rerio (XP_021328460.1), Ciona intestinalis (XP_009862126.1), Drosophila melanogaster (NP_724095.1) va Caenorhabditis elegans (NP_001254310.1) . Inson paraloglari adabiyot tadqiqotlari orqali aniqlangan va onlayn qo'shimcha 1-jadvalda ko'rsatilganidek, KLHL1 dan KLHL42 ga kiradi (barcha onlayn qo'shimcha materiallar uchun www.karger.com/doi/10.1159/000521626 ga qarang) [23]. Jalview versiyasi 2.10.5 [24] yordamida ketma-ketliklar hizalandi. Domen tuzilishi UniProt-dan (Q9UH77, 2021-yil 13-aprelda foydalanilgan) va DOG [25] yordamida tasvirlangan.
Plazmidlar va saytga yo'naltirilgan mutagenez
pTRE2hyg WNK4 va pFN21A KLHL3 plazmidlari doktor Shinichi Uchidaning (Tokio tibbiyot va stomatologiya universiteti) mehribon sovg'alari bo'ldi. P.R431W mutatsiyasini joriy qilish uchun primerlar Primer X (https://www.bioinformatics.org/primerx) yordamida ishlab chiqilgan: 5′- GATGAACACGCGGTGGAGCAGTGTGG -3′ (KLHL3_ R431W{{10} }F) va 5'- CCACACTGCTCCACCGCGTGTTCATC -3' (KLHL3_R431W_1R). Mutant qoldiqlari qalin qilib ko'rsatilgan. Saytga yo'naltirilgan mutagenez ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq PfuUltra yuqori aniqlikdagi DNK polimeraza (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, AQSH) bilan QuikChange Saytga yo'naltirilgan mutagenez to'plami yordamida amalga oshirildi. cDNK Eurofins Genomics da Sanger tomonidan ketma-ketlashtirilgan. Plazmidlar QIAGEN Plasmid Plus Maxi Kit yordamida tayyorlangan.
To'qimalar madaniyati, vaqtinchalik transfeksiya va Western Blot
COS7 hujayralari DMEM + L-glutamin, 1{52}}% FBS va 1% penitsillin/streptomitsinda (barchasi Gibco, Thermo Fisher) yetishtirildi. Transfeksiyalar uchun hujayralar 6-quduq plastinkalariga 1,9 × 105 hujayra/quduq zichligida ekilgan va taxminan 90% zichlikka yetishtirilgan. Hujayralar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq 1 mkg pTRE2hyg WNK4 va 2 mkg pFN21A (bo'sh vektor yoki KLHL3 yovvoyi turi [WT]) yoki KLHL3 R431W cDNA bilan Lipofektamin 2000 (Thermo Fisher Scientific) yordamida transfektsiya qilindi. Transfeksiya uchun ikkita mustaqil klon ishlatilgan. Transfektsiyadan 48 soat o'tgach, hujayralar sovuq PBSda yuvildi va 10 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA va to'liq Proteaz inhibitori kokteyli (Roche, Merck) o'z ichiga olgan 1% NP40 da lizing qilindi. Lizat 20,{49}} g haroratda 30 daqiqa davomida 4 darajada santrifüj qilindi va supernatant -20 darajada saqlangan. Protein kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq BCA tahlili (Pirs, Thermo Fisher) tomonidan ikki nusxada (standart) yoki uch nusxada (namunalar) aniqlandi. Taxminan 20 mkg umumiy protein SDSPAGE tomonidan fraksiyalangan va PVDF membranasiga o'tkazilgan (1,5 soat, 100 V). TBSTda 2% quruq sutda membranalar bloklangan. Western blot poliklonal quyonga qarshi HaloTag (Promega #G9281, 1:500, 4 daraja kechada) yordamida amalga oshirildi, so'ngra eshak IgG anti-quyon IgG (H + L)-HRPO (Jekson ImmunoResearch № {{46) bilan yuvib, inkubatsiya qilindi. }}, dianova, 1:20,000, xona haroratida 1 soat), yuvish va yaxshilangan xemiluminesans aniqlash (Amersham ECL Prime Western Blotting Detection Reagent, GE Healthcare). Blotlar ROTIFree Stripping Buffer 2.0 (Karl Roth) yordamida tozalandi, 2% quruq sutda TBSTda 4 darajada kechasi bloklandi va monoklonal sichqonchani anti-FLAG M2 (SigmaAldrich #F1804, Merck, 1:1,{{69}) bilan inkubatsiya qilindi. }, xona haroratida 1,5 soat), keyin eshak IgG sichqonchaga qarshi IgG (H + L)-HRPO (Jekson ImmunoResearch # 715-035-151, dianova, 1:20,000, xonada 1 soat harorat), yuqoridagi kabi ECLni aniqlash, tozalash va blokirovka qilish. Keyin dog'lar monoklonal sichqonchaga qarshi{71}}aktin (Sigma-Aldrich # A2228, Merck, 1:5,000, xona haroratida 1 soat) va eshak IgG sichqonchaga qarshi IgG bilan inkubatsiya qilindi, keyin yana ECL aniqlandi. Chiziqlar ChemiDoc XRS+ (Bio-Rad) da Image Lab dasturi yordamida aniqlandi. Anti-HaloTag antikori va anti-FLAG M2 antikori tomonidan aniqlangan chiziqlar intensivligi, mos ravishda, anti{84}} aktin antikorlari tomonidan aniqlangan tasmalarning mos intensivligiga bo'lingan. KLHL3 ifoda darajasini baholash uchun hujayralar yuqoridagi kabi transfektsiya qilindi, ammo 0 mkg, 0,5 mkg, 1 mkg, 2 mkg, 4 mkg va 8 mkg pFN21A KLHL3 WT yoki R431W yordamida. Jel elektroforezi va blotting yuqoridagi kabi amalga oshirildi. Sikloheksimidni ta'qib qilish tahlili uchun hujayralar yuqoridagi kabi ekilgan va yuqoridagi kabi transfektsiya qilingan, ammo 2 µg pFN21A KLHL3 WT yoki 4 µg KLHL3 R431W bilan. Transfeksiyadan 48 soat o'tgach, 100 mkM sikloheksimid qo'shildi va ko'rsatilgan vaqt nuqtalaridan keyin hujayralar lizing qilindi. Keyingi tahlil bosqichlari yuqoridagi kabi edi.
2-rasm. WT va p.Arg431Trp (R431W) KLHL3 Kelch domenlarining MD simulyatsiyalari. Kelch domenining yuqoridan pastga ko'rinishi (PDBID: 4CH9), parvona pichoqlari bilan ranglangan (K1–K6). Mutatsiya joyi sariq yulduz bilan ko'rsatilgan va qiziqish zonasi kulrang (qoldiqlar 425-465) va WNK4 peptidi (simulyatsiyalarga kiritilmagan) shaffof va kulrang rangga ega. b Protein magistralida ko'rsatilgan Kelch domenining MSFlaridagi farq. Mutatsiya joyi sariq yulduz bilan ko'rsatilgan. Qizil rang oqsilning yanada dinamik (kam barqaror) qismlarini ko'rsatadi. c RMSD butun oqsil (yuqorida), qoldiqlar 425–465 (oʻrtada) va WNK{15}}bogʻlovchi choʻntak (pastki) kristall strukturasidan uchta mustaqil simulyatsiya nusxasi (qalin chiziqlar, oʻrtacha ishlayotgan). d K3 (qoldiqlar 425–441) va K4 (442–465) o'rtasidagi hbonds (chapda) va COM masofasi (o'rtada) skripka syujetlari - parvona pichoqlari va bog'lovchi cho'ntak elektrostatikasi (o'ngda). e Har bir replikaning (WT, ko'k; R431W, kulrang) yakuniy ramkasidan (1,1 ms) K3–K4 interfeysining eksperimental/boshlang'ich modellar (qora) bilan strukturaviy qoplamasi. Protein magistral qismi multfilm sifatida ko'rsatiladi, qoldiq 431 tayoq shaklida ko'rsatiladi. MSF, o'rtacha kvadrat tebranish.
Molekulyar dinamikani simulyatsiya qilish
WT modeli WNK4 peptid fragmenti bilan kompleksda inson Kelch domenining rentgen-kristal tuzilishiga (PDBID: 4CH9) asoslangan edi [26]. Vizual molekulyar dinamikaning 1.9.3 versiyasida psfgen yordam dasturi yordamida etishmayotgan atomlar va terminal qopqoqlari qo'shildi [27]. Mutant (R431W) KLHL3 modeli Modeller versiyasi 9.18 [28] yordamida yaratilgan. Har bir tizim uchun oxirgi qoldiq diapazoni 300–585 edi. WT va R431W modellarining N- va C-terminallari mos ravishda asetillanish va N-metillamidlanish yo'li bilan zararsizlantirildi. Standart protonatsiya holatlari PROPKA 3.0 versiyasi [29] bilan tahlilga ko'ra titrlanadigan har bir qoldiq uchun tayinlangan. WNK4 peptidi dastlabki muvozanat simulyatsiyalaridan so'ng KLHL3 dan ajralishi tufayli ishlab chiqarish simulyatsiyalaridan olib tashlandi.
Barcha simulyatsiyalar GROMACS dasturiy paketining 2021 [30] versiyasidan foydalangan holda amalga oshirildi. Protein atomlari uchun CHARMM36m kuch-maydon parametrlari ishlatilgan [31]. Ionlar standart CHARMM parametrlari yordamida tasvirlangan va suvlar uchun TIP3P modeli ishlatilgan [32]. Dastlabki muvozanat bosqichi uchun 1 fs integratsiya vaqti, keyingi barcha simulyatsiyalar uchun 2 fs foydalanilgan. Vodorod bilan bog'liq barcha aloqalar LINCS [33] yordamida cheklandi. Bog'lanmagan Van der Waals shovqinlari 1,2 nm kesish radiusi bilan Lennard-Jons potentsialidan foydalangan holda hisoblab chiqilgan; kuchlar 1,2-1,0 nm oralig'ida muammosiz o'chirildi. Barcha elektrostatikalar 1,2 nm real fazoda kesish masofasi bilan tekislangan zarracha-mash Evald [34] usuli yordamida hisoblab chiqilgan. Izokorik-izotermik ansamblda (NVT) dastlabki simulyatsiyadan so'ng, barcha keyingi simulyatsiyalar izobarik-izotermik ansamblda (NPT) 310,15 K haroratda tezlikni o'zgartirish termostati [35] yordamida 0,5 ps vaqt doimiysi bilan amalga oshirildi. Termostat oqsil va hal qiluvchi (ya'ni, suv va ionlar) uchun alohida qo'llaniladi; bir xil guruhlar massa markazi (COM) harakatini olib tashlash uchun ishlatilgan. Berendsen [36] yoki Parrinello-Rahman [37] barostati yordamida izotropik usulda 5 ps vaqt doimiysi bilan 1 bar bosim o'tkazildi.
WT va R431W modellari dastlabki o'lchamlari 1,2 × 1,2 × 1,2 nm3 bo'lgan kubik qutida solvatlangan. Har bir tizim 150 mM NaCl bilan zararsizlantirildi. Dastlabki keskin pasayish energiyasini minimallashtirishdan so'ng, har bir tizim NVT ansamblida 5 ns davomida barcha oqsil atomlarida pozitsiyani cheklash bilan muvozanatlashtirildi. Keyingi muvozanat bosqichi NPT ansamblida oldingi bosqichda bo'lgani kabi bir xil cheklovlar bilan 5 ns davomida amalga oshirildi. Yakuniy muvozanat simulyatsiyasi uchun barcha yon zanjirlardan joylashuv cheklovlari olib tashlandi. WT va R431W tizimlarining mustaqil ishlab chiqarish simulyatsiyalari uchun muvozanatning yakuniy bosqichidan uchta boshlang'ich tuzilma yaratildi va barcha pozitsiya cheklovlari olib tashlandi. Har bir ishlab chiqarish nusxasi 1,1 mks uchun simulyatsiya qilingan; dastlabki 0,1 mks tahlildan olib tashlandi.
Simulyatsiyalar davomida strukturaning barqarorligini baholash uchun butun oqsilning C atomlari, shuningdek, K3-K4 interfeysi (qoldiqlar 425-465) va kristall strukturasidan o'rtacha kvadratik og'ishlar (RMSD) hisoblab chiqilgan. WNK4- bog'lovchi cho'ntak (qoldiqlar 339, 355, 360, 386, 402, 407, 432, 449, 451, 481, 498, 528 va 577). RMSD izlarining ishlaydigan o'rtacha ko'rsatkichlari hisoblab chiqilgan va xom ma'lumotlar bilan qoplangan.
Mutatsiyaning strukturaviy barqarorlikka ta'siri, ramkalar va replikalar bo'yicha o'rtacha hisoblangan protein C atomlarining o'rtacha kvadrat tebranishlaridagi farqni hisoblash va WT oqsili tuzilishiga xaritalash orqali vizualizatsiya qilindi. Barcha protein vizualizatsiyasi ChimeraX [38] yordamida yaratilgan. R431W mutatsiyasining K3 (qoldiqlar 425-441) dan K4 (qoldiqlar 442-465) interfeysiga ta'siri vodorod aloqasi (H-bog') tahlili va ikki guruh orasidagi COM masofasi bilan tavsiflangan. H-bog'lari har bir kadrda GROMACS gmx hbond asbobi yordamida baholandi, masofa va burchak kesimlari mos ravishda 3,5 Å va 30 daraja. COM masofalari har bir kadrda xuddi shunday baholandi - Hbonds va COM masofalarining taqsimoti skripka syujetlari sifatida tasvirlangan. O'rtachalar traektoriyalar va replikalar bo'yicha hisoblab chiqilgan.
WNK{0}}bog'lovchi cho'ntakning elektrostatikligi g_elpot [39] yordamida hisoblangan. Bog'lanish cho'ntagidagi elektrostatik potentsialning vaqt kursi bog'lovchi cho'ntakni o'z ichiga olgan qoldiqlarning geometrik markazida joylashgan 8 Å radiusli sferik hajmni aniqlash orqali baholandi. Elektrostatikadagi dispersiyani baholash uchun 50-ns blokining o'rtacha ko'rsatkichlari hisoblab chiqilgan. WT va R431W mutantlari uchun bog'lovchi cho'ntak ichidagi elektrostatik potentsialning taqsimlanishi skripka syujetlari sifatida tasvirlangan, o'rtacha qiymatlar 50-ns blok va traektoriyalar bo'ylab hisoblangan.
Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp% 2fTel:+86 15292862950}
Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:
https://ww.xjcistanche.com/cistanche-shop
