BATF3 ning Tu9 differensiatsiyasi va T-hujayra tomonidan boshqariladigan L-patologiyalar shilliq qavatidagi roli (2-qism)

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun plz bilan bog'laningdavid.wan@wecistanche.com

MUHOKAZA

T # 9 hujayralari yallig'lanish va allergik kasalliklarning rivojlanishi uchun muhimdir. Biroq, TH9 hujayralarining differentsiatsiyasiga olib keladigan transkripsiya dasturi va yallig'lanish tetiklari to'liq tushunilmagan. Ushbu tadqiqotda biz yallig'lanishga qarshi sitokin TL1Ani sichqon va inson T-9 differentsiatsiyasining kuchli induktori sifatida aniqladik va BATF3 ni TH9 hujayralarini farqlashda ishtirok etadigan muhim transkripsiya omili sifatida aniqladik. TL1A tomonidan qo'zg'atilgan transkripsiya tarmog'i BATF va BATF3 transkripsiya omillarini va bir nechta BATF tomonidan boshqariladigan genlarni o'z ichiga oladi (7-rasm). In vivo, asrab oluvchi transfer tajribalarida,Tm9-TL1A hujayralariichak va o'pkaning yallig'lanishiga olib keladigan yuqori darajada yallig'lanishga qarshi edi. T-9-TL1A hujayralarining yallig'lanishga moyilligi IL-9 ishlab chiqarilishiga bog'liq edi. Batf3-/T va 9-TL1A hujayralarining koʻchirilishi in vivo jonli ravishda shilliq qavat yalligʻlanishi va sitokin ekspressiyasining pasayishiga olib keldi.

Tm9 hujayralari alohida T-yordamchi kichik to'plami sifatida aniqlangan bo'lsa-da, asosiy regulyator sifatida ishlaydigan yoki faqat TH9 fenotipini aniqlaydigan transkripsiya omili aniqlanmagan. Buning o'rniga, T-9 hujayralarining differentsiatsiyasini tartibga solish uchun bir nechta transkripsiya omillari birgalikda harakat qiladi. BATF IRF4 bilan funktsional hamkorlik qilishi va sezgir genlarning promotor hududlaridagi kompozit elementlar bilan bog'lanishi ko'rsatilgan. BATF IRF4 bilan birga Xromatinning boshlang'ich mavjudligiga hissa qo'shish va boshqa transkripsiya omillariga kirishni osonlashtirish orqali Tp17 hujayralarining differentsiatsiyasida yaqinda "kashshof omillar" sifatida taklif qilingan.36 Biz TL1A BATF ifodasiga bevosita ta'sir qilishini va TGF bilan sinergiya qilishini kuzatdik{{9} } va IL{10}} BATF ifodasini maksimal darajada induktsiya qilish uchun, ayniqsa TH9 differensiatsiyasining boshida. Ushbu tushunchani qo'llab-quvvatlash uchun faqat TL1A bilan stimulyatsiya BATF ning II9 promouteriga bog'lanishiga olib keladi va bu boshqa transkripsiya omillarining (IRF4 va BATF3) bog'lanishiga bevosita ta'sir qilmaydi. Biroq,TH9-TL1Asharoitlar BATF3 va IRF4 ning ulanishini, shuningdek, ll9 promotor faolligi bilan bog'liq bo'lgan ruxsat beruvchi xromatin modifikatsiyasi bo'lgan H3 gistonining atsetilatsiyasini sinergik tarzda kuchaytiradi.14 Ilgari chop etilgan ma'lumotlarga muvofiq, IL-9 ifodasi uchun BATF talab qilinadi. va T,9 sharoitida IL-10.15 TL1A IL-9 va IL-13 induksiyasida BATF talabini, ehtimol, boshqa transkripsiyani kuchaytirish orqali qisman yengib o‘tishga qodir. BATF yo'qotilishini qoplashi mumkin bo'lgan omillar. Funktsional kompensatsiya uchun nomzodlardan biri BATF3 bo'lib, u TL1A tomonidan transkripsiyalangan. BATF va BATF3 ning Tu17 va Tp2 rivojlanishi uchun funktsional jihatdan bir-birini almashtirishi va BATF-'- T hujayralarida BATF3 ning haddan tashqari ko'payishi TH17 hujayralari va IL-4 va IL{-17 hujayralarida IL{20}} ishlab chiqarishni tiklashi mumkinligi taklif qilingan. 23}} T#2 hujayralarida ishlab chiqarish.18323738 Biroq, fiziologik sharoitda Tu hujayralarining rivojlanishida BATF3 ning roli va TH9 differensiatsiyasi vaqtida BATF va BATF3 o'rtasidagi potentsial o'zaro ta'sir aniqlanmagan. Bu erda biz TL1A BATF3 ning ll9 promouteriga ulanishini osonlashtirishini ko'rsatamiz. Funktsional natija sifatida, BATF3 T-9 sharoitida, xususan, TL1A stimulyatsiyasi kontekstida IL{33}} ishlab chiqarishga hissa qo'shadi. Ajablanarlisi shundaki, BATF3 Tu9 hujayralarining erta farqlanishi uchun zarurdir, ammo keyingi vaqtlarda TA9 fenotipi va IL{39}} sekretsiyasini barqarorlashtirish yoki ushlab turish uchun talab qilinishi mumkin. TH9 differensiatsiyasida BATF3 ning roli haqidagi topilmalarimiz BATF3 ning Tu1, TA2 va Tu17 differentsiatsiyasi uchun ajratilishi mumkinligi haqidagi oldingi hisobotlardan farqli o‘laroq.2'3'BATFdan farqli o‘laroq, BATF3 faqat IL-9 sekretsiyasiga va IL-10 va IL-13 kabi boshqa TH9 sitokinlariga emas, bu BATF3 ll9 promotoriga maxsus bogʻlanishi va IL-9 sekretsiyasini induktsiya qilishini koʻrsatadi. TH9 differensiatsiyasi paytida qo'shimcha BATF3 maqsadli genlarini va uning boshqa Tu kichik guruhlaridagi rolini aniqlash uchun qo'shimcha tadqiqotlar talab etiladi.

Cistanche haqida ko'proq ma'lumot olish uchun bu yerni bosing

7-rasm Batf3 etishmovchiligi TH9-TL1A hujayralari tomonidan boshqariladigan shilliq qavat yallig'lanishining kamayishiga olib keladi. Sodda WTor Batf3-/hujayralari T_9-TL1A hujayralariga ajratildi va Rag1-7sichqonlarga AOK qilindi. o'pka (yuqori panellar) va yo'g'on ichaklarning (pastki panellar) vakili H&E bo'yashlari. O'lchov chizig'i: 200 mm. b O'pka uchun gistologiya ballari.c Hujayralarning umumiy soni (chapda, o'rtada), CD4* T hujayralarining chastotasi (o'ngda). Ma'lumotlar ±SD.n=10/group.d ILning hujayra ichidagi bo'yalishini anglatadi{{11} }, IL-13 va IL-17 taloq, MLN va o'pkadan PMA va lonomisin bilan ex vivo qayta tiklangandan so'ng. Ma'lumotlar ±SD.n=5/guruhni anglatadi. Uchta mustaqil eksperimentdan bitta vakili eksperiment ko'rsatilgan.*p<0.05,><0.01 as="" determined="" by="" student's="">

IL-1, OX40 va TSLP kabi boshqa yallig'lanishga qarshi sitokinlar yoki vositachilar ta'sirini kuchaytirishi tasvirlangan bo'lsa-daTH9 farqlash, TL1A BATF ni tartibga solishda o'ziga xos ko'rinadi va shu bilan boshqa transkripsiya omillarini, shu jumladan BATF3.353940 ni jalb qilish uchun xromatinni ochadi. Bundan tashqari, bizning RNK ketma-ketligi ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, BATF3 transkripsiya omillari, hujayra proliferatsiyasi va hujayra ichidagi signal uzatilishini tartibga soladi, bu T# 9 differentsiatsiyasida BATF3 ning muhim rolini ko'rsatadi. In vivo, Batf3-'- TA9-TL1A hujayralari shilliq qavatning yallig'lanishi va sitokin ekspressiyasining pasayishiga olib keldi. Biz Batf3-'- TH9-TL1A hujayralarining ichakka migratsiyasining buzilishini kuzatmadik, bu BATF-'- CD4 plus T xujayralaridan farqli o'laroq, ichak migratsiyasi belgilarini kuchaytira olmaydi va ularni tartibga solmaydi. ichaklarni to'ldirish.4' Bizning ma'lumotlarimiz TA9-TL1A hujayralarining patofiziologik funktsiyasidagi BATF3 rolini tasdiqlaydi.

IL-9 va TA9 hujayralari yaqinda IBD patogenezi bilan bog'langan.*-10 IL-9 plyus CD4 va T hujayralari UC va yuqori IL{{ zardobida bo'lgan bemorlarda boyitilgan. 5}} CD bilan og'rigan bemorlarda og'ir kasallik bilan bog'liq.-10Gapten tomonidan qo'zg'atilgan UCga o'xshash kasallikning eksperimental modelida, IL-9-va PU.1-etishmayotgan sichqonlar ichakdan himoyalangan. yallig'lanish va anti-IL-9 antikorlari surunkali profilaktika modelida himoya qiladi. daraja Biroq, biz T9 sharoitida TL1A ning PU.1 ifodasiga ta'sirini kuzatmadik. Biz TL1A stimulyatsiyasi BATF va BATF3 ning yuqori regulyatsiyasiga olib kelishini ko‘rsatdik, lekin PU.1 emas. PU.1 ning majburiyligi PU.1 va BATFning BATF-to'liq mustaqilligida o'zgarmasligini ko'rsatadi. 75

Biz T,{0}}TL1A hujayralari in vivo jonli holatda yuqori darajada patogen ekanligini va ichak va o‘pka yallig‘lanishini keltirib chiqarishini ko‘rsatamiz. Ichakning yallig'lanishiTH9-TL1Aqabul qiluvchilar asosan ingichka ichak bilan chegaralangan. Bundan tashqari, biz in vivo TH9-TL1A qabul qiluvchilarida CCR6* va CD103 hujayralari soni ortganini kuzatdik. Ushbu ma'lumotlar CCR6 va integrin CD103 kimyokin retseptorlari TH9 hujayralarida ifodalanganligini va yallig'lanish joylari va shilliq qavatlarga o'tishni osonlashtirishini doimiy ravishda ko'rsatadi. asosan ingichka ichak yallig'lanishini kuzatishimizga mos keladi, chunki CCR6/CCL20 o'qi ayniqsa T,17 hujayralarining ingichka ichakka migratsiyasini osonlashtirishi ko'rsatilgan va shunga o'xshash mexanizmlar Tm9 hujayralariga ham tegishli.3 Bizning topilmalar ham mos keladi. so'nggi ma'lumotlar bilan, ayniqsa, og'ir kasalliklar bilan kasallangan bemorlarda IL{17}} zardob darajasining oshishi.?

TL1A T,1, TH2 va TA17 differentsiatsiyasini kuchaytiradi va biz in vitroda T9 hujayralaridan boshqa TH kichik to'plamlariga global o'tish belgisini ko'rmagan bo'lsak ham, bu TL1A bilan farqlangan TH9 hujayralari in vivo va "trans"da beqaror bo'lishi mumkinligini ko'rsatishi mumkin. -differensiyalash” boshqa kichik to‘plamlarga. TH9 hujayralarining trans-differentsiatsiyasi potentsiali munozarali bo'lib, kontekstga, kasallik modeliga va xostning immunitet holatiga bog'liq bo'lishi mumkin. EAEda TH9 ning IFN-Y ishlab chiqaruvchi hujayralarga trans-differentsiatsiyasi sodir bo'ladi, ammo T,9 fenotipi saraton modellarida barqaror ko'rinadi.339 Ajablanarlisi shundaki, in vivo T9-TL1A hujayralari IL{ {18}} va IL-17 va IL-13 kabi quyi oqim sitokinlari va trans-differentsiatsiyalanmagan. Bu tushuncha, shuningdek, T9-TL1A hujayralarining patogen ta'sirini blokirovka qilish uchun anti-lL-9 davolashning o'zi yetarli ekanligini ko'rsatadigan ma'lumotlarimiz bilan ham tasdiqlanadi. Anti-Lil{27}} antikorlarini davolashning o'zi IL{28}} ishlab chiqarishni kamaytirdi va ichak va o'pka yallig'lanishini TH9 darajasiga qaytardi. O'pkaning allergik yallig'lanishining rivojlanishi TH2 va TH9 hujayralarining korporatsiyasini talab qiladi. Biroq, bizning surunkali, allergik bo'lmagan o'pka yallig'lanishi modelimiz, asosan, IL{32}}xujayralar ishlab chiqaradigan T.9 hujayralari tomonidan boshqariladiganga o'xshaydi, ammo biz IL{34}}bizning patogenezda T bo'lmagan hujayralarni ishlab chiqaradigan hissasini inkor eta olmaymiz. model.

Xulosa qilib aytganda, TL1A sichqoncha va inson T9 farqlanishining kuchli induktoridir va biz signalizatsiya yo'llarini aniqladik. TH9-TL1A hujayraning in vivo yallig'lanishga qarshi xususiyatlarini hisobga olgan holda, TL1A-BATF3-IL-9 o'qiga yo'naltirish T19-bo'lgan patologiyalarda istiqbolli terapevtik yondashuv bo'lishi mumkin. IBD yoki o'pkaning allergik kasalligi kabi.

USULLARI

Sichqoncha C57BL/6, C57BL/6 Rag1-/, B6.SJL-Ptprc" Pepc/BoyJ(CD45.1),(B6.Cg-Nfkb1*m130l/J), Stat 6-/-(B6.129S2(C)-Stat6"miGr"/J), p50-/-B6.Cg-Tg(TcraTcrb)425Cbn/ (OT-I),Batrf/( B6.129s-Batm1.1kmm/) va Bat3-/(B6.129 S(C)-Batf3m1km"/) sichqonlari Jekson laboratoriyasidan xarid qilingan. Doktor3-/- n sichqonchalar boshqa joyda tasvirlangan.4 Sichqonlar SPF sharoitida saqlangan. Hayvonlarning barcha tadqiqotlari Cedars-Sinai Medical Center Hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. T-hujayra izolyatsiyasi va differentsiatsiyasi Naive T hujayralari (CD62LhichcD44'o"CD25~; klonlar MEL-14, IM7, PC61.5; eBioscience) EasySeptM Mouse CD4 va Izolyatsiya to'plami (Ildiz hujayrasi) yordamida taloq va MLNdan ajratilgan. Technologies) so‘ng hujayralarni saralash (MoFlo, Beckman Coulter). Hujayralar RPMI-1640 muhitida (10 foiz FBS) anti-CD3s (145-2C11;BD Biosciences), anti-CD28(37,51) bilan yetishtirildi. ; eBioscience (TH0 shartlari) va T-9 sharoitida (inson TGF- 1 [3 ng/ml], Biolegend, IL{{66}) ostida sichqon TL1A(100 ng/ml; R&D tizimlari) } [20ng/ml, PeproTech).2 kundan soʻng IL-2(20 U/ml) qoʻshildi. Hujayra proliferatsiyasini baholash uchun saralangan hujayralar karboksifluoressein suksinimidil esteri (CFSE; Invitrogen) bilan yorliqlandi, 5 marta farqlanadi. kun va CFSE suyultirilishi oqim sitometriyasi bilan baholandi.Antigenga xos T,9 differentsiatsiyasini baholash uchun OT-Il sichqonlarining sodda CD4 va T hujayralari 3 kun davomida 1 ug/ml OVA;23-339 peptid bilan stimulyatsiya qilindi; singenik APClarning mavjudligi (nisbati 1:3). e splenotsitlardan CD90.2T hujayralarining kamayishi (Ildiz hujayra texnologiyalari) va mitomisin C bilan davolash orqali tayyorlangan. inson CD4 plyus T hujayralarini ajratish va farqlash Qon sog'lom ko'ngillilardan Sidars-Sinay institutsional ko'rib chiqish kengashi (IRB # 3358, 2673) tomonidan belgilangan tartiblarga muvofiq xabardor qilingan rozilikdan so'ng olingan. Oddiy CD4 plyus T hujayralari (CD4 plus CD25-CD45RA va CD45RO7) EasySepl Human CD4 T hujayralarini boyitish to'plami (Ildiz hujayra texnologiyasi) yordamida PBMC dan ajratildi, so'ngra hujayralarni saralash amalga oshirildi. Hujayralar anti-CD3（5 ug/ml） va anti-CD28（2 ug/ml） bilan inson TL1A (100ng/ml; Fitsjerald) bilan TH9 sharoitida (inson TGF- 1 [5 ng/ml]) yetishtirildi. , inson IL-4 [10 ng/ml]). ELISA Madaniyat supernatantlaridagi sitokin kontsentratsiyasi Elishay tomonidan sichqon yoki odam IL-9, IL-10 va IL-13(eBioscience) uchun tekshirildi. Hujayra ichidagi bo'yash Hujayralar 50 ng/ml PMA (forbol 12-miristat 13-atsetat), 500 ng/ml ionomisin va monensin (eBioscience) bilan 4 soat davomida qayta stimulyatsiya qilindi, anti-CD4 (RM{{) bilan bo'yalgan. 117}},eBioscience), FoxP3 boʻyash buferi toʻplami (eBioscience) yordamida mahkamlangan va oʻtkazuvchanlashtirilgan va sichqon IL-9 (RM9A4, BioLegend),IL-10(JES{123}) ga qarshi antikorlar bilan boʻyalgan. }E3),IL-13(13A),IL-17A (eBio17B7), IL-17F (eBio18F10),IFN-y(XMG1.2),IL{{136} } (BVD6-24G2),IL-22 (1H8PWSR),Ki67(SolA15),BATF(MBM7C7), IRF4 (3E4),inson IL-9(MH9A4, barcha eBioscience), va BATF3 (841792, Ar-ge tizimlari). Namunalar CyAnADP oqim sitometri (Dako Cytomation) va FlowJo dasturi (TreeStar Inc.) yordamida tahlil qilindi.

Miqdoriy RT-PCR

Jami RNK RNeasy to'plamlari yordamida ajratildi va Omniscript RT to'plami (ikkalasi Qiagen) bilan cDNKga teskari transkripsiya qilindi. qPCR Mastercycler" ep realplex² System (Eppendorf) yordamida amalga oshirildi. Platinum Kantitativ PCR SuperMix-UDG (Invitrogen) va TaqMan zondlari. Actb, I9, I10, 13 va BATF (IDT) (Qo'shimcha jadval 7) uchun ishlatilgan. RT² SYBR"Green qPCR Mastermix (Qiagen) va primer to'plamlari Actb va Batf3 (IDT) uchun ishlatilgan. Nishon genlarning mRNK ifodasi Actb ifodasiga normallashtirildi. Usul bilan nisbiy gen ifodasi hisoblab chiqilgan.

2-AACt Xromatin immunoprecipitatsiyasi

Chloe EZ ChIP xromatin immunoprecipitation kit (Millipore) yordamida amalga oshirildi, so'ngra qPCR tahlili o'tkazildi. Hammasi bo'lib, 1 × 10 darajali hujayralar 2ug ChIP-sinf antikorlari yordamida rag'batlantirildi, mahkamlandi, sonikatsiya qilindi va immuno-cho'ktirildi: anti-BATF(sc-100974), anti-BATF3(sc-162246), oddiy sichqoncha lgG(sc-2025), anti-IRF4(sc-6059), oddiy echki lgG(sc-2028)(barcha Santa Cruz Biotechnology), anti-atsetil-giston H3({{17) }}) va oddiy quyon lgG (Milli-pore). Immunopretsipitatsiya qilingan DNK teskari o'zaro bog'langan, spin ustunlari yordamida tozalangan va qPCR tomonidan tahlil qilingan (primer ketma-ketligi: qo'shimcha jadval 7). Immunoprecipitatsiyalangan DNK miqdorini aniqlash uchun biz kirish DNKsining ketma-ket suyultirilishidan standart egri chiziq hosil qildik. Ma'lumotlar kirish DNK miqdoriga nisbatan normalizatsiyaga asoslangan kirish DNK foizi sifatida taqdim etiladi.

RNK ketma-ketligi (GEO kirish raqamlari: GSE60362 va GSE106926)

Kam kirishli RNK-Seg (TH9 va TH9-TL1A): Clontech kompaniyasining SMARTer Ultra"Sequencing v3 uchun past kirishli RNK to'plami har bir namunadan 1,5 dan 2,5 ng gacha bo'lgan jami RNKning ikki qatorli cDNK kutubxonalarini yaratish uchun ishlatilgan. Ishlab chiqaruvchining tavsiyalariga ko'ra. Ikki qatorli cDNK kutubxonalari alohida qismlarga bo'lingan va lon Xpress yordamida lon Xpress "shtrix-kod adapterlari" bilan bog'langan va cheklangan o'zgarishlarga ega bo'lgan Fragment Library to'plami, jumladan, ikki boncukli tozalash va V hajmli o'lchamli yakuniy kutubxonalar. RNK-Seq kutubxonalari konsentratsiyasi va uzunligi Invitrogen's QubitdsDNA HS Assay Kit va Agilent yordamida baholandi.Yuqori sezuvchanlik DNK to'plami, respectively. Samples were multiplexed to obtain >Har bir ketma-ketlik uchun 10 million o'qish. Birlashtirilgan kutubxonalar lon Sphere" ga kuchaytirildi va lon PIM Sequencing 200 Kit v2,lon Torrent" yordamida ketma-ketlashtirildi.

mRNK-seg (WT vs.Baft3-7T,9-TL1A): Illumina TruSeq Stranded mRNA library preparation kit was employed for RNA-Seq. Of total RNA, 1 ug per sample was used for poly-A mRNA selection using streptavidin-coated magnetic beads. cDNA was synthesized from enriched and fragmented RNA using reverse transcriptase (Super-Script ll, Invitrogen) and random primers. The cDNA was converted into double-stranded DNA, and enriched with PCR for library preparation. The PCR-amplified library was purified using Agencourt AMPure XP beads(Beckman Coulter). The concentration of the amplified library was measured with a NanoDrop spectrophotometer and on an Agilent 2100 Bioanalyzer. Samples were multiplexed to obtain >20 million oʻqish/namuna va NextSeq 500 platformasida (Illumina) 75-bp bir uchli ketma-ketlik yordamida ketma-ketlik.

Ma'lumotlarni tahlil qilish. Xom o'qishlar FASTX asboblar to'plami (http://hannonlab.cshl.edu/fastx{0}}toolkit/) tomonidan filtrlangan va qirqilgan va Tophat 2.0.8 versiyasi yordamida UCSC bilan moslashtirildi. GRCm38/mm10 sichqoncha havolasi genom izohi (http://genome.ucsc.edu). Genlarni o'qish soni HTSeq (v0.5.4) yordamida yaratildi va keyin R(v2.15)dagi Bioconductor'da edgeR (v3.0.8) bilan M-qiymatlarini normallashtirish usulining kesilgan o'rtacha qiymati bilan normallashtirildi, bunda log ifoda nisbatlari. Barcha tahlillar uchun faqat sifat signallari (eshik chegarasi: to'rtta namunadan kamida ikkitasida millionga o'nta) ishlatilgan. Nazoratsiz tahlil 100 ta eng saralangan genlar yordamida kvartile diapazoni bo'yicha o'tkazildi va keyin xolis keng tarqalgan gen ekspresyon naqshlarini ko'rish uchun ikki tomonlama Pearson korrelyatsiyasi yordamida (v2.11) yordamida ierarxik klasterlash yaratildi. TH9 va T.9-TL1A yoki WT va Batf{{23} oʻrtasidagi differensial ifodalarni aniqlash uchun Benjamini va Xochberg protsedurasi yordamida Fisherning oʻzgartirilgan aniq testi va Benjamini va Xochberg protsedurasi yordamida 10 foizlik notoʻgʻri aniqlash tezligidan foydalangan holda nazorat ostida tahlil qilindi. }T,9-TL1A. Yo‘lni boyitish tahlili DAVID6.7 (http://david.abcc.ncifcrf.gov/) yordamida amalga oshirildi, buning uchun eng oldingi =5 va osonlik balli chegarasi=0.05.

T-hujayra uzatish modeli

CD45.1 sichqonlarining CD4 va CD62LighcD44"cD{3}} T hujayralari 3 kun davomida T9 yoki T,9-TL1A hujayralariga ajratildi. Erkak latta62}}/oluvchi sichqonlar 0,5×10 darajali TH9 yoki TH{15}}TL1A hujayralari bilan ip AOK qilindi. Sichqonlar 6-8 hafta davomida tortildi. Neytrallash tajribalari uchun sichqonlarga anti-IL-9 yoki lgG2b nazorati bilan IP yuborildi. antikor (ikkalasi 50 ug/doza; R&D Systems) 4 hafta davomida haftasiga uch marta va T-hujayra o‘tkazilgan kundan boshlab qolgan vaqt uchun haftasiga ikki marta.To‘qimalar formalin bilan mahkamlangan, kerosin bilan singdirilgan va H&E bilan bo‘yalgan. yoki AB-PAS. Yallig'lanishni tajriba sharoitlariga ko'r bo'lmagan o'qitilgan patolog tomonidan yarim kantitativ baholash tizimi orqali baholadi. 15 ug/ml Liberaza" (Roche) va 25 ug/ml DNase I (Sigma) ni o'z ichiga olgan 10 ml HBSS va 40-mkm hujayra filtri orqali filtrlash, so'ngra qizil qon tanachalari lizisi. Bir hujayrali suspenziyalar anti-CD4, anti-CD45.1(A20), anti-CCR6 (29-2L17) va anti-CD103 (2E7, barcha eBioscience) va anti-Ki{{52} bilan bo'yalgan. }}(SolA15, BD PharMingen) oqim sitometriyasi uchun antikorlar yoki 3 kun davomida anti-CD3c/anti-CD28 antikorlari bilan qayta tiklanadi. Supernatantlardagi sitokin darajalari Elishay tomonidan o'lchandi.

Statistika

Statistik ahamiyatlilik SPSS dasturi yordamida hisoblab chiqilgan (IBM SPSS Statistics 20, IBM Machines Corp., Armonk, NY, AQSH). Ma'lumotlar bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida tahlil qilindi, so'ngra ko'rsatilgandek, juftlashtirilmagan ikki dumli Student t-testi yoki Mann-Whitney U testi o'tkazildi. Farqlar pda muhim deb hisoblangan<>

MAQDAT

Ushbu ish NIH (DK056328 to SRT) va F. Widjaja Foundation (SRT va KSM) tomonidan qo'llab-quvvatlandi. Anita Vibsig Neytzskiy-Vulff The Carlsberg Foundation (Daniya) va Lundbeck Foundation (Daniya) tomonidan postdoktorlik stipendiyalarini oldi. Jordan Nunnelee Amerikaning Crohn's and Colitis Foundation tomonidan Talaba tadqiqoti mukofotiga sazovor bo'ldi. Cedars-Sinai MIRIAD IBD Biobank F. Vidjaja fondi yallig'lanishli ichak va immunobiologiya tadqiqot instituti, NIH/NIDDK grantlari P01 DK046763, U01 DK062413 va Leona M va Garri B Helmsley xayriya jamg'armasi tomonidan qo'llab-quvvatlanadi.

MUALFOLAR HISSALARI

MT, HH, LT, MW, BS, MW, BS, MW, JN, JS, AN-W, RB, YW, JT, VF va KM. tajribalar o'tkazdi, ma'lumotlarni tahlil qildi va qo'lyozmani tanqidiy ko'rib chiqdi. AP, J. T va YW RNK-Seq ma'lumotlarini tahlil qilishdi. MT, ST va KM tajribalarni ishlab chiqdi. MT va KM qo'lyozmani yozgan.

QO'SHIMCHA MA'LUMOT

Ushbu maqolaning onlayn versiyasi (https://doi.org/10.1038/s41385-018-0122-4) vakolatli foydalanuvchilar uchun mavjud bo'lgan qo'shimcha materiallarni o'z ichiga oladi.

Raqobatdosh manfaatlar: Mualliflar raqobatdosh manfaatlar yo'qligini e'lon qilishmaydi.

Nashriyotning eslatmasi: Springer Nature nashr etilgan xaritalar va institutsional bog'lanishlar bo'yicha yurisdiksiyaviy da'volarga nisbatan betaraf bo'lib qoladi.

ADABIYOTLAR

1. Dardalxon, V. va boshqalar. IL{1}} TGF-beta-induktsiyali Foxp3 plus T hujayralarini inhibe qiladi va birgalikda

TGF-beta bilan IL-9 plyus IL-10 va Foxp3(-) effektor T hujayralarini hosil qiladi. Nat. Immunol. 9, 1347-1355(2008).

2. Veldhoen, M. va boshqalar. O'sish omilini o'zgartirish - beta "qayta dasturlari"

T yordamchi 2 hujayralarining boshlanishi va interleykin 9-ishlab chiqaruvchi kichik to'plamni rag'batlantiradi. Nat. Immunol.9, 1341-1346 (2008).

3. Jager, A, Dardalxon, V, Sobel, RA, Bettelli, E. & Kuchroo, VK Th1, Th17 va Th9

effektor hujayralar turli patologik fenotiplarga ega bo'lgan eksperimental otoimmun ensefalomielitni keltirib chiqaradi.J.Immunol.183,7169-7177(2009).

4. Licona-Limon, P. va boshqalar. Th9 hujayralari oshqozon-ichak tizimiga qarshi immunitetni qo'zg'atadi

qurt infektsiyasi. Immunitet 39,744-757(2013).

5. Purwar, R. va boshqalar. Interleykin vositachiligida melanomaga mustahkam o'sma immuniteti-9-

T hujayralarini ishlab chiqaradi. Nat. Med. 18, 1248-1253 (2012).

6. Gerlach, K. va boshqalar. PU.1 transkripsiya faktorini ifodalovchi TH9 hujayralari T xujayrasini boshqaradi.

ichak epitelial hujayralarida IL-9 retseptorlari signalizatsiyasi orqali vositachilik qilingan kolit. Nat Immunol.15,676-686(2014).

7. Nalleweg, N. va boshqalar. IL-9 va uning retseptorlari asosan ishtirok etadi

UC patogenezi. Gut.64,743-755 (2015).

8. Feng, T. va boshqalar. Qon zardobidagi interleykin 9 darajasi kasallikning og'irligini va klinikligini bashorat qiladi

Kron kasalligi bilan og'rigan bemorlarda infliximabning samaradorligi. Yallig'lanish. Ichak dis. 23, 1817-1824(2017).

9. Matusiewicz, M., Neubauer, K, Bednarz-Misa, I, Gorska, S. & Krzystek-Korpacka, M.

Yallig'lanishli ichak kasalliklarida tizimli interleykin-9: yarali kolitda shilliq qavatni davolash bilan bog'liqligi. Jahon J. Gastroenterol. 23,4039-4046(2017).

10. Ayblanuvchi, C. va boshqalar. Yallig'lanishli ichaklarda sarum II-9 darajalarining ahamiyati

kasallik. Int. J. Immunopatol. Farmakol. 28, 569-575 (2015).

11. Jash, A. va boshqalar. Faollashtirilgan T hujayralarining yadro omili 1 (NFAT1) - ruxsat beruvchi

Xromatin modifikatsiyasi yadro omili-kappaB (NF-kappaB) vositachiligida interleykin-9 (IL-9) transaktivatsiyasini osonlashtiradi. J. Biol. Kimyo. 287,15445-15457(2012). 12. Staudt, V. va boshqalar. Interferon-tartibga soluvchi omil 4 rivojlanish uchun zarurdir

T yordamchi 9 hujayralar dasturi. Immunitet 33, 192-202 (2010).

13. Gosvami, R. va boshqalar. Th9 rivojlanishining STAT6-bog'liq reglamenti.J. Immunol.

188,968-975(2012).

14. Chang, HCet boshq. ning rivojlanishi uchun PU.1 transkripsiya faktori talab qilinadi

IL-9-T hujayralarini ishlab chiqaradi va allergik yallig'lanish. Nat. Immunol. 11, 527-534 (2010).

15. Jabeen, R. va boshqalar. Th9 hujayra rivojlanishi BATF tomonidan boshqariladigan transkripsiyani talab qiladi

tarmoq. J. Klin. Invest. 123,4641-4653(2013).

16. Kaplan, MH Th9 hujayralaridagi transkripsiya faktorlari tarmog'i. Semin. Immunopatol.

39,11-20(2017).

17. Echlin, DR, Tae, HJ, Mitin, N. & Taparowsky, EJB-ATF manfiy sifatida ishlaydi.

AP-1 vositachiligidagi transkripsiya regulyatori va Ras va Fos tomonidan hujayra transformatsiyasini bloklaydi. Onkogen 19, 1752-1763 (2000).

18. Murphy, TL, Tussiwand, R. & Murphy, KM Hamkorlik orqali o'ziga xoslik:

BATF-IRF o'zaro ta'siri immunitetni tartibga soluvchi tarmoqlarni boshqaradi. Nat. Rev. Immunol. 13,499-509(2013).

19. Sopel, N., Graser, A., Musset, S. & Finotto, S. BATF transkripsiya omili

T hujayralarida sitokin vositachiligidagi javoblarni modulyatsiya qiladi. Sitokin o'sish omili Rev. 30, 39-45 (2016).

20. Edelson, BT va boshqalar. Periferik CD103 (plyus) dendritik hujayralar birlashgan kichik to'plamni hosil qiladi

CD8 alfa (plyus) an'anaviy dendritik hujayralar bilan rivojlanishi bilan bog'liq.J. Exp. Med. 207,823-836(2010).

21. Hildner, K. va boshqalar. Batf3 etishmovchiligi CD8alpha＋ dendritik uchun muhim rol o'ynaydi

sitotoksik T hujayralari immunitetidagi hujayralar. Science 322, 1097-1100 (2008).

22. Meylan, F. va boshqalar. TNF-oilaviy retseptorlari DR3 turli T hujayralari uchun zarurdir.

vositachi yallig'lanish kasalliklari. Immunitet 29,79-89 (2008).

23. Fang, L, Adkins, B, Deyev, V. & Podack, ER TNF retseptorlarining muhim roli

o'pkaning allergik yallig'lanishining rivojlanishida superfamily 25 (TNFRSF25). J. Exp.Med.205,1037-1048(2008).

24. Pappu, BP va boshqalar. TL1A-DR3 o'zaro ta'siri Th17 hujayra funktsiyasini va Th17-

vositachi otoimmün kasallik. J. Exp. Med. 205,1049-1062 (2008).

25. Bull, MJ va boshqalar. O'lim retseptorlari 3-TNFga o'xshash protein 1A yo'li harakat qiladi

yallig'lanishli artritda salbiy suyak patologiyasi.J. Exp.Med. 205,2457-2464 (2008).

26. Tomas, LS va boshqalar. TNF oilasi a'zosi TL1A IL{2}} sekretsiyasini induktsiya qiladi

IL-9 induksiyasi orqali inson Th17 hujayralarini hosil qilgan. J. Leukok. Biol. 101,727-737 (2017).

27. Richard, ACet al. TNF-oilaviy ligand TL1A va uning retseptorlari DR3 T ni rag'batlantiradi.

IL{1}}ishlab chiqaruvchi T hujayralarining differentsiatsiyasi va patogenligini kuchaytirish orqali hujayra vositachiligidagi allergik immunopatologiya.J.Immunol.194,3567-3582(2015). 28. Tan, C. va boshqalar. Antigenga xos Th9 hujayralari o'zlarining kinetikasida o'ziga xoslikni namoyon qiladi

sitokin ishlab chiqarish va yallig'lanish joyida qisqa tutilish. Immunol. 185,6795-6801(2010).

29. Vilgelm, C. va boshqalar. IL{1}} taqdiri muxbiri tug'ma IL-ning paydo bo'lishini ko'rsatadi.

O'pka yallig'lanishida 9 javob. Nat. Immunol. 12, 1071-1077 (2011).

30. Banias, G. va boshqalar. TL1A va uning DR3 retseptorlarining surunkali kasallikning ikkita modelidagi roli

murin ileitis. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 103, 841-8446 (2006).

31. Betz, BCet boshq. BATF zarur bo'lgan B va T hujayralari funktsiyasining ko'p jihatlarini muvofiqlashtiradi

normal antikor javoblari uchun.J. Exp.Med. 207,933-942(2010).

32. Schraml, BU va boshqalar. AP-1 transkripsiya faktori BATF boshqaruvlari T(H)17 farq qiladi-

boshlash. Nature 460, 405-409 (2009).

33. Glasmacher, E. va boshqalar. Yig'ishni boshqaradigan genomik tartibga soluvchi element va

immunitetga xos AP-1-IRF komplekslarining funktsiyasi. Science 338, 975-980 (2012). 34. Li, P. va boshqalar. BATF-JUN T hujayralarida IRF4-vositalangan transkripsiya uchun juda muhimdir. Tabiat

490,543-546(2012).

35. Yao, W. va boshqalar. Interleykin-9 havo yo'llarining allergik yallig'lanishi vositachiligida talab qilinadi

TSLP sitokin tomonidan. Immunitet 38, 360-372 (2013).

36. Ciofani, M. va boshqalar. Th17 hujayra spetsifikatsiyasi uchun tasdiqlangan tartibga solish tarmog'i. Hujayra

151,289-303(2012).

37. Tussivand, R. va boshqalar. BATF- vositachiligida kompensatsion dendritik hujayra rivojlanishi

IRF o'zaro ta'siri. Nature 490, 502-507(2012).

38. Ivata, A. va boshqalar. TCR signalining sifati differensial yaqinliklari bilan belgilanadi

kompozit BATF-IRF4 transkripsiya faktor kompleksi uchun kuchaytirgichlar. Nat. Immunol.18,563-572(2017).

39. Vegan, F. va boshqalar. IRF1 transkripsiya omili ILga bog'liqligini belgilaydi

TH9 hujayralarining saratonga qarshi funktsiyalari. Nat. Immunol. 15,758-766(2014).

40. Xiao, X. va boshqalar. OX40 signalizatsiyasi T (H) 9 hujayralari va havo yo'llarining induksiyasini qo'llab-quvvatlaydi

yallig'lanish. Nat. Immunol. 13,981-990 (2012).

41. Vang, C. va boshqalar. BATF ichak tutilishining normal ifodalanishi uchun talab qilinadi

retinoik kislotaga javoban T yordamchi hujayralari tomonidan retseptorlari. J. Exp. Med. 210, 475-489(2013).

42. Kara, EE va boshqalar. Aniq kemokin retseptorlari o'qlari Th9 hujayralari savdosini tartibga soladi

allergik va otoimmün yallig'lanish joylariga. J. Immunol. 191,110-117 (2013).

43. Esplugues, E. va boshqalar. TH17 hujayralarining nazorati ingichka ichakda sodir bo'ladi. Tabiat 475,

514-518(2011).

44. Shih, DQ va boshqalar. Tellaning yangi fibrojenik omilini inhibe qilish o'rnatildi

yo'g'on ichak fibrozi. Mukozal immunol.7, 1492-1503 (2014).

45. Ostanin, DV va boshqalar. Surunkali kolitning T hujayralarini o'tkazish modeli: savdo tushunchalari, mulohazalari va fokuslari. Am. J. Fiziol. Oshqozon-ichak trakti. Jigar fiziol. 296, G135-G146(2009).

46. ​​Chin, JEet boshq. Sichqonlarda leykotsitlarning havo yo'llarida to'planishi alfaga bog'liq4-

integrinlar va qon tomir hujayra yopishish molekulasi-1. Am. J. Fiziol. 272, L{2}}L29 (1997).

47. Weigmann, B. va boshqalar. Sichqoncha lamina propriasini izolyatsiya qilish va keyingi tahlil qilish

yo'g'on ichak to'qimasidan mononuklear hujayralar. Nat. Protok. 2,2307-2311 (2007).