Rekonsolidatsiyaning ERK vositachiligida oldini olish orqali qo'rquv xotirasi fazasini rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga faol o'tish

Aloqa: Audrey Xu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Qayta olishqo'rquvxotiraikkita qarama-qarshi xotira jarayonini, ya'ni rekonsolidatsiya va yo'q bo'lishni keltirib chiqaradi. Qisqa vaqt ichida qo'rquvni saqlab qolish yoki kuchaytirish uchun qayta konsolidatsiyani keltirib chiqaradixotira, uzoq vaqt olish esa bu xotirani o'chiradi. Qayta konsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish mexanizmlari o'rganilgan bo'lsa-da, xotirani qayta tiklash paytida qo'rquv xotirasi fazalari qayta konsolidatsiyadan so'nishga qanday o'tishi noma'lumligicha qolmoqda. Bu erda biz qayta tiklashdan so'ng hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinazga (ERK) bog'liq bo'lgan xotiraga o'tish jarayoni erkak sichqonlarda inhibitiv qochish (IA) vazifasida rekonsolidatsiyaning induksiyasini oldini olish orqali xotira fazalarini rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga o'tishni tartibga solishini ko'rsatamiz. Birinchidan, rekonsolidatsiya induksiyasini bekor qiluvchi, lekin yo'q bo'lib ketishni olish uchun etarli bo'lmagan o'tish xotirasi bosqichi rekonsolidatsiyadan keyin, lekin yo'q bo'lib ketish fazalaridan oldin aniqlangan. Ikkinchidan, keyin qayta konsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish bosqichlarixotirani qayta tiklashamigdala, hipokampus va medial prefrontal korteksda (mPFC) cAMP-javob qiluvchi elementni bog'lovchi oqsil (CREB) va ERK fosforilatsiyasi orqali aniq molekulyar va hujayrali imzolarni ko'rsatdi. Qayta konsolidatsiya bosqichi CREB fosforilatsiyasining kuchayganligini ko'rsatdi, yo'q bo'lib ketish bosqichi esa miyaning ushbu hududlarida CREB va/yoki ERK fosforillanishining turli kombinatsiyalariga ega bo'lgan bir nechta nerv populyatsiyalarini ko'rsatdi. Qizig'i shundaki, xotiraning uchta bosqichi, jumladan, o'tish bosqichi, qayta tiklashdan so'ng darhol vaqtinchalik ERK faollashuvini ko'rsatdi. Eng muhimi, amigdala, gippokamp yoki mPFCdagi ERK blokadasi xotiraning o'tish bosqichida IA ​​xotirasining rekonsolidatsiya natijasida kuchayishini inhibe qildi. Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, ERK signalizatsiya yo'li xotira fazasining qayta konsolidatsiyadan so'nishgacha o'tishini faol ravishda tartibga soladi va bu jarayon qo'rquvni qayta mustahkamlashni bekor qiluvchi kalit sifatida ishlaydi.xotira.

Kalit so'zlar: ERK; yo'q bo'lib ketish; qo'rquv xotirasi; qayta birlashtirish; o'tish

1Tokio qishloq xo‘jaligi universiteti, Hayot fanlari fakulteti biofan bo‘limi, Tokio 156-8502, Yaponiya va

2Qishloq xo‘jaligi va hayot fanlari oliy maktabi, Tokio universiteti, Tokio 113-8657, Yaponiya

Ahamiyat bayoni

Qo'rquv xotirasini tiklashikkita qarama-qarshi xotira jarayonini keltirib chiqaradi; qayta konsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish. Qayta konsolidatsiya saqlaydi/ yaxshilaydiqo'rquv xotirasi, yo'q bo'lib ketish qo'rquv xotirasini zaiflashtiradi. Qayta tiklash vaqtida xotira fazalari qanday qilib rekonsolidatsiyadan so'nishga o'tishi noma'lumligicha qolmoqda. Bu erda biz rekonsolidatsiyani inhibe qiluvchi kalit sifatida ishlaydigan faol xotiraga o'tish jarayonini aniqladik. Ushbu xotira o'tish bosqichi amigdala, hipokampus va medial prefrontal korteksda (mPFC) hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinaz (ERK) fosforillanishining vaqtinchalik o'sishini ko'rsatdi. Qizig'i shundaki, o'tish bosqichida ushbu hududlarda ERK ning inhibisyonu inhibitor oldini olish (IA) xotirasining rekonsolidatsiya vositasida kuchayishini inhibe qildi. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, o'tish xotirasi jarayoni ERK-signalizatsiya yo'lini faollashtirish orqali rekonsolidatsiya induksiyasini oldini olish orqali qo'rquv xotirasining qo'rquv xotirasi fazalarini almashtirishni faol ravishda tartibga soladi.

Kirish

XotiraQidiruv passiv jarayon emas, balki asl xotirani saqlash, mustahkamlash, zaiflashtirish yoki o'zgartirish/yangilash imkonini beruvchi dinamik jarayondir (Misanin va boshq., 1968; Schneider va Sherman, 1968; Lyuis, 1979; Maktutus va boshqalar. ., 1979; Gordon, 1981; Nader va boshqalar, 2000; Nader va Hardt, 2009; Dudai, 2012; Fukusima va boshqalar, 2014). Muhimi, shartli qo'zg'atuvchiga (CS) qisqa vaqt qayta ta'sir qilish orqali olingan shartli qo'rquv xotirasi labil bo'lib qoladi va uni saqlash yoki yaxshilash uchun gen ekspressiyasiga bog'liq qayta konsolidatsiyani talab qiladi (Nader va boshq., 2000; Dudai, 2002; Kida va boshq., 2002; Suzuki va boshqalar, 2004; Tronel va boshqalar, 2005; Fukusima va boshqalar, 2014). Aksincha, CS ga doimiy yoki takroriy ta'sir qilish xotiraning yo'qolishiga olib keladi, bu qo'rquv xotirasini zaiflashtiradi (Pavlov, 1927; Reskorla, 2001; Myers va Devis, 2002). Shunday qilib, qo'rquv xotirasini qayta tiklash ikkita qarama-qarshi xotira jarayonini, ya'ni rekonsolidatsiya va yo'q bo'lishni keltirib chiqaradi, garchi ikkala jarayon ham bir xil CS qayta ta'sir qilish natijasida yuzaga kelgan bo'lsa-da, lekin CSning qayta ta'sir qilish muddatiga qarab farqlanadi.

Qayta konsolidatsiya va yo'q bo'lib ketishning umumiy va muhim biokimyoviy xususiyati cAMP-javob qiluvchi elementni bog'lovchi oqsil (CREB) vositachiligidagi gen ekspressiyasiga bo'lgan talabdir (Mamiya va boshq., 2009). Qizig'i shundaki, biz kontekstli qo'rquv xotirasini qayta tiklash va yo'q qilish bosqichlari o'rtasidagi ziddiyatli molekulyar, anatomik va xulq-atvor belgilarini ko'rsatdik (Suzuki va boshq., 2004; Mamiya va boshq., 2009). Qayta konsolidatsiya bosqichida oqsil sintezini blokirovka qilish asl qo'rquvni buzadixotira, holbuki, yo'q bo'lib ketish bosqichida oqsil sintezini blokirovka qilish buni amalga oshira olmaydi, garchi kontekstli qo'rquv xotirasi qayta faollashtirilgan bo'lsa ham. CREB vositachiligidagi gen ekspresyonining faollashuvini aks ettiruvchi miya hududlariga bo'lgan talab rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish o'rtasida farq qiladi; Rekonsolidatsiya amigdala va gippokampga bog'liq, yo'q bo'lib ketish amigdala va medial prefrontal korteksga (mPFC) tayanadi. Biroq, amigdaloid CREB faollashuvining vaqt kursi rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish xotira fazalari o'rtasida farq qiladi. Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatdiki, rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish bosqichlari mustaqil emas, balki bir-biri bilan o'zaro ta'sir qiladi. Qizig'i shundaki, yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar vaqt oynasini (o'tish bosqichi) aniqladi, bu rekonsolidatsiyadan keyin amigdalada hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinaz (ERK) faollashuvini ko'rsatmaydi, lekin eshitish qo'rquvi xotirasini qayta tiklashdan keyingi yo'q bo'lib ketish bosqichlaridan oldin (Merlo va boshq., 2018). ). Birgalikda bu topilmalar qo'rquv xotirasini qayta tiklash jarayonida xotira fazalarini rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga o'tkazishning mumkin bo'lgan mexanizmlarini taklif qiladi. Boshqacha qilib aytganda, xotiraga o'tish jarayoni ushbu kalitni faol ravishda tartibga solishi mumkin.

Inhibitor oldini olish (IA) vazifasida sichqonlar yorug'lik bo'linmasidan qorong'i bo'linmaga kirib, shakllangandan so'ng elektr zarbasini oladi.xotiraqorong'i bo'lmani oldini olish uchun. Ilgari, ushbu vazifani qo'llash orqali biz rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish bosqichlarini qayta ta'sir qilish seansi paytida yorug'lik bo'limidan sichqoncha qorong'i bo'linmaga kirgan paytdan boshlab ajratilishi mumkinligini ko'rsatdik (Fukushima va boshq., 2014). Shuning uchun, bu vazifa CS ga qayta ta'sir qilish orqali shartli qo'rquv xotirasini qayta faollashtirish klassik kontekstli qo'rquvni shartlash paradigmasidan farqli o'laroq, rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish bosqichlarining istiqbolli molekulyar imzolarini tavsiflash imkonini beradi; Qisqa (3 daqiqa) shartli kontekstga qayta ta'sir qilish rekonsolidatsiyani keltirib chiqaradi, bu kontekstga uzoq (30 daqiqa) yoki takroriy ta'sir qilish esa yo'q bo'lib ketishga olib keladi (Eisenberg va boshq., 2003; Pedreira va Maldonado, 2003; Suzuki va boshq., 2004; Li va boshqalar, 2008; Mamiya va boshqalar, 2009). Bundan tashqari, biz olingan IA xotirasi ushbu vazifada xotirani qayta mustahkamlash orqali yaxshilanganligini aniqladik (Fukushima va boshq., 2014).

Qo'rquvni qayta tiklash jarayonida rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga o'tish mexanizmini tushunishxotira, biz IA xotirasining rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish bosqichlarining molekulyar, uyali va xulq-atvor belgilarini aniqlash va tavsiflashni maqsad qildik. Biz CREB va ERK ning amigdala, hipokampus va mPFCdagi faollashuvini qayta konsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish fazalarida tahlil qildik va ushbu xotira jarayonlarida ERK faollashuvining rolini ko'rib chiqdik.

Materiallar va uslublar

Sichqonchalar Barcha tajribalar Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanmaga (Yaponiya Neyrologiya jamiyati va Tokio qishloq xo'jaligi universiteti) muvofiq o'tkazildi. Ushbu tadqiqotda o'tkazilgan barcha hayvonlar tajribalari Tokio qishloq xo'jaligi universitetining Hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan (ruxsat №280037). Barcha jarrohlik muolajalar Nembutal behushlik ostida o'tkazildi va azob-uqubatlarni kamaytirish uchun barcha harakatlar qilindi. Erkak C57BL/6N sichqonlari Charlz daryosidan olingan. Sichqonlar besh yoki olti kishilik qafaslarga joylashtirildi, 12/12 soat yorug'lik / qorong'u tsiklda saqlangan va oziq-ovqat va suvga ad libitum kirishiga ruxsat berilgan. Sinov paytida sichqonlar kamida sakkiz haftalik edi. Sinov tsiklning yorug'lik bosqichida amalga oshirildi. Barcha tajribalar sichqonlarning davolash holatiga ko'r-ko'rona o'tkazildi.

IA testi Bosqichli IA apparati (OHARA Pharmaceutical) alohida yorug'lik va qorong'i bo'linmalarga ega bo'lgan qutidan iborat edi (ikkalasi ham 15,5 12,5 11,5 sm). Yorug'lik bo'limi lyuminestsent chiroq bilan yoritilgan (2500 lyuks; Fukusima va boshq., 2008, 2014; Zhang va boshq., 2011; Ishikawa va boshq., 2016). IA mashg'ulotlari boshlanishidan oldin, sichqonlar bir hafta davomida har kuni 2 daqiqa davomida individual ravishda ishlandi. O'quv mashg'ulotlari davomida har bir sichqonchaning yorug'lik bo'limiga 30 soniya davomida odatlanishiga ruxsat berildi va qorong'i bo'limga kirish uchun gilyotin eshigi ko'tarildi. Qorong'i bo'limga kirishning kechikishi sotib olish o'lchovi sifatida qabul qilindi. Sichqoncha qorong‘i bo‘lmaga kirishi bilan gilyotin eshigi yopildi. 5 soniyadan so'ng, umumiy 2 soniya (mashq) uchun oyoq zarbasi (0,2 mA) yetkazildi. Mashg'ulotdan 24 soat o'tgach, sichqon qorong'i bo'linmaga kirgunga qadar yorug'lik bo'limiga qo'yildi (o'rtacha 459 6 15.49 s). Sichqoncha qorong'i bo'limga kirgandan so'ng darhol gilyotin eshigi yopildi va sichqoncha qorong'i xonada turli vaqt davomida (0, 1 yoki 10 daqiqa) oyoq zarbasisiz (qayta faollashmasdan) qoldi. Xotira 48 soatdan keyin baholandi [uzoq muddatli xotira (PR-LTM) testi] sichqonchaning yorug'lik bo'linmasida almashtirilganda qorong'i bo'limga kirishi uchun o'zaro kechikish vaqti, masalan, qayta faollashtirish.

Birinchi tajriba uchun biz qayta faollashtirilgandan so'ng oqsil sintezini inhibe qilish ta'sirini ko'rib chiqdik (0, 1 yoki 10 daqiqa davomida qorong'i bo'limga qayta ta'sir qilish; 1-rasm). Protein sintezi inhibitori anizomisin (ANI; Wako) sho'r suvda eritildi (pH NaOH bilan 7.{12}}–7.4 ga sozlangan). Sichqonlar yuqorida ta'riflanganidek o'qitildi va 24 soatdan so'ng ular qorong'i bo'limga 0, 1 yoki 10 daqiqa davomida oyoq zarbasisiz qayta ta'sir qilgandan so'ng darhol avtomobil (VEH) yoki ANI (150 mg / kg, ip) oldilar. (qayta faollashtirish). Ushbu dozada ANI birinchi 2 soat ichida miyadagi oqsil sintezining .90 foizini inhibe qiladi (Flood va boshq., 1973). Qayta faollashtirish seansidan 48 soat o'tgach, alohida sichqonlar yana yorug'lik bo'limiga joylashtirildi va krossover kechikishi baholandi.

Ikkinchi tajriba uchun [fosforlangan CREB (pCREB) va fosforlangan ERK (pERK) immunohistokimyosi; Anjir. 2-5], biz yorug'likka qayta ta'sir qilgandan so'ng faollashgan miya hududlarini (sichqonlar qorong'i xonaga kirguncha, qorong'i xonada 0 daqiqa davomida qayta ta'sir qilish) yoki qorong'i bo'linmani (qayta) tekshirdik. qorong'i kamerada 1 yoki 10 daqiqa). Sichqonlar to'rtta Fukusima va boshqalarga bo'lingan. · Qayta tiklashdan keyin qo'rquv xotirasi bosqichlarining o'tishi J. Neurosci., 10 fevral, 2021 yil, • 41(6):1288–1300 • 1289guruhlar. Treningdan 24 soat o'tgach, alohida sichqonlar yorug'lik bo'linmasiga qayta ta'sir ko'rsatildi va keyin qorong'i bo'linmadan kirgandan so'ng qorong'i bo'lmada qoldi [qayta faollashtirish: qorong'u bo'linmada 0 min, rekonsolidatsiya (Recon) guruhi; 1 daqiqa, o'tish (Tran) guruhi; 10 min, yo'q bo'lib ketish (Ext) guruhi]. Sichqonlarning yana bir guruhi yorug'lik / qorong'i bo'linmaga qaytarilmadi [qayta faollashtirilmagan (NR) guruhi]. Keyin sichqonlar qayta faollashtirilgandan keyin 5, 15 yoki 30 daqiqada Nembutal (750 mg / kg, ip) bilan behushlik qilindi.

Uchinchi tajriba (U0126 mikroinfuziyasi; 6,7-rasm) uchun biz amigdala, hipokampus yoki mPFCdagi ERK inhibisyonining ta'sirini o'rganib chiqdik.xotiraqayta konsolidatsiya/takomillashtirish, o'tish va yo'q bo'lib ketish. MEK inhibitori U0126 (Sigma-Aldrich) 2,5 ml 7,5 foizli dimetil sulfoksid (Wako) tarkibida uch tomchi Tween 80 (Sigma) bo'lgan sun'iy miya omurilik suyuqligida eritildi va pH ga moslashtirildi. 7,4 NaOH bilan. Sichqonlar yuqorida aytib o'tilganidek o'qitildi va 24 soat o'tgach, ular yana yorug'lik bo'linmasiga joylashtirildi (qayta faollashtirish). Sichqonlar U0126 (1 mg) yoki VEH bilan miyaning turli qismlariga darhol (6A, C, E–H, 7A–C-rasm) yoki 3{23}} daqiqadan so‘ng mikroinfuziya qilingan. (6B, D-rasm) qayta faollashtirish. Qayta faollashtirilgandan keyin 48 soat o'tgach, alohida sichqonlar yana yorug'lik bo'linmasiga joylashtirildi va krossover kechikishi baholandi (PR LTM). Hipokampus va mPFC (0,5 ml) ichiga mikroinfuziyalar 0,25 ml / min tezlikda amalga oshirildi. Amigdala ichiga mikroinfuziyalar (0,2 ml) 0,1 ml / min tezlikda amalga oshirildi. Mikroinfüzyondan keyin in'ektsiya kanülasi 2 daqiqa davomida joyida qoldirildi va sichqonlar keyin uy qafaslariga qaytarildi. MEK inhibitori SL327 (Santa Cruz Biotechnology) dimetil sulfoksidda eritildi va sho'r suv bilan suyultirildi. Sichqonlar yuqorida ta'riflanganidek o'qitildi va 24 soat o'tgach, alohida sichqonlar yorug'lik bo'limiga joylashtirildi (qayta faollashtirish). Sichqonlar qayta faollashtirilgandan so'ng darhol SL327 (10 yoki 20 mg / kg) yoki VEH bilan tizimli ravishda AOK qilingan (7D-F-rasm). Qayta faollashtirilgandan keyin 48 soat o'tgach, alohida sichqonlar yana yorug'lik bo'limiga joylashtirildi va krossover kechikishi baholandi (PR-LTM).

Immunohistokimyo ilgari tavsiflanganidek amalga oshirildi (Mamiya va boshq., 2009; Suzuki va boshq., 2011; Zhang va boshq., 2011; Fukushima va boshq., 2014; Ishikawa va boshq., 2016; Hasegawa va boshq., 2019). Anesteziyadan so'ng barcha sichqonlar 4 foizli paraformaldegid bilan perfuziya qilindi. Miyalar olib tashlandi, bir kechada mahkamlandi, 30 foiz saxarozaga o'tkazildi va 4 daraja haroratda saqlanadi. Koronal bo'laklar (30 mm) kriostatda kesilgan.

pCREB va pERK bo'yash uchun erkin suzuvchi qismlar 1 foiz H2O2 bilan ishlov berildi va quyon poliklonal anti-fosfo-CREB (serin 133; S133) antikori (1:1000; #{{10) bilan bir kechada inkubatsiya qilindi. }}, Millipore) va/yoki quyon monoklonal anti-fosfo-ERK1/2 (T202/Y204) antikorlari (1:300; №4370; Hujayra signalizatsiya texnologiyasi) blokirovka qiluvchi eritmada (fosfat-buferli tuz va 1 foiz echki zardobi albumini, 1 mg/ml sigir zardobi albumini va 0,05% Triton X-100). Bo'limlar fosfat tamponli sho'r suv bilan yuvildi va pCREB uchun xren peroksidaza bilan konjugatsiyalangan eshak quyonga qarshi IgG (1:500; Jekson ImmunoResearch) yoki pERK uchun 1 soat davomida pERK uchun xren peroksidaza bilan konjugatsiyalangan echki quyonga qarshi IgG bilan inkubatsiya qilindi. pCREB signallari biotin tiramid tomonidan kuchaytirildi va Alexa Fluor-konjugatsiyalangan streptavidin (Invitrogen) yordamida vizualizatsiya qilindi. perERK signallari TSA-FCM (Invitrogen) bilan kuchaytirildi. Bo'limlar slaydlarga o'rnatilgan va o'rnatish vositasi (Millipore) yordamida qoplangan.

Miqdorni aniqlash ilgari tavsiflanganidek amalga oshirildi (Frankland va boshq., 2006; Fukusima va boshq., 2014; Mamiya va boshq., 2009; Zhang va boshq., 2011; Suzuki va boshq., 2008). Tuzilmalar anatomik jihatdan Franklin va Paxinos (1997) atlasiga muvofiq aniqlangan. Barcha immunoreaktiv neyronlar davolash holatiga ko'r bo'lmagan eksperimentator tomonidan hisoblangan

Natijalar

IA topshirig'ida qayta tiklashdan keyin xotira fazalarining xarakteristikasi

IA vazifasi sichqoncha yorug'lik bo'linmasidan qorong'i bo'linmaga kirgan paytdagi rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish fazalarini farqlash imkonini beradi (Fukushima va boshq., 2014). Xotira fazalarini rekonsolidatsiyadan so'nishga o'tish mexanizmini tushunish uchun biz xotirani qayta tiklash va yo'q bo'lib ketish uchun zarur bo'lgan protein sintezini inhibe qilish ta'sirini o'rganish orqali xotirani qayta tiklashdan keyingi IA xotira fazalarini tavsifladik (Fukushima va boshq., 2014). Sichqonlar birinchi navbatda yorug'lik bo'limiga joylashtirildi. Qorong'i bo'limga kirganlaridan 5 soniya o'tgach, qisqa elektr zarbasi (mashq) berildi. Sichqonlar mashg'ulotdan 24 soat o'tgach yorug'lik bo'linmasiga qayta ta'sir qilishdi (qayta faollashtirish seansi; 1A-rasm) va qorong'i bo'limga kirish uchun ularning krossover kechikishi baholandi (1B-rasm). Sichqonlar yorug'lik bo'limidan qorong'i xonaga kirgandan so'ng darhol uy qafaslariga qaytarildi (0-qorong'i bo'limga daqiqa qayta ta'sir qilish; rekonsolidatsiya bosqichi) yoki qorong'i xonada 1, 3 yoki qorong'i xonada qolishdi. Oyoq zarbasini olmasdan 10 minut (so'nish bosqichi; 1C-E-rasm). Qayta faollashtirish seansidan so'ng darhol sichqonlar VEH yoki protein sintezi inhibitori ANI ning tizimli in'ektsiyasini oldilar. 48 soatdan keyin krossover kechikish PR-LTM baholandi.

Oldingi tadqiqotimizga muvofiq (Fukushima va boshq., 2014), yorug'lik bo'linmasiga (0 min guruh) qayta ta'sir qilish IA xotirasining qayta mustahkamlanishi va yaxshilanishiga olib keldi. Ikki tomonlama ANOVA vaqtning sezilarli ta'sirini aniqladi (F(1,24)=10.433, p=0.{{20}}036), dori (F(1) ,24)=23.197, p, 0.0001) va vaqt dori oʻzaro taʼsiri (F(1,24)=25.022, p, 0.0001; 1B-rasm). Post hoc Bonferroni testi va juftlashtirilgan t-testi shuni ko'rsatdiki, VEH va ANI guruhlari qayta faollashtirish seansi bilan solishtirganda PR-LTM da krossover kechikish mos ravishda sezilarli darajada oshgan yoki kamaygan (ps, 0,05; VEH, t (6) {{28) }} 5.134, p=0.0021, ANI, t(6)=4.804, p=0.003; 1B-rasm). Ushbu kuzatishlar yorug'lik bo'linmasida IA ​​xotirasini olish xotirani kuchaytirganligini ko'rsatadi, oqsil sintezini inhibe qilish esa olingan xotirani buzgan, bu esa IA xotirasini olish oqsil sinteziga bog'liq tarzda qayta konsolidatsiya orqali xotirani kuchaytirishi haqidagi oldingi kuzatuvni tasdiqlaydi.

Aksincha, qorong'i bo'linmaga qayta ta'sir qilish uzoq muddatli yo'q bo'lib ketishga olib keldi [ikki tomonlama ANOVA, vaqt (1C-rasm, F(1,28)=9.575, p=0.{ {50}}04; 1D, F(1,36)=11.699, p=0.0016), dori (1C-rasm, F(1,28)=4.674, b=0.039; 1D, F(1,36)=12.285, {{29-rasm. }}.0012), dori vositalarining oʻzaro taʼsiri (1C-rasm, F(1,28)=7.916, p=0.009; 1D, F(1,36) {{41-rasm. }}.915, p=0.0079)], ilgari kuzatilganidek (Fukushima va boshq., 2014). Qorong'i xonada 3 yoki 10 daqiqa davomida qolgan VEH guruhlari qayta faollashtirish seansi bilan solishtirganda PR-LTM da krossover kechikishning sezilarli darajada kamayganini ko'rsatdi, ANI guruhlari esa qayta faollashtirish seansi va faollashtirish seansi bilan solishtirganda PR-LTM da taqqoslanadigan krossover kechikishini ko'rsatdi. VEH guruhlari (post hoc Bonferroni testi, ps , 0,05; juftlashgan t testi, 1C-rasm, VEH, t(7)=4.976, p=0.0016, ANI, t(7) { {59}}.796, 0,05-bet; 1D, VEH, t(9)=10.211, p, 0,0001, ANI, t(9)=1,02, bet.0,05 ). Ushbu kuzatishlar qorong'u bo'linmada 3 yoki 10 daqiqa davomida qayta ta'sir qilish IA xotirasini o'chirishini va oqsil sintezining inhibisyoni uzoq muddatli yo'q bo'lib ketishni blokirovka qilishini ko'rsatadi. Shunday qilib, qorong'u bo'linmada IA ​​xotirasini olish gen ekspressiyasiga bog'liq holda IA ​​xotirasini o'chiradi.

Muhimi shundaki, VEH guruhi PR-LTM da qayta faollashtirish seansi va qorong'i xonada 1 daqiqa davomida ANI guruhi bilan solishtirganda o'xshash kechikish vaqtini ko'rsatdi [ikki tomonlama ANOVA, vaqt (F(1,36) {{ 5}}.03, p. 0.05), dori (F(1,36)=0.019, p. 0.05), vaqt dori shovqin (F(1,36)=0.011, p. 0.05); post hoc Bonferroni testi, ps. 0,05; juftlangan t-test, VEH, t (9)=0.091, p. 0,05, ANI, t(9)=0,328, p. 0,05; 1E-rasm]. Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, VEH guruhi IA xotirasini kuchaytirmagan va yo'q bo'lganini va ANI guruhi IA xotirasining buzilishini ko'rsatmagan. Shuning uchun, qorong'u bo'linmada 1 daqiqa davomida qayta ta'sir qilish qayta faollashtirilgan IA xotirasining kuchayishini ham, ANI sabab bo'lgan buzilishini ham to'sib qo'ydi, lekin o'chirilmagan IA xotirasi, bu 1-daqiqa qayta ta'sir qilish rekonsolidatsiya induksiyasini bekor qilishini ko'rsatadi. , lekin IA xotirasini o'chirish uchun etarli emas.

Xulosa qilib aytganda, bu natijalar yorug'lik bo'linmasiga qayta ta'sir qilish rekonsolidatsiya fazasini, qorong'u bo'limga uzoqroq qayta ta'sir qilish (3 yoki 10 daqiqa) so'nish fazasini keltirib chiqarishini ko'rsatdi. Eng muhimi shundaki, qorong'u xonada 1 daqiqa qolish rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga o'tish bosqichini keltirib chiqaradi, bu esa yo'q bo'lib ketishni qo'zg'atmasdan qo'rquv xotirasini qayta mustahkamlashni inhibe qiladi.

IA xotirasini qayta tiklashdan keyin amigdala, hipokampus va mPFCdagi rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish fazalarining molekulyar imzolari

Kontekstli qo'rquv xotirasining qayta mustahkamlanishi va yo'q bo'lib ketishi S133 da CREB fosforilatsiyasining kuchayishini ko'rsatadi, bu rekonsolidatsiya va uzoq muddatli yo'q bo'lib ketish uchun zarur bo'lgan gen ekspressiyasi faollashuvining belgisi, lekin CREB fosforillanishining aniq dinamikasini ko'rsatadi (Mamiya va boshq., 2009). ). Qizig'i shundaki, yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, rekonsolidatsiyadan o'tishda amigdalaning bazolateral mintaqasida CREB ning yuqori oqimi regulyatori (Impey va boshq., 1998; Wu va boshq., 2001) ERK fosforillanishida o'sish yo'q. qo'rquv xotirasi yo'q bo'lib ketishiga, garchi qo'rquv xotirasi mustahkamlangan va so'nganida bu fosforlanish bazolateral mintaqada kuchayadi (Merlo va boshq., 2014, 2018). Boshqa bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, hipokampal ERK faqat kontekstli qo'rquv xotirasi o'chirilganda faollashadi, lekin qayta tiklanmaydi (Tronson va boshq., 2009). Ushbu topilmalar rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish fazalari aniq molekulyar va hujayra belgilarini ko'rsatishini ko'rsatadi. Shuning uchun biz immunohistokimyo yordamida rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish bosqichlarida pCREB va pERK darajalarini o'lchadik va taqqosladik. Biz to'rtta eksperimental guruhdan foydalangan holda 1B, D, E-rasmdagi kabi eksperimental jadvallarni bajardik. Sichqonlar mashg'ulotdan so'ng 24 soatdan keyin yorug'lik bo'linmasiga qayta ta'sir qilishdi va keyin qorong'i bo'linmada qolishdi [qayta faollashtirish: qorong'i bo'limda 0 min, rekonsolidatsiya (Recon) guruhi; 1 daqiqa, o'tish (Tran) guruhi; 10 min, yo'q bo'lib ketish (Ext) guruhi]. Sichqonlarning yana bir guruhi yorug'lik / qorong'i bo'limga qaytarilmadi (qayta faollashtirilmagan, NR guruhi). Biz reaktivatsiya seansidan keyin 30 daqiqada amigdala, hipokampus va mPFCdagi pCREB-musbat (pCREB1) neyronlarni, pERK-musbat (pERK1) neyronlarni va ikki-musbat (pCREB1/pERK1) neyronlarni hisobladik.

Amigdala (lateral mintaqa) CREB yo'q bo'lib ketish va qayta konsolidatsiya fazalarida faollashtirilgan, ERK esa faqat yo'q bo'lib ketish bosqichida faollashtirilgan (2A-C-rasm). Bir tomonlama ANOVA guruhning muhim ta'sirini aniqladi (2B-rasm, F(3,29)=14.85, p, 0.0001). Oldingi topilmalarga o'xshash (Mamiya va boshq., 2009), post hoc Newman-Keuls testi Recon va Ext guruhlari boshqa guruhlarga qaraganda sezilarli darajada ko'proq pCREB1 neyronlarini ko'rsatganligini ko'rsatdi (p, 0,05). Bu kuzatuvlar shuni ko'rsatdiki, xulq-atvor darajasidagi kuzatuvlarga o'xshash (1-rasm), 1 daqiqa davomida qorong'i bo'linmaga ta'sir qilish (o'tish bosqichi) CREB fosforillanishining "yoqilishini" bekor qiladi, bu rekonsolidatsiya bosqichida kuchayadi. Aksincha, Ext guruhida boshqa guruhlarga qaraganda sezilarli darajada ko'proq pERK1 neyronlari kuzatildi, ammo Ext guruhidagi pCREB1 neyronlariga qaraganda ancha kam perERK1 neyronlari bor edi (F(3,29)=3.793, p { {23}}.0207; 2C-rasm).

Izchil ravishda, Ext guruhida (F(3,29)=6.698, p=0.00 14; 2D-rasm), Recon va Ext guruhlarida sezilarli darajada ko'proq pCREB1/ pERK- (pCREB yagona musbat) neyronlar kuzatilgan (F(3,29)=13.689, p, 0 .0001; 2E-rasm). Shunday qilib, rekonsolidatsiya bosqichi pCREB1/pERK-neyronlarning faqat bitta populyatsiyasini ko'rsatdi. Aksincha, yo'q bo'lib ketish bosqichi pCREB1/pERK- va pCREB1/ pERK1 neyronlarining ikkita populyatsiyasini ko'rsatdi, bu ERK faqat pCREB1 neyronlarining kichik to'plamida faollashtirilganligini ko'rsatadi. Muhimi, shunga o'xshash natijalar amigdalaning bazolateral mintaqasida kuzatildi (2G-rasm, F(3,29)=13.042, p , 0,0001; 2H, F(3,29) {{32} }.824, p=0.0201; 2I-rasm, F(3,29)=12.633, p, 0,0001; 2J, F(3,29)=12 .505, p , 0,0001).

ERKning yo'q bo'lib ketish bosqichida ikki fazali faollashuvi ERK CREB ning yuqori oqim faollashtiruvchisi hisoblanadi va shuning uchun ERK faollashuvi qo'rquv xotirasini mustahkamlash va qayta mustahkamlash uchun talab qilinadi (Schafe va boshq., 200{{31) }}; Duvarci va boshq., 2005). Biroq, mos kelmaydigan tarzda, reaktivatsiya seansidan keyin 30 daqiqada pERK o'lchanganda, rekonsolidatsiya bosqichida amigdala, gippokampus yoki mPFCda ERK faollashuvi kuzatilmadi (2-4-rasm). Shuning uchun biz ERK va CREB fosforillanishining vaqt kurslarini ko'rib chiqdik. Biz 2-4-rasmdagi kabi tajriba o‘tkazdik, bundan tashqari, pCREB va pERK darajalari qayta faollashtirish seansidan 5, 15 va 30 daqiqa o‘tgach o‘lchandi ({2-4 uchun qorong‘u kameraga qayta ta’sir qilish). 66}}, 1 yoki 10 min; 5A-rasm). Shakllar 2-4da ko'rsatilgan ma'lumotlarga muvofiq, pCREB1 neyronlarida sezilarli o'sish Recon (amigdala, mPFC va gippocampus) va Ext (amigdala va mPFC) reaktivatsiya seansidan keyin 30 daqiqada kuzatildi, lekin 5 daqiqada emas. ) guruhlar, lekin Tran guruhi emas (5-rasm, bir tomonlama ANOVA, amigdala, 5 min, F(3,23)=0.346, p. 0,05, 30 min, F(3,23)=15.272, p, 0,0001; mPFC, 5 min, F(3,23)=1.169, p. 0,05, 30 min, F(3,23)=32. 346, p, 0,0001;gippokampus, 5 min, F(3,23)=0.154, p.0,05, 30 min, F(3,23)=16.197, p, 0,0001; juftlashtirilmagan t testi, amigdala, rekonsolidatsiya, 5 va 30 min, t(12)=7.807, p , 0,0001, so‘nish, 5 va 30 min, t(12)=5.405, p { {73}}.0002; mPFC, rekonsolidatsiya, 5 va 30 daqiqa, t(12)=5.727, p , 0,0001, so‘nish, 5 va 30 min, t(12)=4.188 , p=0.0013; hipokampal CA1 hududi, rekonsolidatsiya, 5 va 30 daqiqa, t (12)=2.339, p=0.0374).

Qizig'i shundaki, NR guruhi bilan solishtirganda reaktivatsiya seansidan 5 minut o'tgach, Recon, Tran va Ext guruhlarining amigdala, mPFC va hipokampusida pERK1 neyronlarida sezilarli o'sish kuzatildi (5F, amigdala, F (3,23-rasm))=10.961, p=0.0001; mPFC, F(3,23)=7.525, p { {13}}.0011; hipokampus, F(3,23)=6.924, p=0.0017). Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatdiki, ERK barcha xotira fazalarida qayta faollashtirish seansidan so'ng darhol faollashadi. Biroq, perERK1 neyronlari sonining bu o'sishi reaktivatsiya seansidan keyin 15 daqiqadan so'ng bazal darajaga (NR guruhi bilan solishtirish mumkin) qaytdi (Fig. 5F, amigdala, F(3,20)=2.676, p. 0,05; mPFC, F(3,23)=0,683, p.0,05; hipokampus, F(3,20)=0,74, p.0,05). Bundan tashqari, 2-4-rasmlarda ko'rsatilgan topilmalar bilan mos ravishda, faqat Ext guruhida reaktivatsiya seansidan keyin 30 daqiqada amigdala, mPFC va hipokampusda sezilarli darajada ko'proq pERK1 neyronlari kuzatildi (5F-rasm, amigdala, F() 3,23)=6.616, p=0.022; mPFC, F(3,23)=8.012, p=0.0008; hipokampus, F( 3,23)=6.206, p=0.003). Shunday qilib, rekonsolidatsiya va o'tish bosqichlari ERKning vaqtinchalik faollashuvini faqat erta vaqt nuqtasida (5 minut) ko'rsatadi, so'nish bosqichi esa qayta faollashgandan keyin erta (5 daqiqa) va kech (30 min) vaqt nuqtalarida ERKning ikki fazali faollashuvini ko'rsatadi. sessiya. Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatdiki, ERK faollashuvini tartibga solish mexanizmlari rekonsolidatsiya/o'tish va yo'q bo'lib ketish bosqichlarida farqlanadi. Birgalikda bizning kuzatishlarimiz rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish fazalari aniq molekulyar belgilarga ega ekanligini ko'rsatdi.

IA xotirasining rekonsolidatsiya va so'nish bosqichlarida ERK faollashuvining rollari

Qayta konsolidatsiya/o'tish va yo'q bo'lib ketish fazalari mos ravishda monofazik va ikki fazali ERK faollashuvini ko'rsatdi. Keyinchalik, biz ERKni inhibe qilish ta'sirini o'rganib, mPFCdagi erta (5 daqiqa) va kech (30 daqiqa) ERK faollashuvining rollarini qayta konsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish bosqichlarida o'rganib chiqdik va taqqosladik (6-rasm).

Munozara

Ushbu tadqiqotda biz IA xotirasini qayta tiklashdan so'ng xotirani rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lib ketish bosqichlariga o'tish mexanizmlarini o'rganib chiqdik. Biz birinchi bo'lib IA xotira fazalarining xatti-harakatlar imzolarini qaytarib olishdan keyin tavsifladik. Oldingi tadqiqotimiz (Fukushima va boshq., 2014)ga muvofiq, IA xotirasini qayta tiklash natijasida yorug'lik (0 daqiqa qorong'i xonada) va qorong'i (0 daqiqa) ta'sirida qayta tiklash va yo'q bo'lib ketish ( mos ravishda 3 yoki 10 min) bo'limlar. Qizig'i shundaki, IA xotirasi kuchaytirilmadi va o'chirilmadi va sichqonlar qorong'i bo'linmaga atigi 1 daqiqa davomida qayta ta'sir qilganda, oqsil sintezining inhibisyoniga qarshilik ko'rsatdi. Shuning uchun, bu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, qorong'u bo'linmaga 1- daqiqa qayta ta'sir qilish rekonsolidatsiya induksiyasini bekor qiladi, lekin IA xotirasini o'chirish uchun etarli emas. Bundan tashqari, biz ERK amigdala, hipokampus va mPFCda 0, 1 yoki 10 daqiqa davomida qorong'u bo'linmaga qayta ta'sir qilgandan so'ng erta vaqt nuqtasida (5 daqiqa) faollashtirilganligini aniqladik. Izchil ravishda, miyaning ushbu hududlarida ERK ning inhibisyonu IA xotirasining rekonsolidatsiyasi / yaxshilanishi va yo'q bo'lib ketishini blokladi. Eng muhimi, amigdala, gippokampus va mPFCda qorong'u bo'linmaga 1-daqiqalik qayta ta'sir qilishdan keyin ERK inhibisyonu IA xotirasining rekonsolidatsiya vositasida yaxshilanishini inhibe qildi, bu esa qisqa (1 daqiqa) qayta ta'sir qilishdan keyin ERK faollashishini ko'rsatadi. qorong'i bo'limga IA xotira rekonsolidatsiyasini inhibe qilish uchun talab qilinadi. Aksincha, qorong'u bo'linmaga 1-daqiqalik qayta ta'sir qilish IA xotirasini o'chirish uchun etarli bo'lmadi, garchi qorong'u bo'limga uzoq vaqt qayta ta'sir qilish (3 yoki 10 daqiqa) bu xotirani o'chirdi. Shunday qilib, bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, qorong'u bo'linmaga 1-daqiqali qayta ta'sir qilish xotiraga o'tish jarayonini keltirib chiqaradi, bu rekonsolidatsiya/yaxshilashni bekor qiladi, lekin yo'q bo'lib ketishni o'rganishni boshlamaydi. Birgalikda biz xotiraga o'tish jarayoni ERK vositachiligida rekonsolidatsiyaning oldini olish orqali xotira fazalarini rekonsolidatsiyadan so'nishga o'tishga hissa qo'shishini taklif qilamiz.

Hozirgi kuzatuvlarimizga o'xshab, eshitish qo'rquvi holatini qo'llagan yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, bitta (1) yoki uzoq (10) CS taqdimoti amigdalaning bazolateral mintaqasida pERK darajasini oshirish orqali mos ravishda xotiraning mustahkamlanishi va yo'q bo'lib ketishiga olib keladi. Aksincha, oraliq (4-7) CS taqdimotlari amigdalaning bazolateral mintaqasida pERK darajasini o'zgartirmaydi. Muhimi, oraliq CS taqdimotlarida ERK inhibisyonu qo'rquv xotirasiga ta'sir qilmadi. Ushbu tadqiqot qo'rquv xotirasini qayta tiklashdan so'ng xotira fazasining rekonsolidatsiyadan yo'q bo'lishga o'tishini taklif qildi (Merlo va boshq., 2018). Ushbu tadqiqotda biz ushbu topilmani kengaytirdik va o'tish bosqichi ERK signalini uzatish yo'lini faollashtirish orqali xotira fazalarini rekonsolidatsiyadan so'nishga qadar faol ravishda almashtirishni taklif qildik. Oldingi topilmalardan farqli o'laroq (Merlo va boshq., 2018), biz o'tish bosqichi amigdala, hipokampus va mPFCda ERK fosforillanishini o'z ichiga olganligini aniqladik. Bu nomuvofiqliklar ERK fosforillanishini tekshiradigan vaqt nuqtalarining farqi bilan bog'liq bo'lishi mumkin; oldingi tadqiqotda perERK darajalari; CS taqdimotidan keyin 12 daqiqada o'lchangan (Merlo va boshq., 2018), bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatdiki, ortib borayotgan pERK darajalari taxminan shu vaqtning o'zida (qayta ta'sir qilishdan 15 minut keyin) bazal darajaga qaytgan. Bundan tashqari, shuni ta'kidlash kerakki, IA vazifasi rekonsolidatsiya orqali IA xotirasining kuchayishini kuzatish imkonini beradi va shu bilan o'tish bosqichida ERKning inhibisyonu IA xotirasining kuchayishini inhibe qilishini aniqlashimizga olib keladi.

Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ERK fosforillanishi amigdalaning bazolateral hududida qo'rquv xotirasi yo'qolganidan keyin 20-60 daqiqada kuchayadi (Herry va boshq., 2006; Merlo va boshq., 2014, 2018), holbuki gippokamp ko'rsatadi. bu faollashuv kontekstli qo'rquv xotirasining yo'q bo'lib ketishini o'rganishdan keyin 1 soatda (Fischer va boshq., 2007; Tronson va boshq., 2009). Ushbu tadqiqotda biz shunga o'xshash kuzatuvlarni oldikki, pERK yo'q bo'lib ketish bosqichida reaktivatsiya seansidan keyin 30 minutda ortadi. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, ERK fosforillanishi kech yo'q bo'lib ketish bosqichining umumiy molekulyar belgisidir (20-60 minut).

Bundan tashqari, biz ERK faollashuvi so'nish bosqichida qayta faollashuv seansidan so'ng erta va kech vaqt nuqtalarida (5 va 30 minut) ikki fazali ravishda sodir bo'lishini kuzatdik, bu faollashuv esa rekonsolidatsiya fazasining dastlabki vaqt nuqtasida bir fazali ravishda sodir bo'ladi (5-rasm). . Izchil ravishda, rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish fazalarining ushbu vaqt nuqtalarida miya hududlarida ERKni inhibe qilish mos ravishda rekonsolidatsiyani / kuchaytirilishini va uzoq muddatli yo'q bo'lib ketishini blokladi (6A, C-H-rasm). Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, monofazik va ikki fazali ERK faollashuvi mos ravishda IA ​​xotirasini qayta konsolidatsiyalash orqali kuchaytirish va yo'q qilish uchun zarurdir. Shuni ta'kidlash kerakki, ERK CREB fosforillanishining yuqori oqimi regulyatori sifatida ishlaydi. Shu sababli, erta xotira bosqichida ERK ning vaqtinchalik faollashuvi, hech bo'lmaganda, CREB ning fosforlanishiga hissa qo'shishi mumkin, bu esa rekonsolidatsiya va uzoq muddatli yo'q bo'lib ketish uchun zarur bo'lgan genlarning ifodasini faollashtiradi.

Kontekstli qo'rquvni sozlash (Mamiya va boshq., 2009) yordamida oldingi topilmalarimiz kabi, CREB rekonsolidatsiya (amigdala / hipokampus / mPFC) va yo'q bo'lib ketish (amigdala / mPFC) xotira fazalarida faollashtirilgan, ERK esa faqat yo'q bo'lib ketish bosqichida faollashtirilgan. qayta faollashtirish seansidan keyin 30 daqiqada. Izchil ravishda, rekonsolidatsiya bosqichida pCREB1/pERK- neyronlarining faqat bitta populyatsiyasi kuzatildi, yo'q bo'lib ketish bosqichida esa alohida neyron populyatsiyalari kuzatildi: amigdaladagi pCREB1/pERK- va pCREB1/pERK1 neyronlari (2-rasm); Hipokampusdagi pCREB– /perK1 neyronlari (3-rasm); va mPFCdagi pCREB1/perK-, pCREB- /perK1 va pCREB1/perK1 neyronlari (4-rasm). Ushbu kuzatishlar, ayniqsa pCREB-/ perERK1 va pCREB1/perK- neyronlarining qarama-qarshi kuzatuvi shuni ko'rsatadiki, CREB va ERK faollashuvi xotira o'chirilganda miyaning har bir sohasida turlicha tartibga solinadi va ERKning kech faza faollashuvi o'ziga xos va aniq rol o'ynaydi. Qo'rquv xotirasini yo'q qilish uchun rollar, quyida muhokama qilingan konsolidatsiya va qayta birlashtirish kabi boshqa xotira jarayonlari bilan solishtirganda. Qizig'i shundaki, biz pERK1 neyronlari hipokampus va amigdala bilan solishtirganda mPFCda ko'proq ekanligini kuzatdik, chunki mPFC hipokampus va amigdala bilan solishtirganda pERK1 neyronlari (yo'q bo'lib ketish bosqichi) va pCREB1 neyronlarining (qayta konsolidatsiya bosqichi) yuqori nisbatini ko'rsatdi. mPFCda ERK ning faollashishi xotiraning yo'qolishida aniqroq rol o'ynaydi.

Neyronlarning bir xil yoki turli populyatsiyalari rekonsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketish xotira fazalarida faollashtirilganmi yoki yo'qmi, noaniq qolmoqda. Oldingi tadqiqot amigdaladagi "qo'rquv neyronlari" va "yo'q bo'lib ketish neyronlari" ning faollashishini aniqladi, agar qo'rquv xotirasi mos ravishda qayta faollashtirilgan yoki o'chgan (Herry va boshq., 2008). Shuning uchun, ERK va CREB turli xil temporal profilli neyronlarning turli populyatsiyalarida faollashtirilgan bo'lishi mumkin (ya'ni, "qayta konsolidatsiya neyronlari" va yo'q bo'lib ketish neyronlari). Yuqorida muhokama qilinganidek, pCREB1 neyronlari, shu jumladan pCREB1/perK1 neyronlari, mos ravishda rekonsolidatsiya va yo'q bo'lib ketish neyronlari sifatida gen ekspressiyasini faollashtirish orqali IA xotirasining rekonsolidatsiyasini va uzoq muddatli yo'q bo'lishini tartibga solishi mumkin. Aksincha, pCREB- / pERK1 neyronlarida ERK faollashuvi rekonsolidatsiya uchun zarur bo'lgan CREB vositachiligidagi transkripsiya faollashuvining bekor qilinishiga hissa qo'shishi mumkin, chunki bu ERK faollashuvi ayniqsa kech yo'q bo'lib ketish bosqichida kuzatiladi; ERK yo'q bo'lib ketish bosqichida gen ekspressiyasini faollashtirishni bekor qilish uchun rekonsolidatsiya neyronlarida faollashdi. Qizig'i shundaki, oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, hipokampal ERK faollashuvi kontekstli qo'rquv xotirasi o'chirilganda c-fos induksiyasini bloklaydi (Guedea va boshq., 2011), bu ERK faollashuvi CREB signalizatsiya yo'lini antagonize qilish ehtimolini oshiradi. Qayta konsolidatsiya, o'tish va yo'q bo'lib ketishni tartibga soluvchi neyron populyatsiyalarini aniqlash va bu neyronlarning molekulyar belgilari va funktsional ahamiyatini o'rganish muhimdir. Bundan tashqari, ushbu tadqiqotda aniqlangan nerv populyatsiyalari o'rtasidagi o'zaro ta'sirlar noma'lumligicha qolmoqda. Ehtimol, "yo'q bo'lib ketish (o'tish) neyronlari" ular orasidagi o'zaro ta'sirlar orqali qayta konsolidatsiyani oldini olish uchun rekonsolidatsiya neyronlarining funktsiyasini modulyatsiya qiladi (Eisenberg va boshq., 2003; Merlo va boshq., 2014). Shu sababli, amigdala, mPFC va hipokampus ichida va o'rtasidagi ushbu o'zaro ta'sirlarni tekshirish ham muhimdir.

Ilgari, biz kontekstli qo'rquvni yo'q bo'lib ketishni o'rgangandan so'ng, hipokampus CREB fosforilatsiyasi va Arc ifodasida hech qanday o'zgarish ko'rsatmasligini ko'rsatdik va doimiy ravishda yo'q bo'lib ketish bosqichida gippokampda oqsil sintezining inhibisyonu uzoq muddatli yo'q bo'lib ketishni to'sib qo'ymaydi (Mamiya va boshq. , 2009). Ushbu kuzatuvlar uzoq muddatli yo'q bo'lib ketish uchun gippokampning zarur emasligi ehtimolini oshirdi. Biroq, biz ERK IA xotirasining yo'q bo'lib ketishini o'rgangandan so'ng, hipokampusda faollashishini va izchil ravishda, hipokampusdagi ERK faolligini blokirovka qilish uzoq muddatli yo'q bo'lib ketishni susaytirishini ko'rsatdik. Shu sababli, bizning kuzatuvlarimiz xotiraning yo'qolishida hipokampusning muhim rolini ko'rsatadi. Oldingi topilmalarimiz bilan birgalikda biz gippokamp xotirani yo'q qilish uchun zarur, lekin gen ekspressiyasini faollashtirish orqali "yo'q bo'lib ketish xotirasi" ni barqarorlashtirish uchun konsolidatsiyaga o'xshash jarayon uchun kerak emasligini taklif qilamiz.