Anneslea Fragrans devoridan fenolli kompozitsiyalarni faollik bo'yicha izolyatsiya qilish. Va ularning HepG2 hujayralarida vodorod peroksid keltirib chiqaradigan oksidlovchi stressga qarshi sitoprotektiv ta'siri 1-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Annotatsiya: Anneslea fragrans Wall., commonly known as"Pangpo Tea", is traditionally used as folk medicine and healthy tea for the treatment of liver and intestine diseases. The aim of this study was to purify the antioxidative and cytoprotective polyphenols from A.fragrans leaves. After fractionation with polar and nonpolar organic solvents, the fractions of aqueous ethanol extract were evaluated for their total phenolic (TPC) and flavonoid contents(TFC) and antioxidant activities(DPPH, ABTS, and FRAPassays). The n-butanol fraction (BF)showed the highest TPC and TFC with the strongest antioxidant activity. The bio-guided chromatography of BF led to the purification of six flavonoids (1-6) and one benzoquinone lanthanoid (7). The structures of these compounds were determined by NMR and MS techniques. Compound 6 had the strongest antioxidant capacity, which was followed by 5 and 2. The protective effect of the isolated compounds on hydrogen peroxide (H2O2)-induced oxidative stress in HepG2 cells revealed that the compounds 5 and 6exhibited better protective effects by inhibiting ROS productions, having no significant difference with vitamin C(p>0.05), 6 esa apoptozga qarshi eng yaxshi faollikni ko'rsatdi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, A.fragrans funktsional oziq-ovqat va sog'lom oziq-ovqat mahsulotlarini ishlab chiqish uchun qimmatli antioksidant fitokimyoviy manba bo'lib xizmat qilishi mumkin.

Kalit so‘zlar:Anneslea fragrans; antioksidant; boshqariladigan izolyatsiya; oksidlovchi stress; flavonoid glikozidlar

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Reaktiv kislorod turlari (ROS) normal fiziologik va biokimyoviy jarayonlarda oksidlovchi nafas olish orqali yon mahsulot sifatida ishlab chiqariladi [1]. Endogen erkin radikallar sifatida ROS hujayra signalizatsiyasida va tana barqarorligini normal diapazonda saqlashda muhim rol o'ynaydi [2]. Agar ROSni samarali ravishda yo'q qilishning iloji bo'lmasa, haddan tashqari ROS oksidlovchi stressning paydo bo'lishiga olib kelishi mumkin, bu hujayra proliferatsiyasi va apoptozga ta'sir qilishi mumkin [3]. Oksidlanish stressi diabet, giperlipemiya, semizlik, saraton, yurak-qon tomir va neyrodegenerativ kasalliklar kabi turli kasalliklar bilan chambarchas bog'liq. So'nggi paytlarda ko'plab tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, antioksidantlar bilan boyitilgan dieta ortiqcha ROSni tozalash qobiliyati tufayli bir qator foydali ta'sirga ega [5,6].

Tabiiy antioksidantlar polifenollar [], karotenoidlar [8], vitaminlar [9], azot o'z ichiga olgan birikmalar [10] va kumarinlar [9] kabi turli molekulalarni o'z ichiga oladi. Polifenollar o'simliklar shohligida keng tarqalgan va antioksidant xususiyatlari tufayli sog'liq uchun foyda keltiradi [11]. Ularning ko'pchiligi, masalan, resveratrol va ba'zi hosilalari [12], antosiyanidinlar [13], izoflavonlar [14l, katexin [15l] va quercetin [16] ROSni tozalash orqali himoya ta'siri bilan yaxshi ma'lum. So'nggi bir necha yil davomida polifenollar saraton [17], yurak-qon tomir disfunktsiyasi [18], neyrodegenerativ kasalliklar [19] va qarishning [20] oldini olishda e'tiborni tortmoqda. Shuning uchun samarali antioksidantlarni izlash inson salomatligini mustahkamlash uchun zarurdir.

Cistanche immunitetni yaxshilashi mumkin

Anneslea fragrans devori. doimiy yashil oʻsimlik boʻlib, u asosan Xitoyning janubida tarqalgan [21]. A.fragrans barglari o'zining bezak maqsadlaridan tashqari, isitma, jigarni himoya qilish, tetiklantiruvchi oshqozon va ichaklarni davolash uchun xalq tabobati sifatida ham qo'llaniladi Xitoy va Kambodja [22] "Yunnan Simao Xitoy o'simlik tibbiyoti" da qayd etilgan. .Bundan tashqari, barglar "Pangpo choyi" deb nomlanuvchi choy ichimligi sifatida ham qayta ishlangan. Oldingi hisobotlarda [23], A.fragrans ekstrakti antioksidant va bezgakka qarshi faollikni ko'rsatdi. Biroq, hozirgi kunga qadar A. xushbo'y hidlaridan uning antioksidant fenolik birikmalari haqida xabar berilmagan.

Shunday qilib, ushbu tadqiqotning maqsadi jigar kasalliklarini davolash uchun an'anaviy foydalanish uchun mas'ul bo'lgan A. fragrans barglaridan antioksidant birikmalarni ajratib olish va aniqlash edi. Suvli etanol ekstraktining to'rtta fraktsiyasi, diklorometan fraktsiyasi (DF), etil asetat fraktsiyasi (EAF), n-butanol fraktsiyasi (BF) va qoldiq suv fraktsiyasi (RWF) ularning umumiy fenolik (TPC) va umumiy flavonoid tarkibi uchun baholandi. (TFC) va ularning antioksidant qobiliyati uchun. N-butanol fraktsiyasi (BF) eng kuchli antioksidant faollikka ega bo'lgan eng yuqori TPC va TFCga ega edi. BF ning bio-boshqaruv fraksiyasi birikmalarni tozalash imkonini berdi. Bundan tashqari, ajratilgan birikmalarning sitoprotektiv ta'siri inson jigar saratoni HepG2 hujayralarida vodorod peroksid (H, O,) keltirib chiqaradigan oksidlovchi stressda amalga oshirildi. Hujayra ichidagi ROS ishlab chiqarish va hujayra apoptozi oqim sitometriyasi yordamida aniqlandi. Shunday qilib, ushbu tadqiqot oziq-ovqat va sog'liqni saqlash sanoatida funktsional qo'shimcha (sog'lom choy) sifatida A.fragrans barglarini ishlab chiqish va ishlatish uchun qimmatli antioksidant fitokimyoviy tarkibiy qismni taqdim etdi.

2. Natijalar va muhokama

2.1.Kasr va kichik kasrlarning rentabelligi

Organik erituvchilar yordamida suyuqlik-suyuqlikka bo'linish va ustun fraksiyasi xom ekstraktdan bioaktiv birikmalarni boyitishning muhim usullari hisoblanadi [24]. Suyuq-suyuq bo'linish yordamida A. fragrans barglaridan etanol ekstrakti (CE) navbati bilan to'rt fraktsiyani (DF, EAF, BF va RWF) hosil qilish uchun diklorometan, etil asetat va n-butanol bilan ketma-ket fraktsiyalangan. Fraksiyalarning rentabellik foizi 11 dan 27 foizgacha o'zgarganligi aniqlandi. Qoldiq suv fraktsiyasi (RWF, 27 foiz) eng yuqori hosilga ega bo'ldi va boshqa fraktsiyalarning hosildorligi quyidagicha bo'ldi: n-butanol fraktsiyasi (BF, 24 foiz), etil asetat fraktsiyasi (EAF, 21 foiz), diklorometan kasr (DF, 11 foiz).

Subfraktsiyalarning rentabelligi (BF-A dan E gacha) 3,82 dan 48,4 foizgacha o'zgarganligi aniqlandi. BF-E eng yuqori rentabellikni taqdim etdi - 48,4 foiz, undan keyin BF-D (24,96 foiz), bu boshqa fraksiyalarga qaraganda ancha yuqori rentabellikka ega.

2.2. HPLC tahlili

Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasini (HPLC) aniqlash miqdoriy aniqlashning kuchli usuli ekanligi isbotlangan. HPLC tahlili shuni ko'rsatdiki, BF eng kuchli antioksidant faollikka ega bo'lgan eng ko'p birikmalarga ega. Antioksidant tahlillari va HPLC tahlillari rahbarligida antioksidant fraktsiya subfraktsiyalarni izolyatsiya qilish uchun qo'shimcha kromatografiyadan o'tkazildi. Beshta subfraktsiyani (BF-A dan E gacha) hosil qilish uchun BF gidratlangan qatron D101 ustuniga ta'sir qildi. HPLC tahlili shuni ko'rsatdiki, BF-Cto E eng ko'p antioksidant birikmalarga ega. Ushbu fraksiyalarning bio-boshqaruv fraksiyasi (BF-C dan E gacha) ettita sof birikmani tozalash imkonini berdi.

1-rasmda ko'rsatilganidek, BF va ettita sof birikmalar HPLC tahlili bilan profillangan. Saqlash vaqtlari va UV yutilish egri chiziqlari bilan taqqoslash asosida ushbu etti birikma 7,51 min (korroziv, 7), 7,92 min ((epi)-katexin, 6), 9,38 min (konfuzozid, 1), 9,57 da saqlash vaqtlari orqali tasdiqlandi. min((S)-naringenin-7-O- -D-glyukopiranozid, 4), 10,32 min (vaccinii folin, 2), 12,64 min (2',3,4,4'-tetrahidroksidihidroxalkon, 5) va 13,95 daqiqa (1-[4-(-D-glyukopiranosiloksi)-2-gidroksifenil]-3-(4-gidroksi-3-metoksifenil) -1-propanon,3)(1A-rasm). Ulardan 1-6 birikmalar flavonoidlarga, 7-birikma esa benzoxinoletanoidlarga tegishli.

2.3. Jami fenolik tarkib (TPC) va umumiy flavonoid tarkibi (TFC)

A.fragrans barglari an'anaviy ravishda qayta ishlangan sog'lom choy sifatida ishlatiladi va fenolik moddalar va flavonoidlarning yaxshi manbai ekanligi isbotlangan [25]. Spektrofotometrik tahlillarga ko'ra, TPC va TFC A. fragrans barglaridan turli fraktsiyalar va subfraktsiyalarda sinovdan o'tkazildi. 1-jadvalda ko'rsatilganidek, BF 238,12±12 bilan eng yuqori TPC qiymatiga ega edi.05 mg GAE/g ekstrakti, keyin EAF. DF eng past TPC qiymatini 66,52±0,57 mg GAE/g ekstrakti sifatida ko'rsatdi. Xuddi shunday, eng yuqori TFC kontsentratsiyasi ham TFC qiymati 165,19±5,21mg RE/ekstrakti bo'lgan BFda topilgan. RWF va EAFga kelsak (mos ravishda 66,92±1,38 va 116,12±2,89 mg GAE/ekstrakt), ular BF (165,19±5,21 mg RE/g ekstrakti) ga qaraganda past TFC konsentrasiyalariga ega, DF esa eng past TFC konsentratsiyasiga ega edi. 47,94±2,84 mg RE/g ekstrakti sifatida. TPC va TFCin BF tarkibi DF tarkibiga qaraganda taxminan to'rt baravar yuqori edi.

Ma'lumotlar BF-Eda eng yuqori TPC va TFC mavjudligini 262,03 ± 1,72 mg GAE / g ekstrakti sifatida ko'rsatdi; Mos ravishda 180,52± 6,30 mg RE/g ekstrakti, keyin BF-D (mos ravishda 219,84±4,01 va 157,01±2,50 mg RE/g ekstrakti), BF-C (210,69±6,31 va 151,01±RE/g ekstrakti, 151,01±4,33 mg) mos ravishda), BF-B va BF-A esa eng past TPC va TFC qiymatlariga ega (1-jadval).

2.4.Antioksidant faolligi

Ko'pgina polifenollar, ayniqsa flavonoidlar va fenolik kislotalar, mashhur antioksidant oziq-ovqat (ozuqaviy moddalar) sifatida ishlatiladi va inson uchun bir qator foyda keltiradi [17]. Oldingi tadqiqotimizda A.fragrans barglari polifenollarning yaxshi manbai ekanligi isbotlangan[26]. Biroq, A. fragrans barglaridan olingan ekstrakt va uning fitokimyoviy moddalarining antioksidant faolligi hali o'rganilmagan. Turli xil antioksidant reaktsiya mexanizmlari tufayli A. fragrans barglaridan fraktsiyalar va subfraktsiyalarning antioksidant faolligini baholash uchun ABTS, DPPH va FRAP ning uchta tahlili birlashtirildi.

Among the fractions, BF showed the most potent antioxidant activity in ABTS, DPPH, and FRAP radical-scavenging activities with 1808.46±96.52,951.42±87.75, and 1822.96± 29.24 μmol TE/g extract （Table 1）.PDF showed the lowest antioxidative activity in ABTS and FRAP assays（139.23±8.62 μmol TE/g extract and 180.05± 9.46 μmol TE/g extract, respectively)(Table 1). Whereas the radical scavenging activities of four fractions (DF, EAE, BF, and RWF) in the DPPH radical-scavenging assay were found to vary from 613.38± 45.35 to 951.42±87.75 μmol TE/g extract, respectively, having no significant difference (p>0.05). These results suggested that the phytochemicals from A. fragrans leaves might be insensitive to DPPH. To further obtain the active metabolites, BF was selected for further fractionation. The BF was subjected to D101 macroporous adsorbing resin column chromatography eluting by a gradient of the methanol-aqueous system to yield five subfractions(BF-A to E). Hence, the ABTS radical-scavenging activity of these subfractions can be ranked as BF-E> BF-C>BF-D. FRAP tahlilidagi kamaytiruvchi faollik BF-Dhadning eng kuchli antioksidant faolligini, undan keyin BF-C va BF-E ekanligini ko'rsatdi. Shunisi e'tiborga loyiqki, uchta subfraksiya (BF-C dan E gacha) ona fraktsiyasiga qaraganda yuqori antioksidant faollikni ko'rsatdi. (BF). Birgalikda BF-C dan E gacha bo'lgan antioksidlovchi fitokimyoviy moddalarni ajratib olish va aniqlash uchun ustun xromatografiyasiga topshirildi.

2.5. Izolyatsiya qilingan birikmalarning antioksidant faolligi

Izolyatsiya qilingan barcha birikmalar ({0}} birikmalari) ABTS, DPPH radikalini tozalash faolligi va FRAP antioksidant faolligi bilan antioksidant qobiliyati uchun baholandi. Barcha ma'lumotlar 2-jadvalda tasvirlangan. 6 va 2 birikmalari eng yuqori antioksidant faollikni ko'rsatdi, undan keyin 5. Murakkab 4 o'rtacha antioksidant faollikni ko'rsatdi va 1, 3 va 7 birikmalari ABTS va DPPH radikallarini tozalash faolligi 200 mkmoldan kam bo'lgan holda faol emas deb hisoblangan. TE/g ekstrakti. Ijobiy nazorat sifatida Vc（(2932,91 ±93,63 va 1873,56±121,68 umol TE/g ekstrakti bilan radikal tozalash faolliklari) musbat nazorat sifatida foydalanilganda, birikma6 ABTS va DPPH radikal tozalash tahlillarida 1591,3 ± 3,3 ± 789,3 mk va 1589,3 mk bilan eng kuchli antioksidant faollikka ega edi. TE/g ekstrakti （p<0.05）, respectively.="" furthermore,="" compound="" 6="" had="" the="" best="" antioxidant="" capacity="" in="" the="" frap="" assay="" as="" 5027.43±620.75="" μmol="" te/extract,="" which="" was="" much="" higher="" than="" that="" of="" vc="" as="" 3291.28±241.02="" μmol="" te/extract.="" moreover,="" the="" compound="" 2and6showed="" a="" significant="" antioxidant="" activity,="" which="" was="" equivalent="" to="" a="" positive="" control="">

Bundan tashqari, flavonoidlarning (1-6) antioksidant tuzilishi-faollik munosabatlari turli darajadagi inhibitiv ta'sirlar bilan muhokama qilinadi. 2-birikma 1, 3 va 5 birikmalariga qaraganda ko'proq antioksidant faollikni taqdim etdi, bu 2-dagi dihidrokalkonlardagi 3,{8}}dihidroksi guruhlari ABTS, DPPH radikallarini tozalash faolligi va FRAP antioksidantiga qarshi muhim rol o'ynashi mumkinligini ko'rsatdi. faolligi va C-4'2 da almashtirilgan glyukoza qismi uning antioksidant qobiliyatida muhim rol o'ynashi mumkin [4]. Bundan tashqari, 6-birikma boshqa birikmalarga nisbatan eng yuqori antioksidant faollikni namoyon qildi, bu esa flavan{14}}ols (katexin) dihidrokalkonlar va flavanonlarga qaraganda yaxshiroq radikal tozalash faolligini ko'rsatishini ko'rsatdi [27]. Xulosa qilib aytganda, keyingi tadqiqotda H2O2 tomonidan oksidlovchi stressga qarshi sitoprotektiv ta'sir ko'rsatish uchun yaxshi antioksidant faollikka ega bo'lgan 2, 5 va 6 birikmalari tanlangan.

2.6. Antioksidant faollik va TPC/TFC tarkibi o'rtasidagi bog'liqlik

TPC va TFC kontsentratsiyasi FRAP (r{0}}.982 va 0.977) va ABTS (r=0.959 va) qiymatlaridan antioksidant faollik bilan yuqori darajada bog'liq. 0,965) mos ravishda. Korrelyatsiya matritsasi ham ABTS va FRAP qiymatlari o'rtasida kuchli korrelyatsiyani ko'rsatdi (r =0.992). Bundan tashqari, 1-jadval ma'lumotlaridan olingan ko'p o'lchovli tahlil (PCA) o'tkazildi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, PCA umumiy o'zgarishlarning 94,44 foizini tushuntirdi, bunda PC1 dispersiyaning 84,73 foizini va PC2 9,71 foizni tashkil etdi. EAF va RWF bilan FRAP, ABTS va DPPH tahlillari yuqori o'ng kvadrantlarda joylashtirilgan va BF va BF-Cto E bilan TPC va TFC kontsentratsiyasi PC1 musbat ballarida mos ravishda pastki o'ng kvadrantlarda joylashgan. Shu bilan birga, past TPC va TFC kontsentratsiyasiga ega DF va BF-A dan B gacha bo'lgan PC1 salbiy ballari o'qi bo'ylab joylashgan. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatdiki, TPC va / yoki TFC kontsentratsiyasi antioksidant quvvat bilan chambarchas bog'liq va fraktsiyalar va subfraktsiyalarda TPC yoki TFC kontsentratsiyasi qanchalik katta bo'lsa, ularning antioksidant qobiliyati qiymatlari shunchalik yuqori bo'ladi. Ushbu natijalar A. fragrans barglarining turli fraksiyalari va subfraktsiyalarida yuqori fenolik va flavonoid tarkibi antioksidant faollikka hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatdi.

Shakl 2. Umumiy fenolik moddalar, flavonoidlar va antioksidant faollik bo'yicha PCA tahlili. Turli harflarga ega vositalar sezilarli farqlarni ko'rsatadi (p<0.05).df, eaf,="" bf,="" rwf="" mean="" dichloromethane="" fraction,="" ethyl="" acetate="" fraction,="" n-butanol="" fraction,="" and="" residual="" water="" fraction.="" bf-a="" to="" e="" means="" bf="" was="" subjected="" to="" d101="" column="" chromatography="" to="" yield="" five="">

Ushbu maqola Molecules 2021, 26, 3690 dan olingan. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules