Buyrak fibrozini davolashning samarali usuli
Mar 17, 2022
qo'shimcha ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com
Ⅰ qism: Endoplazmatik retikulum oqsili TXNDC5 buyrak fibroblastlarida TGF signalini kuchaytirish orqali buyrak fibrozini rag'batlantiradi.
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jao va boshqalar.
Kirish
Buyrak fibrozi, tubulointerstitial bilan tavsiflanadifibrozva glomerulyar skleroz, barcha bo'lmasa ham, ko'pchilik turlarining umumiy patologik ko'rinishidirsurunkalibuyrakkasalliklar(CKD) (1). ning rivojlanishibuyrakfibrozCKD bilan og'rigan bemorlarda asta-sekin yo'qolishiga olib keladibuyrakfunktsiyasi, bu oxir-oqibatda diyaliz yoki dializni talab qiladigan buyrak kasalligining oxirgi bosqichiga (ESRD) olib kelishi mumkin.buyraktransplantatsiya (2). Ko'p molekulyar determinantlar va yo'llar jarayonga hissa qo'shishi ko'rsatilganbuyrak fibrozi, transformatsion o'sish omili-beta (TGF-) odatda buyrak fibrogenezining asosiy regulyatori sifatida qabul qilinadi (3). Shikastlanishdan keyinbuyrak, shikastlangan quvurli epiteliya hujayralari (TEC) G2/M fazasida tutiladi va ko'p miqdorda TGF- ni chiqaradi, bu esa qo'shni buyrak fibroblastlarini miyofibroblastlarga (4-6) faollashishi va transformatsiyasini qo'zg'atadi. Silliq mushak aktini (SMA) ifodasi bilan ajralib turadigan faollashtirilgan miofibroblastlar yuqori darajada proliferativ bo'lib, fibrilyar kollagen, elastin, fibronektin va CCN2 (odatda biriktiruvchi to'qima o'sishi omili sifatida tanilgan) kabi hujayradan tashqari matritsalar (ECM) oqsillarini ishlab chiqaradi. CTGF)(7,8). Buyrak shikastlanishining dastlabki bosqichlarida,fibrozto'qimalarni tiklash va struktura yaxlitligini saqlashga yordam beradigan adaptiv va o'z-o'zidan cheklangan fiziologik javob sifatida boshlangan (9). Shu bilan birga, surunkali, takroriy buyrak shikastlanishidan keyin miofibroblastlarning faollashishi va ko'payishi davom etadi, bu esa ECMning haddan tashqari ishlab chiqarilishi va to'planishiga olib keladi, bu esa funktsional buyrak parenximasining yo'qolishiga va natijada buyrak etishmovchiligiga olib keladi (1O, 11).
Buyrak kasalligi uchun Cistanche para que sirve-ga bosing
Zamonaviy tibbiyotdagi yutuqlarga qaramay, bir nechta klinik davolash usullari samarali ekanligi isbotlanganbuyrak fibrozi. Masalan, angiotensinga aylantiruvchi ferment ingibitorlari (ACEI) va angiotensin retseptorlari blokerlari (ARBs), masalan, proteinuriyani kamaytiradi, yaxshilaydi.buyrakfibroz, va CKD rivojlanishini sekinlashtiradi (12,13). Boshqa tomondan, nospesifik fosfodiesteraza inhibitori bo'lgan pentoksifillin TGF{2}}induktsiyasi bilan bog'liq ECM va CCN2 ifodasini inhibe qilishi va tubulointerstitialning susayishiga olib kelishi ko'rsatilgan.fibroz(14). ACEI va ARBlardan foydalanish ularning gipotenziv ta'siri va giperkalemiya kabi potentsial nojo'ya ta'sirlari bilan cheklangan. Bundan tashqari, na ACE / ARB, na pentoksifillin bilan davolash kasallikning rivojlanishini to'xtata olmaydi.buyrakfibrozva CKD (15,16). Shuning uchun patogenezi uchun muhim bo'lgan yangi vositachilar yoki yo'llarni aniqlash juda muhimdir.buyrakfibrozCKD ga qarshi samarali terapevtik vositalarni ishlab chiqish (surunkali buyrak kasalliklari).
Yaqinda biz 5 (TXNDC5) ni o'z ichiga olgan tioredoksin domenini, ER-rezident, protein disulfid izomeraza (PDI) ferment faolligi bilan fibroblast bilan boyitilgan proteinni yurak faoliyatining muhim vositachisi sifatida aniqladik.fibroz(17). Biz haddan tashqari TXNDC5 yurak rivojlanishiga yordam berishini ko'rsatdikfibrozredoksga bog'liq yurak fibroblastlarini faollashtirish va ECM ishlab chiqarish orqali. Txndc5 ning genetik yo'q qilinishi yurak faoliyatini yaxshilaydifibrozva sichqonlarda agonist tomonidan qo'zg'atilgan kontraktil disfunktsiya (17). TXNDC5 ning miokard fibrogenezidagi kuzatilgan muhim roliga asoslanib, biz TXNDC5 to'qimalarning rivojlanishiga ham muhim hissa qo'shishi mumkinligini taxmin qildik.fibrozyurak bo'lmagan organlarda, ayniqsabuyrak fibrozi.
Ushbu tadqiqotda biz TXNDC5 ham inson, ham sichqonchaning fibrotik buyraklarida, xususan, kollagen chiqaradigan buyrak fibroblastlarida yuqori darajada tartibga solinganligini ko'rsatdik. Txndc5 ning global o'chirilishi miqyosini sezilarli darajada susaytirdibuyrakfibrozbuyrak shikastlanishining bir nechta sichqoncha modellarida. Mexanik jihatdan biz TGF{1}} tomonidan ATF6-bog'liq ER stress yo'li orqali qo'zg'atilgan haddan tashqari TXNDC5 ko'payishini ko'rsatdik.buyrakfibrozTGF-retseptorlari I (TGFBR1) ning posttranslasyonel stabilizatsiyasi va yuqori regulyatsiyasi orqali buyrak fibroblastlarini faollashtirish/proliferatsiyasi va ECM ishlab chiqarishni rag'batlantirish orqali. Muhimi shundaki, biz Txndc5 ning fibroblastga xos o'chirilishini rag'batlantirish uning rivojlanishi va rivojlanishini samarali ravishda yaxshilashini ko'rsatdik.buyrak fibrozisichqonlarda turli xil shikastlanishlar natijasida kelib chiqqan, bu TXNDC5 ni nishonga olish davolash uchun yangi va kuchli yondashuv bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.buyrakfibrozva saqlashbuyrakfunktsiyasi.
Shakl 1. TXNDC5 sichqonchaning fibrotik buyraklari va CKD bilan og'rigan bemorlarning buyrak namunalarida sezilarli darajada ko'tarildi.( surunkali buyrak kasalliklari).
(A) IHC bo'yash (n=3) va (B) immunoblotlar (n=6) TXNDC5 ning protein ifodasi UUO yoki uIRI tomonidan qo'zg'atilgan sichqonchaning fibrotik buyraklarida, qarama-qarshi buyraklar (CL) bilan solishtirganda ko'tarilganligini ko'rsatdi. . O'lchov paneli: 50 mkm.
(C) Miqdoriy RT-PCR Txndc5 transkripti UUO va uIRI (n=4-7) tomonidan qo'zg'atilgan sichqonchaning fibrotik buyraklarida ko'tarilganligini ko'rsatdi.
(D) CKD bilan og'rigan bemorlarning (GSE66494) inson buyragi namunalari bo'yicha mikroarray ma'lumotlarini qayta tahlil qilish shuni ko'rsatdiki, TXNDC5, COL3A1 va FN1 CKD bilan kasallangan bemorlarning buyrak to'qimalarida sezilarli darajada yuqori tartibga solingan (sog'lom nazorat n=8, CKD n {{ 6}}). A-C uchun ma'lumotlar 3 yoki undan ortiq mustaqil eksperimental replikatsiyalarni ifodalaydi.
Barcha panellar uchun ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi. *P < {0}}.05,="" **p="">< 0,01,="" ***="" p="">< 0,001="" 2-tomonlama="" t-testi="" (a–c)="" yoki="" mann-="" uitni="" testi="">
Natijalar
TXNDC5 inson va sichqonchaning fibrotik buyraklarida sezilarli darajada yuqori tartibga solingan. TXNDC5 ning patogenezida potentsial ishtirokini o'rganishbuyrak fibrozi, biz birinchi navbatda bir tomonlama ureteral obstruktsiya (UUO), bir tomonlama ishemiya-reperfuziya shikastlanishi (uIRI) yoki foliy kislotasi (FA) qo'llanilishi bilan qo'zg'atilgan fibrotik sichqonchaning buyrak to'qimalarida uning protein ifoda darajasini aniqladik. Immunogistokimyoviy tadqiqotlar barcha 3 sichqoncha modellarining buyrak bo'limlarida TXNDC5 bo'yalishi intensivligining sezilarli darajada oshishini aniqladi.buyrakfibroz(1A-rasm va qoʻshimcha 1A-rasm; qoʻshimcha material ushbu maqola bilan onlaynda mavjud;https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Immunoblotting va miqdoriy teskari transkripsiya PCR (RT-PCR) shuningdek, sichqonchaning fibrotik buyraklarida protein (1B-rasm) va transkript (1C-rasm va qo'shimcha rasm 1B) TXNDC5 ifoda darajalarining sezilarli darajada oshishini ko'rsatdi. Ushbu natijalarga muvofiq, CKD (GSE66494) (18) bilan og'rigan bemorlarning buyrak biopsiya namunalaridan olingan mikroarray ma'lumotlarini qayta tahlil qilish TXNDC5 ning ifoda darajalari (2,24 marta, P) ekanligini ko'rsatdi.<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">buyrak fibroziCOL3A1 va FN kabilar, shuningdek, KKD bilan og'rigan bemorlarning buyrak namunalarida sog'lom nazoratdagilar bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi (1D-rasm va qo'shimcha rasm 1C). Birgalikda, fibrotik odam/sichqon buyraklarida TXNDC5/Txndc5 ekspressiyasining kuzatilgan yuqori regulyatsiyasi va uning fibrogenik ECM protein genlari bilan ijobiy korrelyatsiyasi TXNDC5 ning patogenezdagi potentsial rolini ko'rsatadi.buyrak fibrozi.
Shakl 2. TXNDC5 buyrak fibroblastlarida yuqori darajada tartibga solingan, ammo fibrotik buyraklarning TEC, endotelial hujayralari yoki podotsitlarida emas.
(A va C) IF Col1a1-GFPTg sichqonlarida UUO tomonidan qo'zg'atilgan fibrotik buyraklar bo'limlarida TXNDC5 (qizil) bo'yalishi TXNDC5 asosan buyrak po'stlog'ida va medullada kollagen ajratuvchi buyrak fibroblastlarida (yashil) ifodalanganligini ko'rsatdi. (n=6). Hujayra yadrolari DAPI (ko'k) bilan bo'yalgan. O'lchov paneli: 100 mkm.
(B) IF Cdh16-Cre, NPHS2-Cre va Tie2-Cre/ERT2 tdTomato sichqonlarida UUO tomonidan induktsiya qilingan fibrotik buyraklar bo'limida TXNDC5 (yashil) bo'yalgan bo'lsa. Hujayra yadrolari DAPI (ko'k) bilan bo'yalgan. O'lchov paneli: 100 mkm.
(D) UUO tomonidan qo'zg'atilgan fibrotik buyraklardagi turli turdagi buyrak hujayralarida TXNDC5 plyus hujayralarining ulushini ko'rsatadigan doiraviy diagramma.
Ma'lumotlar 3 yoki undan ortiq mustaqil eksperimental replikatsiyalarni ifodalaydi. C dagi ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi.
TXNDC5 fibrotik buyraklardagi kollagen ajraladigan buyrak fibroblastlarida yuqori darajada boyitilgan. Buyrak fibrogenezi jarayonida buyrak hujayralarining bir nechta turlari ishtirok etgan. Buyrak shikastlanishidan so'ng rezident (19) va perivaskulyar (20) buyrak fibroblastlari faol miofibroblastlarga differensiallanib, ECM to'planishiga olib kelishi ko'rsatilgan. TEClar va endotelial hujayralar ham rivojlanishiga hissa qo'shishi xabar qilinganbuyrak fibrozimos ravishda epitelial- va endotelial-mezenximaga o'tish orqali (10,21). Buyrak jarayonida TXNDC5 ifodalangan hujayra turlarini aniqlash.fibroz, Buyrak fibroblastlarini (Colla{0}}GFP', Collal kuchaytirgich/promotor tomonidan boshqariladigan GFP, ref.22), TECs (Cdh16-Cre ROSA26- uchun floresan yorliqlash imkonini beruvchi bir nechta reportyor sichqoncha chiziqlari tdTomato), endotelial hujayralar (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato) va podotsitlar (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) UUO, uIRI yoki Induktsiya qilish uchun FA davolashbuyrak fibrozi. Bu hayvonlarning buyrak qismlarini immunofluoresans (IF) bilan bo'yash TXNDC5 ning sezilarli darajada ko'tarilganligini va UUO (81 foiz) tomonidan qo'zg'atilgan sichqonchaning fibrotik buyraklarida kollagen ajraladigan buyrak fibroblastlari bilan yuqori darajada kolokalizatsiya qilinganligini aniqladi (2-rasm) , uIRI (76,8 foiz) va FA bilan davolash (73,4 foiz) (Qo'shimcha rasm 2, A va B). UUO qo'zg'atgan fibrotik buyraklarda TXNDC5 faqat TEClarda (5,94 foiz), podotsitlarda (0,63) sporadik ravishda ifodalangan. foiz ) va endotelial hujayralar (2,05 foiz ) (2-rasm, B va D). UUOga duchor bo'lgan sichqon buyraklaridan ajratilgan fibroblastlarning flowsitometriya tahlili TXNDC5* buyrak fibroblastlarida sezilarli kengayish, shuningdek, bu hujayralarda TXNDC5 ning sezilarli darajada ko'tarilishi aniqlandi. qarama-qarshi nazorat buyraklari bilan solishtirganda (Qo'shimcha rasm 2C). Buyrak fibroblastlarida TXNDC5 ning fibrozda kuchli boyitilganligi TXNDC5 ning ko'payishiga hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatadi.buyrak fibrozibu kollagen chiqaradigan fibrogen hujayralarning faoliyatini/xulq-atvorini tartibga solish orqali.
TXNDC5 buyrak fibroblastlarining faollashishi, ko'payishi va ECM ishlab chiqarilishini qo'zg'atish uchun zarur va etarli edi. Keyinchalik, biz buyrak fibroblastlarida TXNDC5 ning funktsional rolini aniqladik. TGF- 1(10 ng/mL) bilan stimulyatsiya qilingan birlamchi inson buyragi fibroblastlari (HKFs) oqsilda (3A-rasm) va transkriptda (3B-rasm) TXNDC5, shuningdek, fibroblast faollashuv belgisi periostinning ifoda darajalarida kuchli yuqori regulyatsiyani ko'rsatdi. va ECM oqsillari (COL1Al, fibronektin va CCN2). TXNDC5 ning shRNK bilan ishdan chiqishi TGF{10}}protein/mRNKning periostin va HKFlarda bir nechta ECM oqsillarining yuqori regulyatsiyasini sezilarli darajada susaytirdi (3-rasm, A va B). Bundan tashqari, TGF1 bilan davolash HKF ning proliferativ faolligini kuchaytirdi, bu TXNDC5 yiqitishi bilan butunlay bekor qilindi (3D-rasm). Bu natijalar shuni ko'rsatadiki, TXNDC5 TGF{16}}bo'lgan HKF faollashuvi, tarqalishi va ECM ishlab chiqarilishi uchun zarurdir. Boshqa tomondan, TXNDC5 ning haddan tashqari ko'payishi periostin, COL1A1 va fibronektinning sezilarli darajada oshishiga olib keldi (3C-rasm), shuningdek, HKFlarda proliferativ faollikning oshishi (3E-rasm). Umuman olganda, ushbu natijalar TGF- 1 ning quyi oqimidagi TXNDC5 buyrak fibroblastlarining faollashishi, ko'payishi va ECM ishlab chiqarilishini rag'batlantirish uchun zarur va etarli ekanligini ko'rsatadi.
3-rasm. TXNDC5 zaiflashtirilgan TGF- 1-induktsiyasi natijasida HKF faollashuvi va ECM ishlab chiqarilishi; TXNDC5 ning haddan tashqari ifodalanishi HKF faollashuvi va ECM ishlab chiqarishni boshlash uchun etarli edi.
(A) TGF - 1 (10 ng/ml) dan keyin nazorat (Scramble) HKFlarda fibroblast faollashuv belgisi (periostin) va ECM oqsillarining (COL1A1, fibronektin va CCN2) oqsil va (B) transkript ifoda darajalari ortdi. davolash. TXNDC5 ning ishdan chiqishi HKFlarda (n=5-10) TGF- 1 tomonidan qo'zg'atilgan ushbu fibrogenik belgilarning yuqori regulyatsiyasini susaytirdi.
(C) TXNDC5 ning haddan tashqari ifodalanishi HKFlarda (n=3-10) fibroblast faollashuv belgisi (Periostin) va ECM oqsillari (COL1A1, fibronektin) regulyatsiyasini kuchaytirish uchun etarli edi.
(D) TGF- 1 (10 ng/mL) bilan davolash TXNDC5 yiqitishi bilan bekor qilingan HKFlarning hujayrali proliferatsiya faolligini oshirdi.
(E) TXNDC5 ning haddan tashqari ifodalanishi HKFlarning hujayrali proliferatsiya faolligini oshirdi. D va E da, n=10. Ma'lumotlar 3 yoki undan ortiq mustaqil eksperimental replikatsiyalarni ifodalaydi.
Barcha panellar uchun ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi. 2 guruh uchun farqlarning statistik ahamiyati 2-tomonlama t-testi va 3 yoki undan ortiq guruhlar orasida 1-yo'l ANOVA, so'ngra Sidakning post hoc testlari yordamida aniqlandi. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>
Txndc5 ning global yo'q qilinishi buyrakdan himoyalangan b. ni ishlab chiqishda TXNDC5 talabini aniqlashbuyrak fibroziin vivo, WT va Tndc5-/sichqonlarga UUO, uIRI va FA bilan ishlov berildi. Buyrak bo'limlarida Pikrosirius qizil va Massonning trikromli bo'yalishi keng ko'lamli ko'rsatdibuyrakfibrozWT sichqonlarida UUO (4A-rasm), uIRI (5A-rasm) va FA (Qo'shimcha rasm 3A) qo'llanilishidan keyin. Txndc5 ning global o'chirilishi miqyosini sezilarli darajada qisqartirdibuyrakfibrozbuyrak shikastlanishining barcha 3 ta modelida (4A-rasm, 5A-rasm va qo'shimcha shakl 3A).
Shakl 4. UUO tomonidan qo'zg'atilgan Txndc5 zaiflashtirilgan buyrak fibrozining o'chirilishi.
(A) UUO dan 10 kun o‘tgach, WT va Txndc{2}}sichqonlarining buyrak qismlarini Pikrosirius qizil bo‘yalishi (yuqori 2 panel) va Massonning trikromli bo‘yalishi (pastki 2 panel). O'ng tomonda (n=5-10) Pikrosirius qizil va Massonning trixromli bo'yash joylarining miqdoriy natijalarining chiziqli grafiklari ko'rsatilgan. Masshtab sathi∶ 100 mkm.
(B) UUO dan 10 kundan keyin WT va Txndc5-/sichqonlardan olingan buyrak qismlarining SHG tasvirlari. SHG-musbat hududlarning miqdoriy natijalari jarohatdan keyin Txndc5mice buyraklarida emas, balki WTda fibrillar kollagen (yashil) to'planishining ko'payishini ko'rsatdi.
SHG uchun tasvirlangan buyrak bo'limlarining har biri uchun skanerlangan to'qimalarning profilini (pastki panellarda qizil rang) ko'rsatish uchun TPEF tasviri olingan (n=3). Masshtab chizig'i: 50 um. (C) Immunoblotlar WT va Txndc5-/sichqonlarning butun buyrak ekstraktida fibroblast faollashuv belgisi (Periostin) va ECM(COL1A1) oqsil ifodasi darajasini UUO (n= 3-6) dan 10 kun o‘tgach ko‘rsatdi. Ma'lumotlar 3 yoki undan ortiq mustaqil eksperimental nusxalarni ifodalaydi.
Barcha panellar uchun ma'lumotlar o'rtacha± SEM sifatida taqdim etiladi. 3 yoki undan ortiq guruhlar orasidagi farqlarning statistik ahamiyati 1-ANOVA usuli, keyin esa Sidakning post hoc testlari yordamida aniqlandi.**P<><>
Patogen fibrillyar kollagen (I va II tip) miqdorini aniq aniqlash va an'anaviy bo'yash usullari bilan fibroz hududlarni ortiqcha baholashning oldini olish uchun ikkinchi garmonik avlod (SHG) mikroskopiyasi, fibrillar emas, balki fibrillyarni ko'rish imkonini beruvchi yangi optik to'qimalarni ko'rish tizimi, fibrotik organlarda kollagen (23,24), hajmini baholash uchun ishlatilganfibrozjarohatdan keyin WT va Tndc5 plus sichqonchaning buyraklarida. Yuqorida aytib o'tilgan natijalarga muvofiq, SHG mikroskopiyasi UUO (4B-rasm), uIRI (5B-rasm) va FA bilan davolashdan (qo'shimcha rasm 3B) so'ng WTbuyraklarda fibrillyar kollagen cho'kishining sezilarli o'sishini ko'rsatdi, ularning darajasi Txndc {{ 4}}/ sichqonlar (4B-rasm, 5B-rasm va qoʻshimcha 3B-rasm).
Tasviriy tadqiqotlar natijasida kuzatilgan Txndc5 sichqonchasining buyraklarida zaiflashgan shikastlanishdan keyingi fibrotik reaktsiyaga mos ravishda, Tendc5 ning yo'q qilinishi jarohatdan keyin sichqonchaning buyraklarida ECM protein genlarining, jumladan, Collar, Eln, Fnl va Ccn2 ning yuqori regulyatsiyasini yumshatdi (Qo'shimcha rasm, CE). Butun buyrak to'qimalari lizatlarining immunoblotlari, shuningdek, UUO va uIRI dan keyin WT sichqonlari bilan solishtirganda Txndc5-/sichqonlarda ECM(COLIA1) va fibroblast faollashuv belgisi (periostin) oqsil darajasining kamayganini ko'rsatdi (4C-rasm va 5C-rasm).
Shakl 5. ulRI tomonidan qo'zg'atilgan Txndc5 yaxshilangan buyrak fibrozining o'chirilishi.
(A) WT va Txndc5-7sichqonlaridan 28 kundan keyin Pikrosirius qizil va Masson trikromining miqdoriy natijalarining ulRI.Bar grafiklari. bo'yash joylari o'ng tomonda ko'rsatilgan (n=6). Masshtab satri∶ 100 mkm.
(B) ulRIdan 28 kundan keyin WT va Txndc{0}}sichqonlarining buyrak qismlarining SHG tasvirlari. SHG-musbat hududlarning miqdoriy natijalari jarohatdan keyin Txndc5mice buyraklarida emas, balki WTda fibrillar kollagen (yashil) to'planishining ko'payishini ko'rsatdi. SHG uchun tasvirlangan buyrak bo'limlarining har biri uchun skanerlangan to'qimalarning profilini (pastki panellarda qizil rang) (n=3) ko'rsatish uchun TPEF tasviri olindi. O'lchov paneli∶50 mkm.
(C) Immunoblotlar ulRI (n=5-9) dan 28 kundan keyin WT va Txndc5/sichqonlardan olingan butun buyrak ekstraktida fibroblast faollashuv belgisi (Periostin) va ECM (COL1A1) oqsil ifoda darajasini ko'rsatdi. Ma'lumotlar 3 yoki undan ortiq mustaqil eksperimental replikatsiyalarni ifodalaydi.
Barcha panellar uchun ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi. 3 yoki undan ortiq guruhlar orasidagi farqlarning statistik ahamiyati 1-ANOVA usuli, keyin esa Sidakning post hoc testlari yordamida aniqlandi.*P.<><><>
TEClar, podotsitlar va endotelial hujayralar kabi boshqa buyrak hujayralarida ifodalangan TXNDC5 hali ham buyrak hujayralarining rivojlanishiga hissa qo'shishi mumkinligini istisno qilish uchun.buyrakfibroz, biz TECs (Cdh16-cre*Txcndc5i yoki Txndc5Epeko), podotsitlar (NPHS2-cre*Txndc5/n yoki Tendc5Podxko) va endotelial hujayralarga (Tie{{) xos Txndc5 shartli nokaut sichqonlarini yaratdik. 7}}cre/ERT2*Tendc5/ yoki Txndc5Endo.eko). Txndc5Pieko va Txndc5 Poio-cko sichqonlari yordamida o‘tkazilgan tajribalarda Txndc5Wmice boshqaruv elementlari sifatida ishlatilgan; Txndc5EMio-eko sichqonlari ustida oʻtkazilgan tajribalarda Txndc5 oʻchirilishi 9A-rasmda tasvirlanganidek tamoksifen yordamida qoʻzgʻatildi, bu yerda tamoksifen bilan ishlov berilgan Tie{20}}Cre/ERT2 sichqonlari nazorat sifatida ishlatilgan. TEClar, podotsitlar yoki endotelial hujayralardagi Txndc5 ning maqsadli yo'q qilinishi, ammo ularning darajasiga ta'sir qilmadi.buyrak fibroziUUO yoki FA tomonidan qo'zg'atilgan (Qo'shimcha shakl 6, BE). Ushbu natijalar TEC, podotsitlar va endotelial hujayralarda ifodalangan TXNDC5 ning patogeneziga ozgina hissa qo'shishini ko'rsatadi.buyrakfibroz.
Buyrak fibroblastlarida Txndc5 ning yo'q qilinishi buyrak shikastlanishiga javoban TEC apoptozisidan himoya qiladi. jarayonidabuyrakfibroz, shikastlangan TEClar mitoxondrial funktsiyani va apikobazal qutblanishni yo'qotadi, so'ngra apoptoz va hujayra o'limi (30) sodir bo'ladi. UUOdan keyingi 10 kunlik bo'limlar. WT sichqonlarining UUO tomonidan qo'zg'atilgan fibrotik buyraklarida apoptotik TEClar soni sezilarli darajada oshdi, Txndc5 ning yo'q qilinishi TECapoptoz darajasini susaytirdi. Faollashtirilgan buyrak fibroblastlari parakrin ta'sirlar orqali TEC apoptozini qo'zg'atishi mumkinligi haqida xabar berilgan (31). Tendc5 TEClarda deyarli ifodalanmaganligi sababli, Txndc sichqonlarida UUO dan keyin kuzatilgan TEC apoptozisining pasayishi hujayra-avtonom ta'sir emas, balki qisqargan interstitsial ta'sirga ikkilamchi bo'lgan bo'lishi mumkin.fibrozva shuning uchun atrofdagi buyrak fibroblastlaridan kamroq proapoptotik signallar. Ushbu gipotezaga muvofiq, Txndc5 (Tendc5kO) ning fibroblastga xos o'chirilishi TEC apoptozini Txndc5-/sichqonlarda UUO (qo'shimcha) dan 10 kun keyin kuzatilganiga o'xshash darajada susaytirdi. TECapoptozda kuzatilgan pasayishdan farqli o'laroq, F4/80-musbat makrofaglar va CD31-musbat endotelial hujayralar soni WT va Txndc5-sichqonchaning buyraklarida, UUO bo‘lgan yoki bo‘lmagan holda solishtirish mumkin edi, bu Txndc5 o‘chirilishi makrofag infiltratsiyasiga yoki sichqonchaning buyraklarida peritubulyar kapillyar zichlik. Birgalikda bu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, Txndc5 yo'q qilinishining reno-himoya ta'siri quvurli oraliqlarning qisqarishidan kelib chiqadi.fibrozva TEC apoptozisi, buyrak kapillyarlari zichligiga yoki makrofaglarga ta'sir qilmasdan.
Buyrak fibroblastlarida Tendc5 ning induktsiyalangan yo'q qilinishi o'rnatilgan fibroblastlarning rivojlanishini kamaytirdibuyrak fibrozi. Buyrakdagi Txndc5 ni nishonga olish foydali bo'lishi mumkinligini aniqlash uchunbuyrakfibroz, Buyrak fibroblastlarida Txndc5 yo'q qilinishi Txndc5eko sichqonlarida UUO dan 10 kun o'tgach, keng tarqalgan bo'lgan vaqt nuqtasi bo'lgan.buyrakfibrozkuzatish mumkin. Ushbu tajribalarda tamoksifen bilan davolash qilingan Colla{1}}Cre sichqonlari nazorat sifatida ishlatilgan. Ko'rsatilganidek, Colla2-Cre va Tcndc5eko sichqonlari bir xil darajadabuyrakfibrozTamoksifen bilan davolashdan oldin UUO dan 10 kun o'tgach. Tamoksifen kiritilgandan o'n bir kun o'tgach, buyrak fibrozining darajasi nazorat sichqonlarida davom etdi (tolali maydon 5,1 foizdan 10,6 foizga ko'tarildi), holbuki buyrak fibrozining rivojlanishibuyrakfibrozTxndc5eko sichqonlarida deyarli to'xtatildi (tolali maydon 5,3 foizdan 6,9 foizga o'zgardi). Immunoblotting shuningdek, Txndc5eko sichqonlarida CCN2, periostin va TGFBR1 ning UUO dan keyin D10 va D21 o'rtasidagi nazorat sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada zaiflashgan yuqori regulyatsiyasini ko'rsatdi. Ushbu natijalar buyrak fibroblastlarida Txndc5 ning interventsion yo'q qilinishi kasallikning rivojlanishini sezilarli darajada kamaytirishini ko'rsatadi.buyrak fibroziTXNDC5 ning in vivo maqsadli maqsadini yaxshilash uchun yangi va kuchli terapevtik yondashuv bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.buyrakfibrozva CKD rivojlanishini sekinlashtirish uchun.
