O'tkir buyrak ishemiyasi-reperfuziya shikastlanishida glutamin aralashuvidan keyin mikroRNK ifodasini tahlil qilish

Fon.Ishemiya - reperfuziyao'tkir buyrak shikastlanishi(I/R AKI) aog'ir buyrak kasalligiyuqori o'lim va kasallanish bilan. Ushbu tadqiqot o'rganishga qaratilganglutaminning himoya mexanizmi(GLN) I/R AKIga qarshi.Usullari. The I/R AKI kalamush modeli tashkil etildi va HEbuyrak to'qimalarining bo'yalishi va sarum kreatinin(SCr) va qon karbamid azotini (BUN) aniqlash amalga oshirildi. MiRNKlar yuqori o'tkazuvchanlik bilan ketma-ketlashtirilgankalamush buyrak to'qimalarining namunalari. I/R guruhi va I/R + GLN guruhi oʻrtasida differentsial ifodalangan miRNKlar (DEmiR) tekshirildi va DEmiRlarning maqsadli genlari uchun boyitish tahlili oʻtkazildi. Shu bilan birga, inson HK-2 hujayralari yetishtirildi va DEmiR ifodasini tekshirish uchun I/R modeli yaratildi.Natijalar.I / R guruhi bilan solishtirganda, har bir vaqt nuqtasida SCr va BUN darajalari I / R + GLN guruhida pastroq edi. I / R + GLN guruhidagi buyrak tubulalarining vakuolyar degeneratsiyasi sezilarli darajada kamaydi. 104 DEmiRda biz miR{3}}p, miR- 205 va miR-615 ni asosiy miRNK sifatida tanladik. KEGG tahlili shuni ko'rsatdiki, Notch signalizatsiya yo'li, PI3K-Akt signalizatsiya yo'li va cGMP signalizatsiya yo'li asosan I / R ga qarshi GLN bilan bog'liq. qRT-PCR soxta va I/R GLN guruhiga nisbatan I/R guruhida miR-205 ning pastga regulyatsiyasini tasdiqladi. I/R modeli HK-2 xujayralari bilan o'rnatildi va miR- 132-5p va miR-205 ifodasi kamaydi.

Xulosa.GLN I/R sabab bo'lgan AKIni kamaytiradi. GLN bilan davolashdan so'ng I / R da miRNK ifodasi o'rtasida sezilarli farqlar mavjud edi. I/R-induktsiyalangan AKI ga qarshi GLN jarayoni Notch va PI3K-Akt signalizatsiya yo'li bilan bog'liq bo'lishi mumkin.

BUYRAK UCHUN 25% EXINAKOSID VA 9% AKTEOSIDLI CISTANCHE EKSTRATI

1.Kirish

O'tkir buyrak shikastlanishi(AKI) bilan tavsiflanadio'tkir buyrak funktsiyasiyo'qotadi va har yili 13,3 million kishiga ta'sir qiladi [1]. Turli omillar orasida, buyrakishemiya-reperfuziya shikastlanishi(I/R) AKI ning asosiy sabablaridan biri va muqarrar muammodirbuyrak transplantatsiyasi[2, 3]. I/R bilan bog'liq AKI yuqori morbidlik va o'lim bilan bog'liq va hozirda samarali davolash yo'q [4].

Klinik amaliyotda AKI azot almashinuvining yakuniy mahsulotlari (karbamid va kreatinin) to'planishi va siydik chiqarishning kamayishi bilan namoyon bo'ladi [5]. Bundan tashqari, buyrak tubulyar epiteliya hujayralari va qon tomirlarining bir vaqtda shikastlanishi va kuchli yallig'lanish reaktsiyasi mavjud edi [6, 7]. So'nggi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, glutamin, AKI uchun an'anaviy ovqatlanish terapiyasi sifatida qo'llaniladigan preparat oksidlovchi stressni kamaytirish orqali buyrakni himoya qilishi mumkin [8, 9]. Muayyan fiziologik sharoitlarda glutamin buyrak va immunitet tizimi uchun asosiy metabolik yoqilg'i sifatida keng qo'llaniladi [10, 11]. Biroq, uning o'ziga xos himoya mexanizmi hali ham o'rganilmoqda.

21-25 nukleotiddan iborat yuqori darajada saqlanib qolgan kichik molekula bo'lgan mikroRNKlar (miRNKlar) buyrak I/R va AKI bilan bog'liqligi xabar qilingan [12, 13]. miRNKlar buyrak I/R ni susaytirib, himoya rolini o'ynashi mumkinyallig'lanish reaktsiyasi[14]. Ba'zi miRNKlarning buyrak IRIga himoya ta'siri aniqlangan bo'lsa-da, himoya mexanizmi noaniqligicha qolmoqda.

Hozirgacha uning mexanizmi bo'yicha bir nechta tadqiqotlar o'tkazildiglutamin vositachiligida buyrakni himoya qilishmiRNK darajasida. Ushbu tadqiqotda biz glutamin aralashuvidan keyin buyrak I / R da miRNKlarning differentsial ifodasini tahlil qilish uchun yuqori o'tkazuvchanlik sekvensiyasi texnikasini qo'lladik. Biz miRNK darajasida buyrak I/R ga qarshi glutaminning himoya mexanizmini qo'shimcha o'rganib chiqdik.

2. Materiallar va usullar

2.1. Eksperimental hayvon.

Shinjon Tibbiyot Universitetining Birinchi Sho‘ba kasalxonasining Tajriba Hayvonot Markazi tomonidan og‘irligi 180-260 g va yoshi 90-120 kun bo‘lgan jami 72 ta SPF erkak Sprague Dawley (SD) kalamushlari taqdim etildi. Kalamushlar suv iste'molini nazorat qilmasdan, standartlashtirilgan eksperimental kundalik ratsion bilan doimiy haroratli muhitda saqlangan. +eylar teng ravishda uchta guruhga tasodifiy ajratildi: soxta guruh, I / R guruhi va I / R + GLN guruhi. +e eksperimental protokoli Shinjon tibbiyot universitetining +e birinchi bog'langan kasalxonasida Hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

2.2. Hayvon modelining yaratilishi.

SD kalamushlari 2% natriy pentobarbitalni (40 mg/kg) qorin bo'shlig'iga yuborish orqali behushlik qilishdi. I/R guruhi: qorin bo'shlig'ining o'rta chizig'ida kesma qilingan va ikkala buyrak ochilgan, o'ng buyrak rezektsiya qilingan va chap buyrak arteriyasi klemplangan. 45 daqiqadan so'ng qon tomir qisqichi olib tashlandi. +e buyrak rangi quyuq qizildan yorqin qizil rangga aylandi, bu kinderda I/R patofiziologik jarayonni o'tkazganligini bildiradi, kalamushlar qorin bo'shlig'ini yopgandan keyin 2 soat davomida kuzatilgan. Modellashtirish tugallangandan keyin NS va glutamin (0,75 g/kg) mos ravishda, kaudal venadan mikropompa yordamida 0,5 ml/min tezlikda yuborildi. Sham guruhi: o'ng buyrak xuddi shunday rezektsiya qilingan, chap buyrak pedikulasi esa qisilgan emas. Modellashtirish tugallangandan so'ng 0,5 ml/min tezlikda kaudal venadan mikropompa yordamida oddiy sho'r suv (NS) yuborildi.

2.3. Namuna yig'ish va sinovdan o'tkazish.

Har bir guruhdan oltita kalamush har bir vaqt nuqtasida tasodifiy tanlab olindi (modellashdan keyin 1 soat, 5 soat, 12 soat va 24 soat), so'ngra kalamushlar behushlik ostida o'ldirildi. +e qorin aortasi ochilib, venoz qon shprits bilan olindi. Sarum muntazam ravishda ajratilgan va muzlatgichda -80 daraja haroratda saqlangan. +e buyraklar tezda rezektsiya qilindi, so'ngra ikki tomonlama buyraklardan bir bo'lak to'qima 10% neytral formaldegidga joylashtiriladi va bir kechada 4 daraja haroratda mahkamlanadi. Sarum kreatinin (SCr) va qon karbamid azoti (BUN) Beckman avtomatik biokimyoviy analizatori bilan sinovdan o'tkazildi. Parafin bloki qattiq buyrak to'qimalaridan suvsizlanish, shaffoflik, mumni singdirish va suvsizlanish jarayoni orqali tayyorlangan. Keyin parafin bloklari bo'laklarga bo'linib, binoni amalga oshirildi.

2.4. Yuqori mahsuldorlikdagi ketma-ketlikni tahlil qilish.

I / R guruhi va I / R + GLN guruhidan kalamush buyrak to'qimalari namunalarining umumiy RNKsi olingan va sifati uchun baholangan. Kichik RNK ketma-ketlik kutubxonasini qurish jarayoniga ko'ra, tozalangan umumiy buyrak to'qimasi RNK cDNKga teskari transkripsiya qilindi. +uz, ketma-ketlik namunasi kutubxonasini qurishni yakunlash uchun PCR kuchaytirilishi, tozalash va cDNK kutubxonasi sifatini aniqlash amalga oshirildi. Keyin biz FASTQ faylining asl ma'lumotlarini oldik.

2.5. Bioinformatika tahlili.

Clean reads were classified and annotated from the FASTQ file. +e Rfam database, species reference transcripts, and repetitive sequence database were used to analyze the known miRNA annotations, miRNA prediction, and miRNA quantification. +e differentially expressed miRNAs (DEmiRs) were analyzed using the DESeq R package with |log2FoldChange|>2 va P < 0.05. +e maqsadli genni bashorat qilish mos ravishda RAID va miRanda ma'lumotlar bazalari yordamida amalga oshirildi. Gen ontologiyasi (GO) va KEGG yo'llarini boyitish tahlili, shuningdek, ClusterProfiler R paketidan foydalangan holda maqsadli genlar uchun ham amalga oshirildi. P <0,05 sezilarli boyitish sifatida qabul qilindi.

2.6. Miqdoriy real vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qRT-PCR).

dan namunalar yig'ilgankalamush buyrak to'qimalariModellashtirishdan 24 soat o'tgach. Jami RNK ajratib olindi va barcha miRNKlarning cDNK mahsulotlari miRNKning birinchi zanjiri cDNK sintezi to'plami (Shenggong, Shanxay, Xitoy) yordamida olindi. Floresan miqdoriy aniqlash miRNK floresan miqdoriy PCR to'plami (Shenggong, Shanxay, Xitoy) yordamida 3 miRNKga xos primerlar yordamida amalga oshirildi (1-jadval). +e nisbiy miqdoriy tahlil usuli (2−DDCt) har bir namunalar guruhida maqsadli miRNKning nisbiy ifodasini hisoblash uchun ishlatilgan. +e har bir guruhdagi miRNKning nisbiy ifodasi mos yozuvlar sifatida har bir guruhdagi har bir namunadagi U6 ifodasi yordamida hisoblangan.

2.7. Statistik tahlil.

Ma'lumotlar SPSS19 tomonidan tahlil qilindi.0. Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (o'rtacha ± SD) sifatida ifodalangan. +e t-testi guruhlar o'rtasida juftlik taqqoslash uchun ishlatilgan. P < 0.05 farq statistik jihatdan ahamiyatli ekanligini ko'rsatdi.

3. Natijalar

3.1. Glutaminning ishemiya-reperfuziyadan keyin kalamushlarning buyrak funktsiyasiga ta'siri.

SCr va BUN darajalari birinchi navbatda uchta kalamush guruhida tekshirildi (1(a) va 1(b)-rasm). +e SCr va BUN 1 soatdan 24 soatgacha o'sishda davom etdi va I/R guruhida 24 soatda cho'qqiga yetdi, bu soxta guruhdagiga qaraganda ancha yuqori edi (P < 0.{{11} }5). I / R + GLN guruhida SCr va BUN darajalari 1 soatdan 12 soatgacha ko'tarildi, ammo o'sish tendentsiyasi I / R guruhiga qaraganda sekinroq edi. Har bir vaqt nuqtasida SCr va BUN darajalari I / R guruhidagidan past edi (P <0,05).

3.2. Sichqoncha buyraklarida gistologik o'zgarishlar.

Soxta guruhda 24 soatlik jarrohlik amaliyotidan so‘ng mikroskopik kuzatish natijasida korteks hududidagi ayrim buyrak kanalchalari kengayganligi, ayrim buyrak kanalchalari epiteliyasida shish va vakuolyar nasli borligi aniqlangan va glomerulyarlarda aniq anormallik kuzatilmagan (2-rasm (a) )). I/R guruhida kortikal sohada buyrak kanalchalarining cho‘tka chegaralari va korteks-medullar o‘tish sohasi yo‘qolgan, ko‘p sonli buyrak tubulali epiteliy hujayralarida shish va vakuolyar degeneratsiya, ba’zilarida esa kariopiknoz, sitoplazma qizil dog‘, koagulyatsiya nekrozi, abscision va gips shakllanishi

1-rasm: Har bir guruhdagi turli vaqt nuqtalarida kalamushlarning Scr (a) va BUN (b) darajalaridagi o'zgarishlar. ∗P < 0.0 5 soxta guruh bilan solishtirganda; I/R guruhi bilan solishtirganda #P <0,05

2-rasm: HE bo'yash orqali aniqlangan kalamush buyragidagi gistopatologik o'zgarishlar. (a) Sham guruhi, (b) I / R guruhi va (c) I / R + GLN guruhi. Bar: 200×.

(2-rasm (b)). Interstitiumda yallig'lanish belgilari yo'q, glomerulyarlarda esa aniq anormallik kuzatilmadi. I/R+GLN guruhida glomerulus tuzilishi mikroskop ostida normal edi, ba’zi quvurli epiteliy hujayralari shishgan va sharsimon degeneratsiyani ko‘rsatgan, ba’zi tubulali epiteliy hujayralari abssizlangan, ba’zi tubulalar kengaygan, oz miqdorda oqsilli quyma topilgan. (2-rasm (c)).

3.3. Differensial ifodalangan miRNKlarni aniqlash.

Statistik tahlil I / R guruhi va I / R + GLN guruhidan ajratilgan differentsial ifodalangan miRNKlar bo'yicha o'tkazildi. I / R + GLN guruhi bilan taqqoslaganda, I / R guruhida jami 104 ta sezilarli darajada farqlangan miRNKlar tekshirildi (3-rasm (a)). Ularning 76 tasi yuqori tartibga solingan miRNKni va 28 tasi pastga regulyatsiya qilingan miRNKni ifodalagan (3(b)-rasm). Bundan tashqari, RAID va Miranda sezilarli darajada farqlangan miRNKlar uchun maqsadli genlarni bashorat qilish uchun ishlatilgan. Biz 436 ta kesishgan maqsadli genlarni topdik (3-rasm (c)). +uz, biz miRNK maqsadli genlarining tartibga soluvchi tarmog'ini yaratdik (S1-rasm). Muhimi, biz keyingi tadqiq qilish uchun asosiy miRNK sifatida I/R guruhidagi pastga regulyatsiya qilingan miR-132-5p, miR-205 va miR-615 ni tanladik. Bundan tashqari, ushbu uchta miRNK uchun 65 maqsadli gen mavjud edi (3-rasm (d)). Buyrak to'qimalarida qRT-PCR aniqlash natijalariga ko'ra, I/R guruhida miR-132-5p, miR-205 va miR-615 ifoda darajalari kamaydi (4-rasm). ).

3.4. Maqsadli genlarning biologik funktsiyalari.

GLN ning terapevtik ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizmlarni aniqlash uchun biz maqsadli genlar uchun boyitish tahlilini o'tkazdik. GO natijalarida (5-rasm (a)), hujayra ichidagi signalning uzatilishi, ildiz hujayralarining ko'payishini tartibga solish va biologik jarayonlarning gipoksiyasiga (BP) hujayra javobi maqsadli genlar bilan boyitilgan. Bundan tashqari, Notch signalizatsiya yo'li, PI3K-Akt signalizatsiya yo'li va KEGG yo'llarining cGMP PKG signalizatsiya yo'li sezilarli darajada boyitilgan (5-rasm (b)). Qizig'i shundaki, rno-miR-132-5p Mylkni nishonga olgan holda cGMP-PKG yo'lida ishtirok etadi.

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp% 2fTel:+86 15292862950}

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://ww.xjcistanche.com/cistanche-shop

BUYRAK INFEKTSIONIDA 25% EXINAKOSID VA 9% AKTEOSID BO'LGAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRAKTINI OLING.