Koreya populyatsiyasining genetik tahliliga asoslangan retinolga qarshi tirnash xususiyati beruvchi strategiya: genetik jihatdan boshqariladigan yuqoridan pastga yondashuv

Kalit so'zlar: retinol; retinoid;kosmetika; tirnash xususiyati beruvchi; genetik jihatdan moslashtirilgan; yagona nukleotid polimorfizmlari

Cistanche Qarishga qarshi davolash haqida ko'proq ma'lumot olish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Sintetik va tabiiy birikmalarni o'z ichiga olgan A vitaminidan olingan birikmalar oilasi bo'lgan retinoidlar intensiv o'rganilgan va turli xil biotibbiyotda qo'llanilgan.saratonni davolash(o'tkir miyeloid leykemiya), bachadon bo'yni neoplazi, vateri kasalliklariso'nggi bir necha o'n yilliklarda. Retinoidlarning, ayniqsa retinoik kislotaning keng qo'llanilishi ilmiy asosga asoslanadi.retinoik kislotagen ekspressiyasini boshqaradigan yadro retseptorlari o'rtasidagi o'zaro ta'sirni qo'zg'atish orqali tabiatdagi ko'plab biologik yo'llarda ishtirok etadi [1-5]. Retinoidlarning eng yorqin qo'llanilishidan biri bu farmatsevtika preparatlari va kosmetika mahsulotlari bilan bir qatorda dermatologik yondashuvdir. Retinoidlar birinchi marta 1940-yillarda akne davolashda ishlatilganligi sababli, uning terapevtik samaradorligi aktinik keratoz, psoriaz va iktiyoz kabi teri kasalliklariga qarshi terapevtik samaradorligi haqida xabar berilgan [6]. Ko'pgina ilmiy tadqiqotlar va klinik tadqiqotlar tretinoinning (to'liq trans-retinoik kislota) fotoagingda terapevtik samaradorligini ko'rsatganligi sababli, kosmetik tarkibiy qismlar sifatida foydalanish uchun retinoid hosilalarini ishlab chiqish boshlandi. Retinil palmitat, retinil asetat, retinol va retinalni o'z ichiga olgan kosmetik retinoidlar tijoriy bozorda jadal o'rganildi, chunki retinoik kislota 2-ilova 375 (EC 1223/2009) kabi global qoidalar bilan kosmetika mahsulotlarida taqiqlangan. Ba'zi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bu kosmetik retinoidlar, shuningdek, patologik xususiyatlari nozik va qo'pol ajinlar, teri pürüzlülüğü va g'ayritabiiy pigmentatsiyani o'z ichiga olgan fotosuratlarni davolashda samarali bo'ladi va hatto ular tretinoin kabi kuchli ta'sir ko'rsatadi [7].

Biroq, retinoidlar tirnash xususiyati va eritema, qichishish, yonish va qichishish bilan tavsiflangan ba'zi nojo'ya ta'sirlarni keltirib chiqaradi, ular retinoid dermatit deb ham ataladi [8]. Ba'zi tadkikotlar tirnash xususiyati mexanizmini o'rganib chiqdi va retinoidlar tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati turli mexanizmlar bilan bog'liqligi taklif qilinadi, ular orasida sitokinlarning chiqarilishi va immunitet hujayralarining infifiltratsiyasi bilan tavsiflangan keng va keng tarqalgan yallig'lanish [9] va teri to'siqlarining buzilishi bilan tavsiflanadi. kornifiklangan konvert (CE) bilan bog'liq bo'lgan omillarning genetik nomutanosibligi bilan [10,11]. Bundan tashqari, retinoidning fototoksikligi va uning ultrabinafsha nurlari va issiqlik ta'sirida beqarorligi tufayli uning degradatsiyaga uchragan qo'shimcha mahsulotlari retinoid tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati paydo bo'lishiga yordam beradi [12]. Biroq, bu kuzatuvlar retinoid tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati haqida to'liq tushuntirish uchun etarli emas va hozirgacha aniq xulosaga kelinmagan. Shu sababli, hozirgi retinolga asoslangan mahsulotlar odatda "zerikarli" yallig'lanishga qarshi formulaga ega bo'lib, u umumiy tijorat mahsulotlarida umumiy va universal tarzda qo'llaniladi. Shuning uchun kuchli ilmiy asosga asoslangan retinolga qarshi tirnash xususiyati strategiyasi hali o'rnatilmagan.

Genetik yondashuv retinolga qarshi tirnash xususiyati strategiyasini o'rnatish uchun yana bir yechim bo'lishi mumkin. Dori samaradorligi va yon ta'siri bilan bog'liq genlarni aniqlash uchun genetik o'zgarishlar keng miqyosda o'rganildi [13]. Nelson va boshqalar. ma'lum genetik assotsiatsiyalar tomonidan bashorat qilingan dorilar klinikadan oldingi bosqichdagi dori vositalarining atigi 2,0 foizini tashkil etishini ko'rsatdi, garchi bu ulush tasdiqlangan dorilarda 8,2 foizgacha oshadi [14]. Bu shuni anglatadiki, genetik tadqiqotlar natijasida aniqlangan maqsadlarga e'tibor qaratish xolesterin yoki revmatoid artrit uchun dorilar bilan ko'rsatilgandek, muvaffaqiyatli dori ishlab chiqish imkoniyatini sezilarli darajada oshiradi [15-18].

Retinol bilan davolash hujayra o'sishi [19] va strukturaviy oqsillar [11] bilan bog'liq transkripsiya omillari ifodasida o'zgarishlarni keltirib chiqaradi. Aniqrog'i, turli xil oqsillar retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati bilan bog'liq bo'lib, ular yallig'lanish bilan bog'liq sitokinlar (MCP -1, TNF-a, interferonlar va interleykinlar) [9], retinoik kislota retseptorlari (RAG) [9]. 20], og'riqni sezuvchi kanalning vaqtinchalik retseptorlari salohiyati vanilloid 1 (TRPV1) [21] va mast hujayra faollashtiruvchi GPCR (MRGPRX2) [22]. Biroq, ko'pgina genetik tadqiqotlar bitta gen yoki yo'l bilan cheklangan va retinoid dermatitning keng qamrovli mexanizmi hali ham aniqlanmagan. Shu sababli, retinoid dermatitga qarshi tirnash xususiyati beruvchi skrining uchun retinoid tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati bo'yicha "nomzod gen" tahlili o'tkazildi va xuddi shu natijalar retinoid dermatitni o'rganish uchun maqsadli genlarning joriy hovuziga qo'shiladi.

2. Materiallar va usullar

2.1. O'quv dizayni

Ushbu tadqiqot 1-rasmda ko'rsatilganidek ishlab chiqilgan. Qisqacha aytganda, 173 koreysning 1-klinik tekshiruvidan so'ng retinoldan kelib chiqqan tirnash xususiyati uchun fenotiplash o'tkazildi. Genetik tahlil orqali genetik belgilar tekshirildi, tirnash xususiyati beruvchi moddalar va formulalar o'rganildi. Keyinchalik, yangi ishlab chiqilgan formulaning tirnash xususiyati beruvchi samaradorligini tekshirish uchun kichik miqyosli pilot tadqiqot (n=7) va keng miqyosli klinik baholash (2, n=91) ​​o'tkazildi.

1-rasm. Oʻquv dizayni. Yuqori diagramma (strelka) oʻrganishning umumiy jarayonini koʻrsatadi. Pastki jadval uchta asosiy insonga asoslangan testlarni koʻrsatadi. Retinol1IUrefersto3×10−5% w/wintheformulation.(2500IU=0.3000% w/I w/U). w;5000IU=0.15 foiz w/w).

2.2. Retinoldan kelib chiqqan tirnash xususiyati fenotipi

eksperimentdan oldin kremning tarkibiy qismlari haqida ma'lumot berildi va retinoldan tashqari krem ​​tarkibidagi har qanday tarkibiy qismda terining tirnash xususiyati bo'lgan ishtirokchilar eksperimentdan chetlashtirildi. Batafsil protsedura Qo'shimcha ma'lumotda tasvirlangan.

2.3. Yagona nukleotid polimorfizmi (SNP) mikroarray

Genomik DNK QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, AQSh) yordamida tuprik namunalaridan olingan. Genotiplash Illumina Infifinium High-Throughput Screening (HTS) tahlil protokoliga (Illumina, San-Diego, CA, AQSh) muvofiq Global Screening assay 2-versiya chipi yordamida amalga oshirildi. Boncuk intensivligi iScan® asbobi yordamida olingan va keyinchalik GenomeStudio® dasturiy ta'minoti (Illumina, San-Diego, CA, AQSh) yordamida genotip ma'lumotlarini olish uchun ishlatilgan.

Genotip ma'lumotlarining sifatini nazorat qilish afzalroq quyidagi sharoitlarda amalga oshirildi: Genotiplangan namunalar orasida genotip chaqiruv darajasi 98 foizdan past bo'lgan shaxslar chiqarib tashlandi. Genotiplangan variantlar uchun qo'ng'iroq qilish tezligi 98 foizdan past bo'lgan SNPlar, kichik allel chastotalari 1 foizdan past, Hardy-Vaynberg muvozanatidan og'ish (HWE p-qiymati <1 × 10−6) va ikkitadan ortiq allelga ega bo'lganlar chiqarib tashlandi. 173 genotipli shaxslar orasidan 159 nafari QC mezonlaridan o'tdi va keyingi tahlil uchun tanlangan.

2.4. Achchiqlanishni baholash

Ikki turdagi kremlar, ya'ni 5000 IU retinolli nazorat kremi va 5000 IU retinolli tirnash xususiyati beruvchi formula (AF) asosidagi krem, tajriba tadqiqotida etti kishiga (uch erkak va to'rt ayol) qo'llangan. Jismoniy shaxslar yotishdan oldin yuzlariga kremlarni quyidagi tarzda surtdilar: bir krem ​​yuzning yarmiga, ikkinchisi esa yuzning ikkinchi yarmiga. Sinov sub'ektlari tirnash xususiyati beruvchi formulani o'z ichiga olgan kremga (bir marta ko'r) ko'r qilindi. Uch kunlik arizadan so'ng, sub'ektlardan arizani 4 kunga to'xtatish so'raldi. Terining qizarishi va transepidermal suv yo'qotilishi (TEWL) mos ravishda xromometr (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Yaponiya) va Tewameter® (TM 300 E, Courage plus Khazaka electronic GmbH, Kyoln, Germaniya) yordamida o'lchandi. Og'riq bosimi chegarasini (PPT) o'lchash uchun silindr bilan birlashtirilgan prob diametri 1 mm bo'lgan algometr ishlab chiqarilgan va ishlatilgan. O'lchovdan oldin ob'ektlarning yuzlari tozalandi va konditsionerli xonada 20 daqiqa davomida moslashtirildi (harorat, 23 ± 2 ° C; nisbiy namlik, 50 ± 10 foiz).

Retinoidlar keltirib chiqaradigan tirnash xususiyati tirnash xususiyati turlari va zo'ravonliklarining juda keng doirasini qo'zg'atishini hisobga olsak, Frosh va CTFA ko'rsatmalari [23] tomonidan taklif qilingan eritemaga e'tibor qaratuvchi an'anaviy tirnash xususiyati o'lchash bo'yicha ko'rsatmalar bu tirnash xususiyati darajasini samarali baholamaydi yoki miqdorini aniqlay olmaydi. Shuning uchun biz S1-jadvalda ko'rsatilganidek, terining tirnash xususiyati uchun o'z-o'zini baholash yo'riqnomasini qayta ishlab chiqdik (Qo'shimcha materiallarga qarang). Ushbu o'z-o'zini baholash kichik tajriba tadqiqotida va 2-keng miqyosli klinik baholashda amalga oshirildi.

2.5. Hujayra tayyorlash va In Vitro Tajriba

Hujayra tayyorlash va in vitro eksperimental protseduralar haqida batafsil ma'lumot Qo'shimcha ma'lumotda keltirilgan. Qisqacha aytganda, keratinotsitlar, fifibroblastlar, mast hujayralari va TRPV{0}}ortiqcha ifodalangan HEKlar o'zlarining madaniyat protokollari va tajribalari yordamida ekilgan. RT-PCR, -heksosaminidazaning chiqarilishi va kaltsiy oqimi tahlil qilindi. 2.6. Statistik tahlil Statistik tahlil SNP va Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, USA) va PLINK 1.90 (Cambridge, MA, AQSH) [24] yordamida amalga oshirildi. Nomzod genlarini tahlil qilish uchun nomzod genlaridagi SNPlar (shu jumladan promouter mintaqasi -2 kb va quyi oqim mintaqasi 500 bp) ekstraksiya qilindi. Assotsiatsiyalarning statistik ahamiyati va koeffitsientlar qo'shimcha model bilan genotip assotsiatsiyasi testi bilan aniqlandi. Poligenik xavf ballini hisoblashdan oldin, bog'lanish muvozanati (LD) tekshirildi va SNPlar Haploview 4.2 (Kembrij, MA, AQSh) yordamida tanlangan. [25]. Tahlil qilish uchun retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati kuchayganligini ko'rsatadigan allellar ishlatilgan. Poligenik xavf balli har bir allelning imkoniyat nisbatlarining og'irlashtirilgan yig'indisi sifatida hisoblab chiqilgan [26]. Kirish ma'lumotlarini oldindan qayta ishlash, takroriy tekshirish uchun ishtirokchilarning tasodifiy to'plamini yaratish va poligenik xavf ballini hisoblash R v.4.0.3 da maxsus yozilgan kod yordamida amalga oshirildi. Ma'lumotlarni vizuallashtirish uchun GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San-Diego, CA, AQSH) ishlatilgan. Qiymatlari har bir standart og'ishni namunalar sonining kvadrat ildiziga bo'lish yo'li bilan olingan xato chiziqlari rasmlarda ko'rsatilgan.

Dixotomiyali savolga asoslangan tirnash xususiyati paydo bo'lish tezligini tahlil qilishda (retinol kremi tirnash xususiyati bormi: Y / N), statistik ahamiyatlilikni tekshirish uchun chi-kvadrat testi o'tkazildi.

3. Natijalar va muhokama

3.1. Retinol keltirib chiqaradigan tirnash xususiyati uchun tirnash xususiyati beruvchi skrining uchun maqsadli genlarni taklif qilish

3.1.1. 1-Klinik baholash - Retinolning topikal qo'llanilishi va uning tirnash xususiyati beruvchi xususiyatlarini tahlil qilish

Biz 173 Koreyalik odamda retinolning tirnash xususiyati va terining sezgirligi bilan bog'liqligini o'rgandik. Ular 3 kun davomida retinolni qo'llashdi, undan keyin 3 hafta davomida haftasiga 4 kun dam olish kerak edi, retinolning har bir konsentratsiyasi har hafta asta-sekin o'sib boradi (1-haftada 2500 IU, 2-haftada 3300 IU va 5000 IU). 3-hafta). Keyin, retinol bilan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati bilan bog'liq omillarni o'rganish uchun tajribadan so'ng olingan so'rovnomani tahlil qildik.

Nozik teri guruhidagi ishtirokchilarning yuqori ulushi sezgir bo'lmagan teri guruhiga nisbatan tirnash xususiyati his qilganliklarini xabar qilishdi (2a-rasm). Shuningdek, terining sezgir guruhiga mansub odamlarda terining tirnash xususiyati tufayli kosmetik mahsulotlardan foydalanishni to'xtatish tajribasi taxminan uch baravar yuqori ekanligi ko'rsatilgan (2b-rasm). O'tmishda tirnash xususiyati bo'lganlar orasida ko'pchilik odamlar asosiy kosmetika tirnash xususiyati keltirib chiqaradi, keyin quyoshdan himoya qiluvchi vositalar, tozalash vositalari va kosmetika mahsulotlari (2c-rasm) javob berdi. O'tmishda retinol mahsulotlarini qo'llashda terida tirnash xususiyati bo'lgan odamlarning yuqori qismi, o'tmishda retinol mahsulotlarini ishlatganda tirnash xususiyati bo'lmaganlar bilan solishtirganda, bu tajribada tirnash xususiyati borligini aytdi (2d-rasm). Ushbu natija shuni ko'rsatdiki, retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati odamlarga qarab qayta-qayta sodir bo'ladi, bu irsiy omillar retinolga sezuvchanlikka ta'sir qilishi mumkinligi haqidagi farazni qo'llab-quvvatlaydi. Ilgari olib borilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, genetik o'zgarishlar retinol va retinoidning bio-mavjudligiga sezilarli darajada ta'sir qiladi, bu genetik omillar retinoldan kelib chiqadigan tirnash xususiyati ham boshqarishi mumkinligini tasdiqlaydi [27,28].

Retinoldan foydalanish natijasida kelib chiqadigan tirnash xususiyati turi odamlar orasida katta farq qiladi. Biroq, qichishish eng keng tarqalgan bo'lib, u tirnash xususiyatilarning to'rtdan uch qismini tashkil qiladi va undan keyin yonish, qichishish va eritema kuzatilgan (2e-rasm).

(c) asosiy kosmetika vositalaridan foydalanganda tirnash xususiyati bo'lgan shaxslarning nisbati. (d) o'tmishda retinol o'z ichiga olgan mahsulotlarga tirnash xususiyati bo'lgan shaxslarning nisbati. (e) retinol o'z ichiga olgan topikal mahsulotlardan foydalanish paytida odamlar boshdan kechirgan tirnash xususiyati turlari; * p-qiymati < 0.05; *** p-qiymati < 0,001; ns, muhim emas.

3.1.2. Retinoldan kelib chiqqan tirnash xususiyati uchun nomzod gen tahlili

Terining retinolga sezgirligi bilan bog'liq genetik variantlarni aniqlash uchun biz retinoid metabolizmi va terining sezgirligidagi funktsiyalari bilan mashhur bo'lgan 14 ta nomzod genni tanladik (jadval S2). Biz sensibilizatorlar bilan davolash ostida 3D qayta tiklangan terining oldingi transkriptomik tahliliga murojaat qildik [29].

Nomzod genlar ichida joylashgan jami 319 SNP tanlangan va qo'shimcha model yordamida assotsiatsiyani tahlil qilish uchun ishlatilgan. O'ttizta SNP retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati bilan sezilarli darajada bog'liq edi, ularning hech biri ilgari xabar qilinmagan (p <{2}}.05; 1-jadval). Batafsil ma'lumki, RARBda jami 12 ta SNP, EGFRda uchta, CD44da uchta, IL18da ikkita, IL4Rda ikkita va BCL2da to'rttasi topilgan. Boshqa to'rtta gen, CD86, RXRB, MMP10 va COL6A2, bitta SNPni o'z ichiga olgan. Topilgan SNPlar 10 ta genga tegishli bo'lib, ulardan ikkitasi retinol bilan bog'liq genlar, qolgan sakkiztasi esa oldingi tadqiqotlarga ko'ra terining umumiy sezgirligi bilan bog'liq edi. 10 ta gen orasida terining tirnash xususiyati bo'yicha eng muhim uchta genni tanladik: COL6A2, EGFR va IL{19}}R.

Ko'pgina biriktiruvchi to'qimalarda joylashgan VI turdagi kollagenning uchta alfa zanjiridan birini kodlaydigan COL6A2 dermal matritsa birikmasini va fifibroblast harakatini [30] tartibga solishi ko'rsatilgan va u to'qimalarni qayta qurish va yaralarni davolashga yordam beradi [31,32]. Bu nuqson keloid shakllanishiga [33] va anormal teri fenotiplariga [34] olib keladi. Epidermal o'sish omili retseptorlari (EGFR) epidermal to'siq funktsiyasining muhim regulyatoridir. EGFR signalizatsiyasi kornifikatsiyalangan konvertning malakasini inhibe qilishi va epidermal keratinotsitlarda qattiq birikma to'siqni funktsiyasini buzishi ko'rsatilgan [35,36]. EGFR signalizatsiyasiga qo'shimcha ravishda, ADAM17 (dizintegrin va metalloproteinaza 17) [37] va TRP kanali [38] kabi boshqa keng omillar ham EGFR bilan tizimli ravishda bog'langan epidermal to'siq funktsiyasiga ta'sir qiladi deb ishoniladi.

So'nggi bir necha o'n yilliklarda interleykin 4 (IL-4) va uning retseptorlari IL-4R ning vazifalari va rollari keng qamrovli o'rganildi. Gumoral va adaptiv immun tizimining asosiy regulyatori sifatida asosan mast hujayralari va Th2 hujayralaridan ajralib chiqadigan IL-4 Th2 hujayralarining differentsiatsiyasini keltirib chiqaradi va B hujayralarini rag'batlantiradi. Uning roli aniq tushunilmagan bo'lsa-da, ko'plab tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, IL-4 keng tarqalgan pro-va yallig'lanish jarayonlarini qo'zg'atishi mumkin, shu bilan birga uning nuqsoni allergik kasalliklar, Altsgeymer kasalligi va o'smalarni keltirib chiqarishi ko'rsatilgan [39]. IL-4-bog'liq immun javob uchun bir xil eksa bo'ylab IL{10}}R hamma joyda ham tug'ma, ham adaptiv immun tizimlarining turli immun hujayralarida ifodalanadi. IL{11}}R ham IL-4, ham IL-13 [40] uchun umumiy retseptor hisoblanadi. Th2 differentsiatsiyasiga bevosita ta'sir qiluvchi IL-4dan farqli o'laroq, IL{17}} eozinofil funktsiyasini boshqaradigan mast hujayralarini faollashtirish uchun ham javobgardir va yallig'lanishga qarshi sitokinlarni bostirish orqali makrofaglarga immunosupressiv va yallig'lanishga qarshi ta'sir ko'rsatadi. va kimyokinlar [41].

3.2. Yuqoridan pastga yondashuv: tirnash xususiyati beruvchi moddalarni in vitroda tekshirish

3.2.1. To'qimalarni tiklash bilan bog'liq genlar, COL6A2 va EGFR

Tanlangan genlarga asoslanib, biz maqsadli genlar ifodasini nazorat qilish kabi molekulyar patogenezni modulyatsiya qila oladigan tirnash xususiyati beruvchi moddalarni tekshirdik.

Avvalgi ma'lumotlarda retinoidlar teri to'sig'ida fiziologik va morfologik o'zgarishlarni keltirib chiqarishi aniqlangan [8,42,43]. Teri to'qimasini ex vivo va in vivo retinoik kislota bilan davolash transepidermal suv yo'qotilishini (TEWL) ko'tarishi kuzatildi va bir nechta tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, terining to'siq funktsiyasining buzilishi kornifikatsiyalangan konvertning nomutanosib ekspressiyasi va zichligi bilan bog'liq. birikma bilan bog'liq genlar. Filaggrin (FLG), lorikrin va CLDN1 ning pastga regulyatsiyasi va CLDN2, CLDN4 ning yuqori regulyatsiyasi va serpinlar oilasi a'zolarining genlarining sezilarli darajada farqlanishi oldingi tadqiqotda kuzatilgan, bu retinoid tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati keltirib chiqaradigan asosiy sababdir. [10,11]. \Biz COL6A2 va EGFRda genetik o'zgarishlarga ega bo'lgan shaxslar retinol tomonidan terining to'siq funktsiyasini zaiflashishiga moyil bo'ladi, deb taxmin qildik, bu esa retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati keltirib chiqaradi (3a-rasm). Biz, shuningdek, kollagen VI dan tashqari, kollagen IV ham epidermal bazal membranada va jarohatni davolash jarayonida muhim omil ekanligini hisobga oldik, ammo uning teri to'qimalarida aniq roli noaniq bo'lib qolmoqda [44]. Biz kollagen VI va IV etishmovchiligi yoki anormalligi retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati keltirib chiqaradi va har ikki turdagi kollagenning haddan tashqari ko'payishi retinol tufayli teri to'sig'ining zaiflashishini susaytirishi mumkin deb taxmin qildik. Turli moddalar orasida biz glyukozaminning COL6A2 va COL4A2 ifodasini mos ravishda 1.5-katta va 1.{24}} barobar oshirishini kuzatdik (3a-rasm, oʻrta panel). COL6A2 va COL4A2 dagi glyukozaminning modulyatsiya qiluvchi roli ilgari xabar qilinmagan, bu esa bu kuzatishlar ilmiy jihatdan muhim ekanligini anglatadi.

EGFR holatida biz retinoik kislota inson keratinotsitlarida EGFR/ERK yo'li orqali aquaporin 3 (AQP3) ning haddan tashqari ko'payishiga olib kelishini ko'rsatadigan oldingi tadqiqotlarni diqqat bilan ko'rib chiqdik [45]. Birinchi hisobotda biz nafaqat retinoik kislota, balki retinol ham fibroblastlarda AQP3 ifodasini taxminan ikki baravar oshirganini kuzatdik (3a-rasm, o'ng panel). Niatsinamid (nikotinamid) tomonidan AQP3 haddan tashqari ekspressiyasining susaytiruvchi ta'siri avvalgi tadqiqotda topilganiga o'xshaydi. Turli moddalar orasida trehaloza va eupatilin retinol bilan qo'zg'atilgan AQP3 haddan tashqari bosimni susaytirdi. Artemisa asiatica tarkibida topilgan eupatilin (5,{10}}dihidroksi-3',4',6-trimetoksiflavon), in vivo jonli ravishda patologik sharoitlarda teri to'sig'i funksiyasini kuchaytirishi xabar qilingan. [46].

Bundan tashqari, biz terining to'siq funktsiyasining asosiy ko'rsatkichi bo'lgan FLG ifodasini o'rgandik. Oldingi in vivo tadqiqotlar kabi [47], biz retinol FLG ifodasini sezilarli darajada taxminan 45 foizga kamaytirganini kuzatdik va bu pasayish niatsinamid, glyukozamin va sukralfat tomonidan qaytarildi (S1a-rasm, Qo'shimcha materiallarga qarang).

Birgalikda, glyukozamin, trehaloza va sukralfat COL6A2, AQP3 va FLG ifodasini modulyatsiya qilish orqali retinol keltirib chiqaradigan teri to'sig'ining buzilishini engillashtirishi mumkin.

3.2.2. Yallig'lanish geni: IL-4R

Keyin, biz yallig'lanish genlari bilan bog'liq tirnash xususiyati beruvchi moddalarni aniqlashga harakat qildik. Genetik tahlilimiz natijalariga ko'ra, retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati bo'lgan odamlarda IL-4R uchun SNP belgilari bor, lekin IL-4 emasligi ko'rsatilgan. Birinchidan, biz retinol bilan davolash mast hujayralarida IL-4 yoki IL-4R ifodasini modulyatsiya qiladimi yoki yo'qligini tekshirdik, bu ham IL{6}} bilan bog'liq yallig'lanishning asosiy omili hisoblanadi. Retinol IL-4R 1.74-katta haddan tashqari ko'payishiga olib keldi. Garchi retinol IL-4 ning haddan tashqari ko'payishiga olib kelmasa ham (S1b-rasm, Qo'shimcha materiallarga qarang), ektoin mast hujayraning IL-4 ifodasini samarali ravishda kamaytirishi kuzatildi, bu avvalgi tadqiqotlarga to'g'ri keladi. IBD (ichakning yallig'lanish kasalligi) va allergik havo yo'llari kasalligi [48,49] kabi ba'zi kasallik modellarida ektoinning yallig'lanishga qarshi ta'siri haqida bahslashdi. Aniqroq aytganda, oldingi tadqiqotlar ektoin in vivo modelda CNP (uglerod nanopartikullari) tomonidan qo'zg'atilgan o'pka yallig'lanishida IL-4 ifodasini normallashtirishi mumkinligini ko'rsatdi, bu bizning eksperimental natijalarimizni tasdiqlaydi [50].

Krosin, glyukozamin va ektoin mast hujayralarida IL{1}}R ning retinol tomonidan qo'zg'atilgan ortiqcha ekspressiyasini mos ravishda 37,03 foiz, 41,97 foiz va 82,59 foizga kamaytirdi. Ektoin (1,4,5,6-tetrahidro-2-metil-4-pirimidinkarboksilik kislota), bir nechta galofil bakteriyalarda topilgan tabiiy birikma, yallig'lanish sharoitida ko'plab sitokinlar va kimokinlarni modulyatsiya qilish, IL{14}}R ifodasini yaxshilashda ektoinning roli hali aniqlanmagan. Bizning kuzatishlarimiz ektoin funktsiyasi haqida yangi tushunchalarni taklif qiladi. Guruhimiz tomonidan o'tkazilgan avvalgi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, 100 ppm optimal konsentratsiyada ektoin retinoidlar ta'siriga qarshi eng yuqori yallig'lanishga qarshi ta'sir ko'rsatdi va hujayra asosidagi in vitro eksperimentda ahamiyatsiz sitotoksisite (ma'lumotlar ko'rsatilmagan). Shuningdek, biz mast hujayralari degranulyatsiyasining ko'rsatkichi bo'lgan mast hujayralarining -heksosaminidaza chiqarish tezligini o'lchadik (3b-rasm, o'ng panel). Ektoin 400 ppm retinolda retinol bilan bog'liq -geksosaminidazning chiqarilishini kamaytirmadi, garchi u 200 ppm retinolda retinol tomonidan qo'zg'atilgan -heksosaminidazning chiqarilishini kamaytirdi. Umuman olganda, ektoin retinol tomonidan qo'zg'atilgan IL-4 va IL{27}}R bilan bog'liq yallig'lanishni yaxshilashi mumkin degan xulosaga kelish mumkin. Ektoinning CNP tomonidan qo'zg'atilgan o'pka yallig'lanishida [50] EGFR faollashuviga aralashuvi haqidagi oldingi tadqiqotlarni hisobga olsak, ektoin retinol tomonidan qo'zg'atilgan teri to'sig'ini buzish uchun ham foydali ko'rinadi.

3.2.3. Neyrogen yallig'lanish, Adiponektin va TRPV1

Retinoidga juda sezgir bo'lgan bemorlarda retinol bilan qo'zg'atadigan tirnash xususiyati tez yonish va qichishish, qichishish, tez tarqaladigan shish va toshma kabi allergiyaga o'xshash reaktsiyalardir. Tadqiqot shuni ko'rsatdiki, retinoidlar, shu jumladan retinol va retinoik kislota TRPV1 ni faollashtiradi [21]. Shuning uchun, biz retinol tomonidan qo'zg'atilgan tirnash xususiyati, ayniqsa bir necha daqiqada darhol paydo bo'lishi, TRPV1 ning retinol tomonidan faollashishi bilan bog'liq deb taxmin qilamiz.

Shakl 3. Tirnashish bilan bog'liq molekulyar patogenezni o'zgartirishi mumkin bo'lgan tirnash xususiyati beruvchi skrining uchun mRNK ifodasi tahlili. (a) Teri toʻsigʻining buzilishi bilan bogʻliq molekulyar patogenezni oʻrganish Retinol uchun genetik modulyatsiyaga yondashuvning sxematik diagrammasi (ROL sabab boʻlgan teri toʻsiqlarining buzilishi. (chapda) Fifibroblastlar va glyukozaminlar bilan davolashda COL4A2 va COL6A2 ning nisbiy mRNK ifodasi. AQP3 ning nisbiy mRNK ifodasi (keratinotsit, oʻngda). (b) Yalligʻlanish (mast hujayralar tomonidan boshqariladigan) bilan bogʻliq molekulyar patogenezni oʻrganish. RBL-2H3 1 bilan davolash qilinganida IL{11}}R nisbiy mRNK ifodasi 0 mkM retinol va turli nomzodlar. (c) TRPV1 vositachiligida retinol va antagonistik ta'sir natijasida yuzaga kelgan neyrogen yallig'lanish 4-t-butilsikloheksanol va omega-9; Birlashtirish uchun uchta shart: (1) 4-t-butiltsikloheksanol 25 mkM va omega-9 5 mkM, (2) 4-t-butilsikloheksanol 50 mkM va omega{28}} mkM va (3) 4- t-butilsikloheksanol 100 mkM va omega{33}} mkM, BC, 4-t-butiltsikloheksanol; OA, omega-9 oleyk kislota; 50 mkm shkalali chiziq (oq) ko'rsatilgan; * p <0,05; ns, muhim emas; xato paneli ko'rsatilgan; ppm, millionga qismlar.

Turli fizik-kimyoviy stimullar bilan faollashtirilgan selektiv bo'lmagan kation bo'lgan TRPV1, ayniqsa uning teridagi roli keng o'rganilgan. [51-54] Oldingi genetik tahlilda TRPV1 paydo bo'lmagan bo'lsa-da, adiponektin (ADIPQ) past va o'rtacha statistik ahamiyatga ega bo'lgan ba'zi tahlil modellarida paydo bo'lganligini ta'kidlash kerak. Koreya aholisining oldingi tadqiqoti shuni ko'rsatdiki, terining "sezgir" fenotipi adiponektin etishmovchiligi bilan bog'liq bo'lib, natijada TRPV1 [55] ning tartibga solinishiga yordam beradi. TRPV{6}}ortiqcha ifodalangan HEK293 hujayralari retinol bilan ishlov berildi va TRPV1 faollashuvi kaltsiy oqimini tasvirlash orqali tasdiqlandi. Biz retinol TRPV1 ni dozaga bog'liq holda faollashtirishi mumkinligini kuzatdik (S1c-rasm, Qo'shimcha materiallarga qarang). 50 mkM dan yuqori konsentratsiyalarda TRPV1 ga agonistik ta'sir platoga yetganga o'xshardi. Oldingi tadqiqotga asoslanib, biz 4-t-butiltsikloheksanol va omega{16}} oleyk kislota retinol tomonidan qo'zg'atilgan TRPV1 faollashuvini antagonize qila oladimi yoki yo'qligini tekshirdik. Kutilganidek, ikkala modda ham TRPV1 ni antagonize qilishi mumkin, shu bilan birga past dozada omega{19}} oleyk kislotasi 4-t-butilsikloheksanolga qaraganda kuchliroq edi (S1d-rasm, Qo‘shimcha materiallarga qarang). Ushbu ikki materialning kombinatsiyasi TRPV1 ning retinol tomonidan inhibe qilinishiga ozgina sinergik ta'sir ko'rsatdi. 4-t-butiltsikloheksanol va omega{26}} kombinatsiyasining uch xil konsentratsiyasi retinol tomonidan induktsiya qilingan TRPV1 faollashuvining mos ravishda 28,25 foiz, 43,73 foiz va 68,50 foizga kamayganligini ko'rsatdi. TRPV1 faollashuvi orqali hujayralarga kaltsiy oqimi floresan mikroskop ostida kuzatildi (3c-rasm). Xulosa qilib aytganda, biz retinoldan kelib chiqadigan tirnash xususiyati in vitro modelda TRPV1 faollashuvi vositasida neyrogen yallig'lanish bilan ham bog'liq bo'lishi mumkinligini va 4-t butilsikloheksanol va omega{39}} oleyk kislotasi neyrojenik ta'sirni yumshatish uchun ishlatilishi mumkinligini tasdiqladik. TRPV1 ni antagonizatsiya qilish orqali yallig'lanish.

Email:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950