Neyrologiyada Aptamer ilovalari 2-qism

Boshqa bir neyrotransmitter, serotonin, uyqu, tajovuz, tuyadi va jinsiy faoliyatga ta'sir qiluvchi neyromodulyatsiya faoliyatida rol o'ynaydi. U tananing turli qismlarida, masalan, miya, orqa miya, trombotsitlar va ichaklarda ishlab chiqariladi [81-84].

Serotonin insonning jismoniy va ruhiy salomatligida muhim rol o'ynaydigan neyrotransmitterdir. Inson tanasida serotonin kayfiyatni tartibga soladi, ishtahani va uyquni nazorat qiladi, jismoniy zavq va farovonlik tuyg'ularini rag'batlantiradi. Biroq, serotonin ham xotiraga ta'sir qilishda muhim rol o'ynaydi.

Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, serotonin neyronlar orasidagi signalizatsiyani tartibga solish orqali xotirani yaxshilashga yordam beradi. Odamlar ijobiy rag'batlantirilganda, tana serotoninni chiqaradi, bu neyronlar orasidagi aloqalarni mustahkamlashga yordam beradi va xotira samaradorligini oshiradi. Serotonin, shuningdek, odamlarni yanada ijodiy qilishga, aqliy chaqqonlikni yaxshilashga va odamlarni tezroq o'rganishga va fikrlashga yordam beradi.

Bundan tashqari, serotonin tashvish va depressiya alomatlarini, odamlarning konsentratsiyasi va xotirasiga salbiy ta'sir ko'rsatadigan kayfiyat muammolarini kamaytirishga yordam beradi. Baxtli kayfiyat va ruhiy holat ko'pincha odamlarning yangi narsalarni tanib olish va o'rganish qobiliyatiga yordam beradi.

Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, serotonin bizning jismoniy va ruhiy salomatligimiz va xotiramizni o'rganishda ajralmas rol o'ynaydi. Biz ovqatlanish odatlarimizni, jismoniy mashqlar miqdorini, o'rganish usullarini va hokazolarni o'zgartirish, ijobiy va sog'lom mentalitetni tarbiyalash va doimiy ravishda xotirani yaxshilash uchun o'zimizni sinab ko'rish orqali serotoninning chiqarilishini oshirishimiz va [xotirani yaxshilashimiz] mumkin. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche deserticola xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche deserticola antioksidant, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirga ega, bu miyadagi oksidlanish va yallig'lanish reaktsiyalarini kamaytirishga yordam beradi va shu bilan miyani himoya qiladi. asab tizimining salomatligi. Bundan tashqari, Cistanche deserticola asab hujayralarining o'sishi va tiklanishiga yordam beradi, shu bilan neyron tarmoqlarning ulanishi va funktsiyasini oshiradi. Ushbu ta'sirlar xotira, o'rganish va fikrlash tezligini yaxshilashga yordam beradi, shuningdek, kognitiv disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarning rivojlanishiga to'sqinlik qilishi mumkin.

Xotirani kuchaytirish uchun biluvchi qo'shimchalarni bosing

Periferikserotonin darajasining nomutanosibligi bir qator kasalliklar, jumladan, gipertenziya, buyrak kasalligi va depressiya bilan bog'liq. Shunday qilib, kasallikning holatini bashorat qilish va to'g'ri davolashni boshlash uchun serotonindan foydalanish klinik ahamiyatga ega.

Serotonin uchun plazmonik tahlil aptamer-AuNP konjugati bilan ishlab chiqilgan bo'lib, uning agregatsiyasi serotonin borligida o'zgaradi. Zarrachalar agregatsiyasining o'zgarishini yutilishning eng yuqori to'lqin uzunligidagi siljish sifatida o'lchash mumkin.

Tahlil serotoninga o'ziga xos javobni ko'rsatdi va uning metabolitlari, 5-gidroksiindoleasetik kislota (5-HIAA), epinefrin yoki norepinefrin bilan statistik jihatdan ahamiyatli signal bermadi, ularning har biri 1 mkM da sinovdan o'tkazildi.

Homila bovineserum, inson zardobiga taqlid qilib, hech qanday signal bermadi [85]. So'nggi paytlarda miya to'qimalarida serotonin darajasini kuzatish uchun implantatsiya qilinadigan aptamer-dala effektli tranzistor (FET) neyroproblari ishlab chiqildi. Nano-miqyosdagi FETlarning ultra yupqa In2O3 sirtlari aptamerlar yordamida o'zgartirildi va bu neyropodlar fM serotoninni aniqlash chegaralarini in vivo jonli ravishda minimal biofouling bilan [86] yoqdi.

Qo'shimcha neyro-zondlar yordamida neyroaktivlikni fazoviy-vaqt qayd etish mumkin bo'ladi, shuning uchun miya funktsiyalarini chuqurroq tushunish mumkin bo'ladi. Epinefrin fiziologik funktsiyalarning keng doirasiga ega katexolamin neyrotransmitter bo'lib, anormal darajalar aritmiya, miyokard infarkti, qon kabi sog'liq muammolariga olib kelishi mumkin. bosimning oshishi, o'pka shishi.

Ushbu bog'liq kasallik holatlarini kuzatish uchun aylanma epinefrin miqdorini aniqlash muhimdir. Shu maqsadda epinefrinning aptamer funksionallashtirilgan Au-NP bilan o'zaro ta'siriga asoslangan kolorimetrik aniqlash usuli ishlab chiqildi. Tizim epinefrin miqdorini aniqlashning boshqa usullaridan, masalan, suyuq xromatografiya va spektrofotometriyadan ko'ra arzonroq va o'ziga xosdir.

Shuningdek, 0.9 nM aniqlash chegarasi UV-visiblespektroskopiya orqali aniqlandi, bu har qanday kolorimetrik usul yordamida epinefrin uchun qayd etilgan eng past aniqlash chegarasi. Epinefrin, 3,4-digidroksifenilsirka kislotasi (DOPAC), triptofan, askorbin kislota, dopamin, tirozin va homovanilik kislotaning analoglari juda kam javob berdi yoki hech qanday javob bermadi, bu aptasensorning yuqori o'ziga xosligini ko'rsatadi [87].

Bitta neyrotransmitter darajasining o'zgarishi bir nechta kasalliklarning har qandayini ko'rsatishi mumkin, bu esa bitta neyrotransmitterni o'lchash asosida kasallik tashxisini qo'yish mumkin emas. Shu sababli, ko'pgina aptasensorlarning multipleks platformaga integratsiyalashuvi klinikalarga ko'proq mos keladigan diagnostika vositalariga va kasalliklarni aniqroq aniqlashga yordam beradi.

2.3. Biomarkerni aniqlash
Biomarker - bu organizmdagi natijaga olib keladigan yoki muayyan kasallikning mavjudligini ko'rsatadigan har qanday modda, tuzilma yoki jarayon. Ko'pgina biomarkerlar qon, tupurik va siydik kabi biosuyuqliklarda o'lchanadigan moddalardir.

Nevrologik kasalliklar uchun biomarker xarakteristikasining asosiy muammosi qon-miya to'sig'i (BBB) ​​bo'lib, u orqali ko'plab molekulalar, shu jumladan ko'plab oqsillar o'tolmaydi. Proteinlar ma'lum kasalliklar uchun dominant biomarkerlar bo'lsa-da, Y neyropeptidi yoki oqsillarning bo'laklari kabi kichik peptidlar BBB orqali o'tishi va qon aylanishida aniqlanishi ehtimoli ko'proq.

Metabolitlar nevrologik kasalliklar uchun biomarkerlarning yana bir muhim guruhidir. NeoVentures Biotechnology Inc. FRELEX deb nomlangan aptamer tanlash usulini ishlab chiqdi, bu aptamerlarni sirtga biriktirilgan shortoligonukleotid va maqsad o'rtasidagi raqobat asosida tanlash imkonini beradi. Hujayra-SELEX va boshqa tuzilmalarni o'zgartiruvchi SELEX shakllari kabi, bu protokol aptamerlar tanlanadigan maqsad (lar) haqida oldindan ma'lumotga ega bo'lmagan komponentlar aralashmasini o'z ichiga olgan namuna bilan bajarilishi mumkin.

SELEX ning ushbu shakllari bilan kerakli o'ziga xosliklarni bajaradigan aptamerlarni tanlashni boshqarish uchun komponentlarning alohida kichik to'plamlari bilan hisoblagich tanlash amalga oshiriladi. FRELEX yordamida aptamerlar inson tau oqsilini haddan tashqari ifodalagan transgen sichqonlarning sarumiga qarshi tanlangan.

Aptamer tanlovini inson tausiga va tau haddan tashqari ko'payishi oqibatlariga olib borish uchun qarshi tanlovda yovvoyi turdagi sichqonlardan olingan sarum ishlatilgan. Guruh NGS yordamida boyitilgan aptamer ketma-ketliklarini aniqladi va ularning nisbiy ko'pligini solishtirish orqali kech bosqichdagi transgen sichqonlar va yovvoyi tipdagi sichqonlar uchun ma'lum aptamerlarni tavsifladi.

Ularning farazlariga ko'ra, ko'plikdagi farq aptamerlar o'zaro ta'sir qilishi mumkin bo'lgan epitoplarning kontsentratsiyasini (tau haddan tashqari ko'payishiga javoban ortib boradi) aks ettiradi [29].

3. Diagnostika va terapevtik qo'llanmalar

Neyrodegenerativ kasalliklar (SH) miyadagi neyronlarning degeneratsiyasini o'z ichiga oladi, bu esa markaziy asab tizimining tuzilmalari va funktsiyalarini yo'qotishiga olib keladi. ND qarish, genetik va atrof-muhit omillaridan kelib chiqishi mumkin.

Demans Altsgeymer kasalligi (AD) kabi yoshga bog'liq eng keng tarqalgan NDlardan biridir. Parkinson kasalligi (PD) genetik mutatsiyalar va/yoki atrof-muhit toksinlari tufayli yuzaga kelishi mumkin. Amiotrofik lateral skleroz (ALS), Multiple skleroz (MS), Xantington kasalligi (HD) va prion kasalliklari genetik aloqalarga ega bo'lgan boshqa keng tarqalgan NDlardir.

Afsuski, bu kasalliklarni samarali davolash yoki erta aniqlash strategiyalari mavjud emas. Keng qo'llaniladigan antikorlar singari, aptamerlar NDlarni erta tashxislash va ushbu kasalliklarni davolash uchun yangi biosensorlarga qo'llash uchun jozibador vositalarga aylandi [88].

3.1. Altsgeymer kasalligi

Aqliy nuqsonlarga olib keladigan yoshga bog'liq progressiv miya buzilishi sifatida AD demansning eng keng tarqalgan shakli hisoblanadi. Uning patologiyasi amiloid prekursor oqsilidan (APP) olingan va hipokampusning miya hududida boshlangan amiloid- (A) ning to'planishi bilan tavsiflanadi.

Olimlar A-induktsiyali neyrotoksiklik erimaydigan A plitalari (AP) va fibrillalar (AF) bilan bog'liq deb taxmin qilishsa-da, so'nggi ma'lumotlar eruvchan A oligomerlari (AO) ham AD boshlanishi bilan bog'liqligini ko'rsatadi.
Shu sababli, AO ADni erta tashxislash uchun jozibador biomarker sifatida aniqlangan va A va tau ADni davolash uchun muhim terapevtik maqsadlar hisoblanadi [89].

3.1.1. AD diagnostikasi

AO ga qarshi erta tasvirlangan aptamerlar past yaqinlik va o'ziga xoslikka ega edi, ammo keyingi tadqiqotlar A 40 polimerlarini emas, balki A (A 40) qoldiq shaklidagi fibrillarni tanlab tanlab oladigan aptamerlarni aniqlashda muvaffaqiyatliroq bo'ldi [90].

Biroq, aptamerlar sinovdan o'tgan bir qancha boshqa amiloidogen oqsillarning fibrillalariga nisbatan A 40 fibrillalari uchun yuqori o'ziga xoslikka ega emas edi. 68-nM yaqinlikdagi -sinuklein (-sin) oligomeri bilan o'zaro ta'sir qilish uchun tanlangan DNK aptameri AOni 25-nM yaqinlik bilan bog'lashi ham ko'rsatildi [91]. 2019 yilda Tsukakoshi va boshqalar tomonidan olingan aptamerlardan foydalanib, AO ni aniqroq aniqlash uchun yorliqsiz elektrokimyoviy aptasensor ishlab chiqildi [92].

Aptamer tiol (-S) o'zaro ta'siri orqali oltin novda elektrodlarini o'z-o'zidan yig'adi va tizim EIS tomonidan aniqlangan 30 ppm aniqlash chegarasiga ega. Bu EISga asoslangan A protein to'planishini kuzatish uchun muvaffaqiyatli qo'llanilgan birinchi aptasensor edi, bu aptamerning A turlari orasida yuqori selektivligi tufayli mumkin edi. Oson ishlab chiqarish va samarali regeneratsiya bilan, bu aptasensor ADni erta aniqlash va A protein to'planishini ko'rsatish uchun istiqbolli diagnostika vositasi bo'lishi mumkin [92].

A oligomerlarini aniqlash uchun aptasensor metilen ko'k (MB) bilan kompleksda -sin DNK aptamer [91] yordamida ishlab chiqilgan va nano gözenekli anodikaluminaga biriktirilgan. Oq yorug'lik uchun MB ning yuqori yutilish koeffitsienti aks ettirilgan oq yorug'likning past intensivligiga olib keldi.

A oligomerlari ishtirokida aptamer/MB kompleksi dissotsiatsiyalangan va aks ettirilgan yorug'likning ortishi interferometrik reflektiv spektroskopiya (IRS) tomonidan aniqlangan [93]. Aptasensorning aniqlash chegarasi 8 pM va 0,5 dan 50 nM gacha bo'lgan kontsentratsiya oralig'ida A oligomerlariga yaxshi javob beradi. Neyrofibrillar chalkashliklar (NFTs) ADning patologik belgilaridir.

NFT shakllanishi hipokampusda boshlanadi va NFT shakllanishi darajasi ADdagi demansning og'irligi bilan bog'liq. Mikronaychalar bilan bog'langan oqsilning giperfosforilatsiyasi, tau uning normal tauni NFTga aylangan filamentlarga jalb qilish va tartibga solish qobiliyatini oshiradi. Shunday qilib, ADning asosiy sabablaridan biri sifatida tau hiperfosforilatsiyasi taklif etiladi.

Mikrotubulalar birikmasini rag'batlantirish va yig'ilgan mikronaychalarni barqarorlashtirishdagi normal roliga qo'shimcha ravishda, tau muvozanatli bo'lmagan kapillyarelektroforez (CE) orqali uchta tasodifiy tanlangan ssDNK oligonükleotidlarini bog'lash uchun kuzatildi, ulardan biri, ssDNA1, tau381 ga yuqori afiniteli (K) bog'langan. 3}} nM) [94].

Aptamer/antikor-sandvich tahlili ssDNA1 yordamida inson plazmasidagi proteinning femtomolyar kontsentratsiyasini sirt plazmon rezonansi (SPR) yordamida aniqlash uchun ishlab chiqilgan [95].

Boshqa bir tadqiqotda, DNK aptamerlari 441 ta aminokislotadan (tau441) iborat to'liq tau oqsiliga qarshi kapillyar elektroforez bo'linishiga asoslangan tezkor tanlash usuli bilan bir kun ichida uchta tanlash raundlari bilan tanlangan. Yuqori o'tkazuvchanlik ketma-ketligi natijalaridan tanlangan beshta aptamer SPR tomonidan tau tanib olish qobiliyati uchun baholandi.

Yuqori yaqinlikka ega aptamerning analitik potentsiali bir hil fazali floresans anizotropiya tahlili bilan ko'rsatildi. Ushbu yuqori afinitetli aptamer tau441 oqsili va qisqaroq izoformlar, tau352, tau381 va tau383 bilan bog'langan, bu tahlilda mos ravishda 28 nM, 6,3 nM, 3,2 nM va 22 nM aniqlash chegaralari bilan bog'langan [96].

3.1.2. AD terapevtikasi

Potentsial davolash usullaridan biri sifatida RNK aptamerlari A 40 agregatsiyasini inhibe qilish uchun tanlangan. Tanlash jarayonida A oligomeri oltin nanozarrachalarga (A -AuNPs) konjugatsiya qilindi va SELEX dan keyin aptamer nomzodlari sifatida ikkita aptamer aniqlandi.

10-20 nM bolalari. Ushbu aptamerlar transmissiya elektron mikroskopi va A 40 fermenti bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) [97] tomonidan aniqlanganidek, A blyashka va fibril shakllanishini inhibe qilgan.

A bilan o'zaro ta'sir qiluvchi alkogol dehidrogenaza (ABAD) ajraladigan peptid (DP) A peptidining sitotoksikligini antagonizatsiya qiladi. ABAD-DP ketma-ketligi TRX1-ABAD-DP-TRX2peptid aptamerini yaratish uchun tioredoksinda (TRX) disulfid aloqasini hosil qiluvchi ikkitiollar orasiga kiritildi. Adeno bilan bog'langan viruslar yordamida NIH 3T3 hujayralarida uning barqaror ifodalanishi immunofluoresan bo'yash bilan tasdiqlangan.

Eksprese qilingan aptamer A peptidini bog'lashi va hujayra hayotiyligini yaxshilashi mumkin. Ushbu tadqiqot peptid aptamerlari tomonidan A peptidning sitotoksik ta'sirini samarali inhibe qilishini tasdiqladi [98]. Tau oqsillari odatda mikrotubulalar bilan bog'lanadi va barqarorlashadi, ammo ularning giperfosforilatsiyasi natijasida toksik bo'lgan "tauopatiya" deb ataladigan protein to'plamlari paydo bo'lishi mumkin.

Inson tau441 ga qarshi tanlangan DNK aptamer Tau-1 in vitroda Tau1 oligomerizatsiyasini inhibe qiladi [99]. Bu inhibisyon HEK293 hujayralari [100] yordamida hujayra madaniyatini o'rganishda ham tasdiqlangan. Beta-sekretaz (BACE1) A ishlab chiqarishda rol o'ynaydi va BACE1 ifodasini inhibe qilish sichqonlarda halokatli hisoblanadi. ADni davolash BACE1 modulyatsiyasini o'z ichiga olishi mumkin.

Biroq, uning katta faol sayti BACE1 ni kichik molekula ingibitorlari uchun qiyin nishonga aylantiradi. Buni chetlab o'tish uchun nuklein kislota aptamerlari BACE1 faolligini inhibe qilish uchun yangi vositalar bo'lishi mumkin. Bu ferment superoksid dismutaza-1 (CCS) uchun mis chaperoni va ADP ribosilatsiya faktorini bog‘lovchi (GGA1) oqsili kabi oqsillarni biriktiruvchi joy bo‘lib xizmat qiluvchi B1-CT sitoplazmatik dumiga ega.

B1-KT ning fiziologik roli deyarli noma'lum. BACE1 ning C terminalining membrana-proksimal yarmini B1-CT bilan bog'lagan RNK aptamerlari CCSni jalb qilishni oldini oldi va GGA1 ni BACE1 bilan bog'lash va BACE1 transportini qayta ishlash endosomalariga tartibga solish imkonini berdi [101].

BACE1 ni maxsus nishonga olish uchun DNK aptamerlari BI1 va BI2 BACE1 ga qarshi ishlab chiqarilgan, bu esa BACE1 ni inhibe qilgan, lekin na alfa na gamma-sekretazani inhibe qilgan. Barqaror transfeksiyalangan HEK293 hujayra liniyasidan foydalanib, ular amiloid oqsili prekursorini (APP) ifodaladilar va in-vitro floresan rezonans energiya uzatish (FRET) tahlilidan foydalanib, ular A darajasining kamayganligini va asosiy madaniyatli neyron hujayra liniyasida hujayra etishmovchiligi qutqarilganligini ko'rsatdilar. [102]. Aptamer samaradorligi xolesteriltetra etilen glikol (TEG) qo'shilishi bilan yanada yaxshilandi.

3.2. Parkinson kasalligi

Parkinson kasalligi (PD) ikkinchi eng keng tarqalgan neyrodegenerativ kasallik bo'lib, dunyo bo'ylab etti millionga yaqin odamga ta'sir qiladi. Harakatlanuvchi va nomotor xususiyatlar bilan tavsiflangan progressiv kasallik bo'lsa-da, u harakatchanlik va mushaklar nazoratini yo'qotishi tufayli bemorlarga sezilarli klinik ta'sir ko'rsatadi.

Striatal dopaminerjik neyronlarning yo'qolishi va dopaminerjik bo'lmagan sohalarda neyronlarning yo'qolishi PDni tavsiflaydi. Neyronlarning yo'qolishi odatda Lyui tanasining xarakterli shakllanishi bilan bog'liq. Shunday qilib, miyada -sin oligomerlarini o'z ichiga olgan Lyui tanalarining mavjudligi PD uchun mumkin bo'lgan terapevtik va diagnostik maqsad hisoblanadi.

3.2.1. PD diagnostikasi

-singa qarshi tanlangan birinchi aptamer "M5-15" oligomerlar uchun o'ziga xos xususiyatga ega emas edi va -sin monomerlari bilan ham bog'lanishi mumkin edi [103]. Keyin tanlangan DNK aptamerlari -sin monomerlari bilan emas, balki -sin oligomerlari bilan o'zaro ta'sir qilishlari ko'rsatilgan, ammo A 1-40 oligomerlarini bog'lagan.

Tergovchilar, shuningdek, aptamerning -sin oligomerlari uchun tuzilmalari, masalan, pirrolokinolin xinin glyukoza dehidrogenaza (PQQH) ning qatlamli pervanel tuzilishi kabi tuzilmalari boshqa oqsillarga nisbatan o'ziga xosligini o'rganib chiqdilar va aptamerning PQQAH xilma-xilligini bog'lamasligini ko'rsatdilar [91]. Aptasensorlarning soni sinoligomerlarni aniqlashga qodir ekanligi xabar qilingan.

Sinoligomerga qarshi DNK aptameridan foydalanadigan kolorimetrik aptasensor oltin nanozarrachalarga (AuNPs) adsorbsiya qilindi, bu esa nanozarrachalarning tuz bilan induktsiyalanishini oldini oldi. Uning -sin oligomeri bilan bog'lanishi aptamerning AuNP yuzasiga singishiga to'sqinlik qiladi, bu esa yuqori tuz konsentratsiyasida AuNP agregatsiyasini ishga tushirishga imkon beradi va rang o'zgarishiga olib keladi.

Ushbu tizim 10 nM LoD bilan xabar qilingan. Shu bilan birga, sarum (hatto 2% bo'lsa ham) tahlilda rang o'zgarishi oralig'idagi birikmalarning so'rilishiga yordam berdi va aptamer-Au-NPlarning tuzga bog'liq agregatsiyasiga xalaqit berdi.

EIS va SPR dan foydalanadigan aptasensorlar ko'proq sezgir bo'lib, LoDs mos ravishda 1 pM va 8 pM [104]. EIS aptasensori monomerlarga nisbatan oligomerlar uchun juda xos bo'lgan va sarum mavjudligidan ta'sirlanmagan [104]. -sin oligomerini aniqlash uchun elektrokimyoviyaptasensorning ishlab chiqilgan dizayni tiol bog'i orqali oltin yuzasiga bog'langan -sin oligomer aptameriga komplementar ketma-ketlikdan hosil bo'lgan gibridni o'z ichiga olgan, terminal deoksinukleotidil transferaza (TdT) va uning aptamerining 30 uchini kengaytirish uchun dTTPni o'z ichiga oladi. qo'shimcha polip bilan to'ldiring.

Kengaytirilgan ssDNK metilen ko'k bilan bog'langan va uning oltin yuzasi bilan bog'lanishiga yordam bergan va shu bilan anelektrokimyoviy signal hosil qilgan. Bundan tashqari, tizimda ssDNK uchun xos bo'lgan eksonukleaza I (Exo I) mavjud edi. Aptamer -sin oligomeriga bog'langan holda komplement tarkibidagi binar kompleksdan ajratilganda, to'ldiruvchi iplar Exo I tomonidan hazm bo'lib, oltin yuzasida metilen ko'kning to'planishiga to'sqinlik qildi va shu bilan elektrokimyoviy signalni pasaytirdi.

Aniqlash chegarasi 10 PM (S/N=3) edi va 10% va pastroq zardob konsentratsiyasi mavjud bo'lganda signalning tiklanishi juda maqbul 95,3-107% edi [105]. Biroq, uning murakkabligi va fermentlarning birlashishi ushbu tizimni saqlash uchun barqaror bo'lish ehtimolini kamaytiradi va dalada takrorlanadi. Maqsadni oldindan kontsentratsiyalash uchun kapillyar elektroforez-mass spektrometriyasi (CE-MS) bilan qattiq fazali ekstraktsiya (SPE) kombinatsiyasi AOK qilingan katta hajmdagi namunalardagi aptamer bilan modifikatsiyalangan mikro kartrij yordamida aniqlash chegarasi CE-MS tizimlariga nisbatan 100- barobar kamaydi.

Ushbu yangi tizimda namuna tozalanadi va maqsadni tanlab ushlab turuvchi mikro kartrij yordamida yaxshi tahlil qilish uchun hajm minimallashtiriladi. Kartrijdagi aptamer yaqinligi (AA) sorbent toanga qarshi antikorning eng yaxshi alternativi ekanligi aniqlandi. tizimni yuvish uchun zarur bo'lgan fon elektrolitlari sifatida immunoaffinity (IA) sorbent, shuningdek, antikorlarni denatüratsiya qiladi.

AA-SPE-CE-MS ni ishlab chiqish mikro kartrijni M5-15 DNK aptameri bilan o'zgartirish orqali erishildi. Tizim 2,8 nM LoDni ko'rsatdi va qon namunasida 7 va 140 nM -sin oralig'ida chiziqli aniqlash diapazoni bor edi.

Bundan tashqari, erkin va N-atsetillangan -sin proteoformlarini aniqlash MS ning yuqori aniqlikdagi massasini aniqlash va hal qilish qobiliyati natijasida mumkin edi. Nihoyat, mikro kartrij kislotali BGE bilan ham barqaror deb topildi va maqsadni noto'g'ri aniqlash ehtimoli kam bo'lgan 20 ga yaqin tahlillar uchun ishlatilishi mumkin edi [106].

For more information:1950477648nn@gmail.com