Atriplex Canescens: Cistanche Deserticola uchun yangi uy egasi

Aloqa:tina.xiang@wecistanche.com

Fangming Vang a, Bingyu Chjuo b, Shuai Vang c, Jin Lou c, Yuan Chjan b, Qingliang Chen a, Ziyi Shi a, Yuelin Song b, Pengfey Tu a,*

Pekin universiteti Sog'liqni saqlash fanlari markazi, Farmatsevtika fanlari fakulteti, tabiiy va biomimetik dorilarning davlat asosiy laboratoriyasi va tabiiy dorilar bo'limi, Pekin, 100191, Xitoy

b Xitoy Materia Medica maktabi, Pekin Xitoy Tibbiyot Universiteti, Pekin, 102488, Xitoy

c Quheng fondi, Osiyo ilmiy-texnika markazi, 4760 Jiangnan prospekti, Binjiang, Xanchjou, Zhejiang, 310053, Xitoy

A B S T R A C T

Cistanche desertikolatarixan an'anaviy xitoy tibbiyotida buyrak (yang) funktsiyasini to'ldirish, qon va mohiyatiga foyda keltirish va axlatni chiqarish uchun ichaklarni namlash uchun ishlatilgan. Uning uy egasi. Haloxylon ammodendron - bu cho'llanishni nazorat qilish strategiyasi bo'lgan shamoldan himoya qilish va qumtepalarni mahkamlash uchun ishlatiladigan muhim kashshof o'simlik. Uzoq vaqt davomida C.deserticola faqat H. ammodendronida parazitlik qila oladi, deb hisoblangan. Ushbu tadqiqotda morfologik identifikatsiya, gen shtrixli identifikatsiyasi va emlash tajribalari o'tkazildi, biz nihoyat aniqladik.C. deserticolaAtriplex canescens ham parazitlik qilishi mumkin. A.canescens - Chenopodiaceae turkumiga kiruvchi, moslashish qobiliyati keng. H. ammodendron bilan solishtirganda, u ko'proq biomassaga va kengroq ekologik moslashuvchanlikka ega bo'lib, uni C. deserticola sanoat ishlab chiqarishi uchun qulayroq qiladi. Bundan tashqari, faol komponentlar konsentratsiyasi A. canescensda parazitlangan C. deserticola da H. ammodendronda parazitlanganlarga qaraganda yuqori ekanligini ham aniqladik; Bu topilma yana shuni ko'rsatadiki, C. desertikolani kengroq miqyosda qo'llash keyingi tadqiqotlarni talab qiladi.

Kalit so'zlar: Cistanche deserticola Parazitizm DNK shtrix kodiga asoslangan identifikatsiya An'anaviy Xitoy tibbiyoti Cistanche salsa

1.Kirish

An'anaviy xitoy tabobatida Cistanchedan foydalanish birinchi bo'lib Shennong o'simlik yozuvida qayd etilgan, uning buyrak yangini tonlash, qonning mohiyatini kuchaytirish va axlat o'tishini osonlashtirish uchun ichaklarni namlash ta'siri uchun. Qadimgi o'simlik tibbiyoti asarlarida "cho'l jenshen" sifatida ham qayd etilgan. ning quruq go'shtli poyasi va chig'anoq barglariCistanche desertikolaYC Ma va Cistanche tubulosa (Schenk) Wight 2005 yilda Xitoy farmakopeyasida tasvirlangan birinchi qo'shma bo'lgan. Cistanche asosan Shinjon, Ichki Mo'g'uliston va Xitoyning Gansu shaharlarida o'stiriladi va global miqyosda Evropa Pireney yarim oroli, Shimoliy Afrika, Arabiston, Eron, Afg'oniston, Pokiston, Shimoliy Hindiston, Mo'g'uliston va boshqalarning yarim qurg'oqchil va qurg'oqchil hududlarida joylashgan. al. [1]. U o'ta qurg'oqchil iqlim, haroratning keskin o'zgarishi va zaiflashgan tuproqlar kabi og'ir ekologik sharoitlarga chidamli [2]. Xitoy oliy o'simliklarining taksonomik indeksiga ko'ra, Xitoyda oltita Cistanche turi mavjud. Biroq, keyingi tadqiqot Cistanchening faqat to'rt turi va bitta varianti mavjudligini tasdiqladi, ya'niC. deserticolaYC Ma, C. tubulosa (Schenk)R. Wight, C. salsa(CAMey.)G.Beck, C.sinensis G.Beck va C. salsa var. albiflora PF Tu va boshqalar, [3].

C. deserticolaCistanchening yagona an'anaviy manbasi sifatida qaraladi va Sharqiy Xan sulolasi davridan (milodiy 25-220)[4]dan beri tibbiyotda uzoq vaqtdan beri foydalanish tarixiga ega. Materia Medica to'plamida (Li Shizhen tomonidan yozilgan. Ming sulolasi), yangni silliq tonlash uchun hujjatlashtirilgan (ko'proq kuchli ta'sirga ega bo'lgan boshqa o'tlardan farqli o'laroq). Feniletanoid glikozidlar, iridoidlar, lignanlar, alditollar, oligosakkaridlar, polisakkaridlar va alkaloidlarni o'z ichiga olgan bir qator samarali kimyoviy tarkibiy qismlar ajratilgan.C. deserticolazamonaviy fitokimyoviy usullar bilan [5]. Farmakologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, fenetil glikozid asosiy faol komponent bo'lib, u jinsiy funktsiyani yaxshilash, neyroprotektiv ta'sir ko'rsatish, o'rganish va xotirani yaxshilash va jigarni himoya qilish uchun xabar qilingan. Shuningdek, u demans, Altsgeymer kasalligi, Parkinson kasalligi, charchoq va o'smalarga qarshi terapevtik ta'sir ko'rsatadi, shuningdek yallig'lanishga qarshi va immunomodulyar xususiyatlarni namoyish etadi [6, 7].

C. deserticolafaqat haloxylon ammodendron ildizlarida yashaydigan majburiy parazit o'simlikdir [8]. Tadqiqot shuni ko'rsatdiki, C.deserticola hatto Haloxylon persicum [9] da topilmaydi. So'nggi yillarda C, deserticolaga e'tibor ortib bormoqda. chunki u nafaqat dorivor ahamiyatga ega bo'lgan komponentlar manbai, balki cho'llanishni nazorat qilishga katta hissa qo'shadi [10].H. ammodendron C. deserticola bilan bog'liq tadqiqotlarda foydalanilgan yagona xostdir. 2017-yil aprel oyida Chjejiang Ouheng jamoat farovonligi jamg‘armasi xodimi Vang Shuay Gansu provinsiyasi Mingin cho‘l botanika bog‘ida Atriplex canescens ustida C. deserticola urug‘ini emlash va C. deserticola 2018 yil may oyida gullashi aniqlandi va davom etdi. 2019-yilning mayigacha gullash uchun. Biroq, urug‘lar bozordan sotib olingan va ular haqiqatan ham C. deserticola urug‘i ekanligi shubhali. Bundan tashqari, bu hodisa an'anaviy bilimlarni buzadi va qo'shimcha o'rganishni talab qiladi.

A. canescens Janubiy-Gʻarbiy Amerika choʻllarida joylashgan C4 koʻp yillik buta boʻlib, shoʻrlanish, ogʻir metallar, qurgʻoqchilik va yuqori harorat sharoitlariga tez moslashadi [11]. U juda mazali va ozuqa moddalariga boy bo'lgani uchun ko'pchilik chorva va yirik hayvonlar uchun yem sifatida ishlatiladi [12]. Bundan tashqari, u mukammal moslashuvchanligi va keng ildiz tizimi tufayli eroziyaga qarshi kurash va chekka erlarning meliorativ holatini yaxshilash uchun ayniqsa foydalidir. U birinchi marta Xitoyda 1989 yilda Amerika Qo'shma Shtatlaridan kiritilgan va tuproq va suvni saqlash, qumni mustahkamlash va sho'rlangan erlarni tiklash uchun keng qo'llanilgan [13]. ning o'sishi haqida xabar bergan bo'lsa-daC.deserticolaA. canescens C. deserticola haqidagi eksklyuziv parazitlik tushunchasini bekor qiladi, bu inqilobiy kashfiyot bo'lishi mumkin, chunki A. canescens C. deserticola o'sishi uchun ko'proq mos keladi, chunki u ko'proq biomassaga va kengroq ekologik moslashuvchanlikka ega. H. ammodendron bilan solishtirganda.

Tasodifiy kashfiyotning toʻgʻriligini taʼminlash maqsadida oʻsimliklarni aniqlash va sunʼiy emlash tajribalari oʻtkazildi. An'anaviy o'simliklar identifikatsiyasi organoleptik baholash (tegish, hid, ko'rish va ta'm kabi), morfologik xususiyatlarni tahlil qilish (mikroskopik va makroskopik kabi) va kimyoviy profilni (yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi, yupqa qatlamli xromatografiya va gaz kabi) o'z ichiga oladi. xromatografiya)[14]. Poyadagi tomir to‘plamlarining o‘lchami, rangi va joylashishidagi farqi tufayli C. tubulosa va C. Sinensisni istisno qilish nisbatan oddiy. Haqiqiy qiyinchilik C. deserticola va C. salsa o'rtasidagi farqni aniqlashdir. Xitoy florasiga ko'ra, C. salsa braktining uzunligi toj gulining 1/3 qismini tashkil qiladi, C. deserticolada esa tengdir. Goʻshtli poyalarning kesilishi C. deserticola va C. salsa oʻrtasida oʻxshash boʻlib, epidermis, qobiq, tomirlar toʻplamlari va chuqurchalardan tashkil topgan. Asosiy farq tomir to'plamining qobig'ida, chunki u C. deserticola uchun kaudat va C. salsa uchun uchburchak yoki yarim doira shaklida.

So'nggi yillarda turlarni aniqlash uchun DNK shtrix-kodlash texnologiyasi tez-tez ishlatib kelinmoqda. Bu odatda saqlanib qolgan va o'simlik to'qimalarining yoshi va turi kabi tashqi omillarga ta'sir qilmaydigan standart genomning qisqa DNK ketma-ketligini ishlatadigan jarayon. O'simlik DNK shtrix kodlari uchun mashhur nomzodlar ketma-ketligi rbcL, matK, psbA-trnH, ITS va ITS2 [15]. Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ITS/ITS2 o'simliklar uchun eng samarali identifikatsiya vositasidir. Bundan tashqari, ITS2 hududi plastid shtrix kodlariga qaraganda yuqori kamsitish kuchi tufayli asosiy shtrix-kodlarga kiritilishi kerakligi taklif qilingan. ITS2 o'simlik taksonlarining keng doirasini aniqlash uchun yangi universal shtrix kod sifatida ishlatilishi mumkinligi qabul qilindi [16, 17,18, 19,20,21]. Garchi ko'plab tadqiqotlar o'simlikning universal shtrix kodini aniqlashga harakat qilgan bo'lsa-da, mavjud bo'lgan lokuslarning hech biri barcha turlarda ishlamaydi, shuning uchun o'simlik turlarini farqlash uchun ko'p joyli usul zarur [22,23,24,25,26,27, 28].Ushbu tadqiqotda ITS2, rbcL, psbA-trnL shtrix kodlari sifatida ishlatilgan.

Morfologik va molekulyar identifikatsiyalash usullaridan tashqari, to'g'ridan-to'g'ri dalillar emlash tajribalaridan kelib chiqadi. C. deserticola A. canescens parazitlik qilishini koʻrsatish uchun emlash tajribalarini oʻtkazish kerak. Identifikatsiyadan tashqari, sifat nazorati asosiy e'tiborga aylanadi. H. ammodendron ildizida parazitlangan C.desertikola sifati bilan A. canescentda parazit boʻlgan sifat oʻrtasidagi farqni aniqlash uchun qoʻshimcha tadqiqotlar talab etiladi.

2. Materiallar va usullar

2.1. O'simlik materiallari

Cistanche yumshoq shoʻrlangan yumshoq qumli tuproqlarda oʻsadi, odatda xoʻjayinning 30-100 sm chuqurlikdagi yon ildizlarida parazitlik qiladi. Tegishli o'sadigan hududdagi iqlim qurg'oqchil, kam yog'ingarchilik, katta bug'lanish, uzoq quyoshli soat va kunduzi va kechasi o'rtasidagi katta harorat farqiga ega. Minqin okrugi va Baiving shahri bu namunalarni to'plash joylari bo'lib, ular geografik jihatdan yaqin va mo''tadil kontinental qurg'oqchil iqlimga ega, o'rtacha yillik yog'ingarchilik 113,2 mm va o'rtacha yillik nisbiy namlik 44 foizni tashkil qiladi. Namuna to'plash bo'yicha aniq va batafsil ma'lumot 1-jadvalda keltirilgan. Barcha namunalar muzlatilgan va tabiiy va biomimetik dori vositalarining Davlat asosiy laboratoriyasida, Pekin, Xitoyda -20 darajada saqlangan.

2.2. To'qimalarni bo'yash va kuzatish

Yangi namunalar olingan va 90:5:5 nisbatda 70% etanol, muzli sirka kislotasi va formaldegiddan tashkil topgan eritmada saqlangan va etanol gradienti (75%, 95%, 100%, 100%) yordamida suvsizlangan. 1 soat davomida. Shaffof bo'laklarni olish uchun suvsizlangan qismlar 1 soat davomida ksilen gradientiga (25 foiz, 50 foiz, 75 foiz, 100 foiz, 100 foiz) ta'sir ko'rsatdi. Shaffof bo'laklar kerosin infiltratsiyasiga duchor bo'ldi, bunda namunani o'z ichiga olgan ksilenga ksilen hajmiga teng kerosin hajmi qo'shildi, natijada olingan eritmaning yarmi aspire qilindi va yana teng hajmdagi kerosin qo'shildi. Bu jarayon 10 marta takrorlandi va nihoyat, barcha eritmalar aspiratsiya qilindi va teng hajmdagi kerosin bilan almashtirildi; bu oxirgi bosqich ikki marta takrorlandi va har bir bosqichdan keyin hosil bo'lgan eritma 75 daraja haroratda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Parafin infiltratsiyasidan so'ng, bo'limlar o'rnatildi, unda namunalar suyuq kerosin bo'lgan temir idishga joylashtirildi va butun idishni to'ldirish uchun qo'shimcha suyuq kerosin tezda qo'shildi va qattiqlashishi uchun qoldirildi. Olingan mum bloki kesilgan va kesilgan. O'rnatilgan qismlar iliq suvga solingan, baliq ovlangan, slaydga joylashtirilgan va 45 daraja haroratda 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilingan. Slayddagi bo'laklar ketma-ket 100% ksilen, 100% ksilen, 50% ksilen, 50% ksilen, 100% etanol, 100% etanol, 95% etanol va 75% etanolda namlash orqali mumsizlandi va keyin safranga namlangan. min. Buning ortidan 75 foiz etanol va 95 foiz etanolda tez namlashning navbatdagi bosqichi o'tkazildi, so'ngra slaydlar 1 daqiqa davomida tez yashil rangga botiriladi. Nihoyat, bo'limlar 95 foiz etanol, 95 foiz etanol, 100 foiz etanol, 100 foiz etanol, 50 foiz ksilen, 50 foiz ksilen va 100 foiz ksilenda oxirgi marta ketma-ket namlashdan o'tkazildi. Bo'limlar bo'yalgandan so'ng, slaydga bir tomchi qatron elim qo'yildi va uning ustiga qopqoq oynasi qo'yildi. Slaydlar bir hafta davomida buzilmagan holda qoldirildi va to'qimalarning bo'limlari Olympus optik mikroskopi yordamida kuzatildi va tasvirga tushirildi.

2.3. DNK ekstraktsiyasi va PCR amplifikatsiyasi

Jami genomik DNK gul namunalaridan ishlab chiqaruvchining protokollariga muvofiq o'simlik genomik DNK ekstraktsiyasi to'plamidan (Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Pekin, Xitoy) foydalanib olingan. Genni kuchaytirish va sekvensiyalash uchun primerlar va reaksiya sharoitlari 2-jadvalda ko'rsatilgan. Har bir genni kuchaytirish har bir namuna uchun uch marta takrorlangan.

2.4. Ketma-ketlikni tahlil qilish

To'g'ri ketma-ketliklarni olish uchun, Transgene Quick Gel Extraction Kits yordamida tozalashdan so'ng yakuniy PCR mahsulotlari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq, PEASY-Blunt Cloning vektorlariga alohida klonlandi. Klonlashdan so'ng ular kimyoviy jihatdan vakolatli Trans5a hujayralariga aylantirildi. Har bir namunaning uchta koloniyasi tasodifiy tanlangan va M13 primerlari yordamida ketma-ketlashtirilgan. Bu koloniyalar ABI Prism 3700 DNK analizatorlarida BigDye Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kits yordamida Sanger sekvensiyasi orqali ikki yo‘nalishda ketma-ketlashtirildi. Olingan ketma-ketliklar Clustal X(v1.8.7)[29] yordamida hizalandi va BioEdit(v.1.3.0)[30] da qo‘lda sinxronlashtirildi. Tegishli ketma-ketlik ma’lumotlaridan foydalanib, biz qo‘shni birlashma yordamida MEGA 7 dasturi yordamida filogeniyani qayta tuzdik. (NJ) usuli. Kimura 2-parametr (K2P) modelidan foydalanilgan va yuklash 1000 ta takroriy edi [31].

2.5. C. deserticolani emlash

Qumli tuproq bo'lgan qozonlarga (diametri × balandlik × pastki diametri=20 sm × 20 sm × 12 sm) uch gramm C. deserticola urug'i qo'shildi va bir tekis tarqalishini ta'minlash uchun aralashtiriladi. Nazorat guruhi qumli tuproqli shunga o'xshash idishlarga qo'shilgan 3 g C. salsa urug'idan iborat edi. Nihoyat, har bir qozonga A. canescens ekilgan va idishlar ochiq havoda joylashtirilgan. Tuproqning namligi 13 foizdan (g/g) kam bo'lganda, idishlar sug'orilgan. Tajriba Pekin, Xitoyning Zhongguancun hayotiy fanlar parkida (kenglik 39 daraja 56'N, uzunlik 116 daraja 20'E;dengiz sathidan 20m balandlikda) maydan iyulgacha o'tkazildi. Harorat kunduzi 16-35, kechasi 12-16 daraja iliq bo'ladi. Havoning nisbiy namligi 50 foizdan yuqori. Quyosh nurlari juda ko'p. Taxminan 80 kundan so'ng, tuproq qozonlardan olib tashlandi va emlash darajasi aniqlandi.

2.6. Dorivor komponentlarning kontsentratsiyasini aniqlash

Dorivor komponentlarning kontsentratsiyasini aniqlash ikki qismdan iborat bo'lib, biri suyuq xromatografiya protsedurasi, ikkinchisi esa mos yozuvlar va sinov moddasini tayyorlash, batafsilroq ma'lumotlar quyidagilar:

i). Ekinakozid va verbaskozidni aniqlash

Ekinakozid va verbaskozid tortilib, 5{1}}% metanolga qoʻshilib, 0,2 mg/ml eritma hosil boʻldi, u mos yozuvlar eritmasi sifatida ishlatilgan. Birinchisi, quruq C. desertikolni kukunga maydalash, keyin kukun 100 ml jigarrang o'lchov kolbasida 50 ml 50 foizli metanolga aralashtiriladi va aralashmani chayqash, ho'llash, sonikatsiya, tik turgandan keyin sinov suyuqligi olinadi. , va filtrlash. Xromatografik ustun Agilent ZORBAX SB-C18 ustuni (4,6 mm × 150 mm,5um), harakatchan faza sifatida metanol (A)-0,1 foiz chumoli kislotasi eritmasi (B), gradient elyusiyasi ({{14}) edi. } min,26,5 foiz A;17-20 min,26,5 foiz →29,5 foiz A; 20-27 min,29,5 foiz A), oqim tezligi 1,0 ml/min, ustun harorati 35·C, aniqlash to‘lqin uzunligi 330 nm, in'ektsiya hajmi 10 mkul edi.

ii). Betain, mannitol, fruktoza, glyukoza va saxarozani aniqlash

Betain, mannitol, fruktoza, glyukoza va saxaroza aniq tortilib, suvga qoʻshilib, {0}}, 25 mg/ml eritma hosil boʻldi, undan mos yozuvlar eritmasi sifatida foydalanildi. Yuqorida aytib o'tilgan Cistanche sinov eritmasidan besh millilitr 25 ml hajmli o'lchov kolbasida 50% metanol bilan aralashtiriladi, yaxshilab chayqatiladi va 0,2 mm mikrog'ovakli membrana bilan filtrlanadi. Xromatografik ustun SHODEXASHAIPAK NH2P-50 4E polimerizatsiyalangan jel ustuni (250 mm × 4,6 mm, 5 mkm) edi, mobil faza A. canescensda parazitlashgan, biz uning kaudat shaklidagi tomirlar to'plami qobig'iga o'xshashligini aniqladik. C. deserticola (2-rasm).

asetonitril-suv (77:23), oqim tezligi 0,7 ml/min, ustun harorati 25 daraja edi, bug'lanish nurining tarqalishi detektori (ELSD) yordamida, drift naychasining harorati 100 daraja, tashuvchisi gaz oqimi tezligi 3 L/min, mos yozuvlar moddasi va namunaning quyish hajmi 5ul edi.

3. Natijalar

3.1. Gullarni morfologik aniqlash

A. canescens parazitlik qiluvchi Cistanche turini tasdiqlash uchun gul namunalarining morfologik tahlili o'tkazildi (1-rasm va S1-rasm). Parazit oʻsimlik gullarining umumiy morfologiyasi C. deserticola gullariga oʻxshardi. Bundan tashqari, korolla turli xostlarda C.salsanikiga qaraganda qalinroq edi.

Xitoy florasining ma'lumotlariga ko'ra, C. deserticola va C.salsa gullarining ko'krak qafasida aniq farqlarga ega. C. deserticolada novdalar gul tojining pastki qismiga teng, C. salsa novdasi esa gul tojining 1/3 qismini tashkil qiladi. Bizning statistik tahlilimizga asoslanib, Cistanche novdalari A. canescensda parazitlik qilgan, C. deserticola esa gul tojiga tenglashgan (S2-rasm). A. canescensdagi Cistanche C. deserticola ning morfologik xususiyatlarini ko'rsatdi, bu C. deserticola A. canescens paraziti bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

3.2. Bo'yalgan to'qimalar namunalarini mikroskopik aniqlash

C. deserticolaning goʻshtli poyasining kesilishi C. salsa poyasiga juda oʻxshash boʻlib, ularning ikkalasi ham epidermis, qobiq, tomirlar toʻplami va chuqurchadan iborat. Ikkala o'simlikning tomir to'plamlari to'lqinsimon yoki chuqur to'lqinli halqalarda joylashgan bo'lib, chuqurchalar aniq ko'rinadi. Asosiy farq tomir to'plamining qobig'ining lateral shaklida yotadi; u C. deserticola da kaudat, C. salsada esa uchburchak yoki yarim doira shaklida boʻladi. Cistanche-da mikro tuzilma tahlilini o'tkazgandan so'ng

3.3. Molekulyar identifikatsiya

Morfologik identifikatsiyadan tashqari, biz molekulyar identifikatsiyani ham amalga oshirdik va uchta gen fragmentini tanladik, ya'ni ITS2, rbcL va psbA-trnL. Har bir fragmentning ketma-ketligi haqidagi ma’lumotlardan foydalangan holda evolyutsion daraxt qurilgan (3-rasm) va uchta filogenetik daraxt ham A.canescensda parazitlashgan Cistanche C. deserticola bilan yaqin filogenetik aloqaga ega ekanligini ko‘rsatdi. Bu natijalar C. deserticola A. canescens paraziti bo‘lishi mumkinligini ko‘rsatadi.

Turli xil Cistanche turlari o'rtasida batafsil gen farqlari bir nechta ketma-ketlikni moslashtirishda kuzatildi (4-rasm). Biz ITS2 gen tanasida C. deserticola va C.salsa, 139,295 va 472 bazalarda uchta yagona nukleotid polimorfizmini (SNP) topdik. RbcL gen tanasida C. deserticola va C. salsa o'rtasida to'rtta gen farqi bor edi. ikkita SNP va ikkita kiritish va o'chirish (indel) mutatsiyasini o'z ichiga oladi. ITS2 va rbL bilan solishtirganda, C. deserticola va C. salsa o'rtasidagi psbA-trnL gen tanasidagi farqlar aniqroq bo'lib, ettita ketma-ketlikdagi farqlar, bunda to'rttasi SNP va uchtasi InDel mutatsiyalari edi. Xususan, C. deserticola va C. salsa ni farqlash uchun oddiy ketma-ketlikni takrorlash (SSR) markerlarini ishlab chiqish uchun tekislangan ketma-ketlikning 414 bazasidan boshlangan timin takrorlarining bir qatoridan foydalanish mumkin.

3.4. C. deserticolani emlash

C. deserticola yoki C. salsa A.canescensni parazitlashtira oladimi yoki yoʻqligini tekshirish uchun inokulyatsiya tajribasi oʻtkazildi va biz C.deserticola bilan emlangan barcha qozonlarda emlash darajasi deyarli 100 foizni tashkil etgan holda parazitlik borligini aniqladik (5-rasm). Nazorat guruhlarida parazitizm kuzatilmadi. Bu natija toʻgʻridan-toʻgʻri C. deserticola A. canescensni oson parazitlashtirganini, C. salsa esa qila olmaganligini toʻgʻridan-toʻgʻri isbotlaydi.

3.5. Muhim dorivor komponentlarning kontsentratsiyasini aniqlash

Biz A. canescensda parazitlangan C.deserticoladagi muhim dorivor komponentlar kontsentratsiyasini hisobladik. Maxsus xromatogramma qo'shimcha materialda ko'rsatilgan. Aniq natijalarga erishish uchun to'rtta mustaqil eksperiment o'rnatildi. O‘lchovlarimiz asosida (3-jadval) verbaskozid va echinakozid kontsentratsiyasi Xitoy farmakopiyasida qayd etilganidan 20 baravar yuqori ekanligini aniqladik (Xitoy farmakopeyasiga ko‘ra, echinakozid konsentrasiyalari yig‘indisining ulushi). va C. deserticoladagi verbascoside 0.30 foizdan kam bo'lishi kerak). Konsentratsiyalar H. ammodendronda parazit boʻlgan C. deserticoladagiga qaraganda ancha yuqori boʻlgan (odatda 0.2-1,5 foiz)[32]. Mannitol, betain, fruktoza va boshqa uglevod komponentlarining kontsentratsiyasi ham juda yuqori bo'lib, umumiy sifati H. ammodendronda parazitlik qilgan C. deserticoladagidan yaxshiroq edi. Shunday qilib, bu natijalar A. canescens C. deserticola ni sanoat darajasida o'stirish va yo'qolib borayotgan yovvoyi resurslarni himoya qilish uchun ishlatilishi mumkinligini ko'rsatadi.

4. Munozara

Ilgari C. deserticola faqat H. ammodendronni parazit qiladi deb hisoblangan. Biroq, ushbu tadqiqotda morfologik va molekulyar identifikatsiyalash usullaridan foydalangan holda, biz C. deserticola A. canescensni ham parazitlashtirishi mumkinligini ko'rsatdik. Garchi H. ammodendron, A. canescens va H. persicum Chenopodiaceae oilasiga mansub bo‘lsa-da, C. deserticolaning tur selektivligi, ehtimol uy egasi tomonidan ajratilgan signalizatsiya molekulalari tomonidan boshqariladiganligi qiziq va o‘ziga xosdir. Amerika Qoʻshma Shtatlaridan kelib chiqqan A. canescens atrof-muhit buzilishlariga kuchli qarshilik koʻrsatadi va nisbatan katta biomassaga ega. A. canescens turli sabablarga koʻra C. deserticola uchun yashovchan xost hisoblanadi. Birinchidan, u turli xil ekologik sharoitlarda omon qolishi mumkin. Ikkinchidan, C. desertikolaning biomassasi va oʻsish tezligi H. ammodendronga qaraganda A. canescensda mos ravishda kattaroq va tez boʻlishi mumkin. Uchinchidan, A. canescensning moslashish imkoniyatlari keng boʻlganligi uchun ekish maydonini yanada kengaytirish mumkin. Shunday qilib, A. canescens xost sifatida H. ammodendronga nisbatan o'ziga xos afzalliklarga ega va C. deserticola sanoat ishlab chiqarishiga yordam beradi. C. deserticola va C. salsa ni ajratish qiyin va o'tmishda morfologik identifikatsiya qilish chalkash natijalarga olib keldi. Molekulyar biologiya sohasidagi yutuqlar bilan molekulaga asoslangan identifikatsiyalash usullari Xitoy o'simlik tibbiyotida keng qo'llanildi. Ko'pgina xitoylik o'simlik dori-darmonlari kam genomik ma'lumotni taqdim etganligi sababli, DNK shtrix-kodlash texnologiyasi identifikatsiyalashning eng yangi usuli sifatida paydo bo'ldi. Ushbu tadqiqotda noma'lum Cistanche turlarini aniqlash uchun morfologik va DNK shtrix kodlash texnologiyasi har tomonlama qo'llanildi; Bunga ilgari urinilmagan va bizning natijalarimiz bu yondashuvning amalga oshirilishi mumkinligini ko'rsatmoqda. C. deserticola A. canescens parazitlik qilgani uchun A. canescens ildizlarida C. deserticola va H. ammodendron ildizlarida sifat farqlarini aniqlash muhim ahamiyatga ega. Natijalarimiz boʻyicha, faol komponentlar konsentratsiyasi H. ammodendronda parazit boʻlgan A. canescensda parazit boʻlgan C. deserticolada yuqori boʻlgan. Shunday qilib, bizning natijalarimiz A. canescensda parazitlangan C. deserticola ni keng miqyosda ishlab chiqarish uchun mustahkam nazariy asos yaratdi.

5. Xulosalar

Uzoq vaqt davomida C. deserticola H. ammodendronni faqat parazit qiladi deb hisoblangan. Ilgari bozordan sotib olingan C. deserticola urug‘lari Chenopodiaceae o‘simligining yana bir o‘simligi A. canescens parazitlik qilishi aniqlangan. Morfologik va molekulyar identifikatsiyalash usullaridan foydalanib, A. canescens parazit qiluvchi Cistanche turi C. deserticola ekanligini tasdiqladik. Bu natija emlash tajribasi bilan yana bir bor tasdiqlandi. Biz muhim dorivor komponentlar kontsentratsiyasini aniqladik va bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, komponentlarning konsentratsiyasi va sifati H. ammodendronda parazitlangan A.canescens da parazitlashgan C,desertikolada ko'proq bo'lgan. Yangi xostlarni kashf qilish C. desertikolaning sanoat ishlab chiqarishiga yordam berishi mumkin, shuningdek, yovvoyi resurslar va ekologik muhitni samarali himoya qilishi mumkin.

Deklaratsiyalar

Muallif hissasi bayonoti

Fangming Vang: Tajribalarni o'ylab topdi va loyihalashtirdi; Tajribalarni o'tkazdi; Ma'lumotlarni tahlil qilish va sharhlash; qog'oz yozdi.

Bingyu Zhuo, Yuan Chjan, Qingliang Chen, Ziyi Shi & Yuelin Song: Tajribalarni amalga oshirdi.

Shuai Vang va Jin Lou: hissa qo'shgan reagentlar, materiallar, tahlil vositalari yoki ma'lumotlar.

Pengfei Tu: Tajribalarni o'ylab topdi va loyihalashtirdi.

Moliyalashtirish bayonoti

Fangming Vang Xitoyning Milliy asosiy tadqiqot va rivojlanish dasturi (2019YFC1710903) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Dr.Pengfei Tu Xitoyning Milliy tabiiy fanlar jamg'armasi (8177140819) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Ma'lumotlar mavjudligi to'g'risidagi bayonotlar

Ma'lumotlar so'rov bo'yicha taqdim etiladi.

Manfaatlar deklaratsiyasi

Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilmaydi.

Ma'lumotnomalar

[1] DY Tan, QS Guo, CL Vang, Cistanche deserticola status-kvosi va uning Xitoyda ekspluatatsiyasi va ishlatilishini o'rganish, For. Resurs. Boshqarmoq. 33 (2004) 29–32. [2] XY Qiao, HL Vang, YH Guo, Cistanche urug'ining unib chiqishi shartlari bo'yicha tadqiqot, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 32 (2007) 1848-1850.

[3] PF Tu, YP He, ZC Lou, Cistanche, Chinning kelib chiqishi va manbalarini himoya qilish bo'yicha so'rov. An'ana. O't. Giyohvand moddalar 25 (1994) 205-208.

[4] LD Karalliedde, CT Kappagoda, allopatik amaliyotchilar uchun an'anaviy xitoy dori-darmonlarining muammosi, Am. J. Fiziol. Yurak aylanasi. Fiziol. 297 (2009) 1967–1969.

[5] Y. Jiang, PF Tu, Cistanche turlarida kimyoviy tarkibiy qismlarning tahlili, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979 yillar.

[6] T. Vang, XY Zhang, WY Xie, Cistanche deserticola YC Ma, "cho'l ginseng": sharh, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[7] NCOC Pharmacopoeia, Xitoy Xalq Respublikasi Farmakopeyasi, The Chemical Industry Press, Pekin, 2020 yil.

[8] GX Meng, XS Cui, Y. Wu, YH Guo, Leveillula saxaouli ning Haloxylon ammodendronning o'sishi, xlorofill va uglevodiga ta'siri, Shimoliy. Hortic. 14 (2012) 141–143.

[9] YC Chen, M. Li, MZ Wu, YX Song, Haloxylon Bunge, Plant Physiol ikki turdagi ildizlarning tuzilishi va tarkibi. J. 49 (2013) 1273–1276.

[10] PF Tu, Y. Jiang, YH Guo, YZ Tian va boshqalar. G'arbiy cho'l mintaqasining ekologik sivilizatsiyasini targ'ib qilish uchun Cistanches herba ekologik sanoatini rivojlantirish, Mod. Chin. Med. 4 (2015) 297–301.

[11] SC Sanderson, HC Stutz, Mojavean va Sonoran cho'llarida yuqori xromosoma raqamlari Atriplex canescens (Chenopodiaceae), Am. J. Bot. 81 (1994) 1045–1053 yillar.

[12] JL Peterson, DN Ueckert, RL Potter, JE Huston, G'arbiy Texasdagi tanlangan to'rt qanotli sho'r populyatsiyalarida ekotipik o'zgarishlar, J. Range Manag. 40 (1987) 361–366.

[13] DS Kong, Atriplex canescens ning morfologik xususiyatlari va eko-fiziologik moslashuvi, Chin. J. Ekol. 32 (2013) 210–216.

[14] MA Bashir, MS Faezah, SSO Mohd, W. Alina, Ko'rib chiqish: o'simlik dorivor mahsulotlardagi botanikalarning autentifikatsiyasi uchun DNK shtrix-kodlash va xromatografiya barmoq izlari. Evid. Asoslangan to‘ldiruvchi, muqobil. Med. 2017 (2017) 1–28.

[15] XW Li, Y. Yang va boshq., O'simlik DNK shtrix kodlash: gendan genomga, Biol. Vahiy 90 (2015) 157–166.

[16] SL Chen, H. Yao, JP Han va boshq., ITS2 hududini dorivor oʻsimlik turlarini aniqlash uchun yangi DNK shtrix-kodi sifatida tekshirish, PloS One 5 (2010), e8613.

[17] K. Luo, SL Chen, KL Chen va boshqalar, Rutaceae oilasidan foydalangan holda nomzod o'simlik DNK shtrix kodlarini baholash, Sci. Xitoy hayot fanlari. 53 (2010) 701–708.

[18] T. Gao, H. Yao, JY Song va boshqalar, potentsial DNK shtrix-kodi ITS2, J. Ethnopharmacol yordamida Fabaceae oilasidagi dorivor o'simliklarni aniqlash. 130 (2010) 116–121.

[19] T. Gao, H. Yao, JY Song va boshq., Katta Asteraceae oilasining turlarini kamsitishda nomzod DNK shtrix kodlaridan foydalanishning maqsadga muvofiqligini baholash, BMC Evol. Biol. 10 (2010) 324.

[20] XH Pang, JY Song, YJ Zhu va boshqalar, Euphorbiaceae, Planta Med ichidagi turlarni aniqlash uchun DNK shtrix kodidan foydalanish. 76 (2010) 1784–1786.

[21] XH Pang, JY Song, YJ Zhu va boshq., Rosaceae turlarini aniqlash uchun o'simlik DNK shtrix kodlarini qo'llash, Cladistics 27 (2011) 165-170.

[22] PD Hebert, EH Penton, JM Berns, DH Janzen, W. Hallwachs, o'n tur birida: DNK shtrix kodlash neotropik kapalak Astraptes fulgurationda sirli turlarni ochib beradi, Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 101 (2004) 14812–14817.

[23] MW Chase, RS Cowan va boshq., Barcha quruqlikdagi o'simliklarni shtrix kodlash uchun standartlashtirilgan protokol bo'yicha taklif, Taxon 56 (2007) 295–299.

[24] WJ Kress, DL Erikson, quruqlikdagi o'simliklar uchun ikki nuqtali global DNK shtrix kodi: kodlovchi rbcL geni kodlanmagan trnH-psbA spacer mintaqasini to'ldiradi, PloS One 2 (2007) e508.

[25] DL Erickson, J. Spouge, A. Resch va boshqalar, quruqlikdagi o'simliklarda DNK shtrix kodlash: muvaffaqiyatni maksimal darajada aniqlash uchun standartlarni ishlab chiqish, Taxon 57 (2008) 1304-1316. [26] NC Kane, Q. Cronk, Chegarasiz botanika: diqqat markazida shtrix kodlash, Mol. Ekol. 17 (2008) 5175–5176.

[27] R. Lahaye, M. van der Bank, D. Bogarin va boshqalar, biologik xilma-xillik issiq nuqtalarining florasini shtrixli DNK, Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 105 (2008) 2923–2928.

[28] N. Kane, S. Sveinsson, H. Dempewolf va boshqalar, butun xloroplast genomlari va yadroviy ribosoma DNKsi yordamida kakaoda (Theobroma spp.; Malvaceae) ultra shtrixli kodlash, Am. J. Bot. 99 (2012) 320–329.

[29] JD Tompson, TJ Gibson, F. Plevniak, F. Janmujin, DG Xiggins, CLUSTAL_X Windows interfeysi: sifat tahlili vositalari yordamida bir nechta ketma-ketlikni moslashtirish uchun moslashuvchan strategiyalar, Nuklein kislotalari Res. 25 (1997) 4876–4882.

[30] TA Hall, BioEdit: Windows 95/98/NT, Nucl uchun foydalanuvchilarga qulay biologik ketma-ketlikni moslashtirish muharriri va tahlil dasturi. Kislotalar Simp. Ser. 41 (1999) 95–98. [31] S. Kumar, M. Nei, J. Dadli, K. Tamura, MEGA: DNK va oqsil ketma-ketliklarini evolyutsion tahlil qilish uchun biologga asoslangan dasturiy ta'minot, qisqacha. Bioinform. 9 (2008) 299–306.

[32] PF Tu, B. Vang, T. Deyama, ZG Zhang, ZC Lou, RP-HPLC, Acta Pharm tomonidan Herba cistanchening feniletanoid glikozidlarini tahlil qilish. Sinica. 32 (1997) 294–300.