Aspergillus Favus "Jojoba endofiti" Taxolning ‑Nurlanish vositasida oltin nanozarrachalar bilan konjugatsiya orqali saratonga qarshi faolligini oshirish Ⅱ
May 30, 2023
A. favus Taxolning kimyoviy o'ziga xosligi va saratonga qarshi faolligi
ning taxminiy TLC nuqtalariA. favusTaxol parchalanib, metanolda eritildi,va birikmaning kimyoviy xossalari turli HPLC dan hal qilindi,HNMR va FT-IR xromatografik va spektroskopik tahlillar. Proton yadroviy magnitrezonans signallari (1 H NMR) ningA. favusqazib olingan Taxol 1.0 orasida taqsimlangan.va 8.0 ppm, uchta hal qilingan proton signallari 1.0–3.0 ppm da metilga mos keladi,atsetat va asetilen guruhlari, proton signallari esa 6,5–9.0 ppm da mos keladi.aromatik qismlar (1-rasm).3). Proton signallarining shakli va taqsimlanishiA. favusTaxol namunaning strukturaviy o'ziga xosligini va standart bilan o'xshashligini tasdiqlaydiTaxol (rasm.3). Bundan tashqari, Taxol ofA. favushaqiqiy Taxolning bir xil FTIR spektrlariga ega.Cho'qqisi 3393,3 sm−1gidroksil (OH) uchun tayinlangan, cho'qqisi esa 2923,5 edialifatik CH cho'zilishi uchun tayinlangan, cho'qqilari 1661.0 sm.−1C=O ga mos keladicho'zish chastotasi. Kuzatilgan cho'qqilar 1452.0 sm−1va 1404.0 ga havola qilinganNH cho'zilish chastotasi, cho'qqisi esa 1109,0 sm−1karbonil guruhiga ishora qiladikislorodning cho'zilish chastotasi. 1020,0 va 979,77 sm oralig'idagi cho'qqilar−1ediaromatik C va H burmalari mavjudligiga ishora qilinadi. Xulosa qilib aytganda, spektral naqshning funktsional guruhlari bo'yicha FTIRA. favusTaxol haqiqiy bilan bir xil ediTaxol (rasm.3). Xromatografik va spektral tahlillardan xulosa qilib, taxminiynamuna haqiqiy bilan solishtirganda Taxol birikmalari sifatida hal qilindi va autentifikatsiya qilindibirikma.
Xitoy o'simliklari Cistanche bilan tanishish uchun shu yerni bosingAntiproliferativ faoliyat
A. favus tomonidan har xil turdagi vositalarning taksol ishlab chiqarishga ta'siri
Taxol ishlab chiqarishga o'rtacha tarkibning ta'siriA. favusbaholandiPDB, M1D, Czapek's-Dox va solod ekstraktida etishtirish orqali. Madaniy inkubadan keyinTaxol “Materiallar va usullar” bo‘limida tavsiflanganidek qazib olindi va miqdori aniqlandi. Dannatijalar shakl.4tomonidan eng yuqori Taxol hosildorligiA. favussolodda yetishtirish orqali olinganekstrakti (170 µg/l) va Czapek's-Dox (166 µg/l), nazorat sifatida PDB o‘sish muhitiga nisbatan(89 mkg/l). Shunday qilib, tomonidan Taxol hosildorligiA. favustaxminan 2 barobarga oshdinazorat muhitiga nisbatan Czapek's-Dox va solod ekstrakti muhitida o'sishi bilan.Shunday qilib, Taxol rentabelligini maksimal darajada oshirish uchun keyingi optimallashtirish tadqiqotlariA. favusjavob orqalisirt metodologiyasi statistik yondashuv amalga oshirildi.
Response Surface Metodology yordamida bioproses o'zgaruvchilarni optimallashtirishKritik omillar uchun Plackett-Burman dizayn skriningi
tomonidan Taxol hosildorligiA. favusning statistik eksperimental dizayni bilan optimallashtirilganPlackett-Berman [18, 28]. Tanlangan parametrlarning minimal va maksimal diapazonlariPlackett-Burman dizayni bo'yicha tanlanganlar Jadvalda jamlangan2. Taxol konsentratsiyasi ediTLC va HPLC tomonidan belgilanadi. Barcha tajribalar o'tkazildi
Taxolning o'rtacha kontsentratsiyasi hisobga olingan. Ushbu dizaynning statistik tahlili buni ko'rsatadithat the model F-value of 5.98 implies the model is significant and values of "Prob>F" kamroquch nusxada bajariladi vaJadvalda qayd etilganidek, 0.0500 dan ortiq3. ga javoban Taxolning haqiqiy va bashoratli hosildorligiPlackett-Burman dizaynidan aniqlangan eksperimental parametrlarJadvaldagi matritsa4. 0.3061 "Pred R-squared" "Adj R-squared" ga unchalik yaqin emas.ning 0.5760. Maksimal haqiqiy (255,35 mkg/l) va bashorat qilingan(280,4 mkg/l) bo'yicha Taxol unumiA. favusPlackett-Burman dizayni bo'yicha faktoriy dizayn asosida№ 8 yugurishda olingan. Olingan ma'lumotlardan (rasm.4), eng yuqori Taxol hosildorligiA. favus(225 mkg/l) solod ekstrakti (20 g/l), pepton (2 g/l), saxaroza (20 g/l), soyton yordamida olingan.(2 g/l), sistein (0,5 g/l), glutamin (0,5 g/l), mol go‘shti ekstrakti (1 g/l), inkubatsiya haroratida30 daraja, dastlabki pH 6,0 va 12 kunlik inkubatsiyadan keyin chayqalish tezligida (150 rpm). Ushbu madaniyatdayugurish (12), tomonidan Taxol hosildorligiA. favussezilarli darajada qariyb 1,4 baravar oshdi,nazorat muhitiga nisbatan (170 mkg/l). Modelni qisqartirish, javobni o'zgartirish,va Adeq Precision signal-shovqin nisbatini o'lchaydi va bu nisbat 4 dan katta bo'lishi ma'qul.[46]. Hisoblangan parametr asosida va ko'p regressiya tahlilini qo'llash orqalieksperimental ma'lumotlar, test o'zgaruvchilari va javob o'zgaruvchilari quyidagilar bilan bog'liq edimodel tenglamasi: kodlangan omillar bo'yicha birinchi tartibli tenglama — Taxol Con.= plyus 11,51 plyus 1,91E plyus 2,92 J plyus 0,81 K. Taxolning haqiqiy va taxmin qilingan darajalariA. favusPlackett-Bur ustidaInsonni optimallashtirish bioprotsessi Jadvalda jamlangan4va shakl.4. Maksimal haqiqiy(255,35 mkg/l) va prognoz qilingan (280,4 mkg/l) Taxol unumdorligiA. favustomonidan faktoriy dizayn asosidaPlackett-Burman dizayni o'rta komponentda №8 yugurishda olingan. Indining ta'siriPlackett-Burman dizaynidan aniqlangan vidual parametrlar Paretoda aks ettirilganTaxol ishlab chiqarishda ishtirok etuvchi o'zgaruvchilarning ahamiyatlilik tartibini tasvirlaydigan diagramma shakl.4. Shunday qilib, Taxol unumdorligiga ta'sir qiluvchi eng muhim o'zgaruvchilarA. favussistein edi,Plackett-Burman dizaynidan aniqlanganidek, pH va inkubatsiya vaqti.
Qarama-qarshi markaziy kompozit dizayn yordamida keyingi optimallashtirish tadqiqotlari uchun qabul qilindiPlackett-Burman dizaynidan muhim o'zgaruvchi. Uchdan 20 ta yugurish natijalariijobiy ta'sir ko'rsatadigan o'zgaruvchilar Taxol ishlab chiqarish sezilarli darajada diversifikatsiyalanganligini ko'rsatdiholati bilan 96,5-302,7 mkg/l oralig'ida sinovdan o'tkazildi. Maksimal rentabellikTaxol tomonidanA. favus(302,7 µg/l) sistein (0,50 g/l) yordamida pH 6,0 da kuzatilgan va inkubatsiya qilingan.Jadvalda ko'rsatilganidek, 15 kun davomida5. Minimal Taxol ishlab chiqarish da qayd etilgan15-sonli ishga tushirish, bu erda sistein (1.{2}} g/L) pH 7.0 va 7 kun davomida inkubatsiya qilinadi. Statistikchiziqli model dizayni tahlili F-qiymati 87,08 ekanligini ko'rsatadisignificance of the model, and the values of "Prob>F" 0.050 dan kichik boʻlsa, bu modelni bildiradiatamalar muhim (jadval6). Shuning uchun sistein, pH va inkubatsiya vaqti muhim ahamiyatga egamodel shartlari. Tahlil shuni ko'rsatdiki, 0.8972 "Pred. R-squared" o'rtacha darajada.0.9315 "Adj. R-Squared" bilan kelishuv. 30.800 o'lchovli "Adeq. Precision" nisbatisignal-to-shovqin nisbati, chunki to'rtdan katta nisbat ma'qul, Adeq.CCD tajribasidan olingan natijalar ANOVA tomonidan tahlil qilindi va natija berdiTaxol ishlab chiqarish darajasida quyidagi regressiya tenglamasi: birinchi tartibli model ekvakodlangan omillarning tion shartlari — Taxol Conc.{{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Uch o'lchovlieng muhim o'zaro ta'sirlarning ta'sirini ko'rsatadigan javob yuzasi egri chiziqlariCant parametrlari, sistein, pH va inkubatsiya vaqti rasmda ko'rsatilgan.4.
2-jadvalMinimal va maksimaltanlangan parametrlar oralig'ioptimallashtirish uchun P-BD daTaxol ishlab chiqarish
4-jadvalTaxol ishlab chiqarishga ta'sir qiluvchi omillarni baholash uchun Plackett-Burman dizayniA. favus
ijobiy ta'sir ko'rsatadigan o'zgaruvchilar Taxol ishlab chiqarish sezilarli darajada diversifikatsiyalanganligini ko'rsatdi96,5–302,7 mkg/l oralig'ida sinovdan o'tgan holat bilan. Maksimal rentabellikTaxol tomonidanA. favus(302,7 µg/l) sistein (0,50 g/l) yordamida pH 6,0 da kuzatilgan va inkubatsiya qilingan.Jadvalda ko'rsatilganidek, 15 kun davomida5. Minimal Taxol ishlab chiqarish da qayd etilgan15-sonli ishga tushirish, bu erda sistein (1.{2}} g/L) pH 7.0 va 7 kun davomida inkubatsiya qilinadi. Statistikchiziqli model dizayni tahlili F-qiymati 87,08 ekanligini ko'rsatadisignificance of the model, and the values of "Prob>F" 0.050 dan kichik boʻlsa, bu modelni bildiradiatamalar muhim (jadval6). Shuning uchun sistein, pH va inkubatsiya vaqti muhim ahamiyatga egamodel shartlari. Tahlil shuni ko'rsatdiki, 0.8972 "Pred. R-squared" o'rtacha darajada.0.9315 "Adj. R-Squared" bilan kelishuv. 30.800 o'lchovli "Adeq. Precision" nisbatisignal-to-shovqin nisbati to'rtdan katta nisbati ma'qul, Adeq.CCD tajribasidan olingan natijalar ANOVA tomonidan tahlil qilindi va natija berdiTaxol ishlab chiqarish darajasida quyidagi regressiya tenglamasi: birinchi tartibli model tenglamasikodlangan omillar shartlari — Taxol Conc.{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Uch o'lchovlieng muhim o'zaro ta'sirlarning ta'sirini ko'rsatadigan javob yuzasi egri chiziqlariparametrlari, sistein, pH va inkubatsiya vaqti shaklda ko'rsatilgan.4.
Plackett-Burman dizayni bo'yicha RSM dan olingan o'zgartirilgan solod ekstrakti muhiti. Keyinstandart sharoitlarda madaniy inkubatsiya, Taxol ekstraksiya qilingan va TLC tomonidan miqdori aniqlanganva HPLC. Olingan natijalardan (S1-rasm) Taxol pro ga sezilarli ta'sir ko'rsatilmaganturli dozalarda nurlanishda o'tkazuvchanlik.
AuNP sintezi va A. favus Taxol bilan konjugatsiya ‑ Radiatsiya vositasida
Polivinilpirolidon(PVP) bilan qoplangan oltin nanozarrachalar (AuNP) sintez qilindiPVP ni oltin (III) xlorid bilan aralashtirish orqali, dozalarda gamma nurlanish vositasida{0}},25–10,0 kGy va ishlab chiqilgan PVP-AuNPlar UV-Vis, FT-IR,va XRD tahlillari. Taxol-PVP-AuNPs konsorsiumining shakllanishining eskizi ko'rsatildirasmda.5. 1.0 kGy gamma nurlari vositachiligida ishlab chiqilgan PVP-AuNPlarning oʻlchami kuzatildi.DLS tomonidan va u taxminan 50 nm edi (1-rasm).5). HRTEM tasviridan kutilgansintez qilingan AuNP larning shakli va o'lchami ichidagi sharsimon zarralar bilan ko'rsatildinano o'lchov oralig'i 20 dan 30 nm gacha, o'rtacha asosiy diametri 25 nm (1-rasm).5). Shunga o'xshash natijalar gamma-nurlanish vositachiligidagi PVP-AuNPlar bilan kuzatilgan.49, 50]. Gammaning turli dozalariga javoban ishlab chiqilgan AuNPlarning spektral xususiyatlarinurlar maksimal qayd etilgan yutilish spektri bilan UV-Vis tahlilidan baholandil da540nm 1,5–3.0 kGy. Bundan tashqari, AuNPlarning rivojlanishi kuzatildivizual tekshiruvdan, shakllanishni ochib beradigan sarg'ish-jigarrang rangga egaAuNPs.
Taxol va PVP-AuNPlarning kimyoviy konjugasiyasi FT-IR spektridan tekshirildi.ning intensivligi va uzatish nisbatining biroz o'zgarishi bilan aniqlangan tahlilTaxol-PVP-AuNP konjugatlarining funktsional guruhlari nazorat sifatida Taxol bilan solishtirganda.Cho'qqining intensivligi 3393,3 sm−1Taxol-PVP tarkibidagi gidroksil (OH) uchun tayinlanganAuNPs konsortsiumi mahalliy Taxol bilan solishtirganda qariyb 3 baravar ko'paydi.gidroksil guruhlarida kimyoviy cho'zilish (1-rasm).5). Shuningdek, cho'qqilarning intensivligi1661.0 sm−1C=O ni nazarda tutadigan bo'lsak, cho'zish chastotasi taxminan 10 ga oshdiPVP-AuNPs bilan konjugatsiya natijasida buklanib, C=O bog'larining cho'zilishini ta'minlaydi. TheAlifatik CH cho'zilishiga mos keladigan 2923,5 cho'qqining intensivligi ancha barqaror edi. A1452.0 sm da kuzatilgan choʻqqilarning intensivligi boʻyicha biroz oʻzgarish.−1va 1404,0 sm−1bo'lganNH cho'zilish chastotasi tufayli kuzatiladi. Tepalikning intensivligi 1109,0 sm−1ningbilan konjugatsiya qilinganda karbonil guruhi-kislorodning cho'zilish chastotasi biroz kamaydiPVP-AuNPlar.
PVP-AuNPs bilan konjugatsiya qilinganda taksolning kristall/fizik tuzilishiXRD tahlili natijasida hal qilinadi (1-rasm).5). XRD dan Taxol-PVP-AuNPs consortium mahalliy bilan bir xil strukturaviy konfiguratsiyaga, kristall yo'nalishiga va o'lchamiga ega ediTaxol, mahalliy Taxolning kristal tuzilishiga salbiy ta'sir ko'rsatmasligini ta'minlaydi. Kimdannatijalari, Taxol-PVP-AuNP ning amorf va kristall tuzilishi bilan solishtirganda.mahalliy Taxol tasdiqlangan. XRD tahlilidan, Taxol konjugasiyasi vaPVP-AuNPlar diffraktsiya xususiyatlaridan aniqlanganidek hal qilindi2μ=38.18 daraja , 44.01 daraja , 64.57 daraja , 77.67 daraja va 81.74 daraja Bragg kuzatuvlarini tasvirlab berdida (111), (200), (220), (311) va (222). Barcha cho'qqilar ideal bilan bog'liq ediAuNPs (JCPDS) chang diffraktsiya standartlari (JCPDS) bo'yicha qo'shma qo'mitasining kartasikarta № 04–0784) [51]. Shunday qilib, sintez qilingan AuNP kristallarining kuchi ko'rsatildi,yuzga markazlashtirilgan kubik (fcc) kristalli strukturani ta'minlash. Bundan tashqari, oddiy borTaxol uchun 19,25 gradusda amorf cho'qqisi tashkil etilishi va doimiyligiga kiradi.AuNPs. XRD namunasi Taxol va PVP-AuNPlarning muvaffaqiyatli konjugatsiyasini tasdiqladi.Birlashtirilgan AuNPlarning o'rtacha kristallit hajmi Sherrer tomonidan aniqlangan.tenglama [52], va gamma vositachiligida Taxol-PVP-AuNPs konsortsiumi uchun 20,2 nm edi.tenglamada ko'rsatilgan nurlar:
Bu erda D - kristallitning o'rtacha kattaligi, maksimal yarmida to'liq kenglik, l - rentgen nurlarito'lqin uzunligi, th - Bragg burchagi,vak doimiydir.
Taxol-PVP-AuNP konjugatlarining saratonga qarshi faolligi
TheTaxol-PVP-AuNPlarning antiproliferativ faolligikonjugatlar qarshi baholandiHEPG-2 va MCF-7 hujayra liniyalari, mahalliy Taxol va AuNPs uchun normallashtiriladi, alohida. Kimdannatijalar (rasm.6), Taxolning bioaktivligi konjugatsiyadan keyin keskin oshdinazorat sifatida mahalliy Taxol bilan solishtirganda AuNPs bilan. ICdan ma'lum bo'lishicha50qadriyatlar, Taxol-PVP-AuNPs konsortsiumi HEPG-2 (2,2 µg/ml) vaMCF-7 (3,3 µg/ml) mahalliy Taxol va AuNPs bilan solishtirganda alohida. Shunday qilib, konjugatsiya bo'yichaAuNPlar bilan Taxol faolligi sinovdan o'tgan hujayra liniyalariga nisbatan ikki baravar oshdi.AuNPlarning bioaktivligiga kelsak,antiproliferativ faollikTaxol-PVP-AuNPskonsortsium nazorat sifatida AuNPlarga nisbatan taxminan 4 baravar ko'paydi. Qizig'i shundaki,Taxol-AuNPs konsorsiumining faoliyati haqiqiy Taxol bilan mos edi.
Antimikrobiyal faollik Taxol va Sintezlangan AuNPs turli xillarga qarshiMikroorganizmlar
amikroblarga qarshi faollikqazib olinganlardanA. favusTaxol va Taxol-AuNPs konsortsiumiTurli xil ko'p dori-darmonlarga chidamli bakteriyalar va zamburug'larga qarshi baholandi (jadval7). Konjugatsiya bo'yichaAuNP bilan solishtirganda Taxolning mikroblarga qarshi faolligi sezilarli darajada oshdiinhibisyon diametridan aniqlanganidek, mahalliy Taxol va AuNPs uchun alohidatekshirilgan mikroorganizmlar zonalari (1-rasm).6). Shaklda ko'rsatilganidek.6, Taxol-AuNPS konsortiumga qarshi eng yuqori faollikni ko'rsatdiE. aglomeratlar(11 mkg/ml),C. albikanlar (12 µg/ ml), vaE. coli(14 µg/ml), mahalliy bilan solishtirgandaA. favusTaxol va haqiqiy. TheAuNP bilan konjugatsiyalanganda Taxolning yuqori faolligi bioavailabilityni tasdiqlaydi,eruvchanligi va Taxolning in vivo maqsadli tubulin oqsili bilan bog'lanish samaradorligi.
KO'PROQ MA'LUMOT:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950
