Sevofluranni qisqacha inhalatsiyalash neonatal kalamushlarda gipoksik-ishemik miya shikastlanishidan keyin glial chandiq hosil bo'lishini kamaytirishi mumkin 2-qism

Haqiqiy vaqtda PCR

Jarrohlikdan so'ng 12, 24 va 48 soatlarda TRIzolreagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, AQSh) yordamida chaqaloqlarning hipokampal to'qimalaridan jami RNK ajratildi. Qo'shimcha DNK ilg'or Superscript II RT-PCR to'plami (Invitrogen) yordamida sintez qilindi.

Gipoksik-ishemik shikastlanish deganda yurak-qon tomir va serebrovaskulyar tizimlarning buzilishi natijasida miya ishemiyasi, gipoksiya, metabolizm buzilishi va nerv hujayralarining shikastlanishi natijasida yuzaga keladigan patologik holat tushuniladi. Ijtimoiy taraqqiyot va turmush tarzi o'zgarishi bilan hipoksik-ishemik shikastlanish tobora keng tarqalgan. Bu holat inson salomatligiga ko‘p zarar keltirishi, jumladan, aqli va xotirasiga ta’sir qilishi mumkin.

Gipoksiya va ishemiya miya faoliyatining pasayishiga olib kelishi mumkin bo'lsa-da, bu xotiraga salbiy ta'sir qiladi degani emas. Aksincha, biz to'g'ri usullar orqali xotirani yaxshilashimiz va miya samaradorligini oshirishimiz mumkin. Xotirani yaxshilashning ba'zi usullari:

1. Sog'lom ovqatlanish: dietaning xotiraga ta'siri juda muhimdir. Protein, vitaminlar va minerallarga boy oziq-ovqatlar asab tizimi va fikrlash funktsiyasini sog'lom saqlashga yordam beradi.

2. Ko'proq mashq qiling: Jismoniy mashqlar qon aylanishini rag'batlantirishi, kislorod oqimini oshirishi, tananing immunitetini oshirishi va kasallik xavfini kamaytirishi mumkin. Jismoniy mashqlar yordamida siz xotirani yaxshilashingiz mumkin.

3. O‘ziga bo‘lgan ishonchni mustahkamlash: Ishonch inson xotirasining muhim omilidir. Agar siz ma'lum bir vazifani bajarishingiz mumkinligiga ishonsangiz, siz xohlagan natijalarga osongina erishasiz, shuningdek, xotirangizni samarali ravishda yaxshilashingiz mumkin.

Ko'rinib turibdiki, gipoksik-ishemik shikastlanish inson xotirasini muqarrar ravishda buzadigan holat emas. To'g'ri usullarni o'zlashtirib, miyamizga yaxshi g'amxo'rlik qilsak, sog'lom kelajakka ijobiy munosabatda bo'lamiz. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche deserticola xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche deserticola antioksidant, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirga ega, bu miyadagi oksidlanish va yallig'lanish reaktsiyalarini kamaytirishga yordam beradi va shu bilan miyani himoya qiladi. asab tizimining salomatligi. Bundan tashqari, Cistanche deserticola asab hujayralarining o'sishi va tiklanishiga yordam beradi, shu bilan neyron tarmoqlarning ulanishi va funktsiyasini oshiradi. Ushbu ta'sirlar xotira, o'rganish va fikrlash tezligini yaxshilashga yordam beradi, shuningdek, kognitiv disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarning rivojlanishiga to'sqinlik qilishi mumkin.

Miya faoliyatini yaxshilash yo'llarini bilish tugmasini bosing

Flüoresan SYBR Green I bo'yog'i (SYBR Green PCRMaster Mix, Applied Biosystems, Foster City, CA, AQSH) va 1 mkl teskari transkripsiyalangan komplementar DNK HIF{2}}maxsus primerlari bilan real vaqtda PCR orqali DNK sintezini aniqlash uchun ishlatilgan.

Rotor genini real vaqtda DNK kuchaytirish tizimida (Korbett Research, Sidney, Avstraliya) PCR quyidagi tsikllar bilan amalga oshirildi: 15 daqiqa davomida 95 daraja denaturatsiya; 95 graduslik 40 tsikl (20 soniya), 25 soniya davomida 58 daraja tavlanish. , va 35 soniya davomida 72 daraja pastga torting. Floresan mahsulotining monitoringi uzoq vaqt davomida 72 daraja haroratda amalga oshirildi.

Rotor genini tahlil qilish dasturi (Corbett Research) GAPDH uy xo'jaligi genini standartlashtirish va nisbiy gen ifodasini aniqlash uchun ishlatilgan. Barcha primer ketma-ketliklari 1-jadvalda ko'rsatilgan.

Nissl bo'yash
Sichqonlarning miyalari immunohistokimyo uchun yuqorida tavsiflangan operatsiyadan 28 kun o'tgach, tilimlarga tayyorlandi. Har bir miya ketma-ket bo'lingan va Nissl bo'yash uchun miyaning uchta o'xshash bo'limi tanlangan.

Nikon C1 raqamli mikroskop kamerasi (Nikon Corporation, Tokio, Yaponiya) yordamida gippokampal CA1, CA3 va DGareasning odatiy mikrofotosuratlari olingan. Uchta bo'limning har birida hisoblangan bir nechta hujayralar ko'r-ko'rona ImageJ dasturi yordamida amalga oshirildi.

Xulq-atvor testlari

Kalamushlar 3 haftada sutdan ajratildi, uchdan beshtagacha guruhga bo'lindi va guruh topshirig'iga ko'ra qafaslarda saqlangan. Xulq-atvori sinovlari P28-P33 (ya'ni operatsiyadan keyin 21-26 kun o'tgach) kalamushlarda, avval aytib o'tilganidek (Vang va boshq., 2019a) o'tkazildi. ) lekin biroz o'zgartirish bilan. Kemiruvchilarning xulq-atvoriga estrus tsiklining ta'sirini istisno qilish uchun faqat erkak kalamushlar sinovdan o'tkazildi.

Morris suv labirint

Morris suv labirint testi P28-P33 kalamushlarining fazoviy o'rganish va xotira qobiliyatlarini baholash uchun ishlatilgan (Vang va boshq., 2019a).

Sinov ikki bosqichdan iborat bo'ldi, shu jumladan trening bo'limi va fazoviy qidiruv testi. Ketma-ket 5 kun davomida har kuni ertalab soat 8:00 da boshlangan to'rtta mashg'ulot bo'limi o'tkazildi. Platformani aniqlash testini o'tkazish uchun har bir guruhdan 10 ta kalamush hovuz devoriga qaragan holda turli joylarda suvga joylashtirildi.

Agar kalamush platformani 90 soniya ichida muvaffaqiyatli aniqlagan bo'lsa, u platformada 20 soniya turishga majbur bo'ldi va platformani aniqlash uchun ketgan vaqt qochish kechikishi sifatida qayd etildi. Sinovning har bir bosqichi 90 soniyani tashkil etdi va qochishning kechikishi kalamush suvga joylashtirilganidan platformaga muvaffaqiyatli chiqishgacha bo'lgan vaqt sifatida o'lchandi.

Agar kalamush 90 soniya ichida platformani topa olmasa, yozib olish toʻxtatildi va oʻrganish va xotira boʻyicha koʻrsatmalar bajarildi (tajribachi kalamushni platformaga yoʻnaltirish uchun uzun tayoqchadan foydalangan va ularga platformada 20 soniya davomida oʻrganishga imkon bergan). Sinov davomida sahnaga chiqa olmagan kalamushlarning qochish kechikishi 90 soniya sifatida qayd etildi.

Sinovning oltinchi kunida amalga oshirilgan fazoviy prob sinovida platforma olib tashlandi va kalamush qarama-qarshi kvadrantga joylashtirildi va 90 soniya davomida suzishga ruxsat berildi. Suzish tezligi, qochishning kechikishi va platforma avval joylashgan joydan necha marta oʻtganliklari video kuzatuv tizimi (Shanghai MobileDatum Ltd., Shanxay, Xitoy) tomonidan qayd etilgan.

To'xtatib turish testi

Har kuni soat 15:00 dan boshlab ularning motor funktsiyasini baholash uchun P28-P32 kalamushlarida suspenziya sinovi o'tkazildi. Diametri 0.5 sm bo'lgan gorizontal plastik arqon erdan 45 sm masofada joylashtirildi va kalamushlar plastik arqonni ikkala yuqori oyoq-qo'llari bilan ushlab turishlari uchun yo'naltirildi, shu vaqtning o'zida kalamushning yiqilishigacha bo'lgan vaqt o'lchandi. Suspension kechikish. Sinov quyidagi hollarda tugaydi: (i) kalamush yiqilib tushsa; (ii) suspenziyaning kechikishi 60 soniyadan ko'proq edi; yoki (iii) arqon orqa oyoq-qo'llardan ushlangan.

Ochiq maydon testi

Ochiq dala sinovi P28 kalamushlarda pleksiglas qutidan (100 sm × 100 sm; Borj Sanat, Tehron, Eron) tashkil topgan tashqi jihozlardan foydalangan holda, 45- sm balandlikdagi devor bilan o'ralgan, pol 16 kvadratga bo'lingan holda o'tkazildi. Markaziy maydon arena markazidagi 50 sm × 50 sm maydon edi. Har bir kalamush alohida-alohida arenaning markaziga joylashtirildi va 10 daqiqa davomida cheklovsiz kashf qilish uchun ruxsat berildi.

Video kuzatuv tizimidan (Borj Sanat) umumiy yo'nalishni (mashq faolligi ko'rsatkichi sifatida) va markaziy hududda o'tkaziladigan vaqtni (tashvish harakati ko'rsatkichi sifatida) qayd etish va tahlil qilish uchun foydalanilgan (Zhai va boshqalar, 2019).

Golji bo'yalishi

Xulq-atvor testi tugagandan so'ng (ya'ni operatsiyadan 26 kun o'tgach) har bir guruhdan tasodifiy ravishda beshta kalamush tanlab olindi. Golji binoni 150-mkm qalinlikdagi muzlatilgan miya qismlarida FD Rapid Golgi Stain Kit (FDNeuroTechnologies, Columbia, MD, AQSH) yordamida ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq amalga oshirildi.

ImageJ dasturi har bir neyronning umurtqa pog'onasi zichligini (10 mkm uchun umurtqa pog'onasi soni) tahlil qilish uchun ishlatilgan. Tikanlar ikki yoki uchta ikkinchi darajali dendrit segmentlarida hisoblangan.

Statistik tahlil

Ma'lumotlarni tahlil qilish uchun Windows uchun SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, AQSH) ishlatilgan, ular o'rtacha ± standart xato (SEM) sifatida ko'rsatilgan. Shapiro-Uilk testi barcha uzluksiz o'zgaruvchilar orasida normallik farazini sinash uchun ishlatilgan. Bundan tashqari, bir tomonlama dispersiya tahlili va Tukeyning ko'p sonli taqqoslash testlari tajribalar qatorida yondashilgan.

Agar ma'lumotlar normallik faraziga javob bermasa, Kruskal-Uollis H yoki Mann-Uitni Utest alohida to'ldirildi. Escape kechikishi iterativ o'lchovlar uchun dispersiyaning ikki tomonlama tahlili asosida tahlil qilindi. P qiymatlari < 0.05 statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi.

Natijalar

SPC hipokampal neyron hujayralari yo'qolishini yaxshilaydi

Gippokamp, ​​shu jumladan uchta tekshirilgan hudud, o'rganish va xotira bilan bog'liq (Jung va boshq., 2020). Xulq-atvor sinovidan so'ng, hipokampal arxitekturani tekshirish uchun Nissl bo'yash o'tkazildi.

HI guruhida yashovchan neyron zichligi soxta guruhga nisbatan kamaydi. Biroq, SPC ta'siriga uchragan hayvonlarda neyronlar soni ko'paydi; bu ta'sir YC-1 bilan qaytarildi, bu esa neyron zichligini pasaytirdi (1A-rasm). Bu hodisa hipokampusning CA1, CA3 va DG hududlarida kuzatilgan (P).< 0.05; Figure 1B–D).

SPC hipokampal CA1 hududida dendritik umurtqa pog'onasi zichligini yaxshilaydi va kamaytiradi

Golji binoni CA1 piramidal neyronaldendritik umurtqa pog'onasi zichligini aniqlash uchun ishlatilgan (2A-rasm). Tikanlarning o'lchamlari juda xilma-xil bo'lgani uchun (masalan, shoxlangan dendritlar, ingichka yoki qo'ziqorin), biz faqat HI guruhi bilan solishtirganda HIS guruhida dendritik tikanlar zichligi sezilarli darajada oshganligini aniqladik (P < 0.{{6). }}5), dendritik tikanlar zichligi HIS guruhiga nisbatan HIS + YC-1 guruhida kamaygan (P <0,01; 2B-rasm).
SPC hipokampusdagi PSD95 va GAP43 ifodalarini yaxshilaydi

Biz sinaps bilan bog'liq bo'lgan GAP43 va PSD95 oqsillarining glial chandiqlar tomonidan inhibe qilinganligini aniqlash uchun ifodasini baholadik. HI shamguruh bilan solishtirganda PSD95 (P < 0.01) va GAP43 (P < 0,05) protein ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi (2C-E-rasm). HIS guruhi bilan solishtirganda, PSD95 va GAP43 ifoda darajalari YC-1inyeksiyadan keyin sezilarli darajada kamaydi.

Astroglioz va glial chandiqlarning shakllanishi HI dan keyin gipokampal arxitekturaga zarar etkazadi

Keyinchalik, biz sevofluran hipokampalar arxitekturasini himoya qilish va astrogliozni susaytirish orqali o'rganish va xotira funktsiyasini yaxshilaganligini tekshirishga harakat qildik. Yangi tug'ilgan chaqaloqlarda gipokampusda neyronal apoptoz, shuningdek, keyinchalik glial chandiqga aylanib ketadigan infarkt mintaqasida reaktiv astroglioz (Rolls va boshq., 2009).

HI guruhida CA1 va CA3 piramidal qatlamlari va DG mintaqasi neyronlarda aniq pasayishlarni ko'rsatdi (P < 0.01, P < 0.001; 3E va 4C rasmlari), shuningdek, aniq morfologik o'zgarishlarga ega bo'lgan astrositlar sonining ko'payishi (P <0,001; Shakllar 3C va 4B). Biz immunohistokimyo va g'arbiy blot tahlili yordamida chap hipokampusning uchta hududida GFAP va NeuN ifodasini baholadik.

Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, soxta guruh bilan solishtirganda, astrositlar HI guruhida faollashtirilgan, CA1 (4A-rasm) va CA3 (3A-rasm) piramidal qatlamiga kiritilgan va DGda (3B-rasm) o'ralgan neyronlar. Haddan tashqari astroglioz glial jarayonlarning normal neyron tuzilmalari tomon kengayishiga olib keldi, bu aberrant devorga o'xshash astrositlar to'rini hosil qildi (3A, B va 4A rasmlar).

Bundan tashqari, GFAP immunoreaktivligi (3C, D va 4B, E rasmlari) va oqsil darajasi oshdi (P < 0.01; 4E-rasm), NeuN immunoreaktivligi esa pasaygan (P < {{7} }.01 yoki P <0.001; 3E, F va 4C rasmlari).

Ikki tomonlama yorliqli immunofluoresans natijalari HI va sham guruhlari o'rtasida neyrokan+/GFAP+ immuno-bo'yashining floresans intensivligida sezilarli farqlarni aniqladi (P < 0.001, P <0,05, P <0,01; Shakllar 5G, H va 6D), western blot natijalariga mos keladi (P< 0.01; Figure 6F).

SPC hipokampusda astroglioz va glial chandiq shakllanishini susaytiradi

Keyinchalik, bizning tadqiqotimiz SPC glial chandiqni susaytirganligini tekshirdi. HI guruhi bilan solishtirganda, HIS guruhidagi GFAP (5C, D va 6C rasmlari) va neyrokanlarning (5E, F va 6B rasmlari) immunoreaktivligi hipokampusda sezilarli darajada pasaygan (P < 0.{6} }1 yoki P <0,001).

Aksincha, HIS + YC-1 guruhidagi GFAP va neyrokan ifodasi HIS guruhi bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi va HIS + YC-1 va HI guruhlaridan farq qilmadi (P > 0.05; 6E va F-rasm).

Bundan tashqari, NeuN immunopozitivligi ko'tarildi va HIS guruhida tuzilmalar YC-1 bilan teskari bo'lgan HI guruhiga nisbatan ancha tartibli ko'rindi (3E, F va 4C-rasmlar).

For more information:1950477648nn@gmail.com