Camellia Japonica efir moyi B16F10 melanoma hujayralarida MSH tomonidan qo'zg'atilgan melanin ishlab chiqarish va tirozinaz faolligini inhibe qiladi.

Kontakt: ali.ma@wecistanche.com

Si Young Ha, Ji Young Jung va Jae-Kyung Yang

Efir moylari tabiatda organik usulda oʻstirilgan aromatik oʻsimliklarning barglari, poyasi, poʻstlogʻi, gulbarglari va ildizlaridan olinadigan va tabiiy moddalar sifatida turli tibbiy taʼsir koʻrsatadigan aromatik yogʻlardir. Camelliajaponika urug'idan olingan efir moyi turli funktsional xususiyatlarni namoyish etadi; ammo, uningtirozinazainhibitiv faollik keng o'rganilmagan. -kimyoviy tarkibi va tirozinazni ingibitor faolligini o'rganish uchun tadqiqot o'tkaziladiCamellia yapon o'simlik efir moyi(CJS-EO). Geksametilsiklotrisiloksan (42,36 foiz) va oktametilsiklotetrasiloksan (23,28 foiz) gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi orqali aniqlangan CJS-EO ning ikkita asosiy komponenti hisoblanadi.The ning inhibitiv faoliyatiCJS-EOva musbat nazorat arbutin qo'ziqorin tirozinazasiga nisbatan qo'shimcha baholanadi.The natijalari CJS-EO va arbutinni inhibe qilishini ko'rsataditirozinazafaoliyat. Bundan tashqari, CJS-EO melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormonlar bilan davolash qilingan guruhda melanogenezni sezilarli darajada inhibe qiladi va melaninning sezilarli miqdori bostiriladi. CJS-EO sababini aniqlash uchuntirozinazainhibitiv ta'sir va melaninreduksiya ta'siri, genetik va oqsil tahlillari o'tkaziladi. Olingan natijalarga asoslanib, biz taxminiy xulosaga keldikCJS-EOtirozinaz bilan bog'liq protein kabi zararli omillardan melanotsitlarni inhibe qilishi mumkin. Ushbu natijalar CJS-EO potentirozinaza faolligiga ega ekanligini va yaxshi teriga ega bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.oqlashagent.

ga bosingCistanche UK tirozinaz inhibitörleri uchun.

Kirish

Teri rangiga epidermisdagi melanin, dermis qon tomirlaridagi gemoglobin va teri osti to'qimalaridagi karotin kabi pigmentlar ta'sir qiladi. Ular orasida terining tashqi rangi melanin pigmentining miqdori va tarqalishi bilan belgilanadi [1]. Inmelanin sintezida ishtirok etadigan fermentlar yaxshi ma'lumtirozinaza, tirozinaza bilan bog'liq protein-1 (TRP-1) va dopaxrom tautomeraza (DCT, TRP-2) [2]. Ular orasida tirozinaza melanin sintezining tezligini belgilovchi bosqichi bo'lgan boshlang'ich reaktsiyada ta'sir qiluvchi ferment bo'lib, tirozinazani DOPA xinongacha oksidlaydi [3]. Shuning uchun, inhibe qiluvchi moddalartirozinaza,TRP-1 va TRP-2 melanin sintezini inhibe qilishi va shu tariqa teriga ega bo‘lishi mumkin.oqlashfunktsiyasi [4]. Melanin inson terisida ultrabinafsha nurlar va tashqi zararli omillardan terini himoya qilishda muhim rol o'ynaydi. Biroq, u ortiqcha ishlab chiqarilganda va terida to'plangan bo'lsa, u melazma, sepkil, teri dog'lari va boshqalarni keltirib chiqarishi mumkin va melanin prekursorlarining toksikligi va teri saratoni kabi kasalliklar tufayli hujayralar o'limiga olib kelishi mumkin [5-7].

L-askorbin kislotasi, arbutin va sut kislotasi melanin ishlab chiqarishning vakili sifatida ishlab chiqilgan, ammo ulardan foydalanish terining tirnash xususiyati yoki xavfsizlik muammolari tufayli qat'iy tartibga solinadi. Shu sababli, xavfsiz va samarali bo'lgan tabiiy oqartiruvchi vositani topish uchun faol tadqiqotlar olib borilmoqda [8].

O'simlik efir moylari kuchli antibakterial faollik, qarishga qarshi va terini qayta tiklash ta'siri kabi turli xil funktsional xususiyatlarni namoyish etishi ma'lum [9, 10]. Cinnamomum cassia efir moyi [4], Polygonum odoratum efir moyi [11] va Vitex negundo Linn barglari efir moyi [12] borligi xabar qilingan.tirozinazainhibitiv faoliyat.

Camellia japonica (yaponcha "tsubaki" nomi) - Yaponiyada bog 'o'simliklari, shuningdek, yog'li materiallar va xalq tabobati manbai sifatida mashhur daraxtdir [13]. Koreyada C. japonica — doimiy yashil daraxt boʻlib, oʻsimtalar oilasiga va Camellia jinsiga mansub [14]. C. japonica urug'i yog'i teri va soch salomatligini ta'minlash uchun kosmetik himoya vositasi va tinchlantiruvchi vosita sifatida uzoq vaqtdan beri foydalanish tarixiga ega [15]. C. yaponkaza moyi turli xil biologik faollikni, jumladan antioksidant faollikni [16], antibakterial faollikni [17], yallig'lanishga qarshi faollikni [18] va teri to'siqni funktsiyasini [19] ko'rsatishi haqida xabar berilgan. Keng tarqalgan bo'lishiga qaramay, kam sonli tadqiqotlar C. japonica urug'i yog'ining teriga ta'sirini o'rgangan.oqlash- bog'langantirozinazafaoliyat.

Shuning uchun, ushbu tadqiqotda C ning kimyoviy tarkibi. yaponiya urug'ining efir moyi (CJS-EO) gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi (GC-MS) yordamida tekshirildi vatirozinazabu efir moyining inhibitiv faolligi tekshirildi. Ushbu inhibitiv faoliyatni hal qilish uchun, ta'siriCJS-EO-MSH bilan ogohlantirilgan melanogenez va B16F10 melanoma hujayralarida tirozinaz inhibisyonu baholandi.

2. Materiallar va usullar

2.1. O'simlik materiallari.

C. japonica urug'lari 2021-yilning mart oyida Seohyeon o'simlik dori-darmonlari fermerlik assotsiatsiyasi, Nonsan, Janubiy Koreyadan xarid qilingan. O'simlik materiallarini Gyeongsang Milliy universitetining eksperimental o'rmon vakili Xe-Gon Kang aniqlagan.

Cistanche an'anaviy xitoy tabobatidan biridir

2.2. Reaktivlar.

Qo'ziqorintirozinazaT-3824 (Sigma–Aldrich, AQSH) dan, sichqoncha B16F10 mela nomasi esa CRL-6475 (AmericanType Culture Collection, Manassas, VA, AQSh) dan xarid qilingan. Hujayra madaniyati uchun zarur bo'lgan media va reagentlar Invitrogen (AQSh), Sigma (AQSh) va Nunc (AQSh) dan sotib olindi. Forwestern blotting, western blot kit va semidry transfersystem (Bio-Rad, AQSH) ishlatilgan va natijalar tasvirni tahlil qilish tizimi (Bio-Rad, AQSH) yordamida tasdiqlangan. Antikorlar Santa Cruz Biotech (AQSh) dan sotib olingan. Dimetil sulfoksid (DMSO) Sigma-–Aldrichdan (Sent-Luis, MO, AQSh) sotib olindi.

2.3. Ekstraksiya va namuna tayyorlash.

Ekstraksiya avval chop etilgan biroz oʻzgartirishlar bilan chop etilgan usul yordamida amalga oshirildi [4]. Qisqacha aytganda, C. japonica urug'lari (500 g) idishga joylashtirildi va 4 soat davomida 2000 ml suv yordamida distillash orqali ekstraktsiya qilindi. -hosil bo'lgan bug' yopiq sovutish tizimi yordamida sovutildi va hosil bo'lgan suyuqlik idishga yig'ildi. -e moy distillangan suyuqlikning yuqori qismiga qarab suzadi, suv esa suyuqlikning pastki fazasiga joylashdi; shuning uchun,CJS-EOKerakli moyni o'z ichiga olgan suyuqlikning yuqori fazasini olib tashlash orqali olingan va keyin ishlatilgunga qadar -20 darajada saqlanadi. Uyali tajribalar uchun DMSOdagi CJS-EO ning 500 ppmstok eritmasi ishlatilgan.

2.4. GC-MS tahlili.

ning uchuvchan komponentlariCJS-EOGC-MS (Clarus 600 GC-MS, PerkinElmer, Shelton, CT, AQSH) yordamida tahlil qilindi. Tahlil ustunida PerkinElmer Elite-5 ms (3{{10}} mm × 0,3 mm × 0,25 mkm) ishlatilgan. Mobil faza sifatida geliy gazi (1,0 ml/min) ishlatilgan. Pechning harorati minutiga 10 gradus tezlikda 40 darajadan 100 darajaga ko'tarildi va keyin 1,0 daqiqa ushlab turildi. Keyinchalik, harorat 10 daraja / min tezlikda 230 darajaga ko'tarildi va keyin 5 daqiqa ushlab turildi. -e injektorning harorati 200 darajaga, detektorning harorati esa 250 darajaga o'rnatildi. -e tahlil qilingan natijalar NIST Mass Spectral Search dasturi yordamida aniqlandi (versiya 2.0 g, Milliy standartlar va texnologiyalar instituti, Gaithersburg, MD, AQSH).

2.5. Hujayra madaniyati.

B16F10 sichqonchaning melanoma hujayralari Korea Cell Line Bankidan sotib olindi. Hujayra madaniyati DMEM (WELGENE, Daegu, Koreya) yordamida 37 daraja va 5 foiz CO2 sharoitida 10 foizli FBS (homila sigir zardobi, WEL GENE, Daegu, Koreya) va 1 foiz penitsillin-streptomitsin (Gibco BRL) bilan to'ldirilgan holda amalga oshirildi. Hujayralar sonining ko'payishi natijasida yuzaga kelgan haddan tashqari zichlik fenomenini hal qilish uchun B16F10 ekilgan hujayralar tripsin (Hyclone, AQSH) yordamida tegishli miqdorda saqlandi.

2.6. Hujayra hayotiyligini tahlil qilish.

B16F10 melanoma hujayralari hujayra madaniyati uchun 6-quduq plastinkasiga 3 × 104/ml ekilgan.CJS-EOhar bir quduqqa tegishli konsentratsiyada (31,25 ppm dan 500 ppm) ishlov berildi. -e muhiti 72 soatdan keyin olib tashlandi va 200 mkl 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-Difeniltetrazolium bromid (MTT) eritmasi (Promega, Madison, WI, AQSH) davolandi. MTT reagenti 2 soat davomida 37 daraja CO2 inkubatorida inkubatsiyadan so'ng tozalab tashlandi. Bo'yalgan hujayralar uchun 2 ml DMSO quduqlarda hosil bo'lgan barcha formazanlarni eritish uchun ishlov berildi. Hujayra hayotiyligi ELISA o'quvchi (SpectraMax190, Molecular Devices LLC, San-Xose, CA, AQSH) yordamida 540 nm da absorbans bilan o'lchandi.

2.7. Tirozinaza faolligini tahlil qilish.

Tirozinazafaollik L-DOPA oksidlanish tezligini o'lchash yo'li bilan baholandi [20]. B16F10 hujayralari (2 × 105 hujayra / quduq) - melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormon (-MSH) vaCJS-EOva 3 kun davomida o'stiriladi. Hujayralar yig'ib olindi, lizis buferi (1 foiz Triton X-100, 0.1 M PMSF) qo'shildi va keyin hujayralar 1 soat davomida 4 daraja reaksiyaga kirishib lizing qilindi. -e supernatant 15 daqiqa davomida 12,000×g da sentrifugalash orqali yig'ildi. Yig'ilgan supernatantdagi oqsil miqdori aniqlangandan so'ng, 10 mmol/ml L-DOPA qo'shildi. Keyinchalik, hujayralar CO2 inkubatorida 37 daraja haroratda 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi va absorbans mikroplatasini o'quvchi (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San-Xose, CA, AQSH) yordamida 490 nm da absorbans qayd etildi. Olingan ma'lumotlar quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan: tirozinaza faolligi (foiz) � (namunaning OD 490/nazoratning OD490) ×100.

2.8. Melanin tarkibini tahlil qilish.

B16F10 xujayralari 48 soat davomida turli xil CJS-EO va -MSH konsentratsiyasi bilan ishlov berilgan hujayralarning madaniy muhitini yangilagandan va PBS bilan ikki marta yuvilgandan so'ng, 12 soat davomida asixli plastinkada (2 × 105 hujayra / quduq) urug'langan [21]. B16F10 hujayralari -MSH va bilan davolash qilindiCJS-EObirgalikda, 3 kun davomida yetishtirildi va hujayralar yig'ib olindi va ikki marta fosfat tamponli sho'r suv (PBS) bilan yuvildi. Shundan so'ng, 10% DMSO ni o'z ichiga olgan 1N NaOH bilan ishlov berildi va 1 soat davomida 80 darajada reaksiyaga kirishdi. Melanin tarkibini tahlil qilish uchun absorbans 475 nmus orqali absorbans mikroplatasini o'quvchi (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San-Xose, CA, AQSh) da o'lchandi. -e CJS-EO bilan ishlov berilgan hujayralarning foizli qiymati salbiy nazoratga nisbatan hisoblab chiqilgan. Har bir namunadagi oqsil kontsentratsiyasini aniqlash uchun batafsil BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, US) ishlatilgan. -emelanin tarkibi hujayradagi oqsil kontsentratsiyasiga normallashtirildi (melanin / ug oqsilining so'rilishi).

2.9. Genlarni o'rganish.

B16F10 melanoma hujayralari 10% sigir va 1% antibiotiklar bilan to'ldirilgan DMEM (GIBCO, AQSh) 1 × 106 hujayra zichligida 100 mm idishga ekilgan; Keyinchalik, ular 37 darajada 5 foiz CO2 inkubatsiya qilindi. Yangi 10% DMEMmediumga o'tgandan so'ng,CJS-EOkultura plitasiga qo'shildi va 3 kun davomida yetishtirildi va sirt faol modda sifatida 1 foiz Amisoft o'rtacha hajmning 1/1,000 qismiga to'g'ri keladigan miqdorda qo'shildi. 3 kundan keyin 1 ml TRIzol (Invitrogen, AQSh) mRNK ifoda darajasini tekshirish uchun hujayralarga qo'shildioqlash- bog'liq genlar va RNK Invitrogen'sRNK izolyatsiyalash usuli yordamida ajratilgan. Ultraviyole detektori yordamida 260 nm da RNK miqdorini aniqlagandan so'ng, teskari transkripsiya-polimeraza zanjiri reaktsiyasi (RT-PCR) amalga oshirildi. RT-PCR uchun all-in-one RT-PCR to'plami (Super Bio, Koreya) ishlatilgan, tajriba ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalari asosida o'tkazildi va primerlar va reaktsiya shartlari quyidagicha edi: ofaktin ketma-ketligi 5′- edi. GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3';antisense, 5′-GGC CAT CTC TTG CTC GAA GTC-3';teskari transkripsiya 50 darajada 30 daqiqa davomida; teskari transkriptaza 96 gradusda 3 minut, 94 daraja 30 s va 62 daraja uchun 1 minut, so'ngra 25 tsikl 72 darajada 1 daqiqa davomida inaktivlanadi. Ketma-ketligitirozinazaedi 5′-GGC CAG CTT TCA GGC AGA GGT 3'; antisens, 5′-TGG TGC TTC ATG GGC AAA ATC-3';90 gradusda 30 soniya davomida denaturatsiya qilingan; 30 daqiqa davomida 60 daraja teskari transkripsiya; teskari transkriptaza 94 gradusda 1 daqiqa davomida inaktivlanadi. Shundan so'ng, PCR 30 tsikl uchun 94 daraja 30 soniya, 56 daraja 30 soniya va 72 daraja 1 daqiqa davomida amalga oshirildi. -e tirozinaz bilan bog'liq protein 1 (TRP-1) ketma-ketligi 5'-GCT GCA GGAGCC TTC TTT CTC-3' edi; antisens, 5′-AAG ACG CTG CACTGC TGG TCT-3'; 30 soniya davomida 90 daraja denatüratsiya qilingan; 30 daqiqa davomida 60 daraja teskari transkripsiya; teskari transkriptaza 1 daqiqa davomida 94 darajada faollashtiriladi. Shundan so'ng, PCR 30 tsikl uchun 94 daraja 30 soniya, 56 daraja 30 soniya va 72 daraja 1 daqiqa davomida amalga oshirildi. -e ketma-ketligitirozinaza-bog'liq oqsil 2 was5'-TGA CCG TGA GCA ATG GCC-3'; antisens, 5′-CGGTTG TGA CCA ATG GGT GCC-3'; 30 daqiqa davomida 50 daraja teskari transkripsiya; teskari transkriptazaning inaktivatsiyasi 96 daraja 3 daqiqa, 94 daraja 1 daqiqa va 60 daraja 1 minut. Keyinchalik, 1 daqiqa davomida 25 tsiklda 72 PCR reaktsiyasi o'tkazildi.

2.10. Protein ifodasini tekshirish.

Sichqoncha B16F10melanoma hujayralari 10% FBS va 1% antibiotiklar bilan to'ldirilgan DMEMda 5 × 105 hujayra zichligida 100 mm idishga emlandi va keyin 1 kun davomida 5% CO2 da 37 darajada ekildi. Keyinchalik, ular yangi vosita bilan almashtirildi vaCJS-EOturli konsentratsiyalarda ishlov berilgan va 3 kun davomida kultura qilingan. Asurfaktan sifatida Amisoftning 1 foizli suvli eritmasi o'rtacha hajmning 1/1000 qismiga to'g'ri keladigan hajmda qo'shildi. -e madaniyatli hujayralar PBS bilan yuvildi va 1,5 ml mikrotubaga, so'ngra hujayrani buzish buferiga (40 mM Tris-Cl [pH 7,4], 10 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0,1 foiz NP-40, 1 mmM) o'tkazildi. PMSF va proteaz inhibitori kokteyli). Hujayralar qo'shilish yo'li bilan yo'q qilingandan so'ng, sentrifugalash 15,{18}} aylanish tezligida 4 daraja 10 daqiqa davomida amalga oshirildi va oqsillarni ajratish uchun supernatant qaytarildi. -e izolyatsiya qilingan oqsillar Sigma'sBCA usuli yordamida miqdori aniqlandi va SDS-PAGE amalga oshirildi. SDS-PAGE jelini PVDF membranasiga o'tkazgandan so'ng, oqsil birlamchi antikor va peroksidaza bilan konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor yordamida etiketlandi va keyin g'arbiy dog'larni aniqlash to'plami (Intron, Koreya) yordamida toan rentgen plyonkasiga ta'sir qildi. Keyinchalik ifoda darajalari tahlil qilindi.

3. Natijalar

3.1. CJS-EO ning kimyoviy tarkibi.

CJS-EO 18% w/w rentabellik bilan olindi. -e CJS-EO kimyoviy tarkibi GC-MS yordamida tahlil qilindi (1-jadval). -e cho'qqilari GCda ajratildi va MS orqali 17 ta birikma aniqlandi, bu umumiy cho'qqilar maydonining 90 foizini tashkil etdi (1-jadval). - asosiy kimyoviy komponentlarCJS-EOgeksametilsiklotrisiloksan (42,36 foiz), oktametilsiklotetrasiloksan (23,28 foiz), dekametilsiklopentasiloksan (5,81 foiz), geksandioik kislota (5,56 foiz) va vanilin (2,96 foiz) edi. Oldingi tadqiqotlarda GC-MS tahlili Bauhinia acuminataLinn [22] barglari va poyasi ekstraktlarida geksametilsiklotrisiloksanni aniqladi. Moringa oleifera tarkibidagi uchuvchi komponentlar asosan efirlar, kislotalar, aldegidlar va uglevodorodlardan tashkil topgan va uglevodorodlar asosan geksametilsiklotrisiloksandir [23]. Xuddi shunday, bizning tadqiqotimizda geksametilsiklotrisiloksan CJS-EO ning asosiy kimyoviy komponenti sifatida tasdiqlangan. CJS-EO ning asosiy kimyoviy komponentlaridan biri vanillin Eugenia caryophyllata va Ocimum basilicum[24], Hyssopus officinalis L. (Lamiaceae) efir moyi [25] va Calea clematidea efir moyida [26] aniqlangan. Oldingi tadqiqotlarda vanillinning monofenolaza va difenolaza faoliyatiga inhibitiv ta'siri aniqlangan.tirozinazailgari xabar qilingan edi [27]. Qizig'i shundaki, past molekulyar og'irlikdagi siklik uchuvchi metilsiloksan birikmalari, shu jumladan geksametilsiklotrisiloksan turli xil kosmetika va shaxsiy parvarish mahsulotlari va boshqa ko'plab iste'mol mahsulotlarida ishlatilgan [28]. Kelajakda melanin ishlab chiqarish va tirozinaz faolligini inhibe qilish uchun mas'ul bo'lgan birikma ekstrakte qilinadi va uni tabiiy kosmetika yoki tibbiyotda qo'llash mumkin.

3.2. CJS-EO tomonidan qo'zg'atilgan melanoma hujayralarining hujayra hayotiyligi.

Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, B16F10 sichqoncha melanomasi 31,25 dan 500 ppm gacha bo'lgan konsentratsiya bilan davolash qilingan.CJS-EO24 soat davomida hujayra hayotiyligida hech qanday o'zgarishlarga olib kelmadi. 31,25 dan 500 ppm gacha bo'lgan konsentratsiyada hujayra hayotiyligi 90 foizdan 100 foizgacha bo'lgan, bu past sitotoksiklikni ko'rsatadi (1-rasm).tirozinazaB16F10 hujayralarida faollik va melanin sintezi.

3.3. CJS-EO ning hujayra ichidagi tirozinaz faolligini inhibe qilish.

ning ta'siriCJS-EOL-DOPA katalizlangan bytirozinaza, shuningdek, taniqli arbutin oksidlanishi bo'yichatirozinazainhibitori tekshirildi. Shakl 2da ko'rsatilganidek, CJS-EO andarbutin dozaga bog'liq holda L-DOPA oksidaz faolligiga kuchli inhibitiv ta'sir ko'rsatdi. -e natijalari shuni ko'rsatadiki, CJS-EO va arbutin o'xshash tirozinaz inhibitiv faolligini namoyish etdi. Statistik tahlilga asoslanib, arbutin 125 va 500 ppm da CJS-EO ga qaraganda ancha yuqori tirozinaz inhibitör faolligiga ega edi. Biroq, 31.25, 32.50 va 250 ppm da, CJS-EO ning taniqli tirozinaz inhibitori arbutindagi tirozinaz inhibitör faolligi bilan solishtirganda, tirozinazada o'xshash inhibitiv ta'sirlar (muhim emas) ko'rsatilgan.

3.4. CJS-EO ning B16F10 hujayralaridagi melanin tarkibiga ta'siri.

CJS-EO melanin ishlab chiqarishni inhibe qilishga hissa qo'shganligini tasdiqlash uchun CJS-EO ning har bir konsentratsiyasi bilan davolashdan keyin melanin sekretsiyasidagi farq -MSH stimulyatsiyasi orqali melanin ishlab chiqarishni rag'batlantiradigan muhitda tahlil qilindi.CJS-EO31,25, 62,5, 125, 250 va 500 ppm kontsentratsiyalarda xuddi shunday ishlov berilgan.tirozinazafaoliyat. CJS-EO -MSH bilan davolash qilingan guruhda melanogenezni sezilarli darajada inhibe qildi va melaninning sezilarli miqdori bostirildi (3(b)-rasm). - bu musbat nazoratdagi kuzatuvga o'xshash edi, arbutin (3-rasm (a)). Xususan, davolangan guruhdagi eng past kontsentratsiya 32,25 ppm bo'lganida, melanin tarkibi davolanmagan guruhga (0 ppm) nisbatan sezilarli darajada kamaydi. Shu sababli, CJS EO melanin B16F10 hujayralarining sintezi yoki sekretsiyasini samarali ravishda inhibe qilgan degan xulosaga keldi. 31,25, 62,5, 125, 250 va 500 ppmCJS-EO bilan davolash qilingan guruhlarda melanin miqdori davolanmagan guruhga nisbatan mos ravishda 1,1, 1,5, 2,6, 2,7 va 4,3 baravar kamaydi, bu esa melaninning sekretsiyasini inhibe qilishini ko'rsatadi. ta'sir. -e sitotoksiklik testi, tirozinazni inhibisyon testi va melanin miqdori testi natijalari shuni ko'rsatadiki, CJS-EO tabiiy material sifatida juda qimmatlidir.oqlashkosmetika.

3.5. Genetika tadqiqoti.

Genni aniqlash uchunCJS-EOmelanin biosintezi yo'lida ishtirok etuvchi genlarning ekspressiyasiga ta'sir qilish orqali melanin biosintezini inhibe qiladi, RT-PCR usuli yordamida tajriba o'tkazildi va natijalar 4-rasmda ko'rsatilgan. -MSH salbiy nazorat sifatida ishlatilgan va CJS-EO inhibitiv ta'sir ko'rsatdi. tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 barcha konsentratsiyalarda ifodalanishi. Xususan, CJS-EO tirozinaza ifodasini 125 ppm yoki undan yuqori tezlikda 50 foizdan ortiq inhibe qildi. ning inhibitiv ta'sirini aniqladiktirozinaza, TRP-1 va TRP-2 ifodasi CJS EO konsentratsiyasi ortishi bilan kamaydi. Ushbu tajribaning natijalari shuni ko'rsatadiki, CJS-EO ning temelanogenezni inhibe qiluvchi ta'siri tirozinaz, TRP-1 va TRP-2 ifodasini inhibe qilishga yordam bergan.

3.6. Protein ifodasini tekshirish.

CJS-EO ning melanin biosintezida ishtirok etuvchi oqsillarni ifodalashga ta'siri western blotting yordamida tasdiqlangan va natijalar 5-rasmda ko'rsatilgan. CJS-EO salbiy nazorat guruhi bo'lgan -MSH bilan davolash qilingan guruh bilan solishtirilganda, u shunday edi. buni tasdiqladiCJS-EOinhibitiv ta'sir ko'rsatdi; Aslida, CJS-EO tirozinaz va TRP -2 ga eng ko'p inhibitiv ta'sir ko'rsatdi. 500 ppm tirozinaz va TRP-2 da inhibisyon darajasi -MSH bilan davolash qilingan guruhga nisbatan mos ravishda 46,6 va 40,7 foizni tashkil etdi. TRP{11}}eng kam inhibitiv ta'sirni ko'rsatgan bo'lsa-da, MSH bilan davolash qilingan guruh bilan solishtirganda sezilarli darajada pasaygan. Shuning uchun protein tahlili genanaliz bilan bir xil tendentsiyani ko'rsatdi va CJS-EO rag'batlantirganligi tasdiqlandi.tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 melanin kamayishiga olib keladi.

4. Munozara

Tirozinazateri, soch va ko'z rangini, shuningdek, ba'zi oziq-ovqatlarning qorayishini belgilaydigan fermentativ oksidlanish yo'li orqali melanin ishlab chiqarishda ishtirok etadigan ferment [29]. Melanin giperpigmentatsiyasi bilan bog'liq dermatologik kasalliklarni davolash uchun klinik tibbiyotda antitirozinazaktivlikni ko'rsatadigan kimyoviy vositalar qo'llanilgan [30]. Melanin ishlab chiqarilishi faqat malign saratonga xos bo'lgan ba'zi gistopatologik xususiyatlarga yordam berishi mumkin [31]. Shuning uchun antitirozinaz moddalari teri saratonini davolashni osonlashtirishi mumkin. So'nggi yillarda kimyoviy yoki sintetik birikmalar o'rniga tabiiy mahsulotlardan foydalanish ko'proq qiziqish uyg'otmoqda, chunki ular tejamkor, ekologik toza va xavfsiz [32]. Bundan tashqari, yashil texnologiya va arzon xom ashyoni tadqiq qilish va rivojlantirish muhim ahamiyatga ega. sanoat, shuningdek, o'simlik resurslaridan foydalanishni yaxshilash uchun. Yaqinda ayrim o'simliklarning antitirozinaz faolligi haqida xabar berilgan [33]. Biroq, tabiiy o'simliklarning efir moylariga oid ma'lumotlar kam. Shuning uchun yuqori antitirozinaz faolligiga ega bo'lgan o'simlik efir moylarini aniqlash katta qiziqish uyg'otdi. -e pigmentatsiya etiologiyasi yaxshi tushunilmagan. Melanin biosintezi TRP-1 va TRP-2 kabi melanotsitlarga xos fermentlar tomonidan katalizlanadi [34].Tirozinazamelanotsitlar melaninbiosintezi uchun juda muhim va ko'p o'n yillar davomida ma'lum bo'lgan [34]. Shuning uchun tirozinaza pigmentatsiyani davolash uchun muhim ko'rsatkichdir. Bizning tadqiqotimizda CJS-EO melaninsintezini kamaytirdi va antitirozinaz faolligini ta'sir qildi; shuning uchun biz CJS-EO tomonidan antimelanogenez boshqa fermentlar (TRP-1 va TRP-2) bilan bog'lanishi mumkin degan xulosaga keldik. Uchuvchi moddalar yuqori antioksidant faollik ko'rsatishi haqida xabar berilgan [35]. Uchuvchi moddalar sifatida CJS-EO o'tkir hid bilan tavsiflanadi. U o'simliklar tomonidan ikkilamchi metabolitlar sifatida sintezlanadi va bakteritsid, virustsid, fungitsid, saratonga qarshi, antioksidant va antidiyabetik faolligi tufayli keng qo'llaniladi [36]. Ushbu tadqiqotda o'rganilgan CJS-EO asosan geksametilsiklotrisiloksandan tashkil topgan bo'lib, u umumiy kimyoviy tarkibning 42,36 foizini tashkil qiladi. Tarkibida geksametilsiklotrisiloksan bo'lgan toksikodendron verniksifluum turli xil biologik va antimikrobiyal, shu jumladan, antimikrobiyal [37] faollik ko'rsatishi ko'rsatilgan. Bizning tadqiqotimizda CJS-EO ning yuqori konsentratsiyasi melanotsitlarga ozgina sitotoksik ta'sir ko'rsatdi. Shuning uchun, CJS-EO ning -MSH tomonidan induktsiya qilingan B16F10 hujayralarining tarqalishiga inhibitiv ta'siri kuzatildi. -results CJS-EO bilan oldindan davolash dozaga bog'liq tarzda -MSH-induktsiyali hujayralar tarqalishini kamaytirganini ko'rsatdi (3-rasm) va bu natijalar ijobiy nazorat sifatida ishlatiladigan purearbutin bilan o'xshash edi. An'anaviy tibbiyotda qo'llaniladigan ko'pgina tabiiy efir moylarida sof birikmalar o'rniga murakkab birikmalarni o'z ichiga olgan ekstraktlar qo'llaniladi. Ushbu tabiiy efir moylari odatda yuqori o'ziga xos bioaktivlikka ega uchuvchanlik birikmalarini o'z ichiga olmaydi, lekin kengroq o'zaro ta'sirga ega bo'lgan uchuvchanlik birikmalarini o'z ichiga olmaydi [38]. Shu sababli, ko'plab komponentlarni o'z ichiga olgan CJS-EO uchun sof arbutinga qaraganda yuqori antimelanogenez ta'siriga ega bo'lish qiyin. Kelajakda tarkibidagi uchuvchi komponentlarni ajratish kerakCJS-EOva ajratilgan yagona komponentga antimelanogenez ta'sirini o'rganing. Bizning natijalarimizga asoslanib, CJS-EO melanotsitlarni TRP -1 kabi zararli omillardan inhibe qilishi mumkin degan xulosaga kelamiz (4 va 5-rasmlar).ThShuning uchun biz geksametilsiklotrisiloksan CJS-EO dagi asosiy biologik faol birikma ekanligini taxmin qildik. ga oid mavjud tadqiqotlaroqlashYoAJ-EO mulki yetarli emas; shuning uchun u oqlash samaradorligini ko'rsatadigan asosiy ingredientlarga oid kelajakdagi tadqiqotlarda asosiy ma'lumotlar sifatida ishlatilishi mumkin.

5. Xulosalar

Bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, bu B16F10 melanoma hujayralarida melanin ishlab chiqarishni inhibe qilishda CJS-EO samaradorligi haqida hisobot beradigan birinchi tadqiqot. Bizning kuzatishlarimiz shuni ko'rsatdiki, CJS-EOinhibe qilingan -MSH tomonidan qo'zg'atilgan melanogenez orqali.tirozinazainaktivatsiya va B16F10 melanoma hujayralarida melanin biosintezida ishtirok etadigan oqsillar ekspressiyasini bir vaqtning o'zida bostirish.CJS-EOxavfsiz ekanligi ma'lum va biz ushbu tadqiqotda sitotoksik emasligini tasdiqladik.ThShuning uchun, CJS-EO potentsial ravishda samarali teri sifatida ishlatilishi mumkin.oqlashqo'shimcha va muqobil tibbiyotga asoslangan aromaterapiyaning kelajakdagi rivojlanishi uchun agent.