Tailand ipak pillasining aminokislotalar profili va bioaktiv birikmalarining suv ekstraktsiyasi ta'sirida o'zgarishi 2-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.8. Korrelyatsiyalar

Korrelyatsiya tahlili (Pirson testi) umumiy fenolik tarkib, umumiy flavonoid miqdori, DPPHradikal tozalash faolligi, ABTS plus, FRAP tahlili, anti{1}}amilaza qiymatlari oʻrtasida va oʻrtasida (korrelyatsiya koeffitsientlari sifatida,r) taqqoslash uchun ishlatilgan. , anti- -glyukozidaza va Nangsew va Eri shtammlarida SPE ning glikatsiyasiga qarshi (5 va 6-jadvallar). Tadqiqotdan olingan har bir parametr TPC, TFC, DPPH, ABTS, FRAP anti{6}}amilaza, anti- -glyukozidaza va antiglikatsiya o'rtasida kuchli ijobiy korrelyatsiyani ko'rsatdi. Buning sababi, ipak ekstraktida mavjud bo'lgan bioaktiv birikmalar turli xil erkin radikallarni va anti- -amilaza,- -glyukozidaza va antiglikatsiyani tozalashga qodir bo'lishi mumkin. Bizning topilmalarimiz, shuningdek, ikkita shtamm uchun natijalar o'rtasida juda muhim chiziqli korrelyatsiya mavjudligini ko'rsatdi. Ushbu natijalar Benzi va Stezo [29] natijalari bilan mos edi, ular umumiy fenolik tarkib va ​​FRAP tahlili o'rtasida kuchli ijobiy korrelyatsiyani topdilar. Kubola [30] tomonidan xabar qilinganidek, achchiq qovoqda mos ravishda TPC va DPPH(R2=0.711) va FRAP (R2=0.948) oʻrtasida ham shunga oʻxshash natijalar topilgan. Kumar va boshqalar.[31] Lantana Camara barglarining turli navlarida antioksidant faollik va umumiy fenolni baholashni o'tkazdi. Ekstraktlar fenolik tarkib va ​​DPPH, FRAP va ABTSni tozalash faoliyati o'rtasida kuchli bog'liqlikni ko'rsatdi. Eng yuqori korrelyatsiya (r=0.998, R2=0.997) umumiy fenolik tarkib va ​​ABTS tozalash tahlili oʻrtasida aniqlandi. Bundan tashqari, Gynura procumbens barglarida mos ravishda ABTS va TPC (R 2=0.885) va DPPH (R 2=0.999) o'rtasidagi ijobiy korrelyatsiyalar Kaewseejan va boshqalar tomonidan xabar qilingan. [32].

Biologik xususiyatlar va inhibitiv faollik o'rtasidagi bog'liqlik Quan va boshqalarning [33] tadqiqotlarida topilgan. C.tramdenum qobig'i ekstraktlarining antioksidant va potentsial diabetik inhibitiv xususiyatlarini o'rgangan. Ularning natijalari ham buni aniqladiantioksidanttahlillar (DPPH, ABTS, kamaytiruvchi kuch va azot oksidi, shu jumladan) p da -amilaza va -glyukosidaza inhibitör tahlili bilan kuchli bog'liq edi.<>

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

3. Materiallar va usullar 3.1.Silk Coc00ns

Tailand ipak pillalarining Nangsew va Eri shtammlari to'plangan. TheNangsew shtammi(sariq pilla) Tailandning Buriram provinsiyasi, Puttayson tumani, Baan Hua Saban shahridan olingan. Eri shtammi (oq pilla) Nong Ya Plong jamoasidan, Mancha Khiri, Xon Kaen viloyati, Tailanddan kelgan.

3.2. Kimyoviy moddalar va reagentlar

Barcha standartlar Sigma-Aldrich Co. (Sent-Luis, MO, AQSH) dan olingan, jumladan muhim aminokislotalar: fenilalanin, valin,triptofan, treonin, izolösin, metionin, histidin, arginin, lizin va leysin. O'rganilgan muhim bo'lmagan aminokislotalar glitsin, glutamik kislota, aspartik kislota, glutamin, serin, tirozin, alanin va asparagin edi. Antioksidant faollikni aniqlash reagentlari Sigma-Aldrich Co:Folin-Ciocalteu reaktivi,2,2-difenil-1-pikrilgidrazil(DPPH),2,4,6-tripiridil-s-triazindan olingan. (TPTZ),2,2'-and-bis(3-tilbenztiazolin-6-sulfon kislotasi)(ABTS). HPLC tahlilida ishlatiladigan erituvchilar va reagentlar Merck (Darmshtadt, Germaniya) kompaniyasidan sotib olingan. Sigma-Aldrichdan -amilaza (Aspergillus oryzae), -Glyukozidaza (Bacillus stearothermophilus), p-nitrofenil{20}}D-glyukopiranozid (PNP-G), sigir zardobidagi albumini (BSA) va natriy azid sotib olingan. Co.

Cistanche immunitetni yaxshilashi mumkin

3.3. Distillangan suv bilan ekstraktsiya

Ekstraksiya Sangvon va boshqalar usuli yordamida amalga oshirildi. [34]. Ipak pillalari mayda bo'laklarga bo'lingan. Ushbu bo'laklarning ikki grammi belgilangan ekstraksiya vaqtlari uchun 200 ml distillangan suv bilan 100 daraja haroratda olingan. Ekstraktlar sentrifuga yordamida 5000 × g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi (Universal 320/320R, Hettich, Boucherville, QC, Kanada). Ekstraktlar erimaydigan materialni olib tashlash uchun vakuum ostida Whatman №1 qog'ozi orqali filtrlangan va shu bilan ipak oqsili ekstrakti (SPE) ishlab chiqarilgan.

3.4. Proteinni aniqlash

Proteinni aniqlash Bredford tahlili [35] bilan tavsiflangan. SPE (0,5 ml) 1.0ml Bredford eritmasiga qo'shildi va xona haroratida 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Sigir zardobidagi albumin (BSA) standart mos yozuvlar oqsili sifatida ishlatilgan. Namunalarning absorbsiyasi 595 nm da ko'rinadigan spektrofotometr bilan o'lchandi (DR 2700rM Portativ Spektrofotometr, Hach, Loveland, CO, AQSh).

3.5.Amin{2}}LCMS/MS tomonidan kislota tarkibi

Aminokislotalarni tahlil qilishda LC-MS-MS (Shimadzu LCMS-8030) uch karra to'rt kutupli massa spektrometri, elektrosprey ionlash (ESI) rejimi, so'ngra Shimadzu HPLC tizimida tahlil o'tkazildi (Shimadzu, Kyoto, Yaponiya) (Chumroenphat va boshqalar [36). HPLC tahlilida oqim tezligi 0,2 ml/min; ustunli pechning harorati 38 daraja va autosampler 4 daraja edi. Ko'chma fazalar (A) suvli chumoli kislotasi {{10}},1 foiz (o/o) va (B) metanol-suv (50:50) tayyorlandi; keyin mikser 0,1 chumoli kislotasi edi. foiz (o/v). Avtonamuna oluvchi igna namunani aspiratsiya qilishdan oldin va keyin metanol bilan tozalangan. Tahlillar uch nusxada amalga oshirildi.

3.6. Jami fenolik tarkib (TPC)

Ipak oqsili ekstraktidagi jami fenolik tarkib Folin-Ciocalteu usuli [30] boʻyicha tahlil qilindi. Qisqacha aytganda, 0,3 ml SPE distillangan suvda eritilgan 2,25 ml 10 foizli Folin-Ciocalteu reagenti bilan aralashtiriladi. 5 daqiqa inkubatsiyadan so'ng, 2,25 ml 6 foizli natriy karbonat (NazCO) eritmasi qo'shildi va aralashmalar xona haroratida 90 daqiqa turish uchun qoldirildi. Eritma namunalarining absorbsiyasi spektrofotometr yordamida 725 nm da o'lchandi. Fasoldagi TPC g quruq vaznga (mg GAE/g DW) mg gallik kislota ekvivalenti (GAE) sifatida ifodalangan. Tahlillar uch nusxada amalga oshirildi.

3.7. Jami flavonoid tarkibi (TFC)

SPE ning umumiy flavonoid tarkibi Kubota va [30] bo'yicha aniqlandi, o'zgartirildi. Qisqacha aytganda, 0,5 ml har bir namuna eritmasi 2,25 ml distillangan suv va 0,15 ml 5 foizli NaNO, eritma (h/h) bilan aralashtiriladi. Eritma 6 daqiqa tursin va keyin eritmaga 0,3 ml 10% AlCl3(w/v) qo'shildi. 5 daqiqadan so'ng 0,1 ml 1 M NaOH （w/ø） eritmasi qo'shildi va keyin absorbans spektrofotometr yordamida 510 nm da o'lchandi. Natijalar g quruq vaznga (mg RE/g DW) mg rutin ekvivalenti (RE) sifatida ifodalangan.

3.8. DPPH radikallarini tozalash faoliyati

SPE ning antioksidant faolligi Brand-Williams va boshq.[37] bo'yicha barqaror 1,{1}}difenil-2-pikrilgidrazil (DPPH) erkin radikalining tozalash faolligi sifatida aniqlandi. Ipak oqsili ekstrakti 0.1 ml 3 ml a0.001 M DPPHin metanolga qo'shildi. Aralash 30 daqiqa davomida qorong'i joyda xona haroratida saqlanadi. Absorbans spektrofotometr yordamida 517 nm da aniqlandi. DPPH inhibisyonini hisoblash uchun tenglama quyidagicha edi:

(1) Inhibisyon (foiz )=[(Abs. nazorat- Abs.sample)/Abs. nazorat]×100)

qaerda abs. namuna namunaning absorbansi va Abs. nazorat - bu nazoratning absorbsiyasidir.

3.9.ABTS tahlili bo'yicha antioksidant faollik

Re va boshqalarning ABTS radikal kation usuli. (1999) [22] erkin radikallarni tozalash ta'sirini baholash uchun o'zgartirildi. ATBS ishchi eritmasi 7,4 mM ABTS va 2,6 mM kaliy persulfatni 1: 1 (v/v) nisbatda birlashtirib, qorong'ida xona haroratida 12 soat davomida reaksiyaga kirishishi va keyin uni deionizatsiyalangan suv bilan suyultirish orqali tayyorlangan. . Absorbans spektrofotometr yordamida 734 nm da 1,1 ±0 ga yetguncha aniqlandi.02. So‘ngra 150 mkl SPE va 2850 mL ATBS ishchi eritmasi qorong‘uda 2 soat davomida aralashtirib reaksiyaga kiritildi va spektrofotometr yordamida 734 nm da absorbans; nazorat sifatida 100 foiz metanol ishlatilgan. Inhibisyonni hisoblash uchun tenglama tenglama (1) kabi edi.

3.10. Temir kamaytiruvchi/antioksidant quvvat tahlili (FRAP)

Ekstraktlarning kamaytirish kuchi FRAP tahliliga asoslangan edi [23]. Yangi FRAP reaktivi 1{2}}0 ml asetat buferi (0,3 mol LI, pH 3,6), 10 ml 40 mmol L-1HCland 10 ml 20 mmolda eritilgan 10 ml TPTZ eritmasini aralashtirish orqali tayyorlangan. -1FeCl; 10∶1∶1 nisbatda va 120 ml distillangan suv 37 daraja. Qisqacha aytganda, 1,8 ml FRAP reaktiviga 60 mL SPE va 180 uL deionizatsiyalangan suv qo'shildi. Eritma vorteks aralashtirish orqali chayqatildi. Eritma suv hammomida 37 daraja haroratda 4 daqiqa davomida inkubatsiya qilingandan so'ng, absorbans nazoratga qarshi 593 nm da o'lchandi. FRAP qiymatlari g quruq asosda mg FeSO4 sifatida ko'rsatilgan (mg FeSO4/g DW).

3.11.Amilaza fermentiga qarshi inhibitiv faollik

-Amilaza fermentini inhibe qilish faolligi Xiao va boshqalar usuli yordamida o'lchandi. (2006)[38] ozgina oʻzgartirishlar bilan. Substrat 100 mg kartoshka kraxmalini 5 ml fosfat tamponida (pH 7,0) 5 daqiqa qaynatish, so'ngra xona haroratiga sovutish yo'li bilan tayyorlangan. SPE (50 mkl), substrat (300 mkl) va 5ug/ml -amilaza eritmasi (20 mkL) aralashtirildi va eritma 37 daraja haroratda 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Reaksiya 50 mkl 1 M HCl qo'shib to'xtatildi va keyin 50 mkl yod eritmasi qo'shildi. Absorbans 650 nm da mikroplastinka o'quvchi tomonidan o'lchandi. Akarboza ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. X-amilazaning inhibisyon ulushi (1) tenglama sifatida baholandi.

3.12.Glyukozidaza fermentiga qarshi inhibitiv faollik

-glyukosidaza fermentini inhibe qilish tahlili Vang va Chjao [39].SPE (dimetilsulfoksidda erigan 2ml; DMSO) va 0,5 U/ml a-glyukosidaza(40) ​​usuliga muvofiq amalga oshirildi. ml) 120 ml 0,1 M fosfat tamponida (pH 7,0) aralashtirildi. 5 daqiqa oldindan inkubatsiyadan so'ng, 5 mM p-nitrofenil{16}}D-glukopiranozid eritmasi (40 ml) qo'shildi va eritma 30 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilindi. Absorbans 405 nm da UV/Vis absorbans spektrofotometri mikroplatasini o'quvchi orqali o'lchandi. -glyukozidazaning inhibisyon ulushi (1) tenglama sifatida baholandi.

3.13. Anti-AGE shakllanishi faoliyatini baholash

Ipak oqsili va uning fraksiyalarining AGE hosil bo'lishini inhibe qilish qobiliyati Vinson va Xovard [40] usuli yordamida o'lchandi. Glikatsiya reaktsiyasi eritmasining umumiy hajmi (2,5 ml) 5{{10}}0 mkl SPE, 500 mL 20 mg/ml BSA ni fosfat tamponida, 500 mL 0,5 M glyukozani aralashtirish orqali tayyorlandi. fosfat buferi va 0,02 foiz (v/v) natriy azid o'z ichiga olgan pH 7,4 da 1 ml 0,1 M fosfat buferi. Bu aralashma 37 daraja haroratda 5 kun qorong'i joyda inkubatsiya qilindi va keyin hosil bo'lgan floresan AGE soni 330 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligi va 410 nm emissiya to'lqin uzunligi bilan floresan spektrometr yordamida aniqlandi. Anti-AGE hosil bo'lish foizi hosil bo'lgan floresan intensivligi (FI) asosida quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:(2) n =[1-(FIsample - FIsample blank)/(nazorat-nazorat blankasi )]×100 bu yerda Flsample namunaning lyuminestsent intensivligi, namuna blankasi namuna blankasining lyuminestsent intensivligi, nazorat nazoratning lyuminestsent intensivligi va FIcontrol blanki namuna nazorati blankasining lyuminestsent intensivligidir.

3.14. Statistik tahlil

Barcha ma'lumotlar SPSS dasturiy ta'minoti (IBM SPSS, Chicago, IL, AQSH) tomonidan tahlil qilindi. Natijalar uchta takroriy o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida xabar qilinadi va ma'lumotlar nazorat va Pearson korrelyatsiyasiga nisbatan ahamiyatini aniqlash uchun eng kam muhim farq (LSD) bilan bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida tahlil qilindi. vositalar orasidagi korrelyatsiyani baholash uchun test. Barcha holatlarda, p<0.05 was="" considered="">

4. Xulosalar

Ipak oqsilini olishning ta'sirini o'rganishimiz olti soat davomida distillangan suv bilan 100 daraja haroratda ekstraktsiyani o'z ichiga oladi; Ushbu protsedura oqsil miqdori, aminokislotalar, umumiy fenolik tarkib (TPC), umumiy flavonoid miqdori (TFC), DPPH radikalini tozalash faolligi, ABTS radikalini tozalash qobiliyati tahlili, FRAP tahlili, anti{2}}amilaza, boshqa ekstraksiya vaqtlari bilan solishtirganda anti-a-glyukozidaza va anti-glikatsiya. Bundan tashqari, Nangsew shtammlarining SPE shtammlari Eri shtammlari ekstrakti bilan solishtirganda ushbu ozuqaviy foydali moddalarning yuqori miqdorini ta'minladi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, Nangsew pilla bilan davolash jarayonida ekstraksiya qilingan seritsin asosida funktsional oziq-ovqatlar uchun tabiiy qo'shimchani ishlab chiqish bo'yicha davom etayotgan rejalarimiz uchun afzal qilingan shtammlar bo'ladi, bu esa funktsional ichimliklar ishlab chiqarishda muqobil imkoniyatlarni beradi.

Muallif hissalari:Konseptualizatsiya, CBand SS; Metodologiya, CBand SS; Validatsiya, CBand SS; Rasmiy tahlil, CBand SS; Tergov, CBand SS; Yozish — asl loyihani tayyorlash, CBand SS; Yozish - ko'rib chiqish va tahrirlash, CBand SS; Vizualizatsiya, CBandS.S. Barcha mualliflar qo'lyozmaning nashr etilgan versiyasini o'qib chiqdilar va rozi bo'ldilar.

Moliyalashtirish:Ushbu tadqiqot Tailand Ilmiy Tadqiqot va Innovatsiyalar (TSRI) va Siam Natural Products Co., Ltd tomonidan moliyalashtirilgan.

Institutsional nazorat kengashi bayonoti:Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.

Axborotlangan rozilik bayonoti:Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan. Ma'lumotlar mavjudligi to'g'risidagi bayonot: qo'llanilmaydi.

Minnatdorchilik:Hamkorlik va ilmiy yordam uchun Maxasarakham universitetining Laboratoriya uskunalari markazi. Kvinslend universiteti (Avstraliya) Kolin Rrigliga ingliz tilini o'qish uchun ham rahmat.

Manfaatlar to'qnashuvi:Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilmaydi.

Ushbu maqola Molecules 2021, 26, 2033 dan olingan. https://doi.org/10.3390/molecules26072033 https://www.mdpi.com/journal/molecules