Cistanche Deserticola bilan bog'langan endofitik qo'ziqorindan xrizogenamid A va uning SH-SY5Y hujayralariga neyroprotektiv ta'siri
Mar 03, 2022
Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Kirish
Cistanche deserticola(YC Ma) - Xitoyning shimoli-g'arbiy qismida joylashgan parazit o'simlik. Bu o'simlikning poyasi muhim an'anaviy xitoy tabobati bo'lib, buyrak etishmovchiligi va nevrasteniyani davolash uchun ishlatiladi ("Xitoy tibbiyoti lug'ati", 1977). dan feniltanoid glikozidlarCistanchedesertikolaBoshsuyagi asab kasalliklarini oldini olish va davolashda va erkin radikallarni yo'q qilishda faolliklari borligi xabar qilingan [1, 2]. Endofitik zamburug'lar yangi dorivor komponentlar va mezbon o'simliklardan bir xil/o'xshashlarni ishlab chiqarishi mumkinligiga asoslanib, muhim dorivor o'simliklarning endofitik zamburug'laridan yangi faol birikmalarni izlash yangi dorivor resurslarni o'zlashtirishning ahamiyatini ko'rsatadi. dan endofitik qo'ziqorinlardan yangi neyroprotektiv birikmalarni izlash jarayonidaCistanchedesertikolaXitoyning shimoli-g'arbiy qismidagi Ichki Mo'g'ulistondan to'plangan uchta faol shtamm SH-SY5Y hujayralari yordamida tekshirildi. Ular orasida Penicillium chrysogenum sifatida tasdiqlangan 005-sonli qo'ziqorinning madaniy bulyoni SH-SY5Y hujayralarida oksidlovchi stressdan kelib chiqqan hujayralar o'limiga qarshi muhim neyrosit himoya ta'sirini ko'rsatdi. Ushbu shtammning faol tarkibiy qismlari bo'yicha tadqiqotlar xrizogenamid A (1) ni (1-rasm) bioassay bilan boshqariladigan izolyatsiyalash protsedurasi orqali izolyatsiyasiga olib keldi. Bundan tashqari, G (2) [3], 2-[(2-gidroksipropionil) amino] benzamid (3) [4], 2- da to'rtta ma'lum birikma ajratilgan va sirmdat sifatida aniqlangan. ,3-dihidrosorbitsillin (4) [5] va (9Z,12Z)-2,3-dihidroksipropiloktadeka-9,12-dienoat (5) [6] , ularning spektroskopik ma'lumotlarini adabiyot ma'lumotlari bilan solishtirish orqali. Bu erda biz xrizogenamid A ning izolyatsiyasi, identifikatsiyasi va neyroprotektiv ta'siri haqida xabar beramiz.
Materiallar va uslublar
Qo'ziqorin moddasi Penicillium chrysogenum No. 005 namunasi Xitoyning shimoli-g'arbiy qismidagi Ichki Mo'g'ulistondan to'plangan C. deserticola ildizidan ajratilgan. Kartoshka dekstrozi agarda makroskopik ko'rinishda yoyilgan, silliq, baxmalsimon, ko'k-yashil koloniyalar, ba'zan esa engil gifalar o'sib chiqqan; koloniyalar yuzasida ko'pincha ko'p och sariq tomchilar paydo bo'ldi; teskari sariq. 005-sonli 18S ribosomali DNK gen ketma-ketligi (1676 nukleotid; Gen-Bank kirish raqami EU203859) bilan GenBank qidiruvi amalga oshirildi. Natijalar Penicillium chrysogenum turiga eng yaqin mos kelishini ko‘rsatadi. Makroskopik ko'rinishi va 18S rDNK gen ketma-ketligi asosida №005 Penicillium chrysogenum shtammi hisoblanadi.
Fermentatsiya va ekstraktsiya
Qo'ziqorin statik sharoitda 24 daraja haroratda 3{{10}} kun davomida suyuq muhit (30{{2{22}) bo'lgan 35 1000-ml konussimon shisha idishlarda o'stirildi. }}} ml/flflask) glyukoza (10 g/litr), maltoza (20 g/litr), mannitol (20 g/litr), natriy glutamat (10 g/litr), KH2PO4 (0,5 g/litr), MgSO4 · 7H2O (0,3 g / litr), makkajo'xori likyori (1,0 g / litr) va xamirturush ekstrakti (3,0 g / litr) va pH ni 7,0 ga sozlagandan keyin dengiz suvi. Fermentlangan butun bulon (10,5 litr) EtOAc bilan uch marta ekstrakte qilingan va EtOAc eritmasi olingan, u past bosim ostida konsentrlangan holda xom ekstrakt (9,5 g) hosil bo'lgan.
Tozalash
Xom ekstrakt (9,5 g) neft efiri/Me2CO ning bosqichli gradientli elyusiyasi yordamida silikagel ustunida 15 fraksiyaga ajratildi. 8 : 2 neft efiri/Me2CO bilan elutsiya qilingan fraksiya 2 MeOH dan qayta kristallanib, rangsiz igna shaklida 3 hosil qildi (8.{{10}} mg). 7 : 3 neft efiri/Me2CO bilan elutsiya qilingan 3 (19.{{30}} mg fraksiya yana teskari fazali ustun bilan ajratilgan (RP18, 40 6{{38) }} mm, Merck;MeOH - H2O 3:2→4:1→MeOH) fr olish uchun. 3 7 (8.0 mg), u keng qamrovli PHPLC (60 foiz MeOH, tarkibida {{70}.1 foiz TFA, 4.{77}) bilan tozalangan. } ml/minut) 4 (2.{{80}} mg) berish uchun. 6:4 neft efiri/Me2CO bilan elutsiya qilingan 4 fraksiyasi (26,0 mg) keyinchalik teskari fazali ustun bilan (RP18, 40 60 mm, Merck; MeOH - H2O 3:2→4:1→MeOH) ajratildi. fr. 4-3 (5,4 mg) va fr. 4-9 (7,6 mg). Keyin, fr. 4-3 keng PHPLC [YMC-pack ODS (A), 10 250 mm, 5 mm, 4,0 ml/min] (60 foiz MeOH, 4,0 ml/daqiqa) 2 (1,0 mg) hosil qilish uchun ajratildi va fr. 4-9 1 (4,0 mg) va 5 (2,6 mg) hosil qilish uchun keng PHPLC (80 foiz MeOH, 4,0 ml/daqiqa) bilan ajratildi. 1: och sariq rangli qattiq holatda olingan; [a]D 25 24,5 daraja (c 0,155, MeOH); UV (MeOH) l maksimal 208, 251 nm; CD (MeOH) (4-rasmga qarang); IQ (KBr) n max 3433, 3200, 3076, 2928, 2862, 1677, 1440, 1370, 1324, 1188, 1029 sm 1; 1 H- va 13C-NMR (1-jadvalga qarang); HRESI-MS m/z 448,2951 [MH] (C28H38N3O2 uchun hisoblangan, 448,2964)
DPPH radikallarini tozalash effekti
40 ml DPPH (1,1- difenil{{8} ga turli xil konsentratsiyali (1,0 mg/ml 0,0001 mg/ml) MeOH eritmasi (16{2}} ml) qo'shildi. }}pikrilgidrazil; Sigma) MeOH eritmasi (1,5 10 4 M). Sekin aralashtirib, xona haroratida 30 daqiqaga qoldirgandan so'ng, optik zichlik spektrofotometr yordamida 520 nm da o'lchandi. Har bir namunaning antioksidant faolligi IC50 (DPPH radikal shakllanishini 50 foizga inhibe qilish uchun zarur bo'lgan mg / ml yoki mM) bilan ifodalangan va log-doza inhibisyon egri chizig'idan hisoblangan.
cistanche deserticolaning neyroprotektivi
Hujayra madaniyati va dori bilan davolash
Inson neyroblastomasi SH-SY5Y xujayralari DMEM muhitida o'stirildi va 5,0 foiz CO2 bo'lgan namlangan atmosferada 37 darajada saqlangan. 5*104 hujayra ml-1 zichlikdagi bu hujayra suspenziyalari (180 ml) 96- quduq mikrotitr plitalariga solingan va 24 soat davomida inkubatsiya qilingan. yuqoridagi holat. Xrizogenamid A eritmasi (DMSOda 2,0 ml) har xil konsentratsiyalarda nazorat va model guruhlari bundan mustasno har bir quduqqa qo'shildi va yana bir xil sharoitda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. H2O2 (Sigma Chemical Co., MO, AQSh) 24 soat davomida 200 mM yakuniy konsentratsiyada SH-SY5Y hujayralarida apoptozni qo'zg'atish uchun qo'shildi. Hujayra hayotiyligi MTT tahlili yordamida aniqlandi. Fosfat tamponli sho'r suvda eritilgan MTT inkubatsiya oxirida 5,0 mg / ml (PBS) yakuniy konsentratsiyasiga qo'shildi va keyin 37 daraja 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. Supernatantni tashlab, hosil bo'lgan formazan mahsuloti eritildi.
Natijalar va muhokama
1 och sariq rangli qattiq holatda olingan. Molekulyar formula HRESI-MS tomonidan C28H37N3O2 sifatida aniqlandi (kuzatilgan [MH] m/z 448,2951, [MH] C28H38N3O2, 448,2964). IQ spektri NH (3433 va 3200 sm 1 ) va karbonil guruhi(lar) (1677 sm-1) mavjudligini taklif qildi. DMSO-d6 da qayd etilgan 1 H-NMR (1-jadval) spektri uchta metil guruhini (d H 0.62, 0.87, 0.98) va ikkita almashtiriladigan proton signallarini (d H 10.36 va 8.29) aniqladi. Bundan tashqari, uchta orfos bog'langan aromatik signallar (d H 6,90 dd, J 7,3, 7,3 Gts, 6,94 d, J 7,3 Gts va 7,18 J 7,3 Gts) 1,2 3- trialmashtirilgan benzol halqasini ko'rsatdi. Metilen protonlari (d H 3.23) olefin proton (d H 5.27) va ikkita vinil metil (d H 1.67 va 1.70) bilan birlashganda 3-metil{61}}butenil guruhi mavjudligini koʻrsatdi. da 1. Bu protonlar va yana 14 ta metin va yoki metilen protonlarining bir bog'lanish aloqalari HMQC tajribasi orqali o'rnatildi. 28 ta signalni ochib bergan 13C-NMR va DEPT (1-jadval) spektrlari ham ushbu ikki fragmentning mavjudligini tasdiqladi [uch almashtirilgan benzol halqasi (dC 123,6 CH, 120,8 CH, 127,7 CH, 122,1 QC va 140 a.) {79}}metil{80}}butenil (dC 28 CH2, 121,9 CH, 132,3 QC, 25,5 CH3 va 17,7 CH3)]; bundan tashqari, ikkita karbonil (dC 183.1 va 172.3), toʻrtta sp3 toʻrtlamchi uglerod (dC 46.5, 58.7, 60.4 va 62.3), ikkita sp3 metin (dC 46.1 va 58.7) va oltita sp3 metilen (dC 183.1 va 172.3.) 35.2, 39.9 va 64.9) ham kuzatildi. 12 ta toʻyinmaganlikdan 6 tasi hisoblanganligi sababli, 1 tasi oltita halqadan iborat degan xulosaga keldi. Ushbu spektral ma'lumotlarni keyingi baholash, 1 H-1 H COZY va HMBC natijalari bilan birga, 1 qo'ziqorin metabolitlarining markfortin guruhi bilan chambarchas bog'liqligini aniqladi [7]. HMBC korrelyatsiyalarining talqini (2-rasm) qisman A strukturasi mavjudligini ko'rsatdi (HMBC korrelyatsiyalari 1-NH dan C-8 va C-9; H-6 dan C{{ 136}}; H-5 dan C-7 va C-9; H-26 dan C-28 va C-8 va H{{143 }} dan C-29 va C-30) va B (HMBC korrelyatsiyalari H-10 dan C-3, C-22, C-21, C-11, C-12; H-20 dan C-13, C-18, C-22, C-11 va { {157}}NH dan C-13, C-10) va C, olti a'zoli G halqasi [8], C-17 da metillangan uglerod (HMBC korrelyatsiyalari H{{) 163}} dan C-17, C-16gacha). A dan B dan C-3gacha boʻlgan quyi tuzilmaning ulanishi H-4 va 1-NH dan C-3gacha boʻlgan asosiy HMBC korrelyatsiyalari bilan quvvatlangan; H-10 dan C-2 va C-9gacha. B va C tuzilmalarining azot atomi bilan bog'liqligi H{173}} dan C-17 va C-13 gacha bo'lgan asosiy HMBC korrelyatsiyalari va ularning C{176 ning tegishli kimyoviy siljishlarini solishtirish orqali aniqlandi. }} va C-17 (dC 64.9 va 58.7). Yuqoridagi tahlil shuni ko'rsatdiki, olti a'zoli G halqasining benzol halqasidagi yon zanjir va C-17 metildan tashqari, 1 markfortin A ga o'xshash tuzilishga ega. Shunday qilib, 1 ning yalpi tuzilishi 1-rasmda ko'rsatilganidek tayinlandi
NOESY ma'lumotlari asosida 1 ning nisbiy stereokimyosi aniqlandi (3-rasm). Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, 2-oksindol alkaloid tipidagi birikmalar markaziy besh a'zoli halqa oksidol bo'linmasi tekisligiga ortogonal bo'lgan konformatsiyani qabul qilgan [9].
H{0}} va H-10a, H-25 va 19-NH va H-10a oʻrtasidagi NOESY korrelyatsiyalari ularning ikkalasi ham ekanligini koʻrsatdi. siklopentanon halqasining yuzida ularni H-4 tomon yo'naltiradi va ko'rsatilgandek C-3 nisbiy stereokimyosini o'rnatadi. H-21, H-12a, H{9}}b, H-23 va H-24 oʻrtasidagi NOESY oʻzaro taʼsirlari mos keladigan oʻrinbosarlarni old yuzida birga joylashtirdi. siklopentanon halqasi. 1 uchun taklif qilingan nisbiy stereokimyo markfortin A nisbiy stereokimyosining tegishli xususiyatlariga mos keladi [7]. 200-250 nm da Paxta effekti bisiklo-[2.2.2] diazaoktan diketopiperazin yadrosi uchun diagnostik bo'lgan diketopiperazin amid bog'larining np* o'tishidan kelib chiqadi [10, 11]. 1 ning CD spektri (4-rasm) -brevianamid A [11] ning tegishli hududlari bilan bog'liq. Shunday qilib, 1 ning mutlaq stereokimyosi 3S, 11S, 13S, 17S, 21R bo'lishi kerak va unga xrizogenamid A nomi berildi. Xrizogenamid A ning neyrotsitlarga himoya ta'sirini dastlabki baholash SH-SY5 oksidlovchi stress tufayli kelib chiqqan hujayra o'limi yordamida baholandi. hujayralar MTT tahlili orqali. Xrizogenamid A ning erkin radikallarni tozalash faoliyati birinchi navbatda erkin radikal donor sifatida DPPH yordamida tekshirildi. C vitaminidan (IC50: 29,0 mM) farqli o'laroq, xrizogenamid A 100 mM gacha konsentratsiyada DPPH erkin radikalini tozalash qobiliyatini ko'rsatmadi (IC50 100 mM dan katta yoki unga teng). Shu bilan birga, biz SH-SY5Y inson neyroblastomasida xrizogenamid A hujayralarni oksidlovchi stressdan kelib chiqqan hujayra o'limidan himoya qiladimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik.
hujayralar. Vodorod periks bilan oksidlanish stressi nazorat guruhiga nisbatan hujayra hayotiyligini 43 foizga pasayishiga olib keldi. Xrizogenamid A 1*10-4 mM konsentratsiyada hujayralar hayotiyligini 59,6 foizga yaxshilagan holda vodorod peroksid tufayli kelib chiqqan hujayra o‘limini inhibe qilgan. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, xrizogen amid A antioksidant faolligi bilan emas, balki oksidlovchi stress tufayli kelib chiqqan hujayralar o'limiga qarshi neyrositlarni himoya qilish ta'sirini ko'rsatdi. G'ayrioddiy bisiklo [2.2.2] diazaoktan halqa tizimiga ega bo'lgan indol alkaloidlari Aspergillus [12, 9, 13], Penicillium [14 16] va Malbranchea [17] kabi zamburug'larning turli avlodlaridan ajratilgan. 1 ushbu birikmalar guruhining yangi a'zosi bo'lib, u 2005 yilda pentatsiklik spiroin dolinon alkaloidlarining yangi sinfi sifatida e'lon qilingan A va B sitrin administratorlarining biosintezida oraliq vosita bo'lishi kutilgan skeletga ega edi [18]. Strukturaviy nuqtai nazardan shuni ta'kidlash kerakki, 1 C-17 pozitsiyasida metillanishga ega noyob tuzilma va C-7 da izopren birligiga ega bo'lgan 2- oksidol qismidir. Bugungi kunga qadar ajratilgan ushbu indol alkaloidlarining ba'zilari kuchli antiparazitik faollikni [19], inson o'simta hujayralarini inhibe qilishni [13] va sitotoksiklikni [10] namoyish etadi. Bizning ma'lumotlarga ko'ra, bu alkaloidning ushbu turi tomonidan neyroproteksiyaning birinchi hisobotidir.
TasdiqlashUshbu ish Xitoy milliy tabiiy fanlar jamg'armasi (№ 30472136) tomonidan moliyaviy qo'llab-quvvatlandi.
Cistanche deserticola neyroprotektivi: Altsgeymer kasalligiga qarshi
Cistanche deserticola juda ko'p effektlarga ega, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing
Ma'lumotnomalar
Li LL, Vang XW, Vang XF. Antilipid peroksidatsiyasi va glikozidlarning nurlanishga qarshi ta'sirio't sistanches. Xitoy J Chin Mater Med 22: 364–367 (1997)
Xie JH, Vu CF. Etanol ekstraktining ta'siriCistanche deserticolakalamush miyasida monoamin neyrotransmitterlari tarkibiga. Chin Trad Herb Drugs 24: 417–419 (1993)
Dai JR, Carte BK, Sidebottom PJ, Yew ALS, Ng SB, Huang Y, Butler MS. Circumdatin G, Aspergillus ochraceus qo'ziqorinidan olingan yangi alkaloid. J Nat Prod 64: 125–126 84 2-rasm kalit HMBC va 1 H-1 H COSYY korrelyatsiyasi 1. 3-rasm NOESY 1ning. 4-rasm CD spektri 1.(2001)
Kettering M, Sterner O, Anke T. Qo'ziqorinlarning kimyoviy aloqasida antibiotiklar. Zeitschrift fuer Naturforschung, C: Biosciences jurnali 59: 816–823 (2004)
Trifonov LS, Bieri JH, Prewo R, Dreiding AS, Hoesch L, Rast DM. Verticillium intertextum dan uchta metabolitning ajratilishi va tuzilishini aniqlash: sorbitsillin, dihidrosorbitsillin va bisvertinoxinol. Tetraedr 39: 4243–4256 (1983)
Chjan GL, Xing QY, Chjan MZ. Mirabilis Himolayadan olingan glikolipidlar. Fitokimyo 45: 1213–1215 (1997)
Polonsky J, Merrien MA, Prange T, Pascard C, Moreau S. Penicillium roqueforti dan yangi alkaloid bo'lgan markfortin A ning izolyatsiyasi va tuzilishi (rentgen tahlili). JCS Chem Comm 13: 601–602 (1980)
Li BH, Kornis GI, Cialdella JI, Clothier MF, Marshall VP, Martin DG, McNally PL, Mizsak SA, Whaley HA, Wiley VH. Markfortinning oltita alohida uglerod atomida mikrobiologik gidroksillanish A. J Nat Prod 60: 1139-1142 (1997)
Whyte AC, Gloer JB, Wicklow DT, Dowd PF. Sklerotiamid: Aspergillus sclerotiorum sklerotiyasidan kuchli antiinsektan faolligi bilan paraherkuamid sinfining yangi a'zosi. J Nat Prod 59: 1093–1095 (1996)
Kato H, Yoshida T, Tokue T, Nojiri Y, Hirota H, Ohta T, Uilyams RM, Tsukamoto S. Notoamides AD: dengizdan olingan qo'ziqorinlardan ajratilgan prenillangan indol alkaloidlari, Aspergillus sp. Angew Chem Int Ed 46: 2254–2256 (2007)
Uilyams RM, Kwast E, Coffman H, Glinka T. Brevianamid A va B. J Am Chem Soc 111 ning ajoyib, enantio-divergent biogenezi: 3064–3065 (1989)
Banklar RM, Blanchflflower SE, Everett JR, Manger BR, Reading C. Aspergillus turlaridan yangi anthelmintik metabolitlar: aspergillimidlar. J Antibiot 50: 840-846 (1997)
Qian-Cutrone J, Haung S, Shu YZ, Vyas D, Fairchild C, Menendez A, Krampitz K, Dalterio R, Klohr SE, Gao Q. J Am Chem Soc 124: 14556–14557 (2002)
Wilson BJ, Yang DTC, Harris TM. Penicillium Viridicatum kulturalaridan brevianamid A ni ishlab chiqarish, izolyatsiya qilish va toksikligini dastlabki o'rganish. Appl Microbiol 26: 633–635 (1973)
Birch AJ, Rassell RA. XLIV biosintezi bilan bog'liq tadqiqotlar. B, C, D va F brevianamidlarning strukturaviy tushuntirishlari. Tetraedron 28: 2999–3008 (1972)
Liesch JM, Wichmann CF. Penicillium Charlzdan yangi antinematodal va antiparazitik vositalar. II. B, C, D, E, F va G. J Antibiot 43: 1380-1386 (1990) 17. Martinez-Luis S, Rodriges R, Acevedo L, Gonsales MC, Lira-Rocha A, Mata R paraherquamidlarning tuzilishini aniqlash Malbrancheamid, Malbranchea aurantiaca qo'ziqorinidan yangi kalmodulin inhibitori. Tetraedr 62: 1817–1822 (2006)
Mishima T, Tsuda M, Kasa Y, Ishiyama H, Fukushi E, Kawabata J, Vatanabe M, Akao K, Kobayashi J. Dengizdan olingan qo'ziqorinlardan A va B sitrinarlarining mutlaq stereokimyosi. J Org Chem 70: 9430–9435 (2005)
Lopez-Greta MP, Gonsales MC, Ciavatta L, Ayala I, Moya P, Primo J. Paraherquamidlar, paraherquamidlar, shu jumladan paraherquamid H va paraherquamid I, Penicillium cluniae dan ajratilgan ikkita yangi alkaloidlarning insektitsid faoliyati. J Agric Food Chem 54: 2921–2925 (2006)
Cistanche deserticola neyroprotektivi: Altsgeymer kasalligi va Parkinson kasalligiga qarshi
