Sichqonlarda Kongrong-Zaoren-Vumei ichimlik ekstraktining optimallashtirish va uyquni yaxshilash ta'siri

2 Natijalar va tahlillar

2.1 Kongrong-Zaoren-Vumey ichimliklar ekstraktini tayyorlash jarayonini optimallashtirish

 

1-rasmdan boshlab, o'rnatilgan HPLC usuli to'rtta mos yozuvlar birikmalarining xromatografik cho'qqilari - limon kislotasi, echinacoside, verbascoside va spinosin va qo'shni cho'qqilar o'rtasida samarali ajratishga erishdi. Saqlash vaqtlari mos ravishda tR1=9.0 min, tR2=21.6 min, tR3=24.3 min va tR4=25.9 min edi. Analit konsentratsiyasiga nisbatan cho‘qqi maydonining chiziqli regressiyasi 12,12–2016, 0,14–110, 0,18–112,50 va 2,44–18,30 µg·mL–1 chiziqli diapazonlarni berdi, R2 qiymatlari 0,9998, a’lo, chiziqli, 11,ca ko‘rsatdi. Bunday sharoitda limon kislotasi, echinakozid, verbaskozid va spinosinni aniqlash chegaralari (LOD) 3,636, 0,045144, 0,058 va 0,7564 mkg·mL–1, miqdoriy aniqlash chegaralari (LOQ) esa 12,14, 40,1 va 4,02,1 ni tashkil etdi. mkg·mL–1, mos ravishda. Aniqlik sinovlari to'rtta tahlil qiluvchi uchun 0,10%, 0,07%, 0,06% va 0,33% RSDlarni ko'rsatdi, bu yaxshi asbob aniqligini ko'rsatadi. 0-12 soat davomida barqarorlik yaxshi edi, RSDs 0,78%, 0,16%, 0,20% va 1,46%. Takroriylik testlari tahliliy moddalar uchun 0,51%, 0,42%, 0,37% va 0,38% RSD hosil qildi, bu yaxshi takrorlanuvchanlikni ko'rsatdi. Spike-tiklash testlari o'rtacha tiklanishni ko'rsatdi 97,42%, 103,32%, 98,90% va 99,71%, RSDs mos ravishda 0,70%, 0,52%, 1,05% va 0,63%. Shu sababli, ushbu to'rtta asosiy komponentni bir vaqtning o'zida aniqlash uchun o'rnatilgan HPLC usuli aniq va ishonchli bo'lib, keyingi jarayonni optimallashtirish tahlillari uchun javob beradi.

 

 

 

 

1-rasm HPLC kromatogrammalari va 210 nm toʻlqin uzunligidagi (A) va 330 nm toʻlqin uzunligidagi (B va C) eritmalar.

 

Xom polisaxaridlarni uslubiy baholashda LOD 0,098 µg·mL-1 ni tashkil etdi. 485 nm da hal qiluvchi bo'sh va blank nazoratining OD qiymatlari aniq o'zgarishlarni ko'rsatmadi, bu yaxshi o'ziga xoslikni ko'rsatadi. OD ning konsentratsiyaga nisbatan chiziqli regressiyasi R2=0.9997 ni berdi, bu ajoyib chiziqlilikni ko'rsatadi. Oltita ketma-ket o'lchov uchun RSD 0,47% ni tashkil etdi, bu yaxshi aniqlikni ko'rsatdi. 12 soat ichida polisakkarid tarkibi uchun RSD 0,44% ni tashkil etdi, bu yaxshi barqarorlikni ko'rsatadi. Oltita mustaqil tayyorlangan namunalar bo'yicha RSD 2,51% ni tashkil etdi, bu yaxshi takrorlanuvchanlikni ko'rsatadi. Demak, usul jarayonni optimallashtirish jarayonida xom polisaxaridlarning miqdorini aniqlash uchun javob beradi.

 

 

Qadimgi kitobda Cistanche Roucongong foydalari

Batafsil ma'lumot uchun bosing

Wecistanche qo'llab-quvvatlash xizmati - hamkorlik haqida batafsil ma'lumot olish uchun
Email:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

2.1.2 Bir faktorli tadqiqotlar natijalari

O'rnatilgan HPLC usulini polisakkarid tahlili bilan birgalikda qo'llash va ekstraktidagi limon kislotasi, echinacoside, verbascoside, spinosin va polisaxaridlarning tarkibini baholash indekslari sifatida olib, ortogonal dizaynni qo'llab-quvvatlash uchun ekstraktsiya harorati, qattiq-suyuqlik nisbati va ekstraktsiya vaqti bo'yicha bir faktorli tadqiqotlar o'tkazildi.

Ekstraktsiya harorati 60, 80 va 100 daraja bo'lganda, ekstraktlardagi limon kislotasi, echinacoside, verbascoside, spinosin va xom polisaxaridlarning tarkibi harorat o'sishi bilan ortadi.

Qattiq-suyuqlik nisbati 1:3, 1:5, 1:7, 1:10 va 1:12 (g·mL–1)da limon kislotasi, spinosin va xom polisaxaridlarning tarkibi yuqori nisbatlar bilan oshdi; echinacoside va verbascoside 1:10 (g · mL-1) da cho'qqisiga chiqdi va 1:12 (g · mL-1) da kamaydi. Biroq, barcha marker komponentlarining umumiy tarkibi qattiq-suyuqlik nisbati bilan ortdi.

0,5, 1,0, 1,5, 2,0 va 3,0 soatlik ekstraktsiya vaqtlarida alohida tahlil qiluvchi moddalarning tarkibi turlicha o'zgardi, ammo vaqt o'tishi bilan marker komponentlarining umumiy tarkibi ortib bordi.

Batafsil ma'lumotlar Qo'shimcha materiallarda keltirilgan. Sanoat amaliyligini hisobga olgan holda (ortogonal dizayn uchun omillar va darajalar 2-jadvalda ko'rsatilgan va ortogonal sxema 3-jadvalda ko'rsatilgan.

Jadval 2. Kongrong-Zaoren-Vumei ichimliklarini ekstraksiya qilish usuli uchun ortogonal eksperimental dizaynning omil darajalari

Faktorlar:

Javob: Ekstraksiya harorati (daraja)

B: Qattiq-suyuqlik nisbati (g mL–1)

C: Ekstraksiya vaqti (h)

Daraja	Javob: Harorat (daraja)	B: nisbat (g mL–1)	C: Vaqt (soat)
1	60	1:7	1.0
2	80	1:10	1.5
3	100	1:12	2.0

2.1.3 Ortogonal dizayn natijalari

Ekstraktsiya ortogonal massiv bo'yicha amalga oshirildi. Limon kislotasi, echinakozid, verbaskozid, spinosin va xom polisaxaridlarning tarkibi 3-jadvalda ko'rsatilgan. Diapazon (R) tahliliga ko'ra, umumiy marker tarkibiga omil ta'sir qilish tartibi A > B > C, ya'ni ekstraktsiya harorati > qattiq-suyuqlik nisbati > ekstraksiya vaqti. K qiymatlarini solishtirish A3B3C3 optimal kombinatsiyasini taklif qildi: ekstraktsiya harorati 100 daraja, qattiq-suyuqlik nisbati 1:12 (g·mL–1) va ekstraksiya vaqti 2 soat. ANOVA (4-jadval) shuni ko'rsatadiki, ekstraktsiya harorati umumiy marker tarkibiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi, qattiq-suyuqlik nisbati va vaqtining ta'siri sezilarli emas.

Jadval 3. Ortogonal eksperimental dizayn va Congrong-Zaoren-Vumei ichimligining o'lchangan tarkibiy qismlari (mg g-1)

Faktorlar: A (harorat), B (qattiq-suyuqlik nisbati), C (vaqt)

Sinov raqami.	A	B	C	Jami belgilar	Limon kislotasi	Spinosin	Echinacoside	Verbaskozid	Xom polisaxaridlar
1	3	3	1	116.71	75.55	4.08	1.62	0.48	34.98
2	1	2	3	70.98	59.01	2.60	0.80	0.36	8.22
3	3	1	3	117.86	73.87	3.53	1.21	0.45	38.80
4	1	3	2	72.55	59.73	2.37	0.94	0.41	9.99
5	2	3	3	83.64	63.20	2.15	1.08	0.44	16.77
6	2	1	2	117.76	74.09	2.58	1.37	0.48	39.24
7	2	2	1	110.74	70.96	2.36	1.07	0.43	35.92
8	2	1	1	69.63	58.37	1.74	0.54	0.34	8.65
9	1	1	3	69.66	58.14	2.48	0.86	0.36	7.83

K statistik ma’lumotlar (omil darajasi bo‘yicha jami yig‘indisi)

K1: A = 71.06, B = 85.72, C = 85.49

K2: A = 74.46, B = 86.29, C = 86.65

K3: A = 117.44, B = 90.97, C = 90.83

R diapazoni: A=46.38, B=5.25, C=4.19

2.1.4 Validatsiya va masshtabni kengaytirish

Optimal sharoitlarda jarayonni tekshirish barqarorlik va ishonchlilikni ko'rsatuvchi 0,57% RSD bilan 119,74 mg·g-1 marker komponentlarining o'rtacha umumiy tarkibini berdi. Xuddi shu sharoitda o'lchovni kengaytirish sinovi o'rtacha umumiy marker tarkibini 120,89 mg · g-1 RSD bilan 0,95% ni, oldindan o'lchov natijalariga mos keldi va mustahkamlikni yanada tasdiqladi. Uyqu bilan bog'liq keyingi tadqiqotlar uchun uchta masshtabli to'plamdan namunalar ishlatilgan; ularning o'rtacha tarkibi: limon kislotasi 77,73 mg·g-1, echinacoside 2,69 mg·g-1, verbascoside 1,03 mg·g-1, spinosin 0,50 mg·g-1, polisaxaridlar 38,93 mg·g–1.

Jadval 4. Ortogonal tajribalardan dispersiyani tahlil qilish

Faktor	Kvadratlar yig'indisi	df	O'rtacha kvadrat	F	P
Ekstraktsiya harorati	4010.50	2	2005.25	116.26	0.01
Qattiq-suyuqlik nisbati	49.79	2	24.90	1.44	0.41
Ekstraksiya vaqti	47.37	2	23.68	1.37	0.42

Liu va boshqalar. [16] Cistanche tubulosa'dan feniletanoid glikozidlarning suvli ekstraktsiyasini optimallashtirdi va 1:15 (g · mL-1), 80 daraja va 2 soatni optimal deb aniqladi; feniletanoid glikozid miqdori 90 darajadan yuqori kamaydi. Ushbu tadqiqotda echinacoside va verbascoside tarkibi 1:10 (g·mL-1) nisbatda cho'qqisiga chiqdi va 1:12 (g·mL-1) da pasaydi, ammo 60, 80 va 100 daraja haroratlarda ortdi. Bu nomuvofiqlik bizning ichimliklarimizda Cistanche deserticola (cho'l Cistanche) dan foydalanish va feniletanoid glikozidlarning erishiga ta'sir ko'rsatishi mumkin bo'lgan birga mavjud bo'lgan Suanzaoren va Vumeyning matritsa ta'siri bilan bog'liq bo'lishi mumkin.

5-jadval. Kongrong-Zaoren-Vumei ichimlik ekstraktining sichqonlarda to'g'ridan-to'g'ri uyquga ta'siri (n=12)

Guruh	Jami hayvonlar	Uxlayotgan hayvonlar	Uyqu darajasi (%)
Bo'sh	12	0	0
Estazolam	12	0	0
Kam dozali ekstrakt	12	0	0
O'rta dozali ekstrakt	12	0	0
Yuqori dozali ekstrakt	12	0	0

Xulosa qilib aytganda, HPLC va fenol-sulfat kislota usulidan foydalanib, biz limon kislotasi, echinacoside, verbascoside, spinosin va polisaxaridlar tarkibiga asoslangan ekstraktsiya jarayonini optimallashtirdik. Yagona faktorli va ortogonal tajribalar, so'ngra tekshirishdan so'ng optimal sharoit yaratildi: 100 daraja, 1:12 (g·mL–1) qattiq-suyuqlik nisbati va 2 soatlik ekstraksiya vaqti, kelajakda sanoat rivojlanishi uchun ma'lumot beradi.

Industrialization context: WECISTANCHE (Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd., established 2003) operates a vertically integrated cistanche supply chain with seed-breeding bases (~20,000 acres), cultivation bases (>85 000 akr), yangi tsistanche saqlash sig'imi (~ 15 000 tonna) va tozalash va konsentratsiyalash uchun ilg'or ultrafiltratsiya va nanofiltratsiya bilan jihozlangan GMP sertifikatiga ega ishlab chiqarish ustaxonalari (100 000 toifali toza xonalar), shuningdek, 10 000 toifali mikrobiologiya laboratoriyasi. Sertifikatlarga Xitoy SC, HACCP va organik dasturlar (masalan, NOP) kiradi. Ushbu infratuzilma optimallashtirilgan suvli ekstraksiya va marker-standartlashtirish protokolini to'g'ridan-to'g'ri eksportga mos keladigan, funktsional ichimliklar va ekstraktlarni ishlab chiqarishga to'g'ridan-to'g'ri tarjima qilishni qo'llab-quvvatlaydi.

6-jadval. Ekstraktning sichqonlarda natriy pentobarbitalning hipnotik ta'siriga ta'siri (x̄ ± s, n=12)

Guruh	Jami hayvonlar	Uxlayotgan hayvonlar	Uyqu darajasi (%)
Bo'sh	12	1	8.33
Estazolam	12	10	83.33**
Kam dozali ekstrakt	12	4	33.33
O'rta dozali ekstrakt	12	5	41.67
Yuqori dozali ekstrakt	12	6	50.00*

Eslatma: Bo'sh guruh bilan taqqoslaganda, * P <0,05; ** P <0,001.

 

2.2 Ekstraktning sichqonchaning xatti-harakati va uyquga ta'siri

2.2.1 To'g'ridan-to'g'ri uyqu

5-jadvalda ko'rsatilganidek, 30 kunlik uzluksiz qabul qilinganidan so'ng, estazolam guruhidagi va past/o'rta/yuqori dozali ekstrakt guruhlaridagi sichqonlar oxirgi dozadan keyin 20 minut ichida aniq uyquni ko'rsatmadi, bo'sh guruhga nisbatan sezilarli farqlar yo'q. Bu ekstrakti qabul qilingandan keyin 30 kunlik uyquni qo'zg'atuvchi ta'sir ko'rsatmaydi.

 

2.2.2 Xulq-atvor effektlari

Ochiq maydon testi sedativga o'xshash ta'sirlarni baholadi. Umumiy bosib o'tgan masofaga va markazga kirishga ta'siri 2-rasmda ko'rsatilgan. Bo'sh guruh bilan solishtirganda, estazolam statistik ahamiyatga ega bo'lmagan holda umumiy masofani va markazga kirishni mos ravishda 14,48% va 31,07% ga oshirdi. Past dozali ekstrakt umumiy masofani 25,10% ga (P <0,05) sezilarli darajada oshirdi va markazga kirishni 50,93% ga sezilarli darajada oshirdi. O'rtacha doza umumiy masofa va markazga kirishni 27,09% va 72,33% ga sezilarli darajada oshirdi (P <0,05). Yuqori doza umumiy masofa va markazga kirishni mos ravishda 15,60% va 40,78% ga oshirdi, ahamiyatsiz. Estazolamga nisbatan past/o‘rta/yuqori dozalar umumiy masofani 1,73, 1,87 va 1,07 martaga, markazga kirishlar esa mos ravishda 1,64, 2,33 va 1,31 martaga ko‘paygan, hech biri ahamiyatli emas. Ushbu natijalar ekstrakt 30 kundan keyin ochiq maydonda tashvishga o'xshash xatti-harakatni kamaytiradi, bu esa tinchlantiruvchi ta'sirni ko'rsatadi.

2.2.3 Eshikdan past natriy Pentobarbital-induktsiyali uyqu

6-jadvalda ko'rsatilganidek, bo'sh guruh bilan solishtirganda, estazolam va barcha uchta ekstrakt dozalari natriy pentobarbitalning pastki dozasi ostida uyqu tezligini oshirdi. Estazolam uxlab yotgan hayvonlarning sonini bo'shga nisbatan 9 baravar oshirdi (P <0,001). Past, o'rta va yuqori dozali ekstrakt guruhlari uxlab yotgan hayvonlarni mos ravishda 3, 4 va 5 barobarga oshirdi; faqat yuqori doza statistik ahamiyatga ega bo'ldi (P <0,05). Estazolam bilan solishtirganda, ekstrakt dozalarining hech biri kuchliroq uyquni qo'zg'atuvchi ta'sir ko'rsatmadi. Shunday qilib, ekstrakt ma'lum darajada natriy pentobarbital tomonidan qo'zg'atilgan uyquni kuchaytirishi mumkin.

 

2.2.4 Sodium Pentobarbital Sleep Latency

Bo'sh guruh bilan solishtirganda, estazolam va barcha uchta ekstrakt dozalari pentobarbital sabab bo'lgan uyqu kechikishini sezilarli darajada qisqartirdi (P <0,001). Estazolam kechikish vaqtini 58,44% ga kamaytirdi (P <0,001). Past, o'rta va yuqori dozali ekstrakt guruhlari kechikishni mos ravishda 29,59%, 31,42% va 53,83% ga kamaytirdi (barchasi P <0,001). Past va o'rta dozalar o'rtasida sezilarli farq yo'q edi; yuqori doza estazolamga o'xshash ta'sirga ega bo'lgan past va o'rta dozalarga nisbatan 34,43% va 32,69% (P <0,01) bilan solishtirganda kechikishni sezilarli darajada qisqartirdi (7-jadval). Shu sababli, har uch doza ham pentobarbital tufayli uyqu kechikishini sezilarli darajada qisqartirdi, yuqori doza esa eng yaxshi natija beradi.

An'anaviy xitoy dori-darmonlari uyqusizlikni davolash uchun noyob afzalliklarni taklif qiluvchi bir nechta maqsadlarga ta'sir qiluvchi turli xil bioaktiv tarkibiy qismlarni o'z ichiga oladi [17]. Uyqu muammolariga e'tibor ortib borayotganligi sababli, dorivor va qutulish mumkin bo'lgan TCMlar uyqu modulyatsiyasi uchun tobora ko'proq o'rganilmoqda [18]. Masalan, asosan Suanzaoren va Poriyani o'z ichiga olgan kompozitsion qattiq ichimlik 5-HT, DA va GABA [19] dagi o'zgarishlar tufayli sichqonlarda pentobarbital sabab bo'lgan uyqu kechikishini va uzaygan uyqu davomiyligini sezilarli darajada qisqartirdi. Bu erda ekstrakt pentobarbital ostidagi uyquni sezilarli darajada oshirdi va pentobarbital sabab bo'lgan uyqu kechikishini qisqartirdi, uyqu boshlanishini rag'batlantirdi va kechikishni kamaytiradi, shu bilan birga to'g'ridan-to'g'ri uyquni qo'zg'atuvchi ta'sir ko'rsatmaydi. O'lchangan asosiy komponent tarkibi, kamayish tartibida: limon kislotasi (77,73 mg · g - 1), polisakkaridlar (38,93 mg · g - 1), echinacoside (2,69 mg · g -1), verbaskozid (1,03 mg · g - 1) va spinosin (0,50 mg · g -1). Spinosin pentobarbital tufayli uyquni kuchaytirishi ko'rsatilgan; u REM bo'lmagan uyquni oshirishi va uyqu-uyg'onishni tartibga soluvchi miya hududlarida c-Fos ifodasini o'zgartirishi mumkin [20], PCPA tomonidan qo'zg'atilgan uyqusizlikni susaytiradi, uyqu kechikishini kamaytiradi va uyquni uzaytiradi [21]. Verbascoside anksiyolitik, gipnoz va mushaklarni bo'shashtiruvchi faollik haqida xabar bergan [22]. Aksincha, asosiy tarkibiy qismlar - limon kislotasi, polisakkaridlar (Cistanche, Suanzaoren va Vumeydan) va echinacoside - uyquni yaxshilash bo'yicha kamroq to'g'ridan-to'g'ri hisobotlarga ega; ammo, TCM polisaxaridlari (masalan, Acanthopanax senticosus polysaccharides) bo'yicha so'nggi tadqiqotlar SIRT1/PGC-1 [23] kabi yo'llar orqali uyquning potentsial foydasini ko'rsatadi. Shuning uchun limon kislotasi, polisakkaridlar va echinacosidelarning uyqu modulyatsiyasidagi roli qo'shimcha o'rganishni talab qiladi.

 

7. Ekstraktning sichqonlarda natriy pentobarbital tomonidan qo'zg'atilgan uyqu kechikishiga ta'siri (x̄ ± s, n=12)

Guruh	Jami hayvonlar	Uyquning kechikishi (daq)
Bo'sh	12	32.34 ± 4.27
Estazolam	12	13.44 ± 3.20**
Kam dozali ekstrakt	12	22.77 ± 5.81**#
O'rta dozali ekstrakt	12	22.18 ± 6.05**#
Yuqori dozali ekstrakt	12	14.93 ± 3.35**

Eslatmalar:

Bo'sh guruh bilan taqqoslaganda: ** P <0,0001.

Yuqori dozali ekstrakt guruhi bilan solishtirganda: # P <0,01.

 

3 Xulosa

Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen va Mume Fructus shifobaxsh oziq-ovqat TCMlaridan Congrong-Zaoren-Vumei ichimlikini shakllantirish uchun foydalanib, biz uning ekstraktini tayyorlash jarayonini to'rtta marker komponenti (exinakozid, verbaskozid, spinosin, limon kislotasi va limon kislotasi kabi) tarkibidan foydalangan holda optimallashtirdik. Optimal ekstraksiya shartlari 100 daraja, qattiq-suyuqlik nisbati 1:12 (g·mL–1) va 2 soat sifatida aniqlandi, bu sanoat ishlab chiqarishi uchun nazariy yo'l-yo'riq beradi. Keyingi baholash shuni ko'rsatdiki, 30 kunlik uzluksiz qabul qilish sichqonlarda to'g'ridan-to'g'ri uyquni qo'zg'atuvchi ta'sirga ega emas, ammo bu ochiq maydon testida tashvishga o'xshash xatti-harakatni sezilarli darajada kamaytirdi (sedativ ta'sir ko'rsatadi), natriy pentobarbitalning pastki dozasi ostida uyquni kuchaytirdi va pentobarbitalning uyqusizlik darajasini sezilarli darajada qisqartirdi. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, optimallashtirilgan jarayonda tayyorlangan ekstrakt sichqonlarda uyquni yaxshilash uchun qulay ta'sir ko'rsatadi va Cistanche asosidagi uyquni yaxshilaydigan mahsulotlar qatorini ishlab chiqish uchun ilmiy asos yaratadi.

Application and manufacturing note: Given the optimized aqueous extraction and the need to standardize to marker profiles (citric acid, echinacoside, verbascoside, spinosin, plus polysaccharides), WECISTANCHE's integrated cistanche value chain and GMP infrastructure-100,000-class clean workshops certified for National Health Food GMP, advanced ultrafiltration/nanofiltration concentration systems, a 10,000-class microbiology lab, and certifications such as China SC, HACCP, and organic/NOP-allow reliable scale-up from lab to industrial batches. The company's large agricultural bases (seed-breeding ~20,000 acres; cultivation >85 000 akr; yangi sistanche saqlash ~15 000 tonna) xom ashyoning mustahkamligi va xalqaro standart QCni qo'llab-quvvatlaydi, bu AQSh/Yevropa Ittifoqi talablariga javob beradigan funktsional ichimliklar va sog'liq uchun qo'shimchalarni tijoratlashtirishni osonlashtiradi.