AAVlar bilan in Vivo gen terapiyasining hozirgi klinik qo'llanilishi 5-qism
Jul 25, 2024
Tizimli AAV xavfsizligini hisobga olish
Gemofiliya bilan bog'liq tadqiqotlarda qo'llaniladigan vektor dozalarining 120-katta diapazonida (5 1012 dan 6 1013 mg/kg) tizimli AAVni qo'llash natijasida minimal qisqa muddatli xavfsizlik bilan bog'liq muammolar mavjud (1 va 2-jadvallar).
AAV (adeno-associated virus) administratsiyasi hozirda gen terapiyasi sohasida keng qo'llaniladigan texnologiyadir. So'nggi yillarda tobora ko'proq tadqiqotlar AAV ma'muriyati xotirani ma'lum darajada yaxshilashi mumkinligini tasdiqladi.
AAV ma'muriyatining mohiyati ma'lum bir kasallik yoki simptomni davolashga erishish uchun inson hujayralariga terapevtik yoki takomillashtirish ta'siriga ega genlarni kiritishdir. Xotirani o'rganishda olimlar sichqonlar miyasiga xotira bilan bog'liq genlarning kiritilishini o'rganadilar va bu sichqonlar yaxshi xotirani ko'rsatishi mumkinligini aniqlaydilar.
Xususan, AAV ma'muriyati tomonidan yaratilgan xotirani yaxshilash effekti asosan ikki jihatdan aks ettirilgan. Birinchidan, ba'zi genlar neyronlar o'rtasidagi aloqani kuchaytirishi mumkin, shu bilan neyronlar o'rtasidagi axborot almashinuvini kuchaytiradi va xotira shakllanishini yanada barqaror va ishonchli qiladi. Ikkinchidan, ba'zi genlar neyron ildiz hujayralarining ko'payishi va farqlanishiga yordam berishi mumkin, shu bilan miyada ko'proq yangi neyronlar hosil bo'lib, miya xotirasi zaxirasini boy qiladi.
Xulosa qilib aytganda, AAV ma'muriyati va xotira o'rtasidagi munosabatlar ijobiydir. Gen terapiyasi texnologiyasi hali keng qo'llanilmagan bo'lsa-da, u bilan bog'liq ilmiy tadqiqotlar biz uchun uning katta salohiyati va rivojlanish istiqbollarini ochib berdi. Kelajakda texnologiyaning uzluksiz rivojlanishi va tadqiqotlarning chuqurlashishi bilan biz ushbu texnologiya inson salomatligi va farovonligiga yanada ijobiy hissa qo'shishiga ishonamiz. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki u antioksidant, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirga ega, bu miyadagi oksidlanish va yallig'lanish reaktsiyalarini kamaytirishga yordam beradi va shu bilan miyaning sog'lig'ini himoya qiladi. asab tizimi. Bundan tashqari, Cistanche nerv hujayralarining o'sishi va tiklanishiga yordam beradi va shu bilan neyron tarmoqlarning ulanishi va funktsiyasini oshiradi. Ushbu effektlar xotirani, o'rganish qobiliyatini va fikrlash tezligini yaxshilashga yordam beradi, shuningdek, kognitiv disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarning paydo bo'lishining oldini oladi.
Qisqa muddatli xotirani yaxshilash uchun "Bilish" tugmasini bosing
Taxminan 5 ta ishtirokchi 3 ta sinovda 2 10126 1013 mg/kg dozada vektor-infuzion reaktsiyalarni boshdan kechirdi, ular isitma, miyalgiya va/yoki gipotenziya bilan xarakterlanadi, ular tug'ma immunitet reaktsiyasiga mos keladi.
141,150,152 Tizimli AAV infuzionining dozani cheklovchi toksikligi haqidagi maslahatlar nogemofiliya klinik sinovlari kuzatuvlari bilan tasdiqlangan, jumladan: Zolgensma (1 1014 mg/kg) infuziondan keyingi gepatotoksisite haqida xavfsizlik bo‘yicha ogohlantirish, DMD ning to‘ldiruvchi triaktivatsiyasida shubhali 10133 1014 mg/kg) natijasida sitopeniyalar va buyrak toksikligi va vektor infuzionidan 46 hafta o'tgach, ilgari mavjud gepatobiliar kasallikning rivojlanishi sharoitida XLMTM sinovining 3 1014-vg/kg kohortida 3 ta o'lim.
13,176,177 Bu kuzatuvlarning kompozit tahlili davom etmoqda va barcha tizimli AAV ishlari uchun dolzarb bo‘lib, immun javoblar bilan bog‘liq holda AAV serotiplari o‘rtasidagi potentsial o‘ziga xos farqlarni o‘z ichiga oladi. Barcha AAV serotiplari gepatotsitlarni o‘tkazishini hisobga olsak, uzoq muddatli xavfsizlik masalalari asosan gepatotoksik mutatsiyalar xavfiga qaratilgan. natijada gepatotsellyulyar karsinoma (HCC).
Asosan integral bo'lmagan, klinikadan oldingi ma'lumotlar AAV integratsiyasi hodisalari faol transkripsiya joylarida integratsiyani afzal ko'rgan holda dozaga bog'liq tarzda sodir bo'lishini ko'rsatsa-da, to'qimalarga xos promotorlar onkogenezdan himoya qiladi. genotoksiklik xavfini kamaytirish uchun gepatotsitlarga xos promouter bilan vektor dozasi.
Hemophilia is a provocative model to study AAV-related HCC genotoxicity because 90% of severe hemophilia patients >35 yil davomida yatrogen gepatit C virusi (HCV) bilan kasallangan, bu HCC rivojlanishi uchun aniqlangan xavf omilidir.
181–185 Yaqinda nashr etilgan 15-Yillik kuzatuv maʼlumotlari HB boʻlgan 4 ta subʼyektning gepatotoksisite yoki boshqa uzoq muddatli toksik taʼsirlarni tasdiqlovchi dalillari yoʻq; ammo, xulosalar transduktsiya qilingan gepatotsitlarda tasdiqlangan transgen qat'iyligi yo'qligi bilan cheklangan.186
FVIII/FIX Transgen xavfsizligi: tromboz va allo-inhibitorli antikor hosil bo'lish xavfi
Barcha HA klinik sinovlarida B-domenida oʻchirilgan FVIII (BDD-FVIII) transgen ishlatiladi, u toʻliq prokoagulyant funksiyasini saqlab, AAV qadoqlash cheklovlariga (4,7 kb) javob beradi va ifodani kuchaytiradi.
187–189 Deyarli barcha HA sinovlarida standart FVIII B-domenli og‘ir va yengil zanjir bog‘lovchisi, FVIII-SQ.190 Bitta sinov muqobil BDD-FVIII, FVIII-V3 dan foydalaniladi, bunda 6 ta qo‘shimcha N-bog‘langan glikozillanish joylari qo‘shilgan. ifodani yaxshilash uchun SQ bogʻlovchisi.154,191HB sinovlari FIX-Padua (FIX-R338L) transgenini universal tarzda moslashtirdi, bu esa FIXning yovvoyi turiga nisbatan 8-katta koʻproq oʻziga xos faollikni taʼminlaydi.
192,193 Og'ir HA (30%) va HB (5%) da allo-inhibitor antikorlar, "ingibitorlar" paydo bo'lishining ma'lum bo'lgan holatlarini hisobga olgan holda, FVIII-SQ va FIX-R338L transgenlaridan foydalanish immun reaktsiyaning nazariy xavotirini kuchaytiradi. transgendan olingan oqsil.
194,195 rFVIII-SQERT bo'yicha 20 yillik tajribaga muvofiq, inhibitor xavfining ortishi yo'qligini ko'rsatgan holda, hech qanday HA gen-terapiya sub'ektlarida inhibitor ishlab chiqilmagan. funktsiyasi FVIII variantlari (Samelson-Jones va Arruda 199da ko'rib chiqilgan) va xuddi shunday terapevtik foyda bilan xavfsiz bo'lishi mumkin.
Biroq, sinovni ro'yxatdan o'tkazish mezonlari FVIII/FIX proteiniga sezilarli darajada ta'sir qilishni talab qiladi va ingibitorlar tarixi bo'lgan bemorlarni istisno qiladi. Shunday qilib, mavjud bo'lgan gen terapiyasi ma'lumotlari bemorlarda aninhibitorni rivojlanish ehtimoli kamligini aks ettiradi. Shunga qaramay, gepatotsitlar tomonidan boshqariladigan genlarni o'tkazish FVIII, FIX yokiFIX-R338L tolerantligini qo'zg'atish qobiliyatini ko'rsatadigan sichqoncha va itlar ma'lumotlari bilan gen terapiyasidan keyin inhibitor hosil bo'lish xavfining pastligi tasdiqlanadi.200-203
Ushbu klinikadan oldingi muvaffaqiyatlar, ayniqsa, inhibitorlari204 va boshqa kasalliklar (masalan, Pompe kasalligi; Doerfler va boshq.205da ko'rib chiqilgan) bo'lgan HA bemorlar uchun to'g'ri keladigan tolerantlik induksiyasi uchun genlarni o'tkazish bo'yicha keyingi tadqiqotlarni qo'llab-quvvatlaydi.
Protromboz xavfi bo'yicha mavjud biokimyoviy ma'lumotlar FIX-R338L ning tabiatan protrombotik emas, yovvoyi tipdagiFIXga o'xshash faollashtirilgan va inaktivlanganligini ko'rsatadi.193
Bundan tashqari, sichqoncha ma'lumotlari FIX-R338L va yovvoyi FIX-dagi trombotik hodisalarni supraterapevtik FIX: C bilan bog'liqligini ko'rsatdi va FIX-R338L.201ga xos emas edi.
Epidemiologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, suprafiziologik FIX: C suprafiziologik FVIII (OR8.821.3) ga nisbatan o'rtacha mustaqil xavf omili venoz trombozdir (Odds nisbati [OR] 1,84.0). Oddiy yoki engil gemofiliya oralig'ida xavfsizlik bilan bog'liq muammolarsiz FIX: C darajasiga erishildi.
So'nggi ma'lumotlarga ko'ra, bitta FIX-R338L sinovi FIXga erishgan sub'ektda tromboz haqida xabar berdi: C > 200% me'yorda (bir bosqichli tahlil [OSA] bo'yicha) potentsial ko'p hissa qo'shadigan protrombotik kasalliklar, jumladan, semizlik, buyrak etishmovchiligi va yaqinda to'xtash. to'g'ridan-to'g'ri og'iz orqali qabul qilinadigan antikoagulyant145 (rebound protrombotik holatga shubha qilingan209).
Shunga qaramay, ushbu kuzatuv omil faolligi va tromboz haqidagi ma'lum epidemiologik ma'lumotlar bilan birgalikda, terapevtik oynada, ayniqsa protrombotik komorbidiyalar sharoitida ifodani saqlab qolish muhimligini ta'kidlaydi.
HA va HB gen terapiyasining samaradorligi bo'yicha savollar
Epidemiological data may guide target therapeutic FVIII/FIX expression. Potentially targeting FVIII/FIX: C, >Oddiy postgen transferining 10% dan 150% gacha suprafiziologik FVIII/FIX: C206-208 bilan bog'liq yuqorida aytib o'tilgan protrombotik xavflar va mavjud bo'lgan HA tabiiy tarixi ma'lumotlari tomonidan qo'llab-quvvatlanadi, bu FVIII: C ning R12% normal (OSA tomonidan) oldini olish uchun etarli ekanligini ko'rsatadi. o'z-o'zidan bo'g'imlarning qon ketishi.210
Muhimi, FVIII-SQ va FIX-R338L ikkala transgen mahsulotlari ham sinovlar davomida takrorlanishi mumkin bo'lgan omil faolligining OSAversus xromogen tahlili (CSA) determinantlarida o'zgaruvchan faollik o'lchovlarini namoyish etadi. tahlildagi nomuvofiqliklar FIX-R338L biokimyosi bilan bog'liq.192,201,211,212
Gepatotsitlardan olingan FVIII/FIX-R338Lis ning vivo gemostatik funktsiyasini qaysi tahlil eng yaxshi bashorat qilishini tushunish klinik boshqaruvga taalluqlidir, chunki barqaror FVIII: C/FIX: C, foydalanilgan tahlilga qarab, engil/o'rtacha gemofiliya klinik chegaralarini kesib o'tadi,152,155 FVIII:C/FIX: C (Harringtonet boshq., 2020, WFH Virtual Summit, konferensiya), 145,146 va supraterapevtik FVIII:C/FIX: C (Harrington va boshq., 2020, WFH Virtual Summit, konferensiya).145
FVIII antigenining dastlabki ma'lumotlari CSA tomonidan aniqlangan FVIII: C,153 bilan o'zaro bog'liq bo'lsa, OSA tomonidan aniqlangan FVIII: C ni qo'llab-quvvatlovchi dastlabki fenotipik ma'lumotlar gepatotsitlardan olingan FVIII bilan in vivo jonli bog'liq bo'lsa, 152 gepatotsitlardan olingan FVIII ko'rsatkichi uning prostatektoridan ko'proq oson o'zgarishi mumkinligini ko'rsatadi.
Terapevtik FVIII/FIX ifodasining ruxsat etilgan diapazonini belgilash uchun transgen gemostatik funksiyasini aniq oʻlchash zarur. Sichqoncha, 213 koʻp HA va HB oʻrtasidagi transduksiyadagi 7-katta farqni koʻrsatuvchi inson gepatotsitlarining kimerik sichqoncha modelidagi hisobotlarga mos keladi. Sinovlar FVIII:C/FIX: C da bir xil vektor va dozada R10-katta o'zgaruvchanlikni ko'rsatdi (Harrington va boshq., 2020, WFH Virtual Summit, konferentsiya).145,149,150,153
Ushbu o'zgaruvchanlikning bir qismi qisman transduktsiyalangan gepatotsitlar tomonidan taqdim etilgan kapsid peptidlariga gipoteza qilingan hujayra immun javobi bilan izohlanishi mumkin, bu transgen ekspressiyasining pasayishiga yoki yo'qolishiga olib keladi va shu bilan samaradorlikni cheklaydi.214
Bundan tashqari, vektor CpG motiflari potentsial immun stimulyator bo'lishi mumkin va kapsid reaktsiyasiga hissa qo'shishi mumkin; 215 haqiqatdan ham, kassetali CpG boyitish 3 HB sinovlarida steroid aralashuviga qaramasdan transgen ekspressiyasining yo'qolishiga olib kelgan.140,143,216
Kengroq maʼnoda vektor infuziyasidan transgen ifodasigacha boʻlgan koʻp bosqichlar (Li va Samulski 217-da koʻrib chiqilgan) oʻzgaruvchanlik potentsialiga ega boʻlishi, ehtimol 10- barobardan kam boʻlsa-da, terapevtik transgen ekspressiyasiga toqat qilish zarurligini bildiradi.
Va nihoyat, aniqlanmagan bo'lsa-da, HA / HB klinik sinovlarida transgen ekspressiyasining chidamliligi boshqa AAV gepatotsitlariga yo'naltirilgan genoterapiya haqida ma'lumot berishi mumkin. HBda o'tkazilgan birinchi muvaffaqiyatli tizimli AAV sinovidan olingan klinik ma'lumotlar, AAV vositachiligida gen ko'chirilgandan so'ng itlar HA va HBdatadagi 163,164 ko'zgu kuzatuvlari, gen o'tkazilgandan keyin 8 yil o'tgach, bardoshli ifodani ko'rsatadi.139,164,218,219
Bundan farqli o'laroq, birinchi muvaffaqiyatli HA gen terapiyasi sinovi vektordan 14 yil o'tib ekspressiyasining pasayishini xabar qildi,151 shunday nashr etilgan 3-yil FVIII: C 6 ta {{{ 10}}vg/kgkohort, kutilayotgan litsenziyalangan doza.
Yaqinda yana bir HA sinovi 5 ta sub'ektda (5 10111 1012 vg/kg kohorta) 23,3 yil davomida barqaror va bardoshli FVIII ifodasini ko'rsatdi, bu barqaror va bardoshli gepatotsitlardan kelib chiqqan FVIII ekspressiyasini qo'llab-quvvatladi.152
Birinchi HA sinovida kuzatilgan150 FVIII ifodasining pasayishini potentsial tushuntirish uchun bir nechta gipotezalar ishlab chiqilgan, ular quyidagilarni o'z ichiga oladi: AAV vositachiligida FVIII gen o'tkazilishidan keyin HA sichqoncha modellarida qarama-qarshi ma'lumotlar bilan heterolog ekspresyon tizimlarida bildirilgan FVIII ochilgan oqsil javobi (UPR) 220-222 yoki vektorga xos xususiyatlar (masalan, ishlab chiqarish platformasi, kassetaning o'lchami, dozasi, kapsid va boshqalar).
Shunisi e'tiborga loyiqki, birinchi muvaffaqiyatli HA sinovida 3-yilda barqaror ifodalangan yagona sub'ektda FVIII: C 100% me'yorga ega, FVIII: C esa ifodani yo'qotgan sub'ektlar orasida engil va o'rtacha HA diapazoniga kesib o'tgan yoki barqaror bo'lgan 150,151 qiymatga ega. va boshqa sinovda bardoshli.152 Garchi dastlabki va aniq bo'lmasa-da, bu ma'lumotlar FVIII: C darajasida kuzatilgan pasayish yoki barqaror ifoda FVIII ifodasiga bog'liq emasligini ko'rsatadi, bu esa FVIII UPRni ifoda yo'qotilishining asosiy aybdoriga aylantiradi. HA gen terapiyasida muvaffaqiyat yaqinda bo'ldi va davom etayotgan kuzatuvlar FVIII chidamliligi haqida ma'lumot beradi.
Ekspressiyaning mustahkamligi, ayniqsa, barcha sub'ektlarda tizimli AAV vektor infuziyasidan so'ng yuqori titrli AAV NAblar rivojlanishini hisobga olgan holda, ayniqsa muhimdir, bu bir xil AAV serotipini takroriy kiritishni istisno qiladi.
Yuqori titrli NAb ni qo'llab-quvvatlovchi ma'lumotlarning aksariyati tizimli AAV samaradorligini istisno qilsa-da, homiy NHPlarda yoki AAV5 NAb musbat bo'lgan odamlarda tizimli AAV5vektoridan keyin aniqlanishi mumkin bo'lgan transgen ifodasi haqida xabar bergan.148,223
Qo'shimcha tushuncha berishi mumkin bo'lgan ikkita davom etayotgan sinov, Nab-pozitiv sub'ektlarni ro'yxatdan o'tkazish (ClinicalTrials.gov: NCT03520712 va NCT03569891). Shunga qaramay, AAV gumoral immunitetining uzoq umr ko'rishi birinchi tizimli AAVtrialning 15- yillik kuzatuvi bilan tasdiqlanadi, bunda infuzion vektor serotipiga nisbatan doimiy, ko'p serotipli, o'zaro reaktiv AAVNAblar va boshqa sinovdan o'tgan.186
Ushbu ma'lumotlar AAV atrof-muhit ta'siridan keyin odamlarda kuzatilgan va doimiy, ko'p serotipli, o'zaro reaktiv NAbsni ko'rsatadigan hayvon modellarida tizimli AAV vektor infuzionidan keyin kuzatilganlarga mos keladi.224–228
Birgalikda, mavjud ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, joriy usullar bilan hayotda bir martalik AAV vektor infuzioni terapiyaning maqsadi va NAb shakllanishi tufayli majburiydir.
Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, o'ttiz yillik tekshiruvlar gemofiliya uchun AAV geneterapiyasini qayta-qayta isbotlash muvaffaqiyatiga erishish uchun aniqlandi va gen terapiyasini oldinga siljitish uchun zarur bo'lgan muhim savollarni belgilab berdi.
Gemofiliya gen terapiyasidagi o'ziga xos faollik sezilarli optimizmni beradi, bu javoblar gemofiliya fenotipini yaxshilashga qodir bo'lgan bardoshli va barqaror FVIII/FIX terapevtik ifodasini xavfsiz va ishonchli tarzda amalga oshirish bo'yicha yakuniy maqsadga yaqinroq bo'lgan sa'y-harakatlarga javob beradi.
LSDs: Klinik gen-terapiyaga umumiy nuqtai
LSDlar irsiy metabolik kasalliklar guruhi bo'lib, ular lizosomalar ichida makromolekulalar to'planishi bilan tavsiflanadi. Birgalikda LSDlar nisbatan keng tarqalgan kasalliklardir (1:5, 000 dan 1:5,500 gacha), garchi alohida kamdan-kam hollarda.229-231
LSDlar bir nechta organ tizimlariga ta'sir qiladi, lekin bitta aniqlovchi tizimga ega, masalan, Pompe infantil kasalligi bo'lgan bemorlarda gipertrofik kardiyomiyopatiya, CNL2 bo'lgan bolalarda CNS etishmovchiligi yoki I.230 tipidagi Gaucher kasalligi bo'lgan bolalarda gepatosplenomegaliya.
Ularning klinik heterojenligini hisobga olgan holda, samarali davolash usullarini topish yagona tasdiqlangan terapiya, ERT bilan qiyin bo'lib, omon qolishning ko'payishi natijasida ikkilamchi asoratlarni keltirib chiqardi.232
Yangi tug'ilgan chaqaloqlarni skrining paydo bo'lishi bilan bu kasalliklarning tarqalishi ortib borayotganligi sababli, genlarni almashtirish kabi yangi terapevtik aralashuvlar LSDning barcha ko'rinishlarini hal qilishda muhim ahamiyatga ega bo'ladi.230,233,234
Ushbu bo'limda biz ba'zi keng tarqalgan LSDlar uchun genlarni almashtirish terapiyasini ishlab chiqishda erishilgan yutuqlarni muhokama qilamiz: Pompe kasalligi, Gaucher kasalligi, Fabri kasalligi, mukopolisakkaridozlar (MPS) kasalligi va neyronal seroid lipofusinozlar (NCLs) (1-jadval). .
For more information:1950477648nn@gmail.com
