HPLC yordamida Cistanche Herba suv ekstraktidagi echinakozidni aniqlash

Abstrakt: Maqsadning suv ekstraktidagi echinakozidni aniqlash uchun HPLC usuli yaratilganCistanche o't.UsullariEkinakozid HPLC tomonidan aniqlangan. Ajratish Inertsil ODS-da amalga oshirildi.SP C18 asetonitrildan tashkil topgan mobil fazali ustun(A)va 0.4% fosfor kislotasi eritmasi(B), gradient bo'yichaelutsiya. Aniqlash to'lqin uzunligi 333 nm ga o'rnatildi, ustun harorati esa 30 daraja edi. Oqim tezligi 1,0 ni tashkil etdiml·min-1 va in'ektsiya hajmi 10 ni tashkil etdiμL. Natijalarning chiziqli munosabatiechinacosidekontsentratsiya doirasidadiapazoni 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 yaxshi edi(r = 0.999 8). Qayta tiklanganlar 94,59%-105,31%(RSD=2.93%,n = 9). Cistanche herba suv ekstraktlarida echinacoside miqdori 15,527 ni tashkil etdi,7.347,12,267 mg·g-1. 

XulosaYaxshi takrorlanadigan HPLC usuli aniq, oddiy, amalga oshirish mumkin. Bu mos keladiichida echinacoside aniqlash uchunCistanche herba suv ekstrakti. 

Kalit so‘zlar:HPLC;Cistanche herba suv ekstrakti; echinacoside; mazmunini aniqlash

UCHUN YANGI O'TOTLAR FORMULASYASIBUYRAKNI OZIQLANGAN YANG

Cistanche deserticolaklinik amaliyotda keng qo'llaniladigan tonik an'anaviy xitoy tabobati bo'lib, "cho'l jenshen" [1] deb nomlanadi. TheCistanche deserticolaning 2015 yilgi nashrida qayd etilganXitoy farmakopeyasining chig'anoqli barglari bilan quritilgan go'shtli poyadirCistanche deserticola YC MayokiCistanche tubulosa (Schenk) Wight. U issiq, shirin va sho'r bo'lib, buyrak va yo'g'on ichak meridianlariga qaytadi. Buyrakni oziqlantiruvchi, mohiyati va qonni to'ldiradigan, ichaklarni namlovchi va laksatiflar ta'siriga ega [2]. "Shen Nongning Materia Medica", deydi u "o'rtani tonlaydi, beshta ichki organni oziqlantiradi, yinni mustahkamlaydi va mohiyatini oziqlantiradi". Cistanche deserticola tarkibida asosan feniletanoid glikozidlar, iridoidlar va ularning glikozidlari, lignanlar va ularning glikozidlari, polisaxaridlar, efir birikmalari va alkaloidlar mavjud [3].

Feniletanoid glikozidlar Cistanche deserticola ning asosiy faol moddalari bo'lib, ular orasida echinaceaside va verbascoside Xitoy farmakopeyasida Cistanche deserticola ni aniqlash va tarkibini aniqlash uchun indeks komponentlari hisoblanadi. Farmakologik tadqiqotlar [4] shuni ko'rsatadiki, Cistanche deserticola laksatif, jigarni himoya qilish, osteoporozga qarshi, antioksidant, qarishga qarshi va charchoqqa qarshi turli xil farmakologik ta'sirga ega. Cistanche deserticola suvli ekstrakti kalamush osteoblastlarida suyak morfogenetik oqsili 2 genini, shuningdek, tuxumdonlar ektomiyasiga uchragan sichqonlar zardobida tartratga chidamli kislota fosfataza va suyak kaltsiyini rag'batlantirishi mumkin.

Suyak iligi va suyak iligida Smad1, Smad5 genlari, transformatsion o'sish omili- va boshqalarning ifodalanishi osteoporozga qarshi ta'sirga ega [5-6].

Echinacea osteoblastlarning ko'payishiga yordam beradi va in vitroda o'stirilgan suyak iligi mezenximali ildiz hujayralarining osteoblastlarga [7-9] differensiallanishiga yordam beradi. So'nggi yillarda Cistanche deserticola etanol ekstrakti va uning birikma preparatlari [10-12] tarkibidagi echinacoside va verbascoside tarkibini aniqlash bo'yicha ko'plab tadqiqot hisobotlari mavjud, ammo Cistanche deserticola indeks komponentlarini aniqlash bo'yicha bir nechta hisobotlar mavjud. suvli ekstrakt. Ushbu tadqiqotda aniqlash uchun yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) ishlatilganechinaceaside tarkibiichidaCistanche deserticolaning suvli ekstrakti.

1 Material

1.1 Asboblar

LC-20AT yuqori samarali suyuqlik xromatografi, SPD-20detektor, SIL-20Avto-namuna oluvchi, CTO-10ASvp ustunli pech, LC eritmasi suyuq xromatografiya ish stantsiyasi, Shimadzu korporatsiyasi, Yaponiya; MES125P-OCE-DU elektron analitik balansi, Sartorius, Germaniya; SHZ-D (III) aylanma suv ko'p maqsadli vakuum nasosi, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 aylanma evaporatator sovutish sirkulyatsiya tizimi, RV 10 D S96 aylanadigan bug'lanish moslamasi, IKA, Germaniya; DK-S26 elektr doimiy haroratli suv hammomi, Shanxay Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR seriyali ultra toza suv mashinasi, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Dorivor materiallar va reaktivlar

Cistanche deserticola dorivor materiallari Guangzhou Lingnan Chinese Medicine Pieces Co., Ltd.dan sotib olindi, partiya raqamlari: 1801001, 1806001 va 181001. Bu Cistanche deserticola YCMace oilasining Cistanche deserticola YCMace tomonidan o'ralgan barglari bilan quritilgan go'shtli poya sifatida aniqlangan. Guanchjou Xitoy tibbiyoti universitetining uchinchi sho''ba kasalxonasining tibbiyot farmatsevti Tu Xingming. Namuna Xitoy tibbiyoti Guanchjou universitetining Uchinchi filial kasalxonasining dori sinov xonasida saqlanadi; echinacoside mos yozuvlar moddasi, tarkibi 89,7%, partiya raqami: 111670-201706 Xitoy oziq-ovqat va dori-darmonlarni tekshirish instituti; asetonitril xromatografik jihatdan toza (Merck, Germaniya); metanol va fosfor kislotasi analitik jihatdan toza (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); suv juda toza.

2 Usullar va natijalar

2.1 Cistanche deserticola suvli ekstraktini tayyorlash

Cistanche deserticolaning xom kukunini oling, distillangan suvning 10 barobar miqdorini qo'shing, qizdiring va ekstraksiya qilish uchun ikki marta, har safar 1 soat davomida filtrlang, filtratni birlashtiring va filtratni 0,100 g·mL ga konsentratsiyalang. -1 xom preparatni aylanadigan evaporatator orqali oling va keyinroq foydalanish uchun 4 daraja haroratda saqlang.

2.2 Xromatografik sharoitlar va tizimning mosligi

Xromatografik ustun: Inertsil ODS SP C18 ustuni (150 mm × 4,6 mm, 5 mkm); harakatlanuvchi faza: asetonitril (A)-0.4% fosfor kislotasi eritmasi (B), gradient elyusiyasi: 0 ~ 5 min, 17%A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; aniqlash to'lqin uzunligi: 333 nm; ustun harorati: 30 daraja; oqim tezligi: 1,0 ml·min-1; in'ektsiya hajmi: 10 mkl. Bunday xromatografik holatda, echinacoside va qo'shni komponent cho'qqilari o'rtasidagi ajralish 1,5 dan kattaroqdir va echinacoside cho'qqisiga asoslangan nazariy plastinka raqami kamida 4,000 bo'lishi kerak. Xromatogramma 1-rasmda ko'rsatilgan.

1-rasm Ekinakozid (A) va Cistanche herba (B) suv ekstraktining HPLC xromatogrammalari

2.3 Eritma tayyorlash

2.3.1 Yo'naltiruvchi yechim

Tegishli miqdorda echinacoside moslamasini torting, aniq torting, uni 10 ml hajmli o'lchov kolbasiga joylashtiring, uni eritish uchun metanol qo'shing va 1 ml ga 898,794 ug echinacoside o'z ichiga olgan etalon eritmani tayyorlang va keyinroq foydalanish uchun uni 4 daraja haroratda saqlang.

2.3.2 Sinov eritmasi

2.0 ml Cistanche deserticola suv ekstraktini aniq o‘lchab, suv hammomida quriting, eritish uchun metanol qo‘shing, 10 ml hajmli o‘lchov kolbasiga soling, yaxshilab silkiting, va eritmani olish uchun uni 0,22 mkm mikrog'ovak filtrli membrana orqali filtrlang.

2.4 Chiziqli munosabatlarni tekshirish

{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 ml ni 2.3.1 ostida aniq oʻlchang. va uni 5 ml hajmli oʻlchov kolbasiga soling, hajmni toʻldirish uchun metanol qoʻshing, yaxshilab silkiting va gradient konsentratsiyasi 44 boʻlgan etalon eritmani oling.939 7, 89.879 4, 179.{ {21}}, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·ml-1,va 0.22 mkm mikrog'ovakli membrana orqali filtrlang. 2.2 ostida xromatografik sharoitga muvofiq o'lchab, tepalik maydonini yozib oling.

Chiziqli regressiyani gorizontal o‘q (X, ug·mL{0}}) sifatida etalon massa konsentratsiyasi va vertikal o‘q (Y) sifatida tepalik maydoni bilan bajaring va regressiya tenglamasini oling: Y{{1 }}.0X-32 273.0, r=0.999 8. Natijalar shuni ko'rsatdiki, echinacoside 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1 konsentratsiya oralig'ida yaxshi chiziqli munosabatlarga ega.

2.5 Aniqlik sinovi

539.276 4 ug ·mL- 1 mos yozuvlar eritmasini oling va 2.2 ostida xromatografik sharoitga muvofiq 6 marta doimiy ravishda in'ektsiya qiling va o'lchang va tepalik maydonini yozing. Ekinakozidning eng yuqori maydonining RSD 1,81% ni tashkil etdi, bu asbobning yaxshi aniqligiga ega ekanligini ko'rsatadi.

2.6 Barqarorlik testi

2,{1}} ml Cistanche deserticola suvi ekstraktini aniq o‘lchab, suv hammomida quriguncha bug‘lang, metanolda eritib, 10 ml o‘lchov kolbasiga suyultiring, yaxshilab silkitib, 0 bilan filtrlang. .22 mkm mikrogözenekli filtrli membranani soling va 2.2 ostida xromatografik sharoitga muvofiq 0, 2, 4, 8, 12 va 24 soatda in'ektsiya qiling va o'lchang va tepalik maydonini yozib oling. Natijalar Echinacoside tepalik maydonining RSD 1,16% ni tashkil etdi, bu sinov eritmasi 24 soat ichida yaxshi barqarorlikka ega ekanligini ko'rsatdi.

2.7 Takroriylik testi

2.0 ml Cistanche deserticola suv ekstraktidan 6 ta porsiyani aniq o‘lchab, 2.3.2-banddagi usul bo‘yicha 6 porsiya tekshiriluvchi eritmani parallel ravishda tayyorlang va 2.2-banddagi xromatografik sharoitga muvofiq ularni in’ektsiya qiling va o‘lchang. tepalik maydonini yozib oling. Natijalar Echinacoside massa kontsentratsiyasining RSD 1,28% ni tashkil etdi, bu usulning yaxshi takrorlanishini ko'rsatadi.

2.8 Namunani tiklash testi

1,0 ml Cistanche deserticola suvi ekstraktining 9 qismini aniq o‘lchab, 0,8, 1,0 va 1,2 ml etalon eritma (1,552 mg·mL{{11) qo‘shing. }}) mos ravishda suv hammomida quriguncha bug'lanadi, metanolda eritiladi va 10 ml hajmli o'lchov kolbasiga suyultiriladi; yaxshilab silkiting, tekshirilayotgan eritmaning yuqori, o‘rta va past konsentrasiyalarini olish uchun 0,22 mkm mikrog‘ovak filtrli membrana bilan filtrlang, har bir konsentratsiyadan 3 tadan parallel ravishda tayyorlang va 2,2 ostida xromatografik sharoitga qarab o‘lchang, tepalik maydonini yozib oling va hisoblang. namunani qayta tiklash. Natijalar 1-jadvalda keltirilgan.

2.9 Namuna tarkibini aniqlash

2,{1}} ml Cistanche deserticola suvi ekstraktini 3 bo‘lakda aniq o‘lchab, suv hammomida quriguncha bug‘lanadi, metanolda eritiladi, o‘lchov kolbasida 10 ml gacha suyultiriladi, yaxshilab chayqatiladi, filtrlanadi. 0,22 mkm mikrog'ovak filtrli membranani o'rnating va 2,2 ostidagi xromatografik sharoitlarga muvofiq aniqlang, tepalik maydonini yozing va echinacoside tarkibini hisoblang. Natijalar 2-jadvalda keltirilgan.