Tabiiy Scrapie miyaning turli hududlarida o'ziga xos tollga o'xshash retseptorlar gen ekspressiyasi va glial reaktsiyasi 1-qism

Annotatsiya:

Prion kasalliklari surunkali va halokatli neyrodegenerativ kasalliklar bo'lib, ular kasallikka xos prion oqsilining (PrPSc) to'planishi, gubka shaklidagi o'zgarishlar, neyronlarning yo'qolishi va glioz bilan tavsiflanadi.

Prion kasalligi, shuningdek, ma'badning adolatli kasalligi, mum yeyish kasalligi va boshqalar sifatida ham tanilgan, prionlardan kelib chiqqan o'tkir virusli infektsiya. Kasallik asosan prionlarni o'z ichiga olgan pishmagan ovqatni iste'mol qilish orqali yuqadi. Prionlar bilan kasallanganidan so'ng, u miya yallig'lanishi va asab tizimining shikastlanishiga olib kelishi mumkin va bosh og'rig'i, qusish va isitma kabi alomatlar paydo bo'lishi mumkin.

Biroq, bunday vaziyatga duch kelganimizda, prion kasalligi mavjudligi sababli xotiramizga ishonchni yo'qota olmaymiz. Ko'pchilik infektsiyalangan odamlar davolanishdan so'ng xotirasini tiklashi va tiklashi mumkin.

Albatta, profilaktika nuqtai nazaridan, prion infektsiyasini oldini olish uchun ko'proq pishirilgan ovqatni iste'mol qilishga harakat qilishimiz mumkin. Shu bilan birga, agar siz biron bir alomatni sezsangiz, kasallikning kuchayishiga yo'l qo'ymaslik uchun imkon qadar tezroq shifokorga murojaat qilishingiz kerak.

Kundalik hayotda biz xotirani yaxshilash uchun o'qish, ro'yxatlar tuzish, tadbirlar va ma'lumotlarni tashkil qilish va hokazo kabi oddiy xotira mashg'ulotlarini sinab ko'rishimiz mumkin. Ushbu mashg'ulotlar ko'p vaqt va kuch talab qilmaydi, ammo ular sog'lom miya va samarali xotira funktsiyasini saqlash uchun juda muhimdir.

Muxtasar qilib aytganda, prion kasalligi kabi kasalliklarga duch kelganda, biz unga ijobiy munosabatda bo'lishimiz, professional tibbiy davolanish va profilaktika choralariga murojaat qilishimiz va jismoniy salomatligimiz va samarali mehnatimizni ta'minlash uchun kundalik xotira mashqlariga e'tibor berishimiz kerak. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche ko'plab noyob effektlarga ega bo'lgan an'anaviy xitoylik dorivor material bo'lib, ulardan biri xotirani yaxshilashdir. Cistanche ta'siri uning tarkibidagi turli faol moddalar, jumladan, tanin kislotasi, polisakkaridlar, flavonoid glikozidlar va boshqalardan kelib chiqadi. Bu ingredientlar miya sog'lig'ini turli yo'llar bilan yaxshilashi mumkin.

Miya faoliyatini yaxshilash yo'llarini bilish tugmasini bosing

O'sib borayotgan dalillar shuni ko'rsatadiki, neyroinflamatuar javob priondiseazlarning asosiy komponenti hisoblanadi va neyrodegeneratsiyaga hissa qo'shadi.

Tollga o'xshash retseptorlar (TLR) insonning boshqa neyrodegenerativ kasalliklari, jumladan Altsgeymer kasalligi, Parkinson kasalligi va amiotrofik lateral skleroz kabi markaziy asab tizimida qo'zg'atilgan tug'ma immunitet reaktsiyalarining muhim vositachilari sifatida taklif qilingan.

Biroq, prion kasalliklarida TLRlarning roli haqida juda kam narsa ma'lum va ularning tabiiy skrapiya nevropatologiyasida ishtiroki o'rganilmagan. Biz tabiiy scrapie bilan kasallangan qo'ylarda miyaning anatomik jihatdan farq qiluvchi to'rtta hududida qo'y TLRlarining gen ekspressiyasini baholadik va gen ifodasi va prion kasalligining patologik belgilari o'rtasidagi mumkin bo'lgan korrelyatsiyani baholadik.

Biz o'rganilgan hududlarning har birida spongioz, PrPSc cho'kishi va glioz darajasi bilan bog'liq bo'lgan scrapie bilan kasallangan qo'ylarda TLR ifodasida sezilarli o'zgarishlarni kuzatdik.

Shunisi e'tiborga loyiqki, TLR4 nevropatologiyaning og'irligidan qat'i nazar, barcha hududlarda yuqori tartibga solingan yagona gen edi. Gippokampda biz aniq TLR gen ekspresyon profili bilan bog'liq engilroq nevropatologiyani va bu erda birinchi marta scrapie bilan kasallangan qo'ylarning miyasida tasvirlangan rodmikrogliya deb ataladigan o'ziga xos mikroglial morfologiyaning mavjudligini kuzatdik.

Ushbu xususiyatlarning uyg'unligi hipokampusning qisman neyroproteksiyasini ko'rsatadi. Nihoyat, tabiiy yuqtirilgan qo'ylardagi topilmalarni katta o'lchamli sichqoncha modeli (tg338 sichqon) bilan taqqoslash TLRgene ifodasining aniq naqshlarini aniqladi.

Kalit so'zlar: prion; scrapie; pullik retseptorlar; neyro-yallig'lanish; mikrogliya; astrositlar.

1. Kirish

Transmissiv spongiform ensefalopatiyalar (TSEs) yoki prion kasalliklari - bu odamlarda Creutzfeldt-Jakob kasalligi (CJD), qo'y va echkilardagi qoraqo'tirlar, qoramollarda va surunkali kasalliklarni o'z ichiga olgan o'limga olib keladigan neyrodegenerativ kasalliklar guruhidir. CWD).

Ushbu TSElar xost tomonidan kodlangan prion oqsilining (PrPC) infektsion izoformaga, PrPSc ga aylanishi bilan tavsiflanadi, u asosan asab tizimi va limforetikulyar tizimda (LRS) to'planadi va markaziy asab tizimida (CNS) yallig'lanishli immun reaktsiyasi [1] ,2].Prion kasalliklari, masalan, scrapie, PrPSc ning og'zaki ta'sirida tabiiy ravishda olinishi mumkin.

Ichak to'sig'ini kesib o'tib, limfoid to'qimalarda birlamchi replikatsiyadan o'tgandan so'ng, PrPSc neyroinvaziya deb nomlanuvchi jarayon orqali markaziy asab tizimiga etib boradi. Infektsiya oshqozon-ichak traktidagi joylardan vagus va splanxnik nervlar orqali mos ravishda miya va orqa miyaga tarqaladi [3,4].

Markaziy asab tizimiga etib borgach, PrPSc kaudal torostral hududlardan, ya'ni rostral miya sopi orqali serebellum, diensefalon va frontalkorteksga tarqaladi [5]. PrPSc ning anatomik stereotipli to'planishi, uning tarqalishi turli miya mintaqalarining neyron aloqasi va / yoki tanlab zaifligi bilan bog'liqligini ko'rsatadi.

PrPSc genotipi, zoti va infektsiya yoshi kabi xost omillari PrPSc cho'kishining kattaligiga va shimgichli lezyonlarning tarqalishiga yordam beradi.

Biroq, PrPSc ning muayyan miya hududlariga tanlab yo'naltirilishini aniqlaydigan xost-prion o'zaro ta'sirining molekulyar asoslari noma'lum bo'lib qolmoqda va prion shtammlari fenomenining eng qiziqarli jihatlaridan birini tashkil qiladi.

Dastlab, immun tizimi tabiiy tolerantlik tufayli PrPSc ga javob bermadi deb taxmin qilingan edi, ammo vaqtli tadqiqotlar mikrogliya va astrositlarning tez faollashishi va ko'payishini klinik belgilar va neyron degeneratsiyasi boshlanishidan oldin ham aniqladi [6-8].

Mikrogliya va astrositlarning erta faollashishi va ko'payishi prion kasalliklari patogenezida markaziy rol o'ynaydi, ammo ularning faollashuvida ishtirok etadigan molekulyar mexanizmlar va reaktiv astrositlar va mikrogliyalarning kasallik patogenezida aniq roli noaniq bo'lib qolmoqda [9,10].

Bundan tashqari, mikroglialand astroglial taqsimoti va fenotipi miya hududlari va turlari bo'yicha o'zgarib turadi [11-14], bu neyrodegeneratsiyaga zaiflikka ta'sir qiluvchi har bir mintaqaning o'ziga xos xususiyatlarini belgilaydi [10,15,16].

Bu hodisa, ayniqsa, preklinik bosqichda yaqqol namoyon bo'ladi, bu davrda mikrogliya ham, astrogliya ham prion infektsiyasiga mintaqaga xos tarzda javob beradi.

Biroq, kasallik o'sib borishi bilan, mintaqaviy xususiyatlarning ko'pini suyultiruvchi ko'proq tarqalgan neyroinflamatuar javob ustunlik qila boshlaydi [17,18]. So'nggi bir necha yil ichida mikroglial va astroglialreaktivlikda Toll-o'xshash retseptorlarning (TLR) roli haqida xabar berilgan. bir nechta neyrodegenerativ kasalliklarda, ularning ushbu kasalliklarning rivojlanishiga ta'sirini ta'kidlaydi [19-21].

Biroq, TLRsin prion kasalliklarining roli haqida ma'lumotlar kam. TLRlarning qisman himoya roli inprion patologiyasi tasvirlangan. Xususan, TLR2 [22] va TLR4 [23] yo'qolishi prion patogenezini tezlashtiradi, TLR9 stimulyatsiyasi esa sichqon modellarida kasallikning rivojlanishini sekinlashtiradi [24,25].

Bugungi kunga kelib, prion kasalliklarida TLRlarning ko'p tadqiqotlari in vitro yoki sichqoncha modellari [8,22,26-29] yordamida amalga oshirildi va ularning tabiiy yuqtirgan hayvonlar va odamlardagi roli noaniqligicha qolmoqda. Bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, bitta tadqiqot skrapie bilan og'iz orqali emlangan (ya'ni, tabiiy, ammo tabiiy ravishda yuqmagan xo'jayin yordamida) yangi tug'ilgan qo'zilarda o'tkazilgan va kasallikning klinik bosqichlarida qonda TLR2 va TLR4 haddan tashqari ko'payishi haqida xabar berilgan [30].

Ikki tadqiqotda sporadik CJD (sCJD) [31,32] bo'lgan odamlarda TLR gen ekspressiyasi o'zgargani haqida xabar berilgan. Immunitet reaktsiyasida ishtirok etadigan genlarning disregulyatsiyasi sCJD MM1 bemorlarining serebellumida va frontal korteksida TLR4 va TLR7 mRNKning va sCJD VV2 bemorlarining serebellumida TLR7 ning haddan tashqari ekspressiyasini o'z ichiga oladi.

Bundan tashqari, Areskeviciuteet al. [32] sCJD va nazorat miya namunalarida differentsial ifodani ko'rsatishi bashorat qilingan eng yaxshi 40 ta yuqori oqim regulyatoriga TLR4ni kiritdi. Biz tabiiy scrapie infektsiyasi prion sezuvchanligining turli darajalariga ega bo'lgan to'rtta miya hududida ovineTLR va ba'zi sitokinlarning transkripsiya darajalariga qanday ta'sir qilishini o'rganib chiqdik. oldingi natijalar [18].

Miqdoriy PCR (qPCR) tahlili nazorat guruhiga nisbatan scrapie bilan kasallangan guruhda ingen ifodasi o'zgarishini va miya mintaqasiga bog'liq javobni aniqladi.

Qizig'i shundaki, gippokampus o'ziga xos reaktiv mikrogliya morfologiyasi va TLR transkripsiyasi naqshiga ega bo'lgan eng o'ziga xos lezyon profilini ko'rsatdi. Qo'y PrP ni haddan tashqari ifodalovchi sichqonlarda TLR genini ifodalash bo'yicha eksperimental ma'lumotlarning etishmasligini hisobga olib, biz shuningdek, intraserebral intraserebral inoepi tg338 sichqonlari yordamida tajribalar o'tkazdik.

Bizning natijalarimiz yovvoyi turdagi sichqonlar yordamida oldingi tadqiqotlar bilan ba'zi o'xshashliklarni ko'rsatadi, ammo tabiiy skrapie topilmalari bilan bog'liq sezilarli farqlar mavjud.

2. Natijalar

2.1. Tabiiy infektsiyalangan qo'ylarning Scrapi nevropatologiyasi

Avval aytib o'tilganidek, biz ushbu tadqiqotga kiritilgan tabiiy yuqtirilgan qo'ylarda skrapie nevropatologiyasini tasdiqladik [33-36]. Spongioz, PrPSc cho'kmasi va reaktivegliya infektsiyalangan va nazorat qiluvchi qo'y miyasining to'rtta hududida tekshirildi: medullaoblongata (Mo), talamus (Th), hipokampus (Hc) va frontal korteks (Fc).

Barcha tabiiy infektsiyalangan hayvonlar kasallikning klinik bosqichida edi. Biroq, klinik belgilarning chastotasi va og'irligiga qarab, klinik holat qo'ylar orasida turlicha bo'lib, boshlang'ich klinik bosqichdan tortib to rivojlangan klinik bosqichlargacha bo'lgan (1-jadval).

1-rasmda PrPSc, GFAP va Iba1 uchun infektsiyalangan va nazorat qiluvchi hayvonlarda tanlangan hududlarning har birida olingan vakuolatsiya va immuno-bo'yashni baholash uchun vakili mikrofotosuratlar ko'rsatilgan.

Kutilganidek, nazorat qo'ylarining to'qimalar bo'limlarida vakuolatsiya yoki PrPSc cho'kishi aniqlanmadi. Aksincha, scrapie bilan kasallangan qo'ylarda barcha neyroanatomik sohalarda spongioz, PrPSc cho'kmasi va reaktiv glia (p < 0.05) ko'rsatilgan.

Vakuolatsiyaning intensivligi, PrPSc cho'kishi va glioz medulla oblongatasidan frontal korteksgacha kamaydi. Qizig'i shundaki, talamus va gippokampning yaqinligiga qaramay, barcha patologik belgilar uchun ballarda sezilarli farqlar kuzatildi.

Spongiozning eng katta darajasi hipokampus va frontal korteksda joylashgan juda tarqoq vakuolatsiyadan farqli o'laroq, medulla oblongata va tetalamusda kuzatilgan.

Vagus nervining orqa motor yadrosida ko'rsatilganidek, medulla oblongata yadrolarida intraneyronal vakuolatsiya ko'p bo'lgan, talamus va frontal korteksda neyropil spongioz ustunlik qilgan (1A-rasm). Gippokampning neyropillarida juda kam vakuolalar topilgan.

Shakl 1. Temedulla oblongata (Mo), talamus (Th), hipokampus (Hc) va frontal korteksdagi (Fc) nazorat va scrapie bilan kasallangan qo'ylarning markaziy asab tizimida spongioz, PrPScdepozitsiya, mikroglioz va astrogliozning vakili nevropatologiyasi va immunohistokimyoviy bahosi. .

Grafiklarda tahlil qilingan har bir parametr uchun yarim miqdoriy baholash qiymatlari tasvirlangan. (A) Gematoksilin-eozin bo'yoqlari skrapi bilan kasallangan qo'ylarning markaziy asab tizimida spongioz o'zgarishlarini va nazoratsiz qo'ylarda spongiozning yo'qligini ko'rsatdi. (B) Skrapi bilan kasallangan qo'y miya mintaqalarida L42 antikori bilan PrPSc ni aniqlash.

Nazorat guruhida noimmunobelling aniqlandi. (C) Ionlangan kaltsiyni bog'laydigan adapter molekulasi-1(Iba1) immuno-bo'yash nazorat qo'ylariga nisbatan scrapie bilan kasallangan qo'ylarda mikroglial reaktivlikni oshirdi.

(D) Glial fibrilyar kislotali oqsil (GFAP) immuno-bo'yashida nazorat qo'ylariga nisbatan scrapie bilan kasallangan qo'ylarda reaktiv astrogliozin ko'paygan. (E) Miya hududlari o'rtasida spongioz, PrPScdepozitsiya, Iba1 va GFAP intensivligini statistik taqqoslash.

Ballar 0 (salbiy) dan 5 (maksimal intensivlik) gacha. Spongioz, PrPSc, Iba1 va GFAPdagi sezilarli farqlar mos ravishda normal va normal taqsimlanmagan ma'lumotlar uchun Student t-testi yoki Mann-Whitney U testi yordamida aniqlandi.

Miya hududlari o'rtasidagi statistik farqlar bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yoki Kruskal-Uollis testi yordamida normal va normal taqsimlanmagan ma'lumotlar uchun mos ravishda aniqlandi. * p < 0.05, ** p < 0,01. Masshtab satri=200 mkm.

Skrapi bilan kasallangan barcha qo'ylar, tahlil qilingan to'rtta CNS mintaqasida keng tarqalgan PrPSc to'planishini ko'rsatdi, faqat boshlang'ich klinik belgilarni ko'rsatgan va immunohistokimyo (IHC) va Western blot (WB) tomonidan frontal korteksda PrPSc-salbiy bo'lgan uchta qo'ydan tashqari (1-jadval).

PrPSc immuno-bo'yash intensivligi spongiozda kuzatilganiga o'xshash kaudaldan rostral pasayishni aniqladi, medullaoblongata va talamusda maksimal intensivlik, vakuolatsiyaning eng yuqori darajasiga ega bo'lgan ikkita mintaqa va hipokampus va frontal korteksda pastroq intensivlik (1-rasm).

Gipokampusda PrPScimmunostaining, frontal korteks bo'limlarida kuzatilgan bir hil, tarqoq punktat naqshdan farqli o'laroq, fokusli va notekis taqsimlanishni ko'rsatdi.

Biz PrPSc cho'kishining to'rtta asosiy morfologik naqshini kuzatdik, avvalroq ta'riflanganidek [36]: ikkita hujayra ichidagi naqshlar, jumladan, intraneyronal va intraglial (shu jumladan, intra-astrotsitik va intramikroglial) cho'kma va ikkita hujayra membranasi / hujayradan tashqari naqshlar, jumladan, neyropil bilan bog'liq hujayra- va glial. bog'liq cho'kma (S1-rasm).

Miyaning barcha sohalarida intraneyronal va neyropil bilan bog'liq naqshlar ustunlik qildi. Shunisi e'tiborga loyiqki, intaglio va glial naqshlar frontal korteks va hipokampusda medulla oblongata va talamus bilan solishtirganda keskin kamaygan yoki hatto yo'q edi. IHC bilan parallel ravishda biz WB tomonidan proteazga chidamli prionlarning (PrPres) mavjudligini tahlil qildik.

Skrapi bilan kasallangan qo'ylarning miya namunalarida glikozillanmagan fragmentning molekulyar massasi taxminan 19 kDa bo'lgan klassik skrapie bilan bog'liq klassik uch tarmoqli PrPres naqshini ko'rsatdi (2-rasm).

Muayyan darajadagi o'zgaruvchanlikka qaramay, PrPres signali miyaning barcha hududlarida klinik belgilarning og'irligi bilan ortdi va miyaning kaudal sohalarida ko'proq bo'ldi.

PrPres uchun WB barcha scrapie bilan kasallangan qo'ylarda medulla oblongata va talamusda ijobiy bo'ldi. Aksincha, hipokampus va frontal korteks namunalari barcha yuqtirgan hayvonlarda PrPres uchun ijobiy emas edi.

IHC barcha kasallangan qo'ylarning hipokampusida PrPres uchun ijobiy bo'lsa-da, 4/13 WB tomonidan salbiy edi. Frontal korteksda qo'ylarning 3/13 qismi IHC tomonidan PrPres-salbiy, 4/13 esa WB tomonidan PrPres-salbiy edi.

Vakuolatsiya va PrPSc cho'kmasi bilan bir qatorda, glial hujayralarning faollashuvi oqsillarni noto'g'ri qatlamlash kasalliklari patogenezining dastlabki hodisasi sifatida keng hujjatlashtirilgan.

Reaktiv gliani tavsiflash uchun miyaning barcha hududlari mikrogliyani aniqlash uchun astrositlarni va anti-Iba1 antikorlarini aniqlash uchun anti-GFAPantikorlardan foydalangan holda IHC ta'siridan o'tkazildi.

Dam oluvchi va faollashgan mikrogliyani [37] aniqlaydigan Iba1 immuno-bo'yog'i skrapie bilan kasallangan qo'ylarga nisbatan miyaning barcha hududlarida sezilarli darajada oshdi va infektsiyalangan hayvonlarning miya hududlari o'rtasida mikroglial morfologiyada sezilarli farqlarni aniqladi (1C-rasm).

Mikroglial hujayralarning faollashuv holati uchta asosiy morfologiya asosida aniqlanadi: ramifikatsiyalangan, gipertrofik va ameboid [38,39]. "Kuzatuvchi" yoki nisbatan faol bo'lmagan holatdagi mikroglial hujayralar shoxlangan morfologiyaga ega bo'lib, bizning nazorat hayvonlarimizda kuzatilganidek, ko'plab nozik jarayonlarga ega bo'lgan kichik hujayra tanasi bilan tavsiflanadi.

Faol holat odatda fagotsitar holat bilan bog'liq bo'lgan ameboid morfologiyasi bilan tavsiflanadi [38] va sferik, shoxlangan bo'lmagan hujayra tanalaridan iborat. Gipertrofik morfologiya kattaroq hujayra tanasi va qisqaroq, qalin jarayonlarga ega bo'lgan mikrogliya bilan tavsiflanadi va yallig'lanish mediatorlarini ishlab chiqarish va chiqarish bilan bog'liq [40,41].

Ameboid morfologiyasi scrapie bilan kasallangan qo'ylarning medulla oblongatalarida eng ko'p bo'lgan. Talamusda ameboid morfologiyasi kuzatildi, lekin ustunlik qilmadi: turli xil yirik va ingichka jarayonlar gipertrofik mikrogliyaga mos keladigan cho'zilgan hujayra tanalaridan kelib chiqadigan siyrak, qalin jarayonlar bilan aralashib ketgan.

Frontal korteks va hipokampusdagi proliferativ mikrogliyalarning morfologiyasi medulla oblongata va talamusnikidan keskin farq qiladi. Ikkala mintaqada gipertrofiyali mikrogliyalar ustunlik qilgan va ameboid mikrogliyalar deyarli yo'q edi.

Shunisi e'tiborga loyiqki, hipokampusning Cornu Ammonis 3 (CA3) mintaqasi mikroglia morfologiyasi orasidagi eng katta farqlarni ko'rsatdi, bu tayoq mikrogliati deb nomlanuvchi mikroglial naqshni ko'rsatib, miyaning boshqa mintaqalarida kuzatilmagan.

Gippokampni baholashda kuzatilgan bu sezilarli farqlar bizni CA1, 3, 4 sub sohalari va lakunoz-molekulyar qatlam (SLM) ni batafsil tekshirishga undadi.

Shakl 2. Nazorat va tabiiy scrapie bilan kasallangan qo'ylarning markaziy asab tizimida PrPresning Western blot aniqlanishi. Adekvat taqqoslash uchun teng miqdorda protein yuklandi va (A) medulla oblongata, (B) namunalarini tahlil qilish uchun SHA31 monoklonal antikoridan foydalangan holda immunoblotlar o'tkazildi. ) talamus, (C) gippokamp va (D) boshlanuvchi klinik belgilari (1-5-namunalar) va rivojlangan klinik belgilari (namuna 6-13) bo'lgan scrapie bilan kasallangan qo'ylarning frontal korteksi. 14-qatorda manfiy nazorat va 15-qatorda pK hazm bo'lmaydigan yuqtirilmagan qo'y miya gomogenati namunasi ko'rsatilgan.

GFAP immuno-bo'yash nazorat qo'ylariga nisbatan scrapie bilan kasallangan qo'ylarda aniq astrogliozni aniqladi (1D-rasm). Morfologik jihatdan kasallangan qo'ylarning astrositlari gipertrofik hujayra tanachalari va jarayonlarini doimiy ravishda ko'rsatib, reaktiv astroglioz mavjudligini tasdiqlaydi, nazorat qo'ylari esa faol bo'lmagan holatning tipik yulduzsimon morfologiyasini ko'rsatdi.

Medulla oblongata va talamusda GFAP immuno-bo'yog'i bir-biriga o'xshash jarayonlar tufayli astrotsit tarmoqlari paydo bo'lishi bilan kuchliroq edi. Gippokamp va frontal korteksda astrositlar bir tekis taqsimlangan, izolyatsiya qilingan gipertrofik yulduzcha tanachalari mavjud edi.

For more information:1950477648nn@gmail.com