Turli xil xamirturushli antiviral tizimlar LA mikovirusi keltirib chiqaradigan halokatli patogenezni oldini oladi

So'nggi tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, antiviral tizimlar bakteriyalardan sutemizuvchilarga qadar ajoyib darajada saqlanib qolgan va bu tizimlar haqida noyob tushunchalarni mikrobial organizmlarni o'rganish orqali olish mumkinligini ko'rsatadi. Fag infektsiyasi halokatli bo'lishi mumkin bo'lgan bakteriyalardan farqli o'laroq, Saccharomyces cerevisiae kurtaklaridagi xamirturushda sitotoksik virusli oqibatlar ma'lum emas, garchi u LA deb ataladigan ikki zanjirli RNK mikovirusi bilan surunkali infektsiyalangan bo'lsa ham. LA replikatsiyasini cheklaydigan konservatsiyalangan antiviral tizimlarning oldingi aniqlanishiga qaramay, bu shunday bo'lib qolmoqda. Bu erda biz ushbu tizimlar yuqori haroratlarda o'stirilgan hujayralarda o'limga olib keladigan keng tarqalgan LA replikatsiyasining oldini olish uchun hamkorlik qilishini ko'rsatamiz. Ushbu kashfiyotdan foydalanib, biz odamlarda virusli tug'ma immunitetda ishtirok etadigan poliA-bog'lovchi oqsil (PABPC1) va La-domenini o'z ichiga olgan Larp1 oqsilining xamirturush gomologlari uchun antiviral funktsiyalarni aniqlash uchun haddan tashqari ifoda ekranidan foydalanamiz. Funktsiyani yo'qotish yondashuvidan foydalanib, biz REX2 va MYG1 konservatsiyalangan RNK eksonukleazlari uchun yangi antiviral funktsiyalarni aniqlaymiz; SAGA va PAF1 kromatinni tartibga soluvchi komplekslar; va HSF1, proteostatik stress javobining asosiy transkripsiya regulyatori. Ushbu antiviral tizimlarni o'rganish orqali biz LA patogenezi faollashtirilgan proteostatik stress reaktsiyasi va sitotoksik oqsil agregatlarining to'planishi bilan bog'liqligini ko'rsatamiz. Ushbu topilmalar proteotoksik stressni LA patogenezining asosiy sababi sifatida aniqlaydi va konservalangan antiviral tizimlarni kashf qilish va tavsiflash uchun kuchli model tizimi sifatida xamirturushni yanada rivojlantiradi.

Barcha laboratoriya shtammlari va kurtakli xamirturush S. cerevisiae ning aksariyat ekologik izolatlari LA deb ataladigan ikki zanjirli RNK (dsRNK) virusi bilan kasallangan (1, 2). LA endogen dsRNK viruslarining keng tarqalgan Totiviridae oilasiga tegishli. Ushbu oilaning barcha viruslari singari, LA dsRNK genomi ham uni xost vositasida hazm qilishdan himoya qiluvchi virion ichida joylashgan. Viriondagi teshiklar RNK transkriptlarini zarrachaning ko'p qismini tashkil etuvchi kapsid oqsili Gagni kodlaydigan sitozolga ekstruziya qilish imkonini beradi. LA transkripti, shuningdek, RNKga bog'liq RNK polimeraza faolligiga ega bo'lgan Gag oqsilidan ancha past darajada ishlab chiqarilgan Gag-pol termoyadroviy oqsilini kodlaydi. Har bir virionda Gag-pol oqsili mavjud bo'lib, u zarracha ichidagi LA replikatsiyasi va transkripsiyasini hisobga oladi. Yangi paydo bo'lgan zarrachalar ichidagi virus transkriptlarining inkapsidlanishi va dsRNK genomini hosil qilish uchun Gag-pol tomonidan salbiy RNK zanjirining sintezi LA replikatsiya siklini yakunlaydi (2). Ushbu oqsillarni ishlab chiqarish uchun LA odamlarda mavjud bo'lgan RNK viruslariga xos xususiyatlardan, shu jumladan LA transkriptlarini 5'-metil qopqoqli va ribosomali ramka o'zgartirish mexanizmi bilan ta'minlovchi "qopqoqni tortib olish" mexanizmidan foydalanadi. bitta transkript (3, 4).

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Bakterial antiviral tizimlarning so'nggi tadqiqotlari shuni ko'rsatdiki, ular odamlar bilan ajoyib evolyutsion saqlanishni baham ko'rishadi, bu mikrobial organizmlarning virusli tug'ma immunitetga yangi tushunchalar berish potentsialini ochib beradi (5-11). Darhaqiqat, LA bilan bog'liq dastlabki tadqiqotlar ikki antiviral tizimning kashf etilishiga olib keldi, ular keyinchalik sutemizuvchilarda turli xil RNK viruslariga qarshi tug'ma immunitetga hissa qo'shishi ko'rsatilgan (12-17). Ushbu antiviral tizimlarning birinchisi SKI2, 3 va 8 genlarini o'z ichiga oladi, ular LA tomonidan kodlangan (18-23) kabi poli(A) dumlari bo'lmagan transkriptlarning tarjimasiga qarshi bo'lgan konservatsiyalangan ribosoma bilan bog'langan kompleksning subbirliklarini kodlaydi. LA zaiflashuvining alohida yo'li Xrn1 (shuningdek, SKI1 sifatida ham tanilgan), 5'-3' ekzoribonukleaza orqali sodir bo'ladi, bu qopqoqsiz mRNKlarni (24-26) buzadi.

Biz yaqinda mitoxondrial DNK/RNK endonukleaza Nuc1 LA ning sporulyatsiya qiluvchi hujayralarda to'planishini bostirishini aniqladik, bu yangi xamirturush antiviral yo'lini ifodalaydi (27). Nuc1 barcha eukaryotlar va ko'plab prokaryotlarda uchraydigan endonukleaza G (EndoG) homologi bo'lib, sutemizuvchilarning dasturlashtirilgan hujayra o'limida genom parchalanishini rag'batlantirishdagi roli bilan mashhur bo'lib, virusni himoya qilishning eng muhim mexanizmi (28, 29). Ajablanarlisi shundaki, dasturlashtirilgan hujayra o'limi xamirturush sporulyatsiyasiga xosdir va Nuc1 DNKni bu jarayon davomida o'layotgan meiotik mahsulotlardan parchalaydi, bundan tashqari omon qolgan sporlar tomonidan meros qilib olingan LA virus darajasini pasaytirishdagi roli (27, 30, 31).

Laboratoriya shtammlarida LA ning hamma joyda mavjudligiga qaramay, unga hech qanday fitnes oqibati yo'q va shuning uchun LA asosan zararsiz kommensal hisoblanadi. Bu erda biz LA infektsiyasi xamirturush uchun halokatli ekanligini va hayotiylikni saqlab qolish uchun uni virusli tug'ma immunitet orqali faol ravishda susaytirish kerakligini ko'rsatamiz. Xususan, parallel ta'sir qiluvchi NUC1 va SKI antiviral yo'llari bo'lmagan shtammlarda LA nusxasi soni sezilarli darajada oshadi, bu esa yuqori haroratlarda o'limga olib keladi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Biz LA ning keyingi tavsifi va uning replikatsiyasini past darajada ushlab turuvchi omillar yangi antiviral tizimlarni aniqlashi mumkin deb o'yladik. LA patogeneziga olib keladigan sharoitlarni aniqlash bizga yangi antiviral genlarni aniqlash uchun bioinformatik va oldinga genetik skrining yondashuvlaridan foydalanishga imkon berdi. Nuc1∆ ski3∆ shartli halokatliligini bostiradigan haddan tashqari ifodalangan genlar uchun ekrandan foydalanib, biz virusga xos bo'lgan poli(A)-bog'lovchi oqsil (PABPC1) va La-domenini o'z ichiga olgan Larp1 oqsilining xamirturush gomologlari uchun antiviral funktsiyalarni aniqlaymiz. odamlarda immunitet (32, 33). Bundan tashqari, funktsiyani yo'qotish genetik tadqiqotlar o'n ikkita yangi antiviral genni aniqladi. Ular orasida yuqori darajada saqlanib qolgan SAGA transkripsiyali koaktivator kompleksi va bir nechta RNK ekzonukleazlari, shu jumladan REX2 va MYG1 bor, ularning har ikkalasi ham aniq, ammo kam xarakterlangan inson va bakteriya gomologlariga ega (34-37).

Nihoyat, biz hujayra biologik usullari yordamida LA patogenezini tavsiflaymiz va yuqori virusli yuk proteostatik stressni keltirib chiqarishini aniqlaymiz. Yuqori harorat proteostatik stressni kuchaytirishi yaxshi ma'lum bo'lganligi sababli, bu kuzatuvlar halokatli proteostatik stress LA sabab bo'lgan o'limning sababi ekanligini ko'rsatadi. Ushbu gipotezaga muvofiq, nuc1∆ ski3∆ mutantlari ortostatik stressni keltirib chiqarishi ma'lum bo'lgan prolin analogi bo'lgan azetidin{6}}karboksilik kislotaga (AZC) LA ga bog'liq sezuvchanligini ko'rsatamiz (38). Bundan tashqari, biz ortostatik stressga javobni sezadigan va boshqaradigan saqlanib qolgan transkripsiya omili bo'lgan HSF1 uchun antiviral funktsiyani namoyish qilamiz. Qizig'i shundaki, inson Hsf1 turli xil viruslar, shu jumladan OIV, SARS-Cov-2 va dang viruslarining replikatsiyasi va/yoki patogenligida muhim rol o'ynaydi, lekin mexanizmlar noaniq (39). Ushbu topilmalar mikroblardan odamlarga tug'ma immunitetni saqlab qolishning yangi misollarini va yangi antiviral tizimlarni kashf qilish uchun kuchli model tizimi sifatida yuqori yorug'lik xamirturushlarini taqdim etadi.

Natijalar

NUC1, SKI va XRN1 xamirturush antiviral tizimlari LA patogenezini oldini olish uchun hamkorlik qiladi.

NUC1 bo'yicha oldingi tadqiqotlarimiz meiotik hujayralarga qaratilgan edi (27). Vegetativ ravishda o'sadigan xamirturushda NUC1 antiviral funktsiyasini tekshirish uchun biz BY4742 shtammi fonida mitotik haploid hujayralardagi LA nusxasini ko'rib chiqdik. Biz LA dsRNK darajasini elektroforezlangan RNKning etidiy bromidi bilan bo'yash yordamida kuzatdik va nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutant LA dsRNKda katta o'sishni ko'rsatganligini aniqladik (1A-rasm). Biz ushbu topilmalarni replikatsiya qiluvchi RNK viruslarini aniqlash uchun ishlatiladigan dsRNA antikori bilan immunofloressens mikroskopiya yordamida tasdiqladik (40, 41). Bu tasvirlar LA dsRNK fokuslarda to'planganligini ko'rsatdi, bu inson hujayralarida kuzatilgan virusli replikatsiyaning "virusli zavod" joylarini eslatadi (1B-rasm va SI ilovasi, S1-rasm) (42). Boshqa shtamm fonlarida (24, 27, 43) oldingi topilmalar bilan mos ravishda, western blotting nuc1∆ va ski3∆ mutantlarida Gag oqsili darajasi ko'tarilganligini ko'rsatdi (1C-rasm). Bundan tashqari, biz nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutantning Gag darajasini katta miqdorda to'plashini ko'rsatdik (1C-rasm). Ushbu ma'lumotlar NUC1 va SKI3 alohida antiviral yo'llarda ishtirok etishini va ikkala yo'lning yo'qolishi LA virus yukining sezilarli darajada oshishiga olib kelishini ko'rsatadi.

Yuqori LA virus yuki hujayra moslashuviga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz nuqta o'sish tahlillari yordamida xamirturush o'sishini tekshirdik. Nuc1∆ va ski3∆ yagona mutantlarning nozik o'sish nuqsonlari hujayralar uglerod manbai sifatida glyukoza emas, balki glitserin bilan o'stirilganda, xamirturush mitoxondriyal nafas olishga tayanadigan holat (1D-rasm) 37 darajada kuzatilgan. Shunisi e'tiborga loyiqki, nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutantlar odatdagidek 30 darajada o'sgan bo'lsa-da, ular uglerod manbasidan qat'i nazar, 37 darajada shartli halokatliligini ko'rsatdi (1D-rasm). Kutilganidek, yuqori haroratda yashovchanlik nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutantga NUC{12}}ekspressiv plazmid tomonidan tiklandi, bu Gag darajasining mos ravishda pasayishiga olib keldi (1-rasm C va D). Nuc1∆ ski3∆ juft mutantining oʻsish nuqsoni LA sabab boʻlganligini tasdiqlash uchun biz LA (LA0) dan davolangan izogen shtammni yaratdik va uning yuqori haroratlarda oʻsishini tahlil qildik. Biz o'sish nuqsoni butunlay engillashtirilganligini aniqladik, bu shartli o'limning cheklanmagan LA replikatsiyasining natijasi ekanligini anglatadi (1D-rasm). Yuqori LA nusxasi sonining optimal o'sish sharoitida hujayra moslashuviga ta'sirini baholash uchun biz suyuqlik madaniyatida ko'payish tezligini o'lchadik. Ushbu tadqiqotlar nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutantlarning yovvoyi turga nisbatan 30 darajadan past o'sish tezligini aniqladi, bu L-A0 shtammlarida teskari bo'lib, yuqori LA yuki hatto stresssiz hujayralarda ham fitnesga zararli ekanligini ko'rsatdi (SI Ilovasi, 2-rasm). S2).

cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

NUC1 ning ma'lum antiviral yo'llar bilan o'zaro ta'sirini yanada tavsiflash uchun biz uning XRN1 bilan aloqasini sinab ko'rdik. Biz nuc1∆ xrn1∆ qo'sh mutant bitta mutant bilan solishtirganda Gagning ancha yuqori darajalarini to'plaganligini va yuqori haroratda LA ga bog'liq shartli o'limga olib kelishini aniqladik (SI ilovasi, rasm. S3 A ​​va B), bu NUC1 va XRN1 ning ta'sir qilishini ko'rsatdi. LAni susaytirish uchun parallel yo'llar. Xrn1∆ ski3∆ qo'sh mutant mRNKni ommaviy tartibga solishda ularning asosiy ortiqcha bo'lmagan rollarini aks ettiradi, hatto LA bo'lmagan shtammlarda ham o'zgarmasdir (44). XRN1 NUC1 va SKI3 dan mustaqil antiviral tizim ekanligini aniqlash uchun biz nuc1∆ ski3∆ juft mutantida XRN1 ni ortiqcha ifodalash uchun yuqori nusxali plazmiddan foydalandik. Haqiqatan ham, biz Gag darajasining sezilarli pasayishini va plazmid tomonidan boshqariladigan XRN1 haddan tashqari ekspressiyasi yordamida nuc1∆ ski3∆ shartli o'limning bostirilishini kuzatdik (1-rasm C va D). Biz Nuc1, Ski3 va Xrn1 konvergent ravishda LA replikatsiyasiga qarshi turishadi va nuc1∆ ski3∆ yoki nuc1∆ xrn1∆ mutantlarida LA virus yukining ommaviy ravishda ortishi yuqori haroratlarda halokatli patogenezga sabab bo'lgan degan xulosaga keldik (1E-rasm).

Bioinformatikaga asoslangan genetik ekran yangi antiviral omillarni aniqlaydi.

Nuc1∆ ski3∆ juft mutantlarining LA ga bog'liq shartli halokatliligi kombinatorli mutant tadqiqotlari orqali boshqa antiviral omillarni aniqlash imkoniyatini oshirdi. Yangi nomzodning antiviral omillarini aniqlash uchun biz kamida ikkita yuqori o'tkazuvchanlik skrining tadqiqotida nuc1∆ bilan birlashganda sintetik o'sish nuqsoniga sabab bo'lgan genlarni yo'q qilish uchun tanlangan genetik o'zaro ta'sir ma'lumotlar bazasini qidirdik (45). Ushbu ma'lumotlar to'plamida XRN1 va SKI yo'q qilinishi kutilgan mavjudligiga qo'shimcha ravishda biz o'n oltita qo'shimcha genni topdik. Biz ushbu o'n olti genning har birining o'chirilishini nuc1∆ ski3∆ bilan birlashtirgan uch mutantlarni yaratish uchun genetik kesishuvdan foydalandik va jiddiy o'sish nuqsonlarini keltirib chiqaradigan oltitasini tasdiqladik (1-jadval). Biz ushbu genlarning har biridan kelib chiqqan sintetik o'sish fenotiplari LA{11}} shtammlarida teskari bo'lganligini aniqladik, bu ular antiviral oqsillarni kodlashini ko'rsatmoqda (1-jadval). Biz quyida yangi antiviral omillar sifatida ushbu ekran xitlarining bir nechta tasdiqlanishini tasvirlaymiz.

Bizning ekranimizda aniqlangan bir gen, REX2, bakteriyalardan odamlarga saqlanib qolgan 3'-5' RNK ekzonukleazasini kodlaydi (35). Rex2 ham, uning inson homologi REXO2 ham mitoxondriyaga joylashadi va prokaryotik va eukaryotik oqsillarda keng tarqalgan EXOIII domenini, shu jumladan interferon bilan stimulyatsiya qilingan virusga qarshi protein ISG20 (36, 37, 46-48) mavjud. Biz rex2∆ nuc1∆ ikki mutantli shtammi bitta mutantga nisbatan Gag darajasini sezilarli darajada oshirganligini va LA ga bog'liq o'sish nuqsonlarini, shu jumladan yuqori haroratda o'limga olib kelishini ko'rsatdi (2-rasm A va B va SI ilovasi, 2-rasm). S2). Rex2∆ yagona mutantli shtammi Gag darajasining biroz oshishini ko'rsatdi, garchi bu ta'sir cheksiz bo'lsa ham (2B-rasm). LA nusxasi raqami uchun rex2∆ oqibatlarini sinchkovlik bilan tekshirish uchun biz RT-qPCR yordamida LA RNK miqdorini aniqladik. Bu o'lchovlar rex2∆ nuc1∆ shtammlari LA ning sezilarli darajada ko'payishini tasdiqladi, biroq ular rex2∆ yagona mutantda ortib borayotgan LA RNKni to'plamasligini ham aniqladi (2C-rasm). Ushbu topilmalar Rex2 ning antiviral roli faqat NUC1 funktsiyasi yo'qligida namoyon bo'ladi. Shunisi e'tiborga loyiqki, nuc1∆ ski3∆ rex2∆ va nuc1∆ xrn1∆ rex2∆ uch mutantlar barcha o'sish sharoitida daxlsiz edi va bu nuqsonlar L-A0 shtammlarida qaytarildi (2D-rasm). Ushbu topilmalar LA mikovirusining og'ir patogen potentsialini namoyish etadi va yuqori darajada saqlanib qolgan mitoxondrial lokalizatsiyalangan RNK ekzonukleaza uchun yangi antiviral rolni aniqlaydi.

1-rasm. LA zaiflashuvi xamirturushni o'limga olib keladigan patogenezdan himoya qiladi. (A) Ko'rsatilgan shtammlardan tayyorlangan umumiy RNKning etidiy bromidi bilan bo'yalgan jeli ko'rsatilgan, 4,6 kb LA dsRNK bandi o'q bilan ko'rsatilgan. (B) Immunofloressensiya ko'rsatilgan genotiplarning hujayralarida LA dsRNK (apelsin) ni ko'rish uchun ishlatilgan. Ushbu shtammlar fon bo'yashini yo'qotish uchun zaif ko'p bo'lgan L-BC dsRNA virusidan davolandi (Usul tafsilotlari). DNKning DAPI bo'yalishi ko'k rangda. (O'lchov paneli, 1 mkm.) (C) Ko'rsatilgan shtammlarda LA Gag va 3-fosfogliserat kinaz (Pgk1) oqsilining g'arbiy blotingi ko'rsatilgan. Molekulyar og'irlik belgilari o'ng tomonda ko'rsatilgan. (D) 1C dan shtammlarning nuqta sinov o'sishi tahlillari ko'rsatilgan. Glyukoza yoki glitserinni o'z ichiga olgan -Leu muhitida shtammlar aniqlandi va belgilangan haroratlarda o'stirildi. (E) Mitoxondrial oqsil Nuc1 sitozolik oqsillar Xrn1 va SkiC bilan hamkorlik qilib, LA protein darajasini tartibga soladi va hujayra mosligini ta'minlaydi.

Bizning ekranimizda aniqlangan yana bir gen MYG1, inson melanotsit proliferatsiyasining 1-gen achitqi gomologi, barcha taksonlarda homologlarga ega bo'lgan 3'-5' RNK ekzonukleazidir (34). myg1∆ va nuc1∆ni birlashtirgan mutant shtammlari yagona mutantlar bilan solishtirganda Gag oqsili va LA RNKda katta o'sishni ko'rsatdi va yuqori haroratda va suyuqlik kulturasida jiddiy LAga bog'liq o'sish nuqsonlarini ko'rsatdi (2C-rasm va SI ilovasi, S2, S4-rasmlar. A va C). Rex2∆ bilan bo'lgani kabi, myg1∆ yagona mutant shtammi Gag darajasida ozgina o'sishni ko'rsatdi va LA RNKda o'zgarmadi (2C-rasm va SI ilovasi, S4C-rasm). Biz nuc1∆ ski3∆ myg1∆ uch mutantlarini qayta tiklashga muvaffaq bo'ldik, garchi ular 30 darajada juda sekin o'sgan va Gagning yanada yuqori darajalarini to'plagan (SI Ilovasi, S4 A va C-rasm). Ushbu o'sish nuqsonlari L-A0 shtammlarida ham qaytarildi (SI ilovasi, S4A-rasm). Shunday qilib, MYG1 NUC1 va SKI kompleksiga parallel ravishda harakat qiluvchi yangi antiviral omil hisoblanadi.

Jadval 1. Bioinformatik yondashuv yordamida yangi nomzod antiviral omillarni aniqlash

Inson MYG1 ning haddan tashqari ifodalanishiga olib keladigan mutatsiyalar otoimmün buzilish vitiligo bilan bog'liq bo'lib, MYG1 insonning tug'ma immunitetida qandaydir rol o'ynashi mumkinligini ko'rsatadi (49, 50). Biz ushbu imkoniyatni konstitutsiyaviy xamirturush promouteri (34) nazorati ostida inson MYG1 ni ifodalovchi plazmid yordamida o'rganib chiqdik va inson MYG1 nuc1∆ myg1∆ mutantining shartli o'sish nuqsonini qutqarganligini aniqladik (SI Ilovasi, S4D-rasm). Ushbu topilmalar MYG1 xamirturushining antiviral funktsiyasi inson MYG1 tomonidan amalga oshirilishi mumkinligini ko'rsatadi, bu odamlarda MYG1 uchun potentsial antiviral funktsiyani taklif qiladi.

2-rasm. Yangi antiviral omillar LA patogenezini ekspluatatsiya qilish orqali aniqlanadi. (A) NUC1 va REX2 da nuqsonli shtammlarning nuqta tahlili ko'rsatilgan. Glyukoza yoki glitserinni o'z ichiga olgan SC muhitida shtammlar aniqlandi va belgilangan haroratda o'stirildi. (B) 2A-rasmdagi shtammlarning LA Gag va Pgk1 oqsil darajasining Western blotlanishi. Molekulyar og'irlik belgilari o'ng tomonda ko'rsatilgan. (C) LA RNK qPCR yordamida aniqlandi va endogen ACT1 RNK ga normallashtirildi. O'rtacha RNK darajasi va SD ko'rsatilgan. n=5. *P < {{10}}.05, **P < 0.01, ***P < 0,001 (juftlanmagan Student t testi). (D) NUC1 ifodalovchi plazmidni o'z ichiga olgan uchta parallel antiviral yo'lda nuqsonli shtammlarning nuqta tahlili ko'rsatilgan. Shtammlar -URA muhitida yoki 0,1% 5-ftororotik kislota (5-FOA) bilan to'ldirilgan sintetik to'liq (SC) muhitda aniqlanadi.

Bizning bioinformatik ekranimiz yordamida aniqlangan yana bir gen toifasi gen ifodasi edi. CDC73 va SPT3 mos ravishda saqlanib qolgan xromatin bilan bog'langan PAF1 va SAGA komplekslarining subbirliklarini kodlaydi. cdc73∆ va spt3∆ nuc1∆ ski3∆ bilan birlashganda LA-ga bog'liq o'limga olib keldi (1-jadval). SAGA (SptAda-Gcn5-Asetiltransferaza) kashtan zamburug‘i Cryphonectria parasitica da virusga qarshi gen ekspressiyasini ko‘paytirishi ko‘rsatilganligi sababli, biz ushbu kompleksni batafsil o‘rganib chiqdik (51). Spt3∆ nuc1∆ ikki mutantli shtammi Gag darajasini oshirdi va yuqori haroratlarda LA ga bog'liq o'limga olib keldi (SI ilovasi, S4 B va C-rasm). SAGA katta protein kompleksidir va biz bir necha boshqa SAGA subunit-kodlovchi genlarida deletsiya spt3∆ (SI ilovasi, S1 va S4C jadvali) kabi fenotipik oqibatlarga ega ekanligini tasdiqladik. C. parasitica topilmalari bilan birga, bu natijalar SAGA kompleksi turli qo'ziqorin turlarida antiviral gen ifodasini nazorat qilishini ko'rsatadi.

Yuqori nusxani bostirish skriningi odamlarda ham antiviral bo'lgan xamirturushga qarshi antiviral omillarni aniqlaydi.

XRN1 haddan tashqari ifodalanishi nuc1∆ ski3∆ shtammining o'sish nuqsonlarini bostirganligi sababli, biz boshqa antiviral omillarning haddan tashqari ko'payishi shunga o'xshash ta'sirni keltirib chiqarishi haqida faraz qildik, bu yangi antiviral tizimlarni aniqlash uchun ekran sifatida ishlatilishi mumkin. Biz haddan tashqari ekspressiyasi nuc1D ski3D shtammining shartli halokatliligini engillashtiradigan genlarni aniqlash uchun yuqori nusxali plazmid bostirish ekranidan foydalandik (Usul tafsilotlari). Ushbu ekrandan foydalanib, biz SRO9, SLF1 va PAB1 ni nuc1∆ ski3∆ ning yuqori nusxali supressorlari sifatida aniqladik, ularning barchasi ribosoma bilan bog'langan RNK bog'lovchi oqsillarni kodlaydi (3A-rasm) (52, 53). Sro9 va Slf1 eukaryotlarda keng tarqalgan paralog lupus-autoantigen (La) domenini o'z ichiga olgan oqsillardir. Ta'kidlash joizki, ularning inson homologi Larp1 yaqinda SARS-Cov-2 va ssRNK yoki nukleokapsid zanjiri bilan bog'langan oqsillar uchun ekranlarda aniqlangan (32, 54). Larp1 ushbu tadqiqotlarning birida asosiy e'tibor edi va uning mexanizmi noma'lum bo'lsa-da, inson hujayralarida SARS-Cov{27}} replikatsiyasini susaytirishi ko'rsatilgan (32). PAB1 turli mexanizmlar orqali odamlarda virusni inhibe qilishning umumiy maqsadi bo'lgan yuqori darajada saqlanib qolgan PolyA-bog'lovchi oqsilni kodlaydi (33). Biz PAB1 yoki SRO9 ning haddan tashqari ifodalanishi nuc1∆ ski3∆ mutantida Gag darajasini sezilarli darajada kamaytirishini aniqladik, bu ularning qutqaruvchi fenotiplarini tushuntirdi (3B-rasm). Qizig'i shundaki, SLF1 ifodasi nuc1∆ ski3∆ o'sish nuqsonini xuddi SRO9 kabi qutqargan bo'lsa ham, bu Gag darajasining pasayishiga olib kelmadi (3 A va B-rasm). Ushbu topilmalar PAB1 va SRO9 hujayralarini LA replikatsiyasini bostirish orqali qutqarishini va SLF1 hujayralarni yuqori virusli replikatsiyaning patogen oqibatlaridan himoya qilishini ko'rsatadi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Yuqori LA nusxasi soni sitotoksik proteostatik stressga olib keladi.

Sro9 va Slf1 antiviral faoliyatining turli mexanizmlari haqida tushunchaga ega bo'lish uchun biz LA patogenezining fiziologik oqibatlari qanday bo'lishi mumkinligini va SRO9/SLF1 ularga qanday ta'sir qilishi mumkinligini ko'rib chiqdik. Biz NUC1 yoki SKI-kompleks genlarining yo'q qilinishi Hsf1 (55) tomonidan boshqariladigan GFP reportyor genining zaif induksiyasiga olib kelgan oldingi tadqiqotni ta'kidladik, bu proteostatik stressni sezadigan va gen ifoda javobini faollashtiradigan konservatsiyalangan transkripsiya omili (56-58). ). Ushbu muxbir (HSE-GFP) bilan oqim sitometriyasidan foydalanib, biz ushbu natijalarni tasdiqladik va nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutant HSE-GFP ning sinergik va LA ga bog'liq faollashuviga sabab bo'lganligini aniqladik (3C-rasm va SI ilovasi, S5-rasm). Biz nuc1∆ ski3∆ mutantlarida kuzatilgan Gagning ko'p ishlab chiqarilishi ushbu proteostatik stress reaktsiyasini hisobga olgan deb taxmin qildik. Buni qo'llab-quvvatlagan holda, nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutantining HSE-GFP faollashuvi PAB1 yoki SRO9 haddan tashqari ifodasi bilan qaytarildi, bu genlarning Gag to'planishi uchun oqibatlarini aks ettirdi (3-rasm B va C). Ta'kidlash joizki, SRO9 paralogining SLF1 haddan tashqari ifodalanishi HSE-GFP faollashuviga to'sqinlik qilmadi. Shunday qilib, paralog SRO9 va SLF1 genlarining evolyutsion divergensiyasi turli xil antiviral mexanizmlarga olib keldi, SRO9 virusli oqsil to'planishini va u bilan bog'liq proteostatik stressni bostiradi va SLF1 hujayralarni virusli proteostatik stressning toksik oqibatlaridan himoya qiladi.

3-rasm. Tarjimani nazorat qiluvchi omillarning haddan tashqari ifodalanishi LA patogenezini engillashtiradi. (A) SRO9, SLF1 va PAB1 yuqori nusxa ko'chirish bostiruvchilarning nuqta sinov o'sishi tahlillari ko'rsatilgan. Glyukoza yoki glitserinni o'z ichiga olgan LEU muhitida shtammlar aniqlandi va belgilangan haroratlarda o'stirildi. (B) 3A dan shtammlarda LA Gag, Pgk1, Sro9 va Slf1 protein darajalari uchun Western bloting. Molekulyar og'irlik belgilari o'ng tomonda ko'rsatilgan. (C) Ko'rsatilgan shtammlarda HSE GFP ifodasini o'lchash uchun oqim sitometriyasi ishlatilgan (n {{10}}). Birinchi va uchinchi kvartillar kulrang qutilar bilan belgilanadi. O'rtacha GFP intensivligi ichidagi qora chiziqlar bilan belgilanadi. *P < 0.05, **P < 0,01, ***P < 0,001 (juftlanmagan Student t testi). (D) Belgilangan shtammlarda Hsp{17}}GFP ning floresan mikroskopiyasi. Yadrolarni ko'rish uchun hujayralar DAPI bilan bo'yalgan. (Oʻlchov paneli, 1 mkm.) Oʻng tomonda 3+ GFP fokusli hujayralar foizi koʻrsatilgan. n=3. Har bir replikatsiya uchun 75 dan 140 gacha hujayralar hisoblangan.

Proteostatik stress ko'pincha sitotoksik oqsil agregatlarining to'planishi bilan bog'liq bo'lib, ular Hsp104 protein disaggregazasi bilan birlashtirilgan GFP yordamida vizualizatsiya qilinishi mumkin, bu Hsf1 transkripsiya faollashuvining bevosita maqsadi bo'lib, u protein agregatlari bilan birgalikda lokalizatsiya qilinadi (59, 60). LA patogenezi bilan bog'liq proteostatik nuqsonlarni batafsil o'rganish uchun biz turli shtammlarda Hsp{6}}GFP o'choqlarini ko'rish uchun floresan mikroskopiyadan foydalandik. Kutilganidek, 30 darajada o'stirilgan yovvoyi tipdagi hujayralar kamdan-kam hollarda kuzatiladigan Hsp{9}}GFP o'choqlarini to'playdi. Nuc1∆ va ski3∆ yagona mutantlar yovvoyi turga o'xshar ekan, hayratlanarlisi, nuc1∆ ski3∆ qo'sh mutant uchta yoki undan ortiq Hsp{15}}GFP o'choqlari bo'lgan hujayralarning 25% dan ortig'ini ko'rsatdi (3D-rasm). Biz nuc1∆ ski3∆ uchun kuzatgan boshqa barcha fenotiplarda bo'lgani kabi, Hsp{19}}GFP fokuslarining to'planishi LA borligiga bog'liq edi (3D-rasm). Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, NUC1 va SKI3 ning yo'q qilinishi natijasida yuzaga kelgan yuqori virus yuki sitotoksik oqsil agregatsiyasini ko'rsatadigan Hsp{24}}GFP o'choqlarining to'planishiga olib keldi.

LA patogenezi proteostatik nuqsonlar bilan bog'liq bo'lganligi sababli, biz Hsf1 antiviral omil sifatida ishlaydi deb taxmin qildik. HSF1 ni yo'q qilish halokatli, shuning uchun biz ilgari nashr etilgan shtammlar to'plamidan olingan haroratga sezgir allel hsf1-848 dan foydalandik (61). Hsf{6}} alleli 39 daraja o'sishning yo'qligini, 37 daraja oraliq o'sish fenotipini va 35 darajada ko'rinadigan o'sish nuqsonini ko'rsatdi (4A-rasm). Spot test tahlillari shuni ko'rsatdiki, hsf{11}} o'sish fenotiplari 35 va 37 darajalarda nuc1∆ yoki ski3∆ bilan birlashganda sezilarli darajada yaxshilangan va bu o'sish nuqsonlari LA virusi bo'lmagan shtammlarda qaytarilgan (4A-rasm). . Kutilganidek, barcha hsf{18}} mutant shtammlarining daxlsizligi LA borligidan qatʼiy nazar 39 darajada oʻstirilgan hujayralarda saqlanib qoldi. Bundan tashqari, tetrad dissektsiyalardan foydalanib, biz hsf1-848 nuc1∆ ski3∆ uch mutantlar, agar ular LA bilan kasallangan bo'lsa, ruxsat etilgan haroratda daxlsiz ekanligini, ammo LA{26}} shtammidan (SI) olingan bo'lsa, sog'lom ekanligini ko'rsatdik. Ilova, S6-rasm). Vestern blotting yordamida biz hsf1-848 nuc1∆ va hsf1-848 ski3∆ yagona mutantlarga nisbatan LA Gag miqdorini oshirganligini aniqladik (4B-rasm). Hujayra biologik tadqiqotlarimiz bilan birga, bu topilmalar Hsf{34}}regulyatsiya qilingan proteostatik stressga javob xamirturushda antiviral tizim sifatida faoliyat yuritib, keng tarqalgan LA replikatsiyasining patogen oqibatlariga qarshi turishini ko'rsatadi.

Proteostatik nuqsonlarning kuchayishi va yuqori haroratlarda sitotoksiklikka olib kelishi ma'lum bo'lganligi sababli (59), oddiy model yuqori haroratlarda LA patogenezining halokatli oqibatlarini katastrofik proteostatik stress bilan bog'laydi. Ushbu modelni qo'shimcha sinovdan o'tkazish uchun biz shtammlarni ortostatik stressga olib keladigan oqsillarga qo'shilgan prolin analogi bo'lgan azetidin{2}}karboksilik kislota (AZC) bilan davolashdik (38). Ushbu tajribalar nuc1∆ ski3∆ LA virusiga bog'liq bo'lgan tarzda AZC ga kuchli sezuvchanligini ko'rsatdi (4C-rasm va SI ilovasi, S6-rasm). Bundan tashqari, nuc1∆ ski3∆ 5% etanolga sezgirligini aniqladik, bu holat proteostatik nuqsonlarni ham keltirib chiqaradi, ammo osmotik stressni keltirib chiqaradigan 0.5 M NaCl ga emas (SI ilovasi, S6-rasm). Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, LA patogenezining halokatli oqibatlari, ayniqsa, haddan tashqari proteostatik stress bilan bog'liq.

4-rasm. Issiqlik zarbasi reaktsiyasi LA patogenezini bostiradi. (A) HSF1, NUC1 va SKI3 da LA bilan yoki bo'lmagan nuqsonli shtammlarning nuqta tahlili ko'rsatilgan. Glyukoza o'z ichiga olgan SC muhitida shtammlar aniqlandi va belgilangan haroratda o'stirildi. (B) Belgilangan shtammlarning LA Gag va Pgk1 protein darajalari uchun Western bloting. Molekulyar og'irlik belgilari o'ng tomonda ko'rsatilgan. (C) Proteotoksik prolin analogi, azetidin-2-karboksilik kislota (AZC) bilan ishlov berilgan shtammlarning nuqta tahlili ko'rsatilgan. 0.1 mg/mL AZC bilan yoki unsiz qo'shilgan va 30 darajada o'stirilgan glyukozani o'z ichiga olgan SC muhitida shtammlar aniqlandi.

Munozara

Laboratoriya shtammlarida keng tarqalgan bo'lishiga qaramay, LA dsRNA virusini o'rganish uning yaxshi xarakterga ega ekanligi sababli cheklangan. Bu erda biz LA ning replikatsiyasi nazoratsiz bo'lsa, xamirturush uchun chuqur oqibatlarga olib kelishini va turli xil tug'ma immunitet tizimlari LA replikatsiyasini bardoshli darajada ushlab turishini ko'rsatamiz. Xususan, biz ko'rsatamizki, parallel ta'sir qiluvchi NUC1 va SKI3 antiviral genlari mavjud bo'lmagan shtammlarda LA replikatsiyasi ommaviy ravishda ko'tarilib, ortostatik stress va yuqori haroratlarda shartli o'limga olib keladi. Ushbu yangi kashfiyotdan foydalanib, biz LA replikatsiyasini cheklash yoki hujayralarni cheklanmagan LA replikatsiyasining patogen oqibatlaridan himoya qilish vazifasini bajaradigan yangi xamirturush genlarini aniqlash uchun bioinformatik va oldinga genetik ekranlardan foydalandik. Ushbu ekranlar to'yingan emasligi sababli, xamirturush genomi ko'plab boshqa antiviral omillarni kodlashi mumkin. Boshqa organizmlardan ekzogen tarzda kiritilgan virusli RNKlarning replikatsiyasini o'rganuvchi xamirturushlarda ko'plab chuqur tadqiqotlar o'tkazildi va LA antiviral omillari ushbu virusli RNKlarda xuddi shunday ta'sir qiladimi yoki yo'qligini aniqlash qiziq bo'ladi (62, 63).

LA infektsiyasining aniq xavfini hisobga olsak, u doimo mavjud bo'lgan antiviral faollik sharoitida qanday davom etishi hayratlanarli. Ushbu paradoksning tushuntirishi, LA muvozanatlashuvchi foyda keltirishi mumkin. LA ning mumkin bo'lgan afzalliklaridan biri shundaki, u ba'zi shtammlarga qo'shni infektsiyalanmagan hujayralarni o'ldiradigan yashirin toksinlarni kodlaydigan yo'ldosh viruslarini saqlashga imkon beradi. Biroq, LA "Qotil" yo'ldoshlari bo'lmagan ko'plab shtammlarda mavjud, shuning uchun bu tushuntirish LA infektsiyasining davom etishini tushuntirish uchun etarli emas. Shunday qilib, biz LA o'zining zararli potentsialini muvozanatlashtiradigan qandaydir sirli foydaga ega bo'lishi mumkinligini taxmin qilamiz.

Rex2 ni virusni susaytirish omili sifatida kashf qilishimiz ma'lum mitoxondrial antiviral omillar arsenalini Nuc1 dan tashqari kengaytiradi va mitoxondriya xamirturushdagi asosiy antiviral markaz ekanligini ko'rsatadi. Darhaqiqat, mitoxondriyalar dasturlashtirilgan hujayra o'limi regulyatori va odamlarda virusga qarshi signalizatsiya platformasi sifatida virusni himoya qilishda markaziy rollarni bajaradi. Mitoxondriyal nukleazalar xamirturushdagi sitozolda joylashgan virusni qanday susaytiradi? Imkoniyatlardan biri shundaki, bu fermentlar mitoxondriyalarga qaratilgan bo'lsa-da, LA zaiflashishini to'g'ridan-to'g'ri amalga oshirish uchun sitozolda past, ammo etarli darajada to'planishi mumkin. Ushbu gipotezaga muvofiq, biz ilgari Nuc1 ning meiotik hujayralar sitozolida to'planishini ko'rsatdik, ammo bizning usullarimiz uni mitotik hujayralar sitozolida aniqlay olmadi (27). Yana bir gipoteza shundan iboratki, LA replikatsiya siklining ba'zi jihatlari mitoxondriyalar bilan yaqin aloqada bo'ladi. Masalan, LA transkriptlari mitoxondriyalar bilan bog'lanishi va ularni kesib o'tishi mumkin, bu ularni Nuc1 va / yoki Rex2 ta'siriga olib keladi. Bizning natijalarimiz eukaryotlarda virusli tug'ma immunitet uchun mitoxondriyaning potentsial umumiy ahamiyatini ta'kidlaydi va xamirturush-LA tizimini ushbu mavzuni keyingi o'rganish uchun kuchli model sifatida joylashtiradi.

Ribosomalarni tarjima qilish bilan bog'liq bo'lgan antiviral SKI kompleksi va Pab1, Sro9 va Slf1 ni LA patogenezining yuqori nusxasini bostiruvchi sifatida aniqlashimiz, tarjima qiluvchi ribosomani xamirturush antiviral faolligining asosiy markazi sifatida yanada ochib beradi. PAB1 (polyA bog'lovchi oqsil) LA ni bostirishi haqidagi topilma, LA transkriptlarida polyA dumlari yo'qligi sababli ajablanarli, bu Pab1 to'g'ridan-to'g'ri LA ga ta'sir qilmasligini ko'rsatadi. Oldingi topilmalar shuni ko'rsatdiki, LA transkriptlari poliA + xamirturush mRNKlari bilan 60S ribosomali subbirliklarni ushlash uchun 80S komplekslarini tarjima qilish uchun raqobatlashadi (64). Bizning topilmalarimizni tushuntiruvchi modellardan biri shundaki, Pab1 poliA dumli mRNKlarning tarjimasini kuchaytiradi, bu esa keyinchalik tarjima qilish uchun LA transkriptlari uchun 60S subunitlarining mavjudligini yo'q qiladi. Tarjimada Sro9 va Slf1 rollari unchalik yaxshi tushunilmagan, ammo ularning vazifalari xuddi shunday tarzda 60S subunits uchun LA transkriptlarining raqobati bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Muhimi, Pab1 va Sro9/Slf1 gomologlari inson virusini himoya qilishda ishtirok etadi va xamirturushdagi bu genlarni keyingi tadqiqotlar xamirturushdan odamlarga saqlanib qolgan virusga qarshi mexanizmlarga oydinlik kiritadi.

cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi

Biz konservatsiyalangan transkripsiya omili HSF1 uchun virusga qarshi rolni hamda sitotoksik oqsil agregatlarining HSF1-faollashtirilgan belgisi bo‘lgan Hsp104-GFP o‘choqlarining to‘planishini o‘z ichiga olgan LA-induktsiyali proteostatik stress javobini aniqladik. Ushbu natijalar LA patogenezi proteotoksik stress tufayli yuzaga kelgan modelni qo'llab-quvvatlaydi. Shuningdek, biz SAGA kompleksi uchun antiviral funktsiyani aniqladik, bu issiqlik zarbasidan keyin Hsf1 maqsadli gen induksiyasining koaktivatori sifatida harakat qilishini ko'rsatdi (65, 66). Ushbu kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, yuqori darajadagi LA Hsf1 maqsadli genlarining SAGAga bog'liq faollashuviga olib keladi, keyin esa virusga qarshi funktsiyani bajaradi va kurtaklari paydo bo'lgan xamirturushda potentsial antiviral gen ekspresyon dasturini yoritadi. Ushbu model boshqa organizmlardagi virus patogeneziga tegishli bo'lishi mumkin bo'lgan ko'plab tekshiriladigan bashoratlarni amalga oshiradi. Haqiqatan ham, inson HSF1 proteolitik tartibga soluvchi omillarning ifodasini ham nazorat qiladi. Inson HSF1 ning antiviral funktsiyalari tavsiflangan bo'lsa-da, bunda ortostatik stress reaktsiyasi qanday rol o'ynashi aniq emas (39). Bizning topilmalarimiz proteostatik stress reaktsiyasini faollashtirishdagi roliga nisbatan Hsf1 ning antiviral funktsiyasini aniqlash uchun kuchli tizimni yoritadi.

havolalar

1. T. Nakayashiki, CP Kurtzman, HK Edskes, RB Wickner, xamirturush prionlari [URE3] va [PSI+] kasalliklardir. Proc. Natl. akad. Sci. AQSH 102, 10575–10580 (2005).

2. RB Wickner, T. Fujimura, R. Esteban, Saccharomyces cerevisiae viruslari va prionlari. Adv. Virus Res. 86, 1–36 (2013).

3. T. Fujimura, R. Esteban, xamirturush LA ikki zanjirli RNK virusida qopqoqni tortib olish mexanizmi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 108, 17667–17671 (2011).

4. JD Dinman, T. Icho, RB Vikner, achitqilarning ikki zanjirli RNK virusida -1 ribosomali ramka siljishi gag-pol sintez oqsilini hosil qiladi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 88, 174–178 (1991).

5. A. Bernheim va boshqalar, prokaryotik ilonlar turli xil antiviral molekulalarni ishlab chiqaradi. Tabiat 589, 120–124 (2021).

6. A. Bernheim, R. Sorek, Bakteriyalarning pan-immun tizimi: Virusga qarshi mudofaa jamiyat resursi sifatida. Nat. Rev. Mikrobiol. 18, 113–119 (2020).

7. AG Jonson va boshq., Bakterial ustalar hujayra o'limining qadimiy mexanizmini ochib beradi. Fan 375, 221–225 (2022).

8. BR Morehouse va boshq., STING siklik dinukleotidni sezish bakteriyalarda paydo bo'lgan. Tabiat 586, 429–433 (2020).

9. G. Ofir va boshqalar, immun signalizatsiya molekulalari orqali bakterial TIR domenlarining antiviral faolligi. Tabiat 600, 116–120 (2021).

10. KM Slavik va boshqalar, cGAS-ga o'xshash retseptorlar RNKni sezadi va Drosophila'da 3'2'-cGAMP signalini boshqaradi. Tabiat 597, 109–113 (2021).

11. AT Whiteley va boshqalar, Bakterial cGASga o'xshash fermentlar turli nukleotid signallarini sintez qiladi. Tabiat 567, 194–199 (2019).

12. HM Burgess, I. Mohr, Cellular 5'-3' mRNK exonuclease Xrn1 ikki zanjirli RNK to'planishi va virusga qarshi javoblarni boshqaradi. Hujayra xost mikrobi. 17, 332–344 (2015).

13. SC Eckard va boshqalar, SKIV2L RNK ekzosomasi RIG-I-ga o'xshash retseptorlarning faollashuvini cheklaydi. Nat. Immunol. 15, 839–845 (2014).

14. M. Miyashita, H. Oshiumi, M. Matsumoto, T. Seya, DDX60, DEXD / H qutisi helikazasi, RIG-I-ga o'xshash retseptorlar vositachiligida signalizatsiyani rag'batlantiradigan yangi virusga qarshi omil. Mol. Hujayra Biol. 31, 3802–3819 (2011).

15. CS Ng, DM Kasumba, T. Fujita, H. Luo, Hujayra o'limini oldini olish uchun sitoplazmatik RNK viruslariga qarshi XRN1-DCP1/2 agregatsiyasining antiviral faolligining fazoviy-vaqtincha tavsifi. Hujayra o'limi farqi 27, 2363–2382 (2020).

16. RE Rigby, J. Rehwinkel, antiviral immunitet va otoimmunitetda RNK degradatsiyasi. Immunol tendentsiyalari. 36, 179–188 (2015).

17. F. Shiromoto va boshq., IL-1beta/ATF3- vositachiligida Ski2 ifodasini induksiyasi gepatit B virusi x mRNK degradatsiyasini kuchaytiradi. Biokimyo. Biofizika. Res. Kommun. 503, 1854–1860 (2018).

18. JT Braun, X. Bai, AW Jonson, Ski2p, Ski3p va Ski8p xamirturushli antiviral oqsillari in vivo kompleks sifatida mavjud. RNK 6, 449-457 (2000).

19. DC Masison va boshq., Cap-mRNK degradatsiyasi tizimini ikki zanjirli RNK virusi va poli(A)-mRNKni xamirturushga qarshi antiviral tizim orqali kuzatish. Mol. Hujayra Biol. 15, 2763–2771 (1995).

20. C. Shmidt va boshq., Ribosoma-Ski2-Ski3-Ski8 helikaz kompleksining kriyo-EM tuzilishi. Fan 354, 1431–1433 (2016).

21. AM Searfoss, RB Wickner, 3' poly(A) tarjima uchun ajralmas hisoblanadi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSH 97, 9133–9137 (2000).

22. EA Toh, P. Guerry, RB Wickner, Saccharomyces cerevisiae ning xromosomali superkiller mutantlari. J. Bakteriol. 136, 1002–1007 (1978).

23. A. Zinoviev, RK Ayupov, IS Abaeva, CUT Hellen, TV Pestova, To'xtab qolgan ribosomalardan mRNKning chang'i majmuasi tomonidan ekstraktsiyasi. Mol. 77-uya, 1340–1349 e1346 (2020).

24. SG Ball, C. Tirtiaux, RB Wickner, SACCHAROMYCES CEREVISIAE ning qotil tizimlarida La va L-(Bc) Dsrna nusxasining genetik nazorati. Genetika 107, 199–217 (1984).

25. R. Esteban, L. Vega, T. Fujimura, 20S RNK narnavirus Saccharomyces cerevisiae da SKI1/XRN1 ning virusga qarshi faolligiga qarshi. J. Biol. Kimyo. 283, 25812–25820 (2008).

26. PA Rouli, B. Xo, S. Bushong, A. Jonson, SL Soyer, XRN1 xamirturushlarda turga xos virus cheklash omilidir. PLoS patogi. 12, e1005890 (2016).

27. J. Gao va boshqalar, ajdodlarning apoptotik yo'li orqali meiotik virusni susaytirish. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 116, 16454–16462 (2019).

28. LY Li, X. Luo, X. Vang, Endonukleaz G mitoxondriyadan chiqarilganda apoptotik DNazdir. Tabiat 412, 95–99 (2001).

29. BJ Tomson, Viruslar va apoptoz. Int. J. Exp. Patol. 82, 65–76 (2001).

30. MD Eastwood, SW Cheung, KY Lee, J. Moffat, MD Meneghini, Xamirturush gametogenezi davrida ishlab chiqilgan yadroviy qirg'in. Dev. 23, 35–44 uyalar (2012).

31. MD Eastwood, MD Meneghini, sporulyatsiya qiluvchi xamirturushda dasturlashtirilgan hujayra o'limi bilan gametalarning differentsiatsiyasini rivojlanish muvofiqlashtirish. Eukaryot hujayra 14, 858–867 (2015).

32. N. Shmidt va boshq., Infektsiyalangan inson hujayralarida SARS-CoV-2 RNK-oqsil interaktomi. Nat. Mikrobiol. 6, 339–353 (2021).

33. RW Smith, NK Grey, Poly (A) - bog'lovchi oqsil (PABP): Umumiy virusli maqsad. Biokimyo. J. 426, 1–12 (2010).

34. R. Grover va boshq., Myg1 ekzonukleaz RNKni qayta ishlash orqali yadro va mitoxondriyal translatsiya dasturlarini birlashtiradi. Nuklein kislotalari Res. 47, 5852–5866 (2019).

35. E.V.Koonin, saqlanib qolgan qadimiy domen 3'-5' eksonukleazlarning o'sib borayotgan superoilasiga qo'shiladi. Curr. Biol. 7, R604–606 (1997).

36. M. Szewczyk va boshqalar, Inson REXO2 mtRNKni qayta ishlash va parchalanish mexanizmlari tomonidan hosil qilingan qisqa mitoxondrial RNKlarni ikki zanjirli RNK to'planishini oldini olish uchun boshqaradi. Nuklein kislotalari Res. 48, 5572–5590 (2020).

37. Y. Zuo, MP Deutscher, Exoribonuclease superfamilies: Strukturaviy tahlil va filogenetik taqsimot. Nuklein kislotalari Res. 29, 1017–1026 (2001).

38. EW Trotter, L. Berenfeld, SA Krause, GA Petsko, JV Grey, Proteinning noto'g'ri qatlamlanishi va haroratning ko'tarilishi Saccharomyces cerevisiae'da issiqlik zarbasi omiliga bog'liq bo'lgan umumiy mexanizm orqali G1 ning hibsga olinishiga olib keladi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 98, 7313–7318 (2001).

39. A. Reyes, AJ Navarro, B. Diethelm-Varela, AM Kalergis, PA Gonsales, Virusli infektsiyalarda HSF1 ning roli bormi? FEBS Open Bio 12, 1112–1124 (2022).

40. F. Weber, V. Vagner, SB Rasmussen, R. Hartmann, SR Paludan, Ikki zanjirli RNK musbat zanjirli RNK viruslari va DNK viruslari tomonidan ishlab chiqariladi, lekin manfiy zanjirli RNK viruslari tomonidan aniqlanmaydigan miqdorda. J. Virol. 80, 5059–5064 (2006).

41. S. Welsch va boshqalar, Dang virusini ko'paytirish va yig'ish joylarining tarkibi va uch o'lchovli arxitekturasi. Hujayra xost mikrobi. 5, 365–375 (2009).

42. I. Fernandes de Kastro, R. Tenorio, C. Risko, lipid dunyosida virus yig'ish zavodlari. Curr. Fikr. Virol. 18, 20–26 (2016 yil).

43. YX Liu, CL Dieckmann, Mitoxondriyal nukleazada etishmayotgan shtammlar tomonidan xamirturushli virusga o'xshash zarrachalarning ortiqcha ishlab chiqarilishi. Mol. Hujayra Biol. 9, 3323–3331 (1989).

44. AW Jonson, RD Kolodner, Saccharomyces cerevisiae ning sep1 (xrn1) ski2 va sep1 (xrn1) ski3 mutantlarining sintetik halokatliligi qotil virusga bog'liq emas va bu genlarning tarjimani boshqarishda umumiy rolini taklif qiladi. Mol. Hujayra Biol. 15, 2719–2727 (1995).

45. C. Stark va boshqalar, BioGRID: O'zaro ta'sir ma'lumotlar to'plami uchun umumiy ombor. Nuklein kislotalari Res. 34, D535–539 (2006).

46. ​​L. Espert va boshqalar, ISG20, bir zanjirli RNK uchun xos bo'lgan yangi interferon-induktsiyali RNase, RNK genomik viruslariga qarshi muqobil antiviral yo'lni belgilaydi. J. Biol. Kimyo. 278, 16151–16158 (2003).

47. T. Hanekamp, ​​PE Thorsness, YNT20, yme1 yme2 ning bypass bostiruvchisi, Saccharomyces cerevisiae mitoxondriyalarida lokalizatsiya qilingan taxminiy 3'-5' ekzonukleazni kodlaydi. Curr. Genet 34, 438–448 (1999).

48. A. van Huf, P. Lennertz, R. Parker, RNase D oilasining uchta saqlanib qolgan a'zolari xamirturushdagi 5S, 5.8S, U4, U5, RNase MRP va RNase P RNKlarini qayta ishlashda o'ziga xos va bir-biriga mos keladigan funktsiyalarga ega. . EMBO J. 19, 1357–1365 (2000).

49. M. Dwivedi, NC Laddha, R. Begum, MYG1 ifodasining ortishi va uning promotor polimorfizmining kasallikning rivojlanishi va vitiligoli bemorlarda yuqori sezuvchanlik bilan bog'liqligi. J. Dermatol. Sci. 71, 195–202 (2013).

50. K. Kingo va boshqalar, MYG1, melanotsitlar bilan bog'liq yangi gen, vitiligoda yuqori ifodaga ega. J. Dermatol. Sci. 44, 119–122 (2006).

51. IB Andika, A. Jamal, H. Kondo, N. Suzuki, SAGA kompleksi virusga qarshi RNK suskunatsiyasining transkripsiyaviy yuqori regulyatsiyasiga vositachilik qiladi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 114, E3499–E3506 (2017).

52. SG Sobel, SL Wolin, Ikki xamirturush La motifli oqsillar poliribosomalar bilan bog'langan RNKni bog'laydigan oqsillardir. Mol. Biol. 10-uya, 3849–3862 (1999).

53. A. Proveller, J.S. Butler, poli(A)-bog'lovchi oqsilning poli(A)-defisitli Saccharomyces cerevisiaedagi ribosomal assotsiatsiyasi. J. Biol. Kimyo. 271, 10859–10865 (1996).

54. DE Gordon va boshq., SARS-CoV-2 oqsilining o'zaro ta'siri xaritasi dorilarni qayta ishlatish maqsadlarini ochib beradi. Tabiat 583, 459–468 (2020).

55. O. Brandman va boshqalar, Ribosoma bilan bog'langan sifatni nazorat qilish kompleksi yangi paydo bo'lgan peptidlarning degradatsiyasini keltirib chiqaradi va translyatsiya stressini bildiradi. 151-uya, 1042–1054 (2012).

56. J. Anckar, L. Sistonen, issiqlik stressiga javob berishda HSF1 funktsiyasini tartibga solish: qarish va kasallikdagi ta'sir. Annu. Rev. Biochem. 80, 1089–1115 (2011).

57. J. Li, J. Labbadia, RI Morimoto, stress, rivojlanish va organizm salomatligida HSF1ni qayta ko'rib chiqish. Trends Cell Biol. 27, 895–905 (2017).

58. PK Sorger, HR Pelham, xamirturushdan issiqlik zarbasi elementini bog'lovchi oqsilni tozalash va tavsiflash. EMBO J. 6, 3035–3041 (1987).

59. EJ Solis va boshqalar, Hsf1 xamirturushining muhim funktsiyasini aniqlash eukaryotik proteostazni saqlash uchun ixcham transkripsiya dasturini ochib beradi. Mol. 63, 60–71 uyalar (2016).

60. JR Glover, S. Lindquist, Hsp104, Hsp70 va Hsp40: Ilgari yig'ilgan oqsillarni qutqaradigan yangi chaperon tizimi. 94, 73–82 katak (1998).

61. Z. Li va boshq., Haroratga sezgir mutantlar bilan muhim xamirturush geni funktsiyasini tizimli o'rganish. Nat. Biotexnologiya. 29, 361–367 (2011).

62. RY Zhao, virus tadqiqoti uchun xamirturush. Mikrob. 4-uya, 311–330 (2017).

63. T. Panavas, E. Serviene, J. Brasher, PD Nagy, Xamirturush genomi bo'ylab ekran RNK viruslarining replikatsiyasiga ta'sir qiluvchi xos genlarning o'xshash bo'lmagan to'plamlarini ochib beradi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 102, 7326–7331 (2005).

64. Y. Ohtake, RB Wickner, xamirturush virusi tarqalishi tanqidiy ravishda erkin 60S ribosoma subunit konsentratsiyasiga bog'liq. Mol. Hujayra Biol. 15, 2772–2781 (1995).

65. SB Kremer, DS Gross, SAGA va Rpd3 xromatin modifikatsiyasi komplekslari issiqlik zarbasi genining tuzilishi va ifodasini dinamik ravishda tartibga soladi. J. Biol. Kimyo. 284, 32914–32931 (2009).

66. MD Leach va boshqalar, Hsf1 va Hsp90 Candida albicansda haroratga bog'liq global transkripsiyani qayta qurish va kromatin arxitekturasini tashkil qiladi. Nat. Kommun. 7, 11704 (2016 yil).

67. CS Sitron, JH Park, JM Giafaglione, O. Brandman, CAT dumlarining yig'ilishi ularning degradatsiyasini bloklaydi va S. cerevisiae da proteotoksisiteni keltirib chiqaradi. PLoS One 15, e0227841 (2020).

68. L. Magtanong va boshq., Dozani bostirish genetik o'zaro ta'sir tarmoqlari hujayraning funktsional ulanish diagrammalarini yaxshilaydi. Nat. Biotexnologiya. 29, 505–511 (2011).

69. V. Bilanchone va boshq., Ty3 retrotransposon yangi genomlarni yuqtirish uchun xamirturush RNK ​​qayta ishlovchi jismlarni juftlashtirib oladi. PLoS Genet. 11, e1005528 (2015).

70. L. Ruan va boshq., Mitoxondriyaga noto'g'ri qatlamlangan oqsillarni import qilish orqali sitozolik proteostaz. Tabiat 543, 443–446 (2017).