Echinacoside 5-FU tomonidan qo'zg'atilgan miyelosupressiya sichqonlarida gematopoetik funktsiyani yaxshilaydi

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Saisai Vang va boshqalar

Abstrakt

Maqsadlar:ta'sirini o'rganishni maqsad qildikechinacoside(ECH) yoqilgangematopoetik5-FU sabab bo'lgan suyak iligi depressiyasi sichqonlarida funksiya.

Asosiy usullar:In vitro, ECH bilan stimulyatsiya qilingandan so'ng, suyak iligi (BM) hujayralari va suyak iligi stromal hujayralari (BMSC) ning proliferatsiya qobiliyatimiyelosupressiyasichqonlar mos ravishda CCK8 tahlili va morfologiyasi bilan baholandi. In vivo, 5-FU tomonidan qo'zg'atilgan miyelosupressiya yoki nazorat sichqonlari ECH bilan intragastrik tarzda yuborilgan.(echinacoside)BM xujayralari koloniya hosil qiluvchi hujayra tahlili uchun ajratilishidan oldin 12 kun davomida har kuni 15 mg/kg yoki teng hajmdagi oddiy sho'r suvda. Shu bilan birga, BMSC'lar hujayralar o'sish modeli kuzatilgunga qadar 4 hafta davomida ekilgan, hujayra madaniyati supernatantlari Elishay tomonidan GM-CSF sekretsiyasi uchun to'plangan va hujayralarning RNKsi EPO va GM-CSF RT-PCR uchun ekstraksiya qilingan. 24 soat yoki 48 soat davomida ECH bilan rag'batlantirilgan BM hujayralari yoki BMSC'lar protein ekstraktsiyasi va Western bloting uchun to'plangan.

Asosiy topilmalar:ECH(echinacoside)BM hujayralarining o'sishini rag'batlantirdi, lekin 5-FU bilan davolash qilingan sichqonlardan olingan BMSC'larni emas. ECH ning intragastral qo'llanilishi(echinacoside)5-FU bilan davolash qilingan sichqonlar umumiy sonini oshirishi mumkingematopoetiksichqonlar darajasini sog'lom nazorat qilish uchun progenitor hujayralar va GM progenitor hujayralar, lekin BFU progenitor hujayralari emas. ECH bilan ishlov berilgan BMSClarmiyelosupressiyasichqonlar kuchliroq o'sdi va ko'proq GM-CSF ni ifodaladi, lekin EPO emas. ECH 5-FU bostirilgan BM hujayralarida PI3K signalizatsiya yoʻlini faollashtirdi.

Ahamiyati:ECH(echinacoside)yaxshilashi mumkingematopoetiksuyak iligi funktsiyasi 5-FU bilan bog'liqmiyelosupressiyasichqonlar. ECH(echinacoside)kemoterapi yoki HSC transplantatsiyasi paytida bemorlar uchun muqobil samarali terapiya sifatida ko'rib chiqilishi mumkin.

Kalit so‘zlar:Ekinakozid, gematopoetik, miyelosupressiya, GM-CSF, PI3K signalizatsiya yo'li

Ekinakozid ichidaCistanche

Kirish

Fluorourasil yoki 5-FU saratonni yordamchi va palliativ davolash uchun eng ko'p buyurilgan kimyoterapevtik vositalardan biridir [2,9,28]. Bu vodorod o'rnida C-5 pozitsiyasida ftor atomiga ega bo'lgan urasilning analogidir va timidilat sintaza faolligini qaytarilmas inhibe qilish va keyinchalik DNK replikatsiyasini inhibe qilish orqali ishlaydi [20]. Leykopeniya va atrofiyagematopoetikorganlar odamlarda, sichqonlarda va cho'chqalarda 5-FU qo'llanilishi bilan bog'liq ikkita dominant toksiklikdir [15,17,22].Miyelosupressiya, ustidan inhibitiv va sitotoksik ta'sir natijasidagematopoetikprogenitor hujayralar [10] va suyak iligidagi oksidlovchi stress [25], 5-FU asosidagi kimyoterapiyalarning klinik qo'llanilishini cheklaydi.

5-FU tomonidan qoʻzgʻatilgan suyak iligi supressiyasi butun qon hujayralari sonining pasayishiga olib keladi. Keyinchalik klinik alomatlar isitma, kamqonlik va qon ketishni o'z ichiga oladi va davolash asosan qon quyish va o'sish omili qo'shimchalariga bog'liq [4]. Transfüzyon qizil qon tanachalari va trombotsitlarni to'ldirishda samarali bo'lishi mumkin, ammo yengillik qisqa muddatli va takroriy davolanishni talab qiladi. O'sish omillariga eritropoetin, granulotsitlar koloniyasini stimulyatsiya qiluvchi omil (G-CSF) va granulotsitlar-makrofag koloniyalarini stimulyatsiya qiluvchi omil (GM-CSF) kiradi. Bu omillar tabiiy kimyoviy moddalar bo'lib, suyak iligi faoliyatini oshirishi mumkin [7,21], lekin pul talab qiladi va oq qon hujayralari o'sishini rag'batlantirish uchun foydali emas. Muqobil samarali davolash usullari talabga ega. An'anaviy xitoy tibbiyoti mashhurlik ortib borayotgan mavjud variantdir [5]. So'nggi bir necha yil ichida ko'plab tadqiqotlar kimyoviy terapiya bilan bog'liq kasalliklarning oldini olish va davolash uchun xitoy o'simlik dori-darmonlarining ta'siriga qaratilgan.miyelosupressiya[33,35].

Echinacoside(ECH) (1-rasm) an'anaviy xitoy tibbiyoti Herba Cistanchesdan olingan feniletanoid birikma bo'lib, u qon aylanishini rag'batlantiruvchi vosita, buyrak etishmovchiligi va neyrodegenerativ kasalliklar uchun dori sifatida keng qo'llaniladi [24]. ECH(echinacoside)suyak regeneratsiyasi [18], oksidlanishga qarshi [8,14,27], immunitetni tartibga solish, neyroproteksiya va xulq-atvorni yaxshilash [11,16] kabi ko'plab farmakologik faollikka ega. Shuningdek, u gepatotoksisite [32] va o'tkir o'pka shikastlanishiga qarshi himoya qiluvchi vosita sifatida aniqlandi [34]. Trk retseptorlari va quyi oqimdagi Trk-ERK yo'li uning rotenon shikastlanishiga qarshi neyronal himoya faoliyatida ishtirok etishi mumkin [36]. Rag'batlantirishda ECHning roli va yangi mexanizmlarimiyelosupressiyasuyak iligi hujayralarining o'sishi to'liq tushunilmagan. Ushbu tadqiqotda biz ECH ta'sirini baholadik(echinacoside)yoqilgangematopoetikin vitro va in vivo sichqonlarning 5-FU tomonidan induktsiya qilingan suyak iligi depressiyasi va tegishli mexanizmlardagi funktsiyasi.

Materiallar va uslublar

Kimyoviy va biokimyoviy moddalar

EchinacosideRonghe Medical Technology and Development Corporation (Shanxay, Xitoy) dan sotib olindi (tozaligi HPLC tomonidan aniqlangan 98 foizdan katta yoki teng) va DMSOda eritildi. 5-FU HaoRan Biotexnologiya korporatsiyasidan (Shanxay, Xitoy) olingan. Sichqoncha hujayralari uchun rekombinant sitokinli metiltsellyuloza muhiti (MethoCult muhiti) Stem Cell Technologies (Vankuver, Kanada) kompaniyasidan sotib olindi.

cistanche bodibilding

Hayvonlar va eksperimental dizayn

Oʻziga xos patogensiz, ogʻirligi 15-18 g gacha boʻlgan 5- dan 6-haftagacha boʻlgan urgʻochi Balb/c sichqonlari Shanghai Laboratory Animal Company (SLAC, Shanxay, Xitoy) dan xarid qilingan. Sichqonlar Xitoyning Chjetszyan universitetining hayvonlar muassasasida boqilgan. Hayvonlar bo'yicha tajribalar Zhejiang universitetining Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan va laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ishlatish bo'yicha qo'llanmaga amal qilgan [1,31].

Choy EH va boshqalar ta'riflaganidek, suyak iligi depressiyasini aniqlash uchun sichqonlarga 200 mg/kg 5-FU bir dozasi qorin bo'shlig'iga yuborilgan. [6]. In vitro tadqiqoti uchun suyak iligi hujayralari (BM) va suyak iligi stromal hujayralari (BMSC) 5-FU in'ektsiyasidan 2 kun o'tgach ajratildi. In vivo sichqonlar tasodifiy ravishda 4 guruhga bo'lingan, har bir guruhda 5–6 sichqon (n=5–6): 5-FU/ECH guruhi, 5-FU/nazorat guruhi, ECH(echinacoside)guruh va nazorat guruhi. 5-FU/ECH guruhida 5-FU in'ektsiyasidan so'ng sichqonlar 12 kun davomida kuniga 15 mg/kg miqdorida ECH bilan har kuni intragastral oziqlantirildi. ECH oʻrniga 5-FU/nazorat guruhida(echinacoside), 5-FU yuborilgan sichqonlarga teng hajmdagi oddiy sho'r suv yuborildi. ECH guruhi va nazorat guruhi uchun ECH yoki oddiy fiziologik eritma xuddi shu usul bilan 5-FU ishlov berilmagan sichqonlarga yuborildi. 12-kuni sichqonlar evtanatizatsiya qilindi va keyingi tadqiqotlar uchun suyak iligi hujayralari ajratildi. Batafsil, BM xujayralari koloniya hosil qiluvchi hujayra (CFC) tahlili uchun tayyorlangan, BMSC'lar proliferatsiya tahlili uchun va BMSClarning hujayra madaniyati supernatantlari GM-CSF ELISA uchun to'plangan va BMSClarning RNKsi EPO va GM-CSF RT uchun ekstraksiya qilingan. -PCR. Tajribalar 3 marta takrorlandi.

BM hujayralari va BMSClarni tayyorlash

BM hujayralari sichqonchaning suyak iligidan olingan bir hujayrali suspenziyalardan tayyorlangan. Qisqacha aytganda, sichqonlar evtanatizatsiya qilindi va 5 daqiqa davomida etanolda namlandi. Hujayralar tibia va son suyagining medullar kanalidan 23-oʻlchovli igna bilan qayta-qayta yuvilib, bir hujayrali suspenziyalar olish uchun 100 mkm hujayrali filtrdan oʻtkazildi. Eritroid suyak iligi hujayralari ammoniy xlorid buferi bilan qisqa muddatli inkubatsiya (30 s) orqali lizing qilindi, so'ngra madaniy muhit bilan takroriy yuvish bosqichlari. Hayotiylik va hujayralar soni gemositometr yordamida tripan ko'kni chiqarib tashlash usuli bilan aniqlandi.

BMSClarni yaratish uchun BM hujayralari TC-plastinkalari quduqlarida 24 soat davomida o'sishiga ruxsat berildi, yopishmaydigan hujayralarni olib tashlash va madaniy muhit bilan takroriy yuvishdan so'ng, yopishgan hujayralar BMSC sifatida qabul qilindi.

Hujayralar Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) nam inkubatorida 5% CO2 bilan 37 darajada, 10% issiqlik bilan inaktivlangan homila sigir zardobi (FBS), penitsillin/streptomitsin (100 U/ml) va L-glutamin bilan to'ldirilgan. (2 nM). Hujayralarni etishtirish uchun barcha reagentlar Invitrogen kompaniyasidan (Shanxay, Xitoy) sotib olingan.

CCK8 tahlili bilan in vitro BM hujayralarining ko'payishi

5-FU bilan davolash qilingan sichqonlarning BM hujayralari 96-quduq plastinkasiga (Costar) 1 × 103 hujayra/quyuk zichligida qo‘yildi va turli konsentratsiyalarda ECH bilan to‘ldirilgan muhitda yetishtirildi.(echinacoside)({0}} mkM, 0,1 mkM, 1 mkM, 10 mkM, 25 mkM, 50 mkM mos ravishda). 3 yoki 6-kuni hujayralar 20 ul CCK-8 eritma reagenti (Beyotime, Jiangsu) bilan "impulsatsiya qilindi" va qo'shimcha 4 soat davomida kulturalandi. Hujayra proliferatsiyasi 450 nm da ultra mikroplata o'quvchida (Molekulyar qurilmalar) kolorimetrik CCK8 ni o'lchash yo'li bilan tekshirildi.

Ekinakozid ichidaCistanche

In vitro BMSC proliferatsiyasi va morfologiyasi

BMSClar 6-quduq plastinkasining quduqlarida BM hujayralarining (shuningdek, 5-FU bilan ishlov berilgan sichqonlardan) dastlabki zichligi 3,5 × 106 hujayra/quduq bo‘lgan holda tayyorlangan. 24 soatdan keyin madaniyat muhiti ECH (50 ug/ml) bo'lgan muhit bilan almashtirildi. Har hafta supernatantlarning yarmi olib tashlandi va o'rniga yangi madaniyat muhiti (ECH bilan yoki bo'lmasdan) qo'yildi(echinacoside)ko'rsatilgandek). 4 haftalik madaniyatdan so'ng BMSC morfologiyasi teskari mikroskop ostida kuzatildi.

Koloniya hosil qiluvchi hujayra (CFC) tahlili

MethoCult muhitida CFC tahlili ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi. Qisqacha aytganda, sichqonlarning turli guruhlaridagi BM hujayralari ml uchun 2 × 105 da tayyorlangan. Keyin hujayra aralashmasini hosil qilish uchun 4 ml MethoCult muhitiga 0,4 ml hujayra qo'shildi. 16-oʻlchovli toʻmtoq igna bilan yaxshilab aralashtirilgandan soʻng, 1,1 ml hujayra aralashmasi har 35 mm kultura idishiga (Stem Cell Technologies) quyilib, uch marta koʻpaytirildi va 5 foizli CO2 namlangan muhitda 37 darajada inkubatsiya qilindi. 7 kun davomida. 7 kunlik madaniyatdan so'ng kamida 30 hujayradan iborat koloniyalar aniqlandi va hisoblandi.

Teskari transkriptaza-polimeraza zanjiri reaktsiyasi (RT-PCR) va GM-CSF Elishay

Sichqonlarning turli guruhlaridan olingan BMSClar yuqorida ta'riflanganidek 4 hafta davomida yetishtirildi. 4-haftalik madaniyatdan so'ng, RNAsimple Total RNK to'plami (TianGen, Pekin) yordamida umumiy RNK ekstraktsiyasi uchun BMSClar yig'ildi. Birinchi zanjirli cDNK iScript cDNK sintezi to'plami (Bio-Rad, Richmond, CA) yordamida 1 ug umumiy RNK (DNase bilan ishlov berilgan) yordamida sintez qilindi. Granulotsit-makrofag koloniya-stimulyator omili (GM-CSF) va eritropoetin (EPO) ifodalari yarim miqdoriy RT-PCR bilan aniqlandi. PCR primer ketma-ketligi quyidagicha edi: GM-CSF: 5′-GGCCTTGGAA GCATGTAGAGG-3′ (oldinga) va 5′-GGAGAACTCGTTAGAGACGA CTT-3′ (teskari); EPO: 5′-CCTCATCTGCGACAGTCG AG-3′ (oldinga) va 5′-ACAACCCAT CGTGACATTTTCT-3′ (teskari); Beta-aktin uy xo'jaligi geni: 5'-GTATCCTGACCCT GAAGTACC-3' (oldinga) va 5'-TGAA GGTCTCAAACATGATCT-3' (teskari). PCR kuchaytirilishi 2720 Thermal Cycler (Applied Biosystems) da amalga oshirildi va mahsulotlar agaroz gel elektroforezi yordamida tahlil qilindi. Maqsadlarning mRNK ifoda darajalari beta-aktin darajasiga normallashtirildi. BMSClarning supernatantlari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq GM-CSF ELISA to'plami (JinSui, Shanxay) yordamida GM-CSF ELISA tahlili uchun yig'ildi.

Western bloting

5-FU dan BM hujayralari va BMSC'larmiyelosupressiyasichqonlar yoki nazorat sichqonlari 6-quduq plitalaridagi har bir quduq uchun 5 × 106 boshlang'ich zichlikda qoplangan. 24 soatdan so'ng, ECH 50ug / ml madaniyat muhitiga qo'shildi va hujayralar 1 mM fenilmetilsulfonil ftoridni o'z ichiga olgan 1 × RIPA buferida (CST, Danvers, MA) parchalanishidan oldin hujayralar qo'shimcha 24 soat yoki 48 soat davomida o'sishiga ruxsat berildi. (PMSF). Protein kontsentratsiyasi BCA protein tahlili bilan aniqlandi. 30ug jami oqsillar 10% natriy dodesil sulfat-poliakrilamid jellarida elektroforezlandi va PVDF membranalariga (Millipore, MA, AQSh) o'tkazildi. Membranalar blokirovka qiluvchi bufer bilan ((Beyotime, Haimen, Xitoy) 37 daraja haroratda 1 soat davomida bloklangan, so'ngra -aktin (# 4967, CST), fosfo-PI3 kinaz p85 (Tyr458) / p55 ga qarshi antikorlar bilan 4 daraja kechada inkubatsiya qilingan. (Tyr199) (#4228, CST), fosfo-Akt (Ser473) (#4060, CST), Akt (pan) (C67E7) (#4691, CST), fosfor-Stat1(Tyr701)(#9167, CST), Fosfo-Stat3 (Tyr705) (#9415, CST), Fosfo-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)(#9215, CST), Fosfo-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204, CST)(#437) ), p38 MAPK(#9212, CST), p44/42 MAPK (Erk1/2)(#4695, CST), Fosfo-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185)(#4668, CST) va SAPK/JNK(#) 9258, CST). CA, AQSh).

Statistik tahlil

Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etildi. Har bir guruh o'rtasidagi farqlarning ahamiyati Student t-testi bilan aniqlandi. A p-qiymati b 0.05 statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi.

cistanche bodibilding

Natijalar

In vitro bilan ta'minlangan ECH(echinacoside)5-FU bostirilgan BM hujayralari proliferatsiyasini rag'batlantiradi

5-FU dan olingan BM hujayralarimiyelosupressiyasichqonlar ECH bilan davolash qilindi(echinacoside)3 kun yoki 6 kun davomida 0.01 dan 50 mkM gacha bo'lgan turli konsentratsiyalarda va hujayra proliferatsiyasi CCK8 tahlili bilan baholandi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, ECH bilan ishlov berilgan BM hujayralarining ko'payish darajasi 3 yoki 6 kunlik madaniyatdan keyin ham ECH bilan ishlov berilmagan hujayralarga qaraganda yuqori edi. Rag'batlantiruvchi ta'sir dozaga bog'liq bo'lgan usulni ko'rsatdi.

In vitro bilan ta'minlangan ECH(echinacoside)5-FU bostirilgan BMSC proliferatsiyasiga ta'sir qilmaydi

5-FUdan kelib chiqqan BMSC'larmiyelosupressiyasichqonlar ECH bilan davolash qilindi(echinacoside)4 hafta davomida 50 ug / ml konsentratsiyasida va hujayra proliferatsiyasi yorug'lik teskari mikroskop ostida hujayra morfologiyasini kuzatish orqali baholandi. 3-rasmda ko'rsatilganidek, hujayralarning o'sish shakli va morfologiyasi ECH bilan davolashda yoki bo'lmaganda o'xshash edi.

Oshqozon ichiga yuboriladigan ECH(echinacoside)eritroid (BFU-E) progenitor hujayralari emas, balki 5-FU tomonidan qo'zg'atilgan miyelosupressiv granulotsit-makrofagning (CFU-GM) gematopoetik funktsiyasini rag'batlantiradi.

BM hujayralarining 5-FU/ ECH, 5-FU/control, ECH dan ko'payishi va differentsiatsiyasi naqshlari(echinacoside), va nazorat guruhi CFC tahlili bilan baholandi. MethoCult muhitida BM hujayralarining 7 kunlik madaniyatidan so'ng, CFC'lar yorug'lik mikroskopi ostida in situ tasniflandi va sanab o'tdi. 4-rasmda ko'rsatilganidek, progenitor darajalarining tahlili 5-FU/ECH guruhida CFU-GMning sezilarli darajada ko'payishini aniqladi (pb 0.0001). bilan solishtirganda 5-FU/nazorat guruhi (169,3 ± 11,1 ga qarshi 54,5 ± 3,1), shuningdek nazorat guruhi (169,3 ± 11,1 va 129,3 ± 5,6) (mos ravishda pb 0,05). Har bir guruhdagi BFU-E sonida farq yo'q edi (73,0 ± 11,1 ga qarshi 74,7 ± 8,6 va 91,2 ± 5,5). ECH guruhidagi CFU-GM va BFU-E soni nazorat guruhidagi bilan deyarli bir xil edi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).

4-rasm. Oshqozon ichiga yuboriladigan ECH(echinacoside)rag'batlantiradigematopoetik5-FU induktsiyasi funksiyasimiyelosupressiyagranulotsit-makrofag (CFU-GM), ammo eritroid (BFU-E) progenitor hujayralari emas. A) Koloniya hosil qiluvchi birliklarning vakili tasviri. CFU-GM: koloniya hosil qiluvchi birliklar - granulotsit makrofagi. BFU-E: portlash hosil qiluvchi birlik - eritroid. (B) Har bir guruhning koloniya hosil qiluvchi birliklarining vakili tasvirlari. C) Har bir guruhning koloniya hosil qiluvchi birliklari soni. BM hujayralari har bir guruhdan ajratildi va Materiallar va usullarda tavsiflanganidek CFU-GM va BFU-E progenitor hujayra koloniyasini hosil qiluvchi tahlil uchun ekildi. Natijalar 3 ta mustaqil tajribadan olingan va oʻrtacha ± SEM, n=5–6 sifatida ifodalangan. * pb 0.0 Nazorat guruhi bilan solishtirganda 5, 5-FU guruhi bilan solishtirganda ## pb 0,0001.

Oshqozon ichiga yuboriladigan ECH(echinacoside)5-FU sabab bo'lgan miyelosupressiya BMSC proliferatsiyasini rag'batlantiradi.

4 haftalik madaniyatdan so'ng, BMSClarning ko'payishi yorug'lik teskari mikroskop ostida hujayra morfologiyasini kuzatish orqali baholandi. 5-rasmda ko'rsatilganidek, BMSClar 5-FU/ECH(echinacoside)guruh nazorat guruhiga qaraganda kuchliroq o'sdi.

Oshqozon ichiga yuboriladigan ECH(echinacoside)5-FU tomonidan qo'zg'atilgan miyelosupressiv BMSClarning GM-CSF ishlab chiqarishini rag'batlantiradi

BMSC madaniyatining 4 haftasidan so'ng, RT-PCR yordamida hujayralarning GM-CSF va EPO ning mRNK ifodalari aniqlandi. 6A-rasmda ko'rsatilganidek, ECH bilan davolash qilingan suyak iligini bostirish sichqonlarining BMSC'larida GM-CSF ifodasi 5-FU/nazorat guruhi bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi. Hujayra madaniyati supernatantlarida GM-CSF ishlab chiqarilishi Elishay tomonidan aniqlandi. 6B-rasmda ko'rsatilganidek, 5-FU/ nazorat guruhi bilan solishtirganda, 5-FU/ECH(echinacoside)guruh GM-CSF (pb 0.05) ning yuqori ifodasini ko'rsatdi va deyarli nazorat guruhiga teng edi.

ECH(echinacoside)5-FU bostirilgan BM hujayralarida PI3K signalizatsiya yoʻlini faollashtiradi

5-FU dan BM hujayralari va BMSC'larmiyelosupressiyayoki nazorat sichqonlari ECH bilan rag'batlantirildi(echinacoside)24 soat yoki 48 soat davomida 50 ug / ml konsentratsiyasida hujayralar oqsil ekstraktsiyasi va Western blotting uchun to'plangan. ECH mexanizmlari beri(echinacoside)ko'p o'rganilmagan, biz JAK/STAT1, JAK/STAT3, SAPK/JNK, p{2}} MAPK, p44/42 MAPK va PI3K/Akt signalizatsiya yo'llarini o'z ichiga olgan tegishli signal yo'llari panelini ko'rib chiqdik. 7-rasmda ko'rsatilganidek, ECH BMSC yoki nazorat guruhlarida induksiya aniq bo'lmagan 5-FU sichqonlaridan olingan BM hujayralarida p-PI3K p85/p55 ning yuqori ifodasini keltirib chiqarishi mumkin. Boshqa barcha yo'llar uchun biz katta farqlarni ko'rmadik (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).

Munozara

ECH bu haqiqatga o'xshardi(echinacoside)Oddiy gematopoezli sichqonlarga hech qanday ta'sir ko'rsatmadi, chunki 5-FU davosisiz sichqonlar uchun ECHdagi gematopoetik progenitor hujayralar soni.(echinacoside)guruh nazorat guruhi bilan deyarli bir xil edi, shuning uchun morfologiya, GM-CSF va EPO sekretsiyasi bilan ko'rsatilgandek BMSClarning ko'payishi va faollashuvi sodir bo'ldi. Shunday qilib, natija sessiyasida ECHdan olingan ma'lumotlar(echinacoside)guruh nazorat guruhi bilan birlashtirildi va nazorat sifatida tavsiflandi.

5-FU saraton kasalligini davolashda kimyoterapiya preparati sifatida suyak iligi funktsiyasiga ta'sir qiladi. 5-FU ning yuqori dozasini qo'llash suyak iligining kuchli susayishiga olib kelishi mumkin [19]. Bizning tadqiqotimizda suyak iligi bostirish modeli sichqonlarda 5-FU bilan davolash orqali muvaffaqiyatli o'rnatildi, chunki koloniya hosil qiluvchi birliklarning kamayishi va BMSC morfologiyasi qo'llab-quvvatlandi.

Suyak iligi asosiy hisoblanadigematopoetikgematopoetik ildiz hujayralari (HSC) va suyak iligi stromal hujayralaridan (BMSC) tashkil topgan organ [13]. Oldingi hujayralar qon hujayralarini, shu jumladan qizil qon tanachalarini, trombotsitlarni, monotsitlarni, granulotsitlarni va limfotsitlarni ishlab chiqarishi mumkin. Va oxirgi hujayralar yog ', xaftaga va suyak ishlab chiqarishi mumkin, ular mezenximal yoki stromal hujayralar deb ta'riflanadi [26]. Ma'lumki, BMSClar HSC o'chog'ining asosiy komponentlari bo'lib, bu ikki ildiz hujayra populyatsiyalari bir-biri bilan chambarchas bog'liq.gematopoetikva skelet gomeostazi [29]. BMSClar FL [23], GM-CSF [12] va SCF [12,3] kabi tartibga soluvchi molekulalar va sitokinlarni ajratish orqali HSClarning ko'payishini rag'batlantirishi va kuchaytirishi mumkin.

In vitro ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, ECH(echinacoside)dan BM hujayralarining ko'payishini rag'batlantirishi mumkinmiyelosupressiyasichqonlar dozaga bog'liq bo'lsa-da, umuman olganda, hujayralar 3-kuni 6-kunga qaraganda kuchliroq o'sgan bo'lsa ham, ehtimol in vitro madaniyat muhiti natijasida. Aksincha, ECH(echinacoside)5-FU bilan davolash qilingan sichqonlardan BMSClarning ko'payishiga ta'sir ko'rsatmadi. Salbiy ta'sir hujayra o'sishi holatiga bog'liq emasligi ehtimolini istisno qilish uchun biz eksperimental sharoitda BMSClarni rag'batlantirishi isbotlangan o'simlik komponenti Rg1ni ham qo'shdik.miyelosupressiyasichqonlarning o'sishi, ijobiy nazorat sifatida [33].

In vivo ma'lumotlar ECH ekanligini isbotladi(echinacoside)gematopoezni, katta ehtimollik bilan granulotsitopoezni va megakaryotsitopoezni samarali qayta qurishi mumkin, ammo eritropoez emas.miyelosupressiyasichqonlar. ECH ning intragastral qo'llanilishi(echinacoside)12 kun davomida 5-FU bilan davolash qilingan sichqonlar umumiy sonining oshishiga olib keldigematopoetikprogenitor hujayralar va granulotsit-makrofaglarning progenitor hujayralari, ammo CFC tahlillarida CFU-GM va BFU-E soni ko'rsatganidek, eritroid progenitor hujayralar emas. Qizig'i shundaki, biz 5-FU/ECHdagi CFU-GM sonining(echinacoside)guruh nazorat guruhlaridagidan ham yuqori edi. Biz CFU-GM ning tez kengayishini taxmin qildik, bu esa kompensatsiya sifatida yuzaga keldimiyelosupressiya5-FU boshchiligidagi holat. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, ECH BMSC tarqalishini va GM-CSFni rag'batlantirishi mumkin, ammo EPO ishlab chiqarishni emas.miyelosupressiyaCFC natijalariga mos keladigan sichqonlar.

Natijalar ECHning yangi usulini ko'rsatdi(echinacoside)Bu uni yaxshilash uchun ishlatilishi mumkingematopoetikichida ishlaydimiyelosupressiyasichqonlar (8-rasmda ko'rsatilganidek): HSC niche muhitida, in vitro yoki in situ in situ aralash BMs madaniyati bilan, ECH BMSC proliferatsiyasini va GM-CSF ishlab chiqarishni rag'batlantiradi, shuning uchun proliferatsiya va differentsiatsiyani rag'batlantiradi va kuchaytiradi. HSClar. HSC mavjud bo'lmasa, ECH BMSC tarqalishini rag'batlantirishga qodir emas.

GM-CSF retseptorlari (ligand bog'lash) va (signalizatsiya) bo'linmalaridan iborat. GM-CSF avval subbirlik bilan bog'lanadi, so'ngra effektor oqsillarning subbirlik bilan o'zaro ta'siri orqali quyi oqim signal kaskadlarini qo'zg'atadi [30]. pastki oqim signalizatsiyasini boshlaydigan JAK2 ni transaktivlangan subbirlik. Faollashtirilgan signalizatsiya modullari orasida Janus kinaz/signal transduser va transkripsiya faollashtiruvchisi (JAK/STAT), mitogen faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) yo'li va fosfatidilinositol 3-kinaz (PI3K) yo'li kiradi [30]. Qizig'i shundaki, bizning skrining natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, PI3K yo'li 5-FU bilan davolash qilingan sichqonlardan olingan BM hujayralarida faollashtirilgan, ammo 5-FU bostirilgan BMSCS va oddiy BM hujayralari yoki BMSC'larda aniq emas edi. Ehtimol, GM-CSF/PI3K yo'lini faollashtirish orqali, ECH(echinacoside)BM hujayralarining o'sishini tanlab rag'batlantiradi.

Cistanchedagi echinacoside

Xulosa

Xulosa qilib aytganda, biz ECHni ko'rsatdik(echinacoside)ga istiqbolli rag'batlantiruvchi ta'sir ko'rsatadigematopoetik5-FU tomonidan induktsiya qilingan suyak iligi sichqonlarida, ayniqsa granulotsitik va makrofagotsitar hujayralarda bostirish funktsiyasi, bu ECH(echinacoside)kimyoviy moddalar bilan davolashdan keyin kimyoterapiya yoki HSC transplantatsiyasi paytida suyak iligi inhibisyonunda klinik qo'llash potentsialiga ega bo'lishi mumkin.

Manfaatlar to'qnashuvi bayonoti

Hech qanday manfaatlar to'qnashuvi yo'q.

Ma'lumotnomalar

[1] ESD Alleva, Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanma, Etologiya 103 (1997) 1072-1073.

[2] J. Bergh, T. Wiklund, B. Eriksen, E. Lidbrink, H. Lindman, P. Malmstrom va boshqalar, moslashtirilgan florourasil, epirubitsin va siklofosfamid yordamchi davolash sifatida ilik qo'llab-quvvatlanadigan yuqori dozali kimyoterapiya bilan solishtirganda. yuqori xavfli ko'krak saratoni uchun: randomizatsiyalangan sinov. Skandinaviya ko'krak guruhi 9401 tadqiqoti, Lancet 356 (2000) 1384-1391.

[3] A. Bernstein, L. Forrester, AD Reith, P. Dubreuil, R. Rottapel, The murine W/c-kit va po'lat lokuslar va gematopoezni nazorat qilish, Semin. Gematol. 28 (1991) 138–142.

[4] PJ Keri, Giyohvand moddalardan kelib chiqqanmiyelosupressiya: diagnostika va boshqarish, Drug Saf. 26 (2003) 691–706.

[5] F. Cheung, TCM: Xitoyda ishlab chiqarilgan, Nature 480 (2011) S82–S83.

[6] EH Choi, HE Ok, Y. Yoon, BA Magnuson, MK Kim, HS Chun, antosiyaninga boy bo'lgan antosiyaninga boy bo'tqa (Vaccinium myrtillus L.) ekstraktining 5-fluorourasil, BioFactors tomonidan qo'zg'atilgan mielotoksiklikka qarshi himoya ta'siri. Oksf. Angliya) 29 (2007) 55–65.

[7] J. Krouford, H. Ozer, R. Stoller, D. Jonson, G. Layman, I. Tabbara va boshqalar. Kichkina bemorlarda isitma va neytropeniyani granulotsitlar koloniyasini ogohlantiruvchi omil bilan kamaytirish. hujayrali o'pka saratoni, N. Engl. J. Med. 325 (1991) 164–170.

[8] L. Dalby-Brown, H. Barrett, AK Landbo, AS Meyer, P. Molgaard, Echinacea purpurea dan alkamidlar, kofein kislotasi hosilalari va polisakkarid fraksiyalarining inson past zichlikdagi lipoproteinlarining in vitro oksidlanishiga sinergik antioksidant ta'siri, J. Agrik. Oziq-ovqat kimyosi. 53 (2005) 9413–9423.

[9] WH de Vos tot Nederveen Cappel, HJ Meulenbeld, JH Kleibeuker, FM Nagengast,

FH Menko, G. Griffioen, va boshq., Irsiy bo'lmagan polipozis kolorektal saratonda III bosqichli yo'g'on ichak saratoni uchun adjuvant 5-FU davolashdan so'ng omon qolish, Int. J. Saraton 109 (2004) 468-471.

[10] LE Friberg, MO Karlsson, uchun mexanik modellarmiyelosupressiya, Tekshirish. Yangi dorilar 21 (2003) 183–194.

[11] X. Geng, X. Tian, ​​P. Tu, X. Pu, neyroprotektiv taʼsiriechinacosideParkinson kasalligining sichqoncha MPTP modelida, Evr. J. Farmakol. 564 (2007) 66–74.

[12] JY Xan, RY Goh, SY Seo, TH Xvang, HC Kvon, SH Kim va boshq., Kordon qonini kotransplantatsiya qilishgematopoetikildiz hujayralari va SCID sichqonlarida madaniyat bilan kengaytirilgan va GM-CSF-/SCF-transfektsion mezenximal ildiz hujayralari, J. Korean Med. Sci. 22 (2007) 242–247.

[13] EL Herzog, L. Chai, DS Krause, ilikdan olingan ildiz hujayralarining plastikligi, Blood 102 (2003) 3483–3493.

[14] C. Jia, H. Shi, V. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao va boshqalar, Metabolism ofechinacoside, yaxshi antioksidant, kalamushlarda: uning safro metabolitlarini ajratish va identifikatsiya qilish, Drug Metab. Dispos. 37 (2009) 431–438.

[15] S. Kojima, K. Takaba, N. Kimoto, T. Takeda, M. Kakuni, M. Mizutani va boshqalar.miyelosupressiyasichqonlarda, Arch. Toksikol. 77 (2003) 285–290.

[16] R. Kuang, Y. Sun, V. Yuan, L. Lei, X. Zheng, Himoya effektlariechinacoside, feniletanoid glikozidlardan biri, PC12 hujayralarida H (2) O (2) dan kelib chiqqan sitotoksiklik bo'yicha, Planta Med. 75 (2009) 1499–1504.

[17] JC Laurenz, M. Hadjisavas, GW Chovanec, FW Bazer,Miyelosupressiyacho'chqada (Sus scrofa): uteroferrin yosh cho'chqalarda 5-florourasilning miyelosupressiv ta'sirini kamaytiradi, Comp. Biokimyo. Fiziol. Fiziol. 116 (1997) 369–377.

[18]
F. Li, Y. Yang, P. Chju, V. Chen, D. Qi, X. Shi va boshqalar.EchinacosideMC3T3-E1 hujayralarida OPG/RANKL nisbatini oshirish orqali suyak yangilanishini rag'batlantiradi, Fitoterapia 83 (2012) 1443–1450.

[19] A. Lindner, D. Santilli, J. Xodjett, C. Nerlinger, 5-fluorourasilning organizmga ta'sirigematopoetikSichqoncha tizimi, Cancer Res. 20 (1960) 497–502.

[20] DB Longley, DP Harkin, PG Johnston, 5-fluorouracil: ta'sir mexanizmlari va klinik strategiyalar, Nat. Rev. Saraton 3 (2003) 330–338.

[21] BR Luce, JW Singer, JM Weschler, CD Buckner, SH Sheingold, K. Shannon-Dorcy, va boshq., Limfoid saraton uchun suyak iligining otolog transplantatsiyasidan so'ng rekombinant inson granulotsit-makrofagi koloniyasini ogohlantiruvchi omil: iqtisodiy tahlil randomizatsiyalangan, ikki marta ko'r, platsebo-nazorat qilingan sinov, PharmacoEconomics 6 (1994) 42-48.

[22] M. Malet-Martino, R. Martino, 5-fluorourasil (kapetsitabin, UFT, S-1) ning uchta og'iz dori vositalarining klinik tadqiqotlari: sharh, Onkolog 7 (2002) 288-323 .

[23] S. Mishima, A. Nagai, S. Abdulla, C. Matsuda, T. Taketani, S. Kumakura va boshqalar, Effective ex vivo expansion ofgematopoetikosteoblast-differentsiatsiyalangan mezenximal ildiz hujayralarini ishlatadigan ildiz hujayralari CXCL12 ga bog'liq, Eur. J. Gematol. 84 (2010) 538–546.

[24] M. Mostafa, N. Nahar, M. Mosihuzzaman, T. Makhmoor, MI Choudhary, AU Rahman, Leucas indica Linn dan erkin radikallarni tozalash feniletanoid glikozidlari, Nat. Prod. Res. 21 (2007) 354–361.

[25] S. Numazava, K. Sugihara, S. Miyake, X. Tomiyama, A. Hida, M. Hatsuno va boshqalar, 5-fluorourasil vositachiligida oksidlovchi stressning mumkin bo'lgan ishtirokimiyelosupressiyasichqonlarda, Basic Clin. Farmakol. Toksikol. 108 (2011) 40–45.

[26] DJ Prockop, ilik stromal hujayralari doimiy yangilanish uchun ildiz hujayralari sifatidagematopoetik bo'lmaganto'qimalar va gen terapiyasi uchun potentsial vektor sifatida, J. Hujayra. Biokimyo. (1998) 284–285.

[27] BD Sloley, LJ Urichuk, C. Tywin, RT Coutts, PK Pang, JJ Shan, solishtirish kimyoviy komponentlar va turli xil Echinacea turlarining antioksidant imkoniyatlari, J. Pharm. Farmakol. 53 (2001) 849–857.

[28] C. Twelves, A. Vong, MP Nowacki, M. Abt, H. Burris III, A. Carrato va boshqalar. III bosqich yo'g'on ichak saratoni uchun yordamchi davolash sifatida Capecitabine, N. Engl. J. Med. 352 (2005) 2696–2704.

[29] M. Valtteri, A. Sorrentino, mezenximal stromal hujayraning gomeostazga hissasi, J. Hujayra. Fiziol. 217 (2008) 296–300.

[30] L. van de Laar, PJ Koffer, AM Woltman, GM-CSF tomonidan dendritik hujayralar rivojlanishini tartibga solish: molekulyar nazorat va immun gomeostaz va terapiya uchun ta'siri, Blood 119 (2012) 3383-3393.

[31] JMBK Worley, M. Bloomsmith, K. Coleman, TL Koban, The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (2011) ning sakkizinchi nashri; xulq-atvorni boshqarish uchun oqibatlari, Am. J. Primatol. 73 (2011) 98.

[32] Y. Vu, L. Li, T. Ven, YQ Li, Himoya effektlariechinacosidekalamushlarda uglerod tetraklorid bilan bog'liq gepatotoksisite haqida, Toksikologiya 232 (2007) 50-56.

[33] SF Xu, LM Yu, ZH Fan, Q. Wu, Y. Yuan, Y. Wei va boshqalar, ginsenoside Rg1 ni yaxshilashgematopoetiksiklofosfamid ta'sirida funktsiyamiyelosupressiyasichqonlar, Evr. J. Farmakol. 695 (2012) 7–12.

[34] Y. Chjan, J. Xing, T. Ai, T. Ven, L. Guan, J. Zhao, himoya qilishechinacosidekalamushlarda oleyk kislotasi sabab o'tkir o'pka shikastlanishiga qarshi, Free Radic. Res. 41 (2007) 798–805.

[35] AB Zhao, B. Yu, XL Wu, KJ Cao, EQ Li, QM Li va boshqalar, himoya ta'sirimiyelosupressiyasichqonlar uch xil klassik xitoy tibbiyoti formulalari, Pharmacogn bilan davolanadi. Mag. 7 (2011) 133–140.

[36] M. Zhu, C. Lu, V. Li, Vaqtinchalik ta'sir qilishechinacosideTrk signalini faollashtirish va neyron hujayralarini rotenondan himoya qilish uchun etarli, J. Neyrochem. 124 (2013) 571–580.