Tanshinone IIA ning RAW264.7 hujayralarida ROS-NLRP3 yallig'lanishga bog'liq bo'lgan LPS tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish reaktsiyasiga ta'siri

Qo'shimcha ma'lumot uchun:emily.li@wecistanche.com

Eng muhimlar

Tan IIA yallig'lanish reaktsiyasini va LPS yoki LPS va ATP tomonidan rag'batlantirilgan NLRP3 ifodasini inhibe qilishi mumkin. ROS inhibitori bo'lgan atsetilsistein (N-asetil-l-sistein, NAC) LPS va NLRP3 darajasining ATP sabab bo'lgan o'sishini inhibe qilishi mumkin. Tan IIA ta'siri ostida yotgan mexanizm ROS-NF-kB/ P38-NLRP3 yo'lini tartibga solishni o'z ichiga olishi mumkin. Ushbu tadqiqot Tan IIA ning molekulyar mexanizmini yanada tavsifladi va uning klinik terapiyasiga yangi fikrlarni taqdim etdi.

Abstrakt

Yangi paydo bo'lgan dalillar, Tanshinone IIA (Tan IIA) kardiyomiyositlarning shikastlanishi, yurak fibroblastlari va aterosklerozning oldini olishini ko'rsatdi. Biroq, Tan lA ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizm hali ham aniq emas. Tan ll A ning yallig'lanish reaktsiyasida ROS-NLRP3 yallig'lanishiga bog'liq bo'lgan rolini o'rganish. LPS bilan rag'batlantirilgan RAW264.7 hujayralari yallig'lanish reaktsiyasining hujayra modelini ishlab chiqarish uchun jalb qilingan. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, NO ishlab chiqarish LPS tomonidan rag'batlantirilgandan keyin sezilarli darajada oshgan. andTan IIA davolash sezilarli darajada NO darajasini kamaydi. NLRP3 ning mRNK ifodasi. IL{6}}B va TNF-a LPS bilan davolash qilingan hujayralar bilan solishtirganda Tan LLA tomonidan sezilarli darajada inhibe qilingan. NLRP3 ning protein ifodasi. IKBa, pp65/p65 va pp38/p38 imzolangan LPS yoki LPS plus ATP rag'batlantirilgan guruhlar bilan solishtirganda Tan IIA tomonidan samarali ravishda kamaydi. Ayni paytda. Tan IA LPS va ATP tomonidan qo'zg'atilgan ROS darajasini sezilarli darajada inhibe qildi. ROS inhibitori bo'lgan NAC ham NLRP3 ning protein ifodasini inhibe qilishi mumkin. Ushbu topilmalarga asoslanib, Tan IIA ta'siri ostida yotgan mexanizm ROS-NF-kB/ P38-NLRP3 yo'lini tartibga solishni o'z ichiga olishi mumkinligini taxmin qilish mumkin. Ushbu tadqiqot Tan IA ning molekulyar mexanizmini yanada tavsifladi va uning klinik terapiyasiga yangi fikrlarni taqdim etdi.

Kalit so'zlar: Tanshinone IIA,Yallig'lanish, NLRP3 yallig'lanishli, ROS

Cistanche mahsulotlarining afzalliklari

Fon

Makrofaglar yurak gomeostazini saqlashda va to'qimalarni tiklashda, shuningdek qayta qurishda muhim rol o'ynaydi. Inyurakmuvaffaqiyatsizlikbemorlarda qon zardobidagi yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ko'payishi klinik natijalarning yomonlashuvining bashorat qiluvchi biomarkerlari bo'lishi kerak vayallig'lanishyurak etishmovchiligining rivojlanishiga hissa qo'shishi mumkin [1]. Garchiyallig'lanishyurak-qon tomir kasalliklarini davolash uchun terapevtik maqsad sifatida paydo bo'ldi, ammo keng immunosupressiya miyokard infarktidan (MI) keyin ham, yurak etishmovchiligida ham klinik natijalarni yaxshilay olmagan ko'rinadi [2,3].

Bir qator klinik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, inhibisyonyallig'lanishyo'l, masalanyallig'lanishsitokin, IL-1, takroriy yurak-qon tomir hodisalarini samarali ravishda kamaytirishi mumkin [4, 5]. Yallig'lanish reaktsiyasining immunomodulyatsiyasi yurak-qon tomir kasalliklari jarayonida muhim diagnostik va terapevtik ahamiyatga ega ekanligini taxmin qilish mumkin.

NLRP3 inflamasomasi barcha turdagi yallig'lanishlar ichida eng ko'p o'rganilgan. NLRP3 yallig'lanishi ko'plab kasalliklarda, masalan, ko'p skleroz (MS), Altsgeymer kasalligi (AD), ateroskleroz, semizlik va 2-toifa qandli diabetda hal qiluvchi rol o'ynashi hujjatlashtirilgan va ko'proq dalillar NLRP3 ekanligini ko'rsatadi. inflammasome ham miyokard ishemiyasi/reperfuzion shikastlanishida (MI/RI) ishtirok etadi [7,8]. NLRP3 faollashuvi mexanizmlari reaktiv kislorod turlarini (ROS) hosil qilish, kaliy oqimi va lizosomal destabilizatsiyadan keyin sitozolga katepsinlarni chiqarishni o'z ichiga olishi mumkin. Hujayralar patogenlar yoki xavf signallari bilan rag'batlantirilganda, NLRP3 faollashtirildi va ASC oqsili adapteri orqali pro-kaspaza-1 jalb qilindi. NLRP3. ASC va pro-kaspaz{13}} NLRP3 yallig'lanishli kompleks birikmasini yaratdi. NLRP3 yallig'lanish ta'siri ostida pro-kaspaz{17}} kaspaza-1 bo'lish uchun faollashdi, natijada IL-1 va IL-18 ajralishiga olib keldi va yallig'lanish reaktsiyalari qatori [9,10].

Tan IIA Danshen (Sahia miltiorrhiza Bge) ning yog'da eriydigan tarkibiy qismi bo'lib, turli biologik xususiyatlarga ega va bir qator biokimyoviy reaktsiyalarda ishtirok etadi. Tan IA borqarshi-yallig'lanish, antioksidantva angiogenez ta'sirini rag'batlantiradi, shuningdek, yurak-serebrovaskulyar tizim kasalliklarini davolash uchun keng tarqalgan [1, 12]. Yangi dalillar shuni ko'rsatdiki, Tan IIA kardiyomiyositlarning shikastlanishi, yurak fibroblastlari, ateroskleroz va boshqalarning oldini oladi.neyro yallig'lanish[13-16]. Biroq, Tan IIA ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizm hali ham aniq emas.

Ishemiya/reperfuzion shikastlanish vaqtida monotsit/makrofag, neytrofillar va endotelial hujayralaryallig'lanishjavob, turli ozod rag'batlantirishyallig'lanishsitokinlar va natijada qon tomirlarining o'tkazuvchanligi, to'qimalarning shishishi va shikastlanishi kuchayadi. Makrofag barcha hujayralar orasida yallig'lanishni tartibga soluvchi muhim hujayra turidiryallig'lanishhujayra turlari va miyokard infarkti jarayonida hal qiluvchi rol o'ynaydi [17]. Shikastlangan miyokardga jalb qilingan monositlar/makrofaglar miyokard shikastlanishini kuchaytiruvchi ROS, yallig'lanish vositachilari va proteazlarni yanada chiqarishi mumkin [18].

Makrofaglar yurak gomeostazini saqlash va to'qimalarni tiklashda muhim rol o'ynashi sababli, biz yallig'lanish reaktsiyasining hujayra modelini ishlab chiqarish uchun LPS bilan rag'batlantirilgan RAW264.7 hujayralarini jalb qildik. Ushbu tadqiqot Tan IIA ning LPS rag'batlantirilgan makrofaglarga ta'siri bor-yo'qligini va Tan ⅡA ning makrofagga ROS-NLRP3 yallig'lanishiga bog'liq bo'lgan ta'siri ostida yotgan mexanizmlarni o'rgandi.

Materiallar va uslublar

Hujayra madaniyati va davolash

RAW264.7 xujayrasi Xitoy Tibbiyot fanlari akademiyasining Hujayra madaniyati markazidan (Pekin, Xitoy) sotib olindi. Hujayralar DMEM muhitida (yuqori glyukoza) ekilgan, 1{11}} foiz homila sigir zardobi (FBS), 100 U/ml penitsillin va 100 ug/ml streptomitsin qo‘shilgan. Hujayralar 5 foiz CO2 bo'lgan to'liq namlangan atmosferada 37 daraja haroratda o'stirildi. Barcha tajribalar uchun hujayralar 80-90 foiz hujayra qoʻshilish darajasida ishlov berildi. Hujayralar 1 ug/ml LPS bilan yoki bo'lmasdan turli vaqtlarda Tan IIA ning turli konsentratsiyasi (10,1 va 0,1 uM da) bilan ishlov berildi. Shu bilan birga, nazorat guruhidagi hujayralar teng hajmdagi 0,1 foiz DMSO bilan ishlov berildi.

NO ishlab chiqarishni o'lchash

NO tahlil to'plami (Beyotime, Xitoy) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq NO ishlab chiqarishni o'lchash uchun ishlatilgan. Qisqacha aytganda, standartlar DMEM plyus 10% FBS bilan suyultirildi va 96-quduq plastinkasining har bir qudug'iga 50 mkl standart yoki hujayra madaniyati supernatant qo'shildi. Keyin plitaning har bir qudug'iga 50uL Griess Reagent I va II pipetlendi va optik zichlik (OD) Varioskan LUX multimode mikroplata o'quvchi tomonidan 540 nm da aniqlandi.

RNK ekstraktsiyasi

RAW264.7 xujayralari 1×106 hujayra/quduq zichligida 10 foizli FBS DMEM bilan oltita quduqli plitalarga qo'yildi. 24 soat o'tgach, vosita olib tashlandi va uning o'rniga sarumsiz, antibiotiksiz DMEM muhiti qo'shildi. RAW264.7 xujayralari DMSO (nazorat), LPS (1 ug/ml) va LPS plus Tan IIA (10,1 va 0,1 uM) bilan 6 soat davomida ishlandi. Keyin NLRP3, IL{ mRNK darajasini aniqlash uchun umumiy RNK ekstraksiya qilindi. {18}} va TNF-. Jami RNK TRIzol reagenti (Ambion) yordamida ekstraksiya qilindi. RNK kontsentratsiyasi Va boʻyicha oʻlchandi ultramikrofloresan spektrofotometr (DeNovix). Teskari transkripsiya uchun HiFiScript cDNK sintezi toʻplami (cwbiotech) ishlatilgan. ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalari.1 ug RNK namunalari teskari transkripsiya qilindi va reaksiya bosqichlari quyidagicha edi: 50 daqiqa davomida 42 daraja C, 5 daqiqa davomida 85 daraja C, keyin esa 4 darajada saqlanadi.

RT-PCR

Ouantitative PCR (OPCR) tahlili UltraSYBR aralashmasi (cwbiotech) yordamida O-PCR asbobi (Lightcycler 96, Roche) bilan o'tkazildi. PCR protokoli 10 daqiqa davomida 95 daraja, keyin 10 soniya uchun 95 darajali 40 tsikl, 30 soniya uchun 56 va 32 soniya uchun 72 tsikl edi. qRT-PCR uchun ishlatiladigan primerlar quyidagicha ko'rsatilgan: GADPH-Forward: 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3';GADPH-Reverse:5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3',NLRP3-Forward: 5'-ATGCTGCTTCGACATCTCCT-3'NLRP3-Teskari:5'-AACCAATGCGAGATCCTGAC-3';IL-1 -O'tkazish:5'-GCCCATCCTGTGACTCAT-3';IL{ {32}}Orqaga:5'-AGGCCACAGGTATTTTGTCG-3':TNF- -Oldinga:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3'TNF-a-Reverse:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3 ! Genni ifodalash darajasi 2-AACt usuli yordamida hisoblangan.

Western bloting

Western blotting quyidagilar bilan o'tkazildiantikorlar: anti-NLRP3 antikor (CST), anti-pp38 antikor (CST), anti-p38 antikor (CST), anti-pp65 antikor (CST), anti-GADPH antikor (oqsil texnologiyasi), anti- -tubulin antikor (oqsil texnologiyasi), anti-HMGB1 antikor (oqsil texnologiyasi), anti-p65 antikor (oqsil texnologiyasi), anti-IKB- antikor (oqsil texnologiyasi). Protein fraktsiyalari ekilgan hujayralar lizatlaridan olingan va oqsil kontsentratsiyasini o'lchash uchun Kengaytirilgan BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Xitoy) ishlatilgan. Proteinlar denatüratsiya qilindi va SDS-PAGE da hal qilindi, so'ngra PVDF membranasiga o'tkazildi. QuickBlockTMBlocking Bufer (Beyotime, Xitoy) bilan 1 soat davomida bloklangandan so'ng, PVDF membranalari bir kechada 4 daraja haroratda asosiy antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. Keyin membranalar Western Wash Buffer (Beyotime, China) bilan uch marta yuvildi va xona haroratida 1 soat davomida HRP konjugatsiyalangan ikkilamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. Ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq oqsillarni aniqlash uchun BeyoECL Plus (Beyotime, Xitoy) to'plami ishlatilgan. Tasvir uchun C-DiGit 3600 (Li-Cor, AQSH) ishlatilgan va diapazonlar Image J Software tomonidan o'lchangan.

ROS to'planishini o'lchash

DCFH-DA probi Reaktiv kislorod turlarini tahlil qilish to'plami (Beyotime, Xitoy) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq RAW264.7 hujayralarida hujayra ichidagi ROS darajasini o'lchash uchun ishlatilgan. Qisqacha aytganda, DCFH-DA sarumsiz DMEM muhiti bilan suyultirildi va yakuniy konsentratsiya 10 mkM / L ga o'rnatildi. 10 mkM DCFH-DA bo'yog'i bilan 30 daqiqa davomida 37 daraja C da inkubatsiya qilingandan so'ng, RAW264.7 hujayralari ortiqcha DCFH-DA ni olib tashlash uchun sarumsiz DMEM muhiti bilan uch marta yuvildi. Ijobiy nazorat qilish uchun hujayralarga lmL Rosup qo'shildi. Floresans miqdori Nikon IX73 teskari mikroskop yordamida aniqlandi. Hujayralarning tasvirlari Image J dasturi yordamida o'lchandi.

Statistik tahlil

Barcha tajribalar kamida uch marta takrorlanadi. Barcha tahlillar uchun SPSS dasturidan foydalanildi, grafik chizma uchun GraphPad Prism 5 bajarildi. Barcha natijalar o'rtacha qiymat ± SD sifatida berilgan. SNK-q testi yordamida guruhlar o'rtasida ma'lumotlarni tahlil qilish va juftlik bilan taqqoslash uchun bir tomonlama ANOVA ishlatilgan. P qiymati< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">

1-rasm. Tan IIA NO ishlab chiqarish, NLRP3, IL-1, TNF-mRNKga tartibga soluvchi ta'sirga ega.

ifoda

A. RAW264.7 Hujayralar YO'Q turli guruhlar ishlab chiqarish. Hujayralar Tan IIA 10µM, 1µM va

{0}}.1µM 30 daqiqa davomida va 24 soat davomida LPS (1 ug/ml) bilan stimulyatsiya qilindi. * P <0,05 va="" ctrl,="" #="" p=""><0,05 va="" lps.="" bd.="" tan="">

TNF-, NLRP3 va IL-1 mRNK ifodasini tartibga soluvchi ta'sirga ega. Hujayralar Tan IIA bilan oldindan ishlov berilgan

Natijalar

RAW264.7 hujayralariga ta'siri Tan IIA davolash YO'Q ishlab chiqarish

NO ikkinchi xabarchi molekulasi hujayradagi fiziologik va patologik jarayonlarda turli funktsiyalarni bajaradi. Makrofaglar tomonidan chiqariladigan NO yallig'lanish, immun va virusga qarshi reaktsiyalarda muhim rol o'ynaydi [19, 20]. Shu sababli, NO LPS ning immun va yallig'lanish reaktsiyalariga ta'sirini baholash uchun ishlatilishi mumkin. Hujayralar 24 soat davomida 1 ug/ml LPS bilan yoki bo'lmasdan Tan IIA ning turli konsentratsiyasi (1 0, 1 va 0,1 mkM da) bilan ishlandi va nazorat guruhidagi hujayralar teng hajmda ishlandi. 0,1 foiz DMSO. 1A-rasmda ko'rsatilgandek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, 24 soat davomida LPS bilan rag'batlantirilgan model guruhida NO ishlab chiqarish sezilarli darajada oshdi (P).<0.05); and="" various="" concentrations="" of="" taniia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" no="" production=""><0.05) of="" the="" cells="" stimulated="" with="">

Tan IIA davolashning NLRP3, IL-1 va TNF-mRNK ifodasiga ta'siri

LPS bilan qo'zg'atilgan RAW264.7 hujayralari yallig'lanish reaktsiyasini faollashtirishi mumkin va uni Tan IIA, shu jumladan NLRP3, IL-1 va TNF-ning mRNK ifodasi bilan yaxshilash mumkin. 1B-D-rasmda ko'rsatilgandek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, LPS bilan stimulyatsiya qilingan model guruhida NLRP3, IL-1 va TNF-ning mRNK ifodasi sezilarli darajada oshdi (P < {{1{{14}="" }}}.05);="" tan="" iia="" davolashning="" turli="" konsentratsiyalari="" (10,="" 1="" va="" 0,1="" mkm="" da)="" lps="" bilan="" qo'zg'atilgan="" hujayralardagi="" nlrp3,="" il-1="" va="" tnf-="" (p=""><0,05) ning="" mrnk="" ifodasini="" sezilarli="" darajada="">

Tan IIA davolashning NLRP3 oqsil ifodasiga ta'siri

ATP, ikkinchi signal molekulasi, NLRP3 yallig'lanishini faollashtirish uchun zarur bo'lgan faollashtiruvchidir. Shunday qilib, ATP NLRP3 ni faollashtirish uchun ishlatilgan [21, 22]. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, LPS va ATP NLRP3 oqsilining ekspressiyasini faollashtirdi va uni Tan IIA tomonidan yaxshilash mumkin. 2-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, LPS plus ATP tomonidan qo'zg'atilgan model guruhida NLRP3 ning protein ifodasi darajasi sezilarli darajada oshdi (P < 0.05);="" va="" taniia="" davolash="" (10mkm="" da)="" lps="" plus="" atp="" bilan="" rag'batlantirilgan="" hujayralardagi="" nlrp3="" (p=""><0,05) ning="" protein="" ifodasini="" sezilarli="" darajada="">

NF-kB va p38 yo'lining LPS tomonidan qo'zg'atilgan faollashuvi Tan IIA tomonidan inhibe qilinishi mumkin.

2-rasmda ko'rsatilgandek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, LPS yoki LPS plus ATP bilan rag'batlantirilgan hujayralarda IKB , pp65/p65 ning protein ifodasi sezilarli darajada oshdi (P < 0.05);="" va="" tan="" iia="" davolash="" (10mkm="" da)="" yuqori="" tartibga="" solishni="" sezilarli="" darajada="" kamaytirdi.="" lps="" plyus="" atp="" bilan="" rag'batlantirilgan="" hujayralarda="" pp38="" p38="" protein="" darajasi="" yuqoriga="" ko'tarildi="" va="" ko'tarilish="" tan="" iia="" (10="" mkm)="" tomonidan="" inhibe="" qilindi="" (2-rasm).="" biroq,="" pp38="" p38="" protein="" darajasi="" lps="" bilan="" qo'zg'atilgan="" hujayralarda="" sezilarli="" darajada="" o'zgarmadi.="" bundan="" tashqari,="" hmgb1="" ning="" protein="" ifodasi="" lps="" yoki="" lps="" va="" atp="" bilan="" induktsiya="" qilingan="" hujayralarda="" ham="" kuchaytirildi,="" ammo="" statistik="" farq="" ko'rsatmadi.="" ushbu="" natijalar="" lps="" yoki="" lps="" plyus="" atp="" tomonidan="" nf-kb="" va="" p38="" yo'lining="" faollashuvini="" tan="" iia="" tomonidan="" inhibe="" qilinishi="" mumkinligini="">

Tan IIA ROSga tartibga soluvchi ta'sir ko'rsatdi

Tan IIA hujayra ichidagi ROSni tozalashi mumkinligini tasdiqlash uchun hujayra ichidagi ROS ishlab chiqarilishi reaktiv kislorod turlarini tahlil qilish to'plamidan foydalangan holda flüoresan mikroskopiya bilan baholandi. RAW264.7 xujayralari 6 soat davomida LPS ta'siriga uchradi va hujayralar yig'ib olinishidan 30 daqiqa oldin 1 mM ATP qo'shildi. ROS-musbat hujayralar yorqin yashil dog'lar sifatida tasvirlangan va LPS plus ATP bilan davolash nazorat guruhidagiga nisbatan hujayra ichidagi ROS darajasini sezilarli darajada oshirgan (3-rasm). Shu bilan birga, Tan IIA bilan davolash LPS va ATP tufayli hujayra ichidagi ROSning sezilarli darajada oshishini inhibe qildi (3-rasm). Ushbu natijalar Tan IIAning antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi.

Shakl 3. Tan IIA ROS ifodasida tartibga soluvchi ta'sirga ega (shkala satri 50 mkm)

Hujayralar Tan IIA 1{6}}mkM bilan 30 daqiqa davomida oldindan ishlov berildi va 5,5 soat davomida LPS (1 ug/mL) bilan stimulyatsiya qilindi. Hujayralar yig'ib olinishidan 30 daqiqa oldin ATP qo'shildi. A. Hujayra ROS ifodasining vakili floresan tasvirlari. B. Uchta alohida tajriba bo'yicha o'rtacha miqdoriy ma'lumotlar. * P <0,05 va="" ctrl,="" #="" p=""><0,05 va="" lps/lps="" plus="">

Shakl 4. NAC NLRP3 ning oqsil ifodasiga tartibga soluvchi ta'sirga ega.

Hujayralar Tan IIA 1{9}}mM bilan 3{11}} daqiqa davomida oldindan ishlov berildi va 5,5 soat davomida LPS (1 ug/mL) /LPS (1 ug/mL) va NAC (1mM) bilan stimulyatsiya qilindi. Hujayralar yig'ib olinishidan 30 daqiqa oldin ATP qo'shildi. A. NLRP3 ning g'arbiy dog'i vakili. B. Uchta alohida tajriba bo'yicha o'rtacha miqdoriy ma'lumotlar. * P <0,05 va="" ctrl,="" #="" p=""><0,05 va="" lps="" plus="">

NAC NLRP3 ga tartibga soluvchi ta'sirga ega edi

ROSni tozalash vositasi bo'lgan atsetilsistein (N-asetil-l-sistein, NAC) NLRP3 ning protein ifodasini inhibe qilishi mumkin. Yuqorida aytib o'tilganidek, 6 soat davomida LPS va ATP bilan rag'batlantirilgandan so'ng, NLRP3 ning protein ifodasi sezilarli darajada oshdi va Tan IIA bilan davolash NLRP3 protein darajasining LPS va ATP tufayli kelib chiqqan o'sishini inhibe qildi. Bundan tashqari, NAC bilan davolash LPS va ATP tufayli NLRP3 protein darajasining sezilarli darajada oshishiga to'sqinlik qilishi mumkin (4-rasm). Ushbu natijalar Tan IIA ning NLRP3 ga tartibga soluvchi ta'siri ROS-NLRP3 yo'liga bog'liq bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

Munozara

Makrofaglar yallig'lanish reaktsiyasi jarayonida ishtirok etadi va miyokard infarkti jarayonida hal qiluvchi rol o'ynaydi. Shikastlangan miyokardga to'plangan monositlar/makrofaglar ROS, yallig'lanish vositachilari va proteazni yanada chiqarishi mumkin, bu esa miyokard shikastlanishini kuchaytiradi [23]. RAW264.7 hujayralari hukmron eksperimental makrofag modeli sifatida qabul qilingan va makrofagga tegishli yallig'lanish signalizatsiya yo'llarini tadqiq qilishda muhim rol o'ynaydi [24]. Makrofaglar yurak gomeostazini saqlashda va to'qimalarni tiklashda, shuningdek qayta qurishda muhim rol o'ynaydi. LPS bilan stimulyatsiya qilingan RAW264.7 hujayralari yallig'lanishga qarshi xususiyatlarga va asosiy mexanizmlarga ega bo'lgan dorilarni o'rganish uchun keng qo'llanilgan [25,26].

NLRP3 yallig'lanishi yallig'lanish reaktsiyalarining muhim vositachisi bo'lib, NLRP3 inflamasomasi yurak kasalliklarida hal qiluvchi rol o'ynashi haqida ko'proq dalillar mavjud. Insonning arterial tomirlarida NLRP3 ning yuqori ifodasi aterosklerotik kasalliklarning xavf omillari va koronar arter kasalligining og'irligi bilan bog'liq edi [27] va NLRP3 yallig'lanish bilan bog'liq genlar darajasi aterosklerotik blyashka bilan bog'liq edi [28]. NLRP3 yallig'lanishining faollashishi yurakning salbiy qayta tuzilishi bilan ham bog'liq. NLRP3 kardiyomiyositlarda ko'ndalang aorta torayishi (TAC) bilan qo'zg'atilgan sichqonlarda yurak faoliyatini qayta qurishning salbiy modelida faollashtirilgan va NLRP3 yallig'lanishining faollashishi pro-kaspaza{11}}ning faol shakliga aylanishiga olib keldi [29]. MCC950.a NLRP3 yallig'lanish inhibitori aterosklerotik ta'sirni inhibe qilishi mumkin, ehtimol monotsitlarning yopishishini inhibe qilish va intraplakka makrofaglar to'planishini kamaytirish [30].

Tan IIA turli biologik xususiyatlarga ega bo'lgan Danshendan olingan asosiy monomerdir. Tan ⅡA borqarshi-yallig'lanish, antioksidantva angiogenez ta'sirini kuchaytiradi va yurak-serebrovaskulyar tizim kasalliklarini davolashda keng qo'llaniladi [11]. Yangi dalillar shuni ko'rsatdiki, Tan A kardiomiotsitlar shikastlanishi, yurak fibroblastlari, ateroskleroz va boshqalarni oldini oladi.neyro yallig'lanish[13-16]. Bizning oldingi tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, Tan IIA TLR{2}}MyD88-NF-KB signalizatsiya yo'lini inhibe qilish va LPS bilan stimulyatsiya qilingan RAW264.7 hujayralarida tegishli miRNK ifodasini sozlash orqali yallig'lanishga qarshi ta'sir ko'rsatdi [31] . Bundan tashqari, Tan IIA yallig'lanishga qarshi M1 fenotipidan yallig'lanishga qarshi M2 fenotipiga [32] makrofaglarning qutblanishini rag'batlantirishi mumkin. Biroq, Tan IIA ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizm hali ham noaniq edi.

Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, LPS bilan rag'batlantirilgan RAW264.7 hujayralarida NO ishlab chiqarish sezilarli darajada oshdi va Tan IIA bilan davolash (10,1 va 0,1 uMda) hujayralarning NO ishlab chiqarishini sezilarli darajada kamaytirdi. LPS bilan qo'zg'atilgan RAW264.7 hujayralari yallig'lanish reaktsiyasining faollashuviga olib kelishi mumkin va uni Tan IIA, shu jumladan NLRP3, IL-1 va TNF- .ATP ning ikkinchi signal molekulasi bo'lgan mRNK ifodasi bilan yaxshilash mumkin. NLRP3 yallig'lanish faollashuvi. Tadqiqotda ATP NLRP3 faollashuvini qo'zg'atish uchun ishlatilgan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, LPS va ATP NLRP3 oqsilining ekspressiyasini faollashtirdi va uni Tan IIA tomonidan yaxshilash mumkin. LPS yoki LPS plus ATP bilan rag'batlantirilgan hujayralarda IKBa, pp65/p65 ning protein ifodasi sezilarli darajada oshdi; va Tan IA davolash (10 mkM da) yuqori tartibga solishni sezilarli darajada kamaytirdi. LPS va ATP bilan rag'batlantirilgan hujayralarda pp38 / p38 protein darajasi ko'tarildi va yuqori tartibga solish Tan IA (10uM) tomonidan inhibe qilindi. Bundan tashqari, HMGB1 ning protein ifodasi LPS yoki LPS va ATP bilan induktsiya qilingan hujayralarda ham kuchaytirildi, ammo statistik farq ko'rsatmadi. Ushbu natijalar LPS yoki LPS plus ATP induktsiyasi bilan NF-kB va p38 yo'lining faollashishi Tan IIA tomonidan inhibe qilinishi mumkinligini ko'rsatdi.

LPS plyus ATP bilan davolash hujayra ichidagi ROS darajasini sezilarli darajada oshirdi va Tan IIA hujayra ichidagi ROSning LPS va ATP sabab bo'lgan o'sishini sezilarli darajada inhibe qildi. Asetilsistein (N-asetil-I-sistein, NAC) ROSni tozalash vositasidir. NAC NLRP3 protein darajasining IPS va ATP tomonidan qo'zg'atilgan o'sishini sezilarli darajada inhibe qilishi mumkin. Ushbu natijalar Tan IIA ning antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini va Tan IIA ning NLRP3 ga tartibga soluvchi ta'siri ROS-NLRP3 yo'liga bog'liq bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

Yakunlab, yakunida; qo'shmoq. Tan IIA yallig'lanish reaktsiyasini va LPS yoki LPS plyus ATP tomonidan rag'batlantirilgan NLRP3 ifodasini inhibe qilishi mumkin va NAC NLRP3 darajasining LPS va ATP sabab bo'lgan o'sishini inhibe qilishi mumkin. Shunday qilib, Tan IIA ta'siri ostida yotgan mexanizm ROS-NF-kB/ P38-NLRP3 yo'lini tartibga solishni o'z ichiga olishi mumkin, deb taxmin qilish mumkin. Ushbu tadqiqot Tan IA ning molekulyar mexanizmini yanada tavsifladi va uning klinik terapiyasiga yangi fikrlarni taqdim etdi.

Ma'lumotnomalar

1 M.DeBerge.SJ. Shah, L. Weilbacher, va boshqalar Ejeksiyon fraktsiyasining qisqargan va saqlanib qolgan yurak etishmovchiligidagi makrofaglar. Trends Mol. Med 2019, 25: 328-340.

2. GH. Gislason, S. Jacobsen, JN Rasmussen, va boshqalar. O'tkir miokard infarktidan keyin selektiv siklooksigenaza-2 inhibitörleri va nonselektiv nonsteroid yallig'lanishga qarshi dorilarni qo'llash bilan bog'liq o'lim yoki reinfarkt xavfi. 2006 yil, 113-tiraj: 2906-2913

3. DM McNamara, R. Holubkov, RCStarling va boshqalar. Yaqinda boshlangan kengaygan kardiyomiyopatiyada tomir ichiga immun globulinning nazorat ostida sinovi. Murojaat 2001, 103:2254-2259.

4. PM Ridker, BMEverett, T.Thuren va boshqalar. Aterosklerotik kasallik uchun kanakinumab bilan yallig'lanishga qarshi terapiya. N Engl J Med 2017,377:1119-1131. PMRidker, JG MacFadyen, T. Thuren va boshqalar.

5. Kanakinumab bilan interleykin{1}}beta inhibisyonining aterosklerozli bemorlarda sodir bo'lgan o'pka saratoniga ta'siri: randomizatsiyalangan, ikki marta ko'r, platsebo-nazorat ostida o'tkazilgan tadqiqot natijalari. Lancet 2017,390:1833-1842. X. Guo, JB Kallavey, JP Ting.

6. ta'sir mexanizmi, kasallikdagi roli va davolash usullari. Nat Med 2015,21:677-687.

7. L.Minutoli.D.Puzzolo, M.Rinaldi va boshqalar. Miyada ROS vositachiligida NLRP3 yallig'lanish faollashuvi. yurak. buyrak, va moyak ishemiyasi/reperfuziya shikastlanishi.Oxid Med Cell Longley 2016.2016:2183026.

8. M.KawaguchiM.TakahashiTHata va boshqalar. Yurak fibroblastlarining yallig'lanish faollashuvi miyokard ishemiyasi/reperfuziya shikastlanishi uchun zarurdir. Murojaat 2011, 123:594-604. G. Trendelenburg. Hujayra taqdirini molekulyar tartibga solish

9. miya ishemiyasida: yallig'lanish va bog'langan yo'llarning roli. J Cereb Blood Flow Metab 2014,34:1857-1867.

10.C. Jin, RAFlavell. NLRP3 inflamasoma faollashuvining molekulyar mexanizmi. J Clin Immunol 2010,30:628-631.

11.Y. Cai. W, Zhang, Z.Chen va boshqalar. Tanshinonlarning biologik faolligi va dori vositalarini etkazib berish tizimlari haqida so'nggi ma'lumotlar. Int J Nanomedicine 2016,11:121-130.

12. M.Akaberiy, M.Eronshohiy, S. Mehriy. Neyrofarmakologiya va kardiologiyada salvia turlari diterpenlarning biologik ta'siri ortidagi molekulyar signalizatsiya yo'llari. Phytother Res2016.30:878-893.

13. D. Vang, Y.Liu, G.Zhong va boshqalar. Tanshinon IIA va astragalosid IV ning gipoksiyadan kelib chiqqan kardiyomiyositlarning shikastlanishini susaytirishda muvofiqligi. Etnofarmakol 2017,204:67-76.

14. V. Chen, X.Li, S.Guo va boshqalar.Tanshinone IIA aterosklerozni susaytirish uchun miR-375/KLF4 yo'li orqali makrofaglarda avtofagiya va polarizatsiya o'zaro bog'liqligini uyg'unlashtiradi. Int Immunopharmacol 2019,70:486-497.

15. YT Tsai, SHLoh, CY Lee va boshqalar. Tanshinon A yurak fibroblastlarida eritroid yadro omili 2-bog'liq bo'lgan 2 omil orqali yuqori glyukoza-induktsiyali kollagen sintezini inhibe qiladi. Cell Physiol Biochem 2018,51:2250 2261.

16.N. Huang, Y.Li, Y. Zhou va boshqalar. Tanshinon IA-inkubatsiyalangan mezenxima hujayralarining neyroprotektiv ta'siri Abeta{2}}neyroinflammation on 5C induced.Behav Brain Res 2019,365:48-55.

17.T. Xaydt. G Courtesies, P Dutta va boshqalar. Stabil holatda va miyokard infarktidan keyin yurak makrofaglariga monotsitlarning differensial hissasi. Circ Res 2014,115:284-295.

18. S. Steffens, F. Montecucco, F. Mach. Yallig'lanish reaktsiyasi miyokard ishemiyasini va reperfuzion shikastlanishni kamaytirishga qaratilgan. Thromb Haemost 2019,102:240-247.

19.J. MacMicking, OW Xie. C. Natan Azot oksidi va makrofag funktsiyasi Annu Rev Immunol 1997,15: 323-350.

20.SHHH. W, WU NO at Work.Cell 1994.78: 919-925.

21. L. Franchi, T. Eigenbrod, R. Munoz-Planllo, va boshqalar Yallig'lanish: immun javoblari va kasallik patogenezini tartibga soluvchi kaspaza{2}}faollashtirish platformasi. Nat Immunol 2009,10:241-247.

22. X. Dong Z. Zheng, P. Lin va boshqalar ACPA'lar NLRP3 yallig'lanishini faollashtirish orqali revmatoid artritda IL{1}}beta ishlab chiqarishni rag'batlantiradi. Cell Mol Immunol 2019.

23. PJ. Myurrey, TA Wynn. Makrofaglar to'plamining himoya va patogen funktsiyalari. Nat Rev Immunol 2011,11:723-737.

24. G Pascual, AL Fong, S.Ogawa va boshqalar. SUMOilatsiyaga bog'liq yo'l PPAR-gamma tomonidan yallig'lanish reaktsiyasi genlarining transrepressiyasiga vositachilik qiladi. Tabiat 2005,437:759-763.

25.X. Zhang G.Vang, ECGurley va boshqalar. Flavonoid apigenin makrofaglarda ko'p mexanizmlar orqali lipopolisaxarid tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish reaktsiyasini inhibe qiladi. PLoS One 2014,9:e107072.

26. Z. Yuan, MA Syed, D.Panchal va boshqalar. Curcumin vositachiligidagi epigenetik modulyatsiya lipopolisakkaridga javoban TREM{1}} ifodasini inhibe qiladi. Int J Biochem Cell Biol 2012,44:2032-2043.

27.F.Zheng.S, Xing. Zhong va boshqalar NLRP3 yallig'lanishi aterosklerozli bemorlarning aortasida yuqori ifodani ko'rsatadi. Yurak o'pkasi 2013 yil, 22:746-750.

28. G Paramel Varghese, L. Folkersen, RJ Strawbridge va boshqalar. Inson aterosklerozida NLRP3 yallig'lanish ifodasi va faollashuvi. J Am Heart Assoc 2015,5.

29.T. Suetomi, A. Willeford, CSBrand, ar al Yallig'lanish va NLRP3 yallig'lanish faollashuvi kardiyomiyositlarda Ca(2 plyus)/kalmodulinga bog'liq bo'lgan protein kinaz II delta signali tomonidan bosimning haddan tashqari yuklanishiga javoban boshlangan yurak faoliyatini salbiy qayta qurish uchun zarurdir. Murojaat 2018, 138:2530-2544.

30. T. van der Heijden, E. Kritikou, V. Venema va boshqalar. MCC950 tomonidan NLRP3 yallig'lanish inhibisyonu apolipoprotein E-tanqisligi bo'lgan sichqonlar haqida qisqacha hisobotda aterosklerotik lezyon rivojlanishini kamaytiradi. Arterioskler Thromb Vasc Biol 2017,37:1457-1461.

31. G Fan.X. Jiang. X. Wu, e1 al. MiRNK va TLR4-NF-kappaB yo'li orqali LPS-stimulyatsiya qilingan RAW264.7 makrofaglarida tanshinon IIA ning yallig'lanishga qarshi faolligi. Yallig'lanish 2016,39: 375-384.

32. S. Gao, Y. Vang, D. Li va boshqalar. Tanshinone IIA yallig'lanish reaktsiyasini engillashtiradi va lipopolisakkaridlar bilan stimulyatsiya qilingan RAW264.7 hujayralarida makrofag polarizatsiyasini yo'naltiradi. Yallig'lanish 2019, 42: 264-275.