Miya ishemiyasi-reperfuziyasi bo'lgan kalamushlarda Cistanche Deserticola umumiy glikozidlarining oksidlovchi stress shikastlanishi va hujayra apoptoziga ta'siri Ⅰ

Abstmuomala

Maqsad: ta'siri va mumkin bo'lgan mexanizmlarini o'rganishCistanche deserticola umumiy glikozidlari(GCs) miya kasalliklari bo'lgan kalamushlarda oksidlovchi stress shikastlanishi va asab hujayralari apoptozi bo'yichaishemiya reperfuzion shikastlanishi(CIRI).

Usullari: O'rta miya arteriyasi okklyuziyasi (MCAO) modeli kalamushlarda tikuv embolizatsiyasi usuli yordamida qurilgan. Model muvaffaqiyatli o'rnatilgandan so'ng, dori guruhidagi (GC) kalamushlarga 14 kun ketma-ket gavaj orqali 50 mg / (kg · d) GC berildi; soxta operatsiya guruhidagi (Sham) va model guruhidagi (Model) kalamushlarga bir xil hajmdagi oddiy sho'r suv berildi. Og'iz orqali yuborish. Ma'muriyatdan so'ng, nevrologik etishmovchilikni baholash uchun Longa ball usuli ishlatilgan; keyin kalamushlar qurbon qilindi va miya infarkti maydoni foizini hisoblash uchun TTC binoni amalga oshirildi; Sarumni aniqlash uchun Elishay usuli qo'llaniladimalondialdegid(MDA) tarkibi,superoksid dismutaza(SOD) vaGlutation peroksidaza (GSH-Px)faoliyat; Miya to'qimalarida yadro omili E2-bog'liq 2 (Nrf2), gem oksigenaz-1 (HO-1) va B ni aniqlash uchun Western blotHujayrali limfoma/leykemiya-2 (Bcl-2), Bcl-2-bog'langan X oqsili (Bax) va kaspaza-3 (Kaspaza-3) ifodasi.

Natijalar: Sham guruhi bilan solishtirganda, Model guruhida nevrologik tanqislik ko'rsatkichi ko'tarildi, miya infarkti hududi ulushi oshdi,MDA tarkibining ko'payishi, SOD va GSH-Px faolligining pasayishi va Nrf 2, HO -1 va Bc l-2 protein ifodasi darajasining pasayishi Bax va Kaspaza-3 oqsillarini ifodalash darajasi oshdi; Model guruhi bilan solishtirganda, GK guruhidagi kalamushlarning nevrologik tanqisligi ko'rsatkichi kamaydi, miya infarkti zonasi ulushi kamaydi,MDA tarkibi kamaydi, SOD va GS H-Px faolligi oshadi, Nrf 2, H2O -1 va Bcl - 2 oqsillarni ifodalash darajalari oshdi va Bax va Kaspaza - 3 oqsillarini ifodalash darajalari kamaydi. Xulosa: GCs miya yarim ishemiya-reperfuzion shikastlanishini samarali ravishda kamaytirishi mumkin va uning mexanizmi Nrf 2 / HO - 1 yo'lini faollashtirish bilan bog'liq bo'lishi mumkin, shu bilan oksidlovchi stress darajasini pasaytiradi va asab hujayralari apoptozini inhibe qiladi.

[Kalit so'zlar]Cistanche deserticola umumiy glikozidlari; miya ishemiyasi - reperfuziya shikastlanishi; oksidlovchi stress; hujayra apoptozi

TABIY ORGANIK CISTACHE EKSTRAKTI

Batafsil ma'lumot olish uchun bosing

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik sistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Miya ishemiyasi - reperfuziya,

MDH o'ta og'ir kasallikdiryuqori kasallanish, nogironlikvao'lim ko'rsatkichlari. Miya hujayralari ishemiya va gipoksiyaga juda sezgir, shuning uchun miya qon tomirlarini imkon qadar tezroq qayta kanalizatsiya qilish o'tkir ishemik insult bilan kurashishning eng samarali usuli hisoblanadi. Hozirgi vaqtda tomir ichiga tromboliz va mexanik trombektomiya keng qo'llaniladigan usullardir, ammo ularning nisbatan

Tor vaqt oynasi va boshqa nazorat qilinmaydigan omillar tufayli, faqat<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Miya ishemiyasining reperfuziyasi, CIRI - stenozdan miya qon tomirlarini tiklashning bir turi bo'lib, qon oqimi paytida yuzaga keladigan qo'shilgan patologik zarar. Hozirgi vaqtda uning patologik mexanizmi qo'zg'atuvchi aminokislotalar toksikligi, kaltsiyning haddan tashqari yuklanishi, yallig'lanish omillarining chiqarilishi va mitoxondriyal shikastlanish natijasida kelib chiqadigan erkin kislorodli radikallarning to'planishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, deb ishoniladi [1], natijada qon-miya to'sig'ini yo'q qilishga, mikrosirkulyatsiya buzilishiga olib keladi. , nerv hujayralari apoptozi va nekrozi [1] 2] va bir qator reaktsiyalar, shu bilan nevrologik nuqsonlarni yanada kuchaytiradi.

Cistanche deserticola umumiy glikozidlari (sistanche glikozidlari, GCs) an'anaviy xitoy tibbiyoti Herba Cistanche dan olingan Asosiy faol moddasi dyuymlarning poyalari va ildizlaridan olinadi). Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, GC lipid peroksidatsiyasini samarali ravishda inhibe qilishi, mitoxondriyal funktsiyani yaxshilash, ortiqcha kislorodli erkin radikallarni tozalash, yallig'lanish sitokinlarining chiqarilishini inhibe qilish, sitotoksisiteni kamaytirish, trombotsitlarga qarshi agregatsiyani kamaytirish, hujayra proliferatsiyasini inhibe qilish, neyronal apoptozni inhibe qilish va Reduce gormoni darajasini, Shunday qilib, qarishga qarshi, o'smaga qarshi, depressiyaga qarshi, immunitetni oshirish, ishemik yurak-qon tomir va serebrovaskulyar kasalliklarni yaxshilash, o'rganish va xotira qobiliyatlarini va kognitiv funktsiyalarni yaxshilash va ko'payishni yaxshilash [3].

Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, GC hujayralarga oksidlovchi zararni kamaytirishi va qon-miya to'sig'ining yaxlitligini saqlab turishi mumkin.

[4]; GKlar hujayra hayotiyligini samarali ravishda yaxshilashi va ishemiya-reperfuziyadan keyin kelib chiqqan yallig'lanish va apoptozni bloklashi mumkin [5]; Nrf 2 yallig'lanishga qarshi va antioksidant jarayonlarda muhim rol o'ynaydi [6]. Yuqoridagi ma'lumotlarga asoslanib, ushbu maqola CIRI modelini takrorlash orqali CIRIdan keyin oksidlovchi stress va apoptozga GClarning ta'siri va mumkin bo'lgan yo'llarini o'rganishga qaratilgan.

1 Materiallar va usullar

1. 1 Dori va reagentlar GC (SN-5692, tozaligi 98%, Gʻarbiy

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% trifeniltetrazolium xlorid (TTC) bo'yoq eritmasi (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), ELISA to'plami (Beijing Boosen Co., Ltd.), BCA oqsil miqdorini tahlil qilish to'plami (USA Cell Signaling) Technology Company), quyonlarga qarshi sichqonchaga qarshi antikor Bcl-2, Bax, e-3, Nrf 2, HO-1 kabi Kaspas antikorlari va echkilarga qarshi quyonlarga qarshi ikkilamchi antikorlar hammasidan sotib olingan. Amerika Qo'shma Shtatlarining Proteintech kompaniyasi.

1. 2 ta asbob

Santrifüj (Model: TDL-40B, Shanxay Anheng ilmiy asboblar fabrikasi), mikroplastinka o'quvchi (Model: Max-M5, American Molecular Devices Company), SDS-PAGE elektroforez asbobi (model: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. kompaniyasi), gel skaneri (Model: 4466611, AQSh BIO-RAD kompaniyasi).

1. 3 ta hayvon

Erkak Wistar kalamushlar [SCXK (Pekin) 2019-0010], toza sinf, 8 haftalik, tana vazni 250-280 g.

1. 3 ta usul

1. 3. 1 Guruhlash va modellashtirish

Kalamushlar oddiy randomizatsiya usuli yordamida sham guruhiga (Sham), model guruhiga (Model) va dori guruhiga (GCs) bo'lingan. Har bir guruhda 15 ta kalamush bor edi. Ular 1 hafta davomida moslashtirilgan tarzda tarbiyalangan va keyin modellashtirilgan. Operatsiyadan 12 soat oldin qat'iy ro'za tutish va ro'za tutish, Model guruhi va GCs guruhi o'rta miya arteriyasi okklyuziyasini (o'rta miya arteriyasi tiqilishi) yaratish uchun tikuv embolizatsiya usulini qo'llagan [7]. okklyuzion, MCAO) kalamush modeli, emboliyani olib tashlash 2 soatlik ishemiyadan so'ng reperfuziyaga erishish uchun amalga oshirildi. , reperfuziyaning boshlanish vaqtini yozib oling. Yara tikilgan, teri yodofor bilan dezinfektsiya qilingan va hayvonlar qafasga qaytarilgan va boqilgan, so'ngra 24 soat davomida perfuziya qilingan. Sham guruhidagi kalamushlar uchun operatsiya namunali kalamushlar bilan bir xil edi, lekin hech qanday tiqinlar bajarilmadi. Nihoyat, har bir guruhdagi 10 ta kalamush keyingi tajribalar uchun qoldirildi.

1. 3. 2. Boshqaruv usuli

GCs kukunini oling va 15 mg / ml eritma tayyorlash uchun toza suv qo'shing. Dastlabki tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, 50 mg/(kg·d) dozasi boshqa doza guruhlariga qaraganda yaxshiroq [8], shuning uchun bu tajriba uchun tanlangan doza avvalgidek bo'ladi. GK guruhidagi kalamushlarga 24 soatlik ishemiya va reperfüzyondan so'ng gavaj orqali GC berildi, Sham guruhi va Model guruhidagi kalamushlarga esa 14 kun davomida gavaj orqali teng hajmda oddiy sho'r suv berildi.

1. 3. 3 Nevrologik defitsit balli

Jarrohlikdan keyin 24 soat o'tgach, Longa baholash usuli [7] qo'llanilgan va 1 dan 3 gacha ball olgan model kalamushlar keyingi tajribalar uchun saqlanib qolgan. Oxirgi dozadan keyin ball. 0 ball: Yoʻq

Nevrologik belgilar; 1 ball: engil nevrologik nuqson, dumni ko'targanda qarama-qarshi old oyoq egilib, ko'tariladi va elka qo'shiladi; 2 ball: o'rtacha nevrologik nuqson, dumni ko'targanda qarama-qarshi old oyoq bukiladi va ko'tariladi , elkaning qo'shilishi, yurish paytida jarohatning qarama-qarshi tomoniga aylana bo'ylab burilish; 3 ball: og'ir nevrologik nuqson, yurish paytida lezyonning qarama-qarshi tomoniga suyanish; 4 ball: ongsiz va avtonom faoliyat.

1. 3. 4 Miya infarkti hududining foizini aniqlash

Oxirgi administratsiyadan so'ng, har bir guruhdan 4 ta kalamush tasodifiy tanlab olindi, chuqur anesteziya qilindi, boshi kesildi va ularning miyalari tezda olib tashlandi.

Miya to'qimasini -20 darajali muzlatgichda 20 daqiqa davomida tezda muzlatib qo'ying. Miya to'qimasi nisbatan mustahkamlangandan so'ng, uni olib tashlang. Miyaning oldingi qutbining kesishmasidan optik chiazmagacha va peshonadan oksiputgacha, kalamush miyasini koronal tekislik bo'ylab kesib tashlang. Qalinligi 2 mm bo'lgan 5 ta miya tilimga kesib oling, ularni 2% TTC eritmasiga botiring, 15 daqiqa davomida bo'yash uchun 37 daraja suv hammomiga qo'ying, ularni aylantiring va yana 15 daqiqa davomida bo'yab qo'ying. Nihoyat, miya bo'laklari 4% paraformaldegid eritmasiga botirildi va suratga olishdan oldin 12 soat davomida mahkamlandi. Oddiy miya to'qimalari qizil rangda ko'rsatilgan va infarktli miya to'qimalari oq rangda ko'rsatilgan. Har bir miya bo'lagining infarkt tezligini tahlil qilish va hisoblash uchun tasvirlar dasturidan foydalaning. Infarkt darajasi=infarkt maydoni/miya boʻlagining umumiy maydoni × 100%.

1. 3. 5 Oksidlanish kuchlanishiga bog'liq ko'rsatkichlarni aniqlash

Sichqonchani behushlik qiling, 4 ml qorin aortasi qonini oling, uni toza EP trubkalariga ajrating va 0 uchun 4 darajali muzlatgichga qo'ying. 3 500 r/min 5 soat davomida 4 daraja 15 daqiqa davomida santrifüj qiling, supernatantni oling va nihoyat har bir guruhda 3 ta kalamushning sarumini saqlang. Malondialdegid (MDA) va superoksid dismutaza (superoksid dismutaza) tarkibi Elishay to'plamining ishlash usuliga muvofiq aniqlandi. e dismutaz,

SOD), glutation peroksidaza (glutation peroksidaza, GSH-Px) faolligi.

1. 3. 6 Western blot aniqlash

Miya to'qimalarida Nrf 2, H2O -1, Bcl -2, Bax va Kaspaza -3 oqsillarining ifodasini o'lchash uchun oksidlovchi stress va apoptoz bilan bog'liq oqsillar o'lchandi. Har bir guruhdan uchta kalamush tanlab olindi va kasallangan hududdan miya yarim korteksining tegishli miqdori olindi, unga lizis eritmasi qo'shildi va oqsil kontsentratsiyasi protein ekstraktsiyasidan keyin hisoblab chiqildi. Proteinli gel elektroforezdan so'ng, membranaga o'tkazing, 2 soat davomida blokirovka qiluvchi eritma bilan to'sib qo'ying, yuving va keyin bir kechada 4 daraja haroratda birlamchi antikor bilan inkubatsiya qiling, ertasi kuni TBST olib tashlandi, yuvildi va 2 inkubatsiya uchun ikkilamchi antikor qo'shildi. h. Kulrang qiymatni tahlil qilish uchun maqsadli bandni tasvir analizatoriga joylashtiring. Nisbiy chiziqli kulrang qiymatni, nisbiy chiziqli kulrang qiymatini=maqsadli chiziqli kulrang qiymatni / ichki mos yozuvlar tasmasining kulrang qiymatini hisoblang.

1. 4 Statistik tahlil usullari

Ma'lumotlar ilovasi SPSS 25. 0 ma'lumotlarni tahlil qilish uchun dasturiy ta'minot va ushbu maqoladagi statistik grafiklar GraphPad Prism 8 dasturi yordamida chizilgan. Oddiy taqsimotga mos keladigan ma'lumotlar natijalari o'rtacha ± standart og'ish sifatida ifodalanadi. Bir faktorli dispersiya tahlili bir nechta namunalar orasidagi taqqoslash uchun ishlatilgan va LSD-t ikkita mustaqil namuna o'rtasidagi taqqoslash uchun ishlatilgan. Sinov, P < 0 bilan. 05 farq statistik ahamiyatga ega ekanligini ko'rsatadi.