Cistanche Deserticolaning turli ekstrakt qismlarining Db / Db qora sichqonlarning gipoglikemik ta'siriga ta'siri Ⅱ

2 Eksperimental usullar

2.1 Cistanche deserticola qayta ishlangan mahsulotlarini tayyorlash:

Cistanche deserticola dorivor materiallarini oling, kirlarni yuving, qozonda normal bosimda 2 soat davomida bug'lang, 6 mm kesib oling va 70 darajada quriting. Cistanche deserticola: Cistanche deserticola qaynatma bo'laklarini oling, mos miqdorda guruch sharobini qo'shing, yaxshilab aralashtiring, 8 soat davomida namlang (sariq guruch sharob: suv=1:1), yuqori bosim ostida 4 soat bug'lang va quriting. 70 daraja. (Har 100 g Cistanche deserticola uchun 30 ml guruch sharobidan foydalaning).

TABIY ORGANIK CISTACHE EKSTRAKTI

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp% 2fTel:+86 15292862950}

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://www.xjcistanche.com% 2fcistanche-shop

2.2 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning turli qazib olingan qismlarini boyitish

30 g Cistanche deserticola/Tamarococcus deserticola kukunini oling, ekstraksiya uchun 10 barobar miqdorda suv qo'shing, qizdiring va har safar 2 soat davomida ikki marta, har safar 2 soat, ekstraktlarni birlashtiring, konsentratsiya qiling, spirt miqdori 60% ga etguncha etanol qo'shing, cho'ktiring. 12 soat davomida past haroratda, so'rg'ich bilan filtrlang. , cho'kma xom polisaxarid qismidir. Supernatantni tegishli konsentratsiyaga konsentratsiyalang, uni D101 so'l gözenekli adsorbsion qatronga qo'llang va uni ketma-ket ravishda turli konsentratsiyali suv va etanol bilan eluting. Suv eluatini to'plang va kamaytirilgan bosim ostida quyuq xamirga kontsentratsiya qiling, bu umumiy oligosakkarid fraktsiyasi; 40% etanol bilan yuving. Cistanche deserticolaning umumiy glikozid fraktsiyasi bo'lgan past bosim ostida suyultiriladi, konsentratsiyalanadi va quritiladi.

2.3 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning turli qazib olingan qismlari tarkibini aniqlash

2.3.1 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning umumiy polisaxarid miqdorini aniqlash.

Glyukoza namunasini torting 20. 0 hosil qilish uchun 5{13}} ml hajmli kolbaga 00 mg. 4 mg·mL-1 standart glyukoza eritmasi uchun 50 ml hajmli o‘lchov kolbasiga mos ravishda 3, 4, 5, 6 va 7 ml pipetka soling, suv bilan hajmgacha suyultiring va 2,0 ml. har bir konsentratsiyali glyukoza eritmasini probirkaga soling. Bo'sh nazorat sifatida yana bir xil miqdordagi distillangan suvni oling, har bir kolbaga 1 ml 5% fenol qo'shing, yaxshilab silkiting, tezda 5 ml konsentrlangan sulfat kislota qo'shing, 10 daqiqaga qoldiring, 40 graduslik suv hammomiga qo'ying. 15 daqiqa, uni chiqarib oling, xona haroratiga tez sovuting va 490 nm da absorbans qiymatini o'lchang, absorbansni (A) ordinata sifatida va glyukoza kontsentratsiyasini (C) abscissa sifatida oling, standart egri chizing va regressiya tenglamasi Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6). Xom ashyo va mahsulotlarning jami polisaxarid kukunining 1,0 g miqdorini aniq torting, ularni mos ravishda 50 ml hajmli o'lchov kolbalariga soling, eritish uchun suv qo'shing va hajmini belgiga moslang, probirkaga 2,0 ml aniq torting va xuddi shunday o'lchang. standart egri chiziq tayyorlash usuli sifatida. , bo'ldi shu.

2.3.2 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola tarkibida betain miqdorini aniqlash

2.3.2.1 Etalon eritmani tayyorlash:

1,17 mg betain etalon eritmasidan aniq torting, uni 5 ml hajmli o'lchov kolbasiga soling, eritish uchun 50% metanol qo'shing va hajmgacha suyultiring va u tayyor.

2.3. 2. 2 Xromatografik sharoitlar

Xromatografik ustun Ecosil {0}}AMINO xromatografik ustun (4,6 mm×250 mm, 5 mkm), harakatlanuvchi faza: asetonitril-suv (99,5 ∶ 0,5) , ustun harorati: 30 daraja, aniqlash to‘lqin uzunligi: 194 nm, oqim tezligi: 0,6 mL·min-1, inyeksiya hajmi 10 mkL, xromatogramma 1-rasmda ko‘rsatilgan. 2.3.2.3 Sinov eritmasini tayyorlash. 5 ml hajmli o'lchov kolbasiga solingan, mos ravishda 1,0 g xom va tayyor mahsulotlarning umumiy oligosakkarid fraktsiyasining kukunini torting, eritish uchun distillangan suv qo'shing va hajmgacha suyultiring, yaxshilab chayqatiladi, 0,45 mkl mikrog'ovak filtrli membranadan o'tadi va tayyor bo'ladi.

2.3.2.4 Namuna tarkibini aniqlash

Xom va tayyorlangan Cistanche deserticoladagi jami oligosakkarid sinov eritmasini aniq so'rib oling, uni "2.3.2.2" ostidagi shartlarga muvofiq o'lchang va namunadagi betain miqdorini hisoblang.

2.3.3 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola tarkibida echinakozid, verbaskozid va heterotsimisifugarin miqdorini aniqlash

2.3.3.1 Etalon eritma tayyorlash

4,50 mg echinakozid, 4,80 mg verbaskozid va 5,05 mg geterologik komitsinni 5 ml hajmli o'lchov kolbalariga aniq torting, eritish uchun 50% metanol qo'shing va belgigacha suyultiring va har bir nazoratni oling. flakonga 400 mL 50% metanol qo'shing va aralash moslama eritmasini tayyorlash uchun yaxshilab aralashtiramiz, yaxshilab chayqating va u tayyor.

2.3.3.2 Xromatografik sharoitlar

Xromatografik ustun - Ecosil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 mkm), metanol - mobil faza, 0, 1% chumoli kislotasi - mobil faza B, gradient elyusiyasi, {{ 12}}~45 min, 30% A→ 70% A, oqim tezligi 1,0mL·min-1, ustun harorati 30 daraja, aniqlash to‘lqin uzunligi 330 nm, inyeksiya hajmi 10 mkl va xromatogramma 2-rasmda ko'rsatilgan.

2.3.3.3 Sinov eritmasini tayyorlash

Xom ashyo va mahsulotlarning umumiy glikozid kukunining 1,0 g miqdorini aniq torting, ularni 100 ml hajmli o‘lchov kolbalariga soling, eritish uchun 50% metanol qo‘shing va hajmini belgiga moslang va silkiting. yaxshi. Har bir namunadan 5 ml dan 10 ml hajmli o'lchov kolbasiga aniq torting, hajmni to'ldirish uchun 50% metanol qo'shing, yaxshilab silkiting va 0,45 mkm mikrog'ovak filtrli membranadan o'tkazing.

2.3.3.4 Namuna tarkibini aniqlash

Cistanche deserticola umumiy glikozidlari namunasini aniq chizib oling va uni "2.3.3.2" ostidagi shartlarga muvofiq o'lchang. Namunadagi echinacoside, verbascoside va geterologous complicit tarkibini hisoblang.

2.4 Hayvonlarni guruhlash, modellashtirish va dori vositalarini qo‘llash

Hayvonlar xonasida 12 soat yorug'lik va 12 soat qorong'ilik, nisbiy namlik 50% dan 70% gacha, xona harorati 18 dan 22 darajagacha. db/db qora sichqonlar va db/m qora sichqonlar (oddiy nazorat guruhi) odatdagi ozuqa bilan oziqlangan va tajriba 9 haftalikdan boshlangan. Oddiy nazorat guruhidan tashqari, qolgan db / db qora sichqonlar qon shakar darajasi va tana vazniga qarab tasodifiy tanlangan. 8 ta guruhga boʻlingan, yaʼni namunaviy guruh, musbat nazorat guruhi, Cistanche deserticola jami polisaxaridlar guruhi, Cistanche deserticola umumiy oligosakkaridlar guruhi, Cistanche deserticola umumiy glyukozidlar guruhi, Tarthouse deserticola umumiy polisaxaridlar guruhi, Tarthouse deserticola jami oligosakkaridlar guruhi, Tarthouse deserticola umumiy oligosakkaridlar guruhi. Oddiy nazoratdan tashqari

Model guruhi va model guruhidan tashqari, boshqa guruhlardagi kalamushlarga ketma-ket 4 hafta davomida 2 ml / 100 g dozada intragastral yuborish amalga oshirildi. Suyuqlikning konsentratsiyasi 4,1 g·kg-1 edi. Oddiy nazorat guruhi va model guruhiga xuddi shunday munosabatda bo'lishdi. Oshqozonga ma'lum miqdorda oddiy sho'r suv bering.

2.5 Cistanche deserticolaning turli ekstrakt qismlarining qora sichqonlarning qon glyukoza darajasiga ta'siri db/db

2.5.1 Og'iz orqali glyukoza bardoshlik testi (OGTT).

26 kunlik administratsiyadan so'ng ular 12 soat ro'za tutishdi va ertasi kuni qabul qilinganidan keyin 6{4}} daqiqadan so'ng har bir guruhdagi qora sichqonlarga 2.0 g·kg-1 glyukoza berildi. mos ravishda 0, {{10}}.5, 1.0 va 2. .0 Qon glyukoza qiymatini o'lchash uchun dum venadan qon olindi. Qon glyukoza qiymatini ordinata va vaqt abscissa sifatida hisobga olgan holda, qon glyukoza o'zgarishi jadvali tuzildi va har bir eksperimental guruhning qon glyukoza egri chizig'i ostidagi maydon (AUC, hmmoL·L{) formula bo'yicha hisoblab chiqildi. {13}}) [19]. AUC=A × {{20}}.25 + B × 0.50 + C × 0.75 + D. Formulada: A, B, C va D mos ravishda 0, 0,5, 1,0 va 2,0 soatlarda qondagi glyukoza qiymatlari.

2.5.2 Insulin qarshiligi indeksini va arterioskleroz indeksini hisoblash

Insulin qarshiligi indeksi adabiyot usuli bo'yicha hisoblab chiqilgan [20]: HOMA-IR=glyukoza × insulin / 22. 5. HOMA - =20 × insulin / (glyukoza - 3,5) × 100%. IQ - insulin qarshiligi va (%) - hujayra funktsiyasi. Glyukozaning molyar birligi mmol·L-1

. Insulin mU·L-1 da beriladi. Ro'za paytida glyukoza va insulin miqdori o'lchanadi. Arterioskleroz indeksi (Aterogen indeks) Zheng va boshqalar tomonidan tasvirlangan usul bo'yicha hisoblab chiqilgan. [21]. Hisoblash usuli: Aterogen i indeks=(TC-HDL-C) / HDL-C.

2.5.3 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning turli ekstraksiyalangan qismlarining db/db qora sichqonlarning zardobi INS va HbA1c ga ta'siri

Muzlatilgan sarum namunalarini oling va ularni INS va HbA1c fermenti bilan bog'langan immunoassay to'plamlari bilan tekshirish uchun ishlatishdan oldin ularni xona haroratiga keltiring. To'plamdagi ko'rsatmalardagi usullar va qadamlarga qat'iy rioya qiling.

2.6 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning turli ekstraksiya qismlarining db/db qora sichqonlarning jigar oksidlovchi stress darajasiga ta'siri.

Muzlatilgan sarum namunalarini oling va MDA va SOD fermenti bilan bog'langan immunoassay to'plamlari bilan tekshirish uchun ishlatishdan oldin ularni xona haroratiga keltiring. To'plamdagi ko'rsatmalardagi usullar va qadamlarga qat'iy rioya qiling.

2.7 Cistanche deserticola/Cistanche deserticola ning turli ekstraksiya qilingan qismlarining db/db qora sichqonlarning jigar yog 'almashinuviga ta'siri

Sichqoncha zardobidagi TG, TC, HDL-C va LDL-C darajalari tegishli to'plamlar yordamida o'lchandi. Muayyan o'lchov bosqichlari uchun to'plam ko'rsatmalariga qarang.

2.8 Cistanche deserticola/Ratiana kofurining turli xil ekstraksiya qilingan qismlarining db/db qora sichqonlarning plazmasi va siydikida UA, Cr va mALB ga ta'siri.

Muzlatilgan plazma va siydik namunalarini oling va ularni UA, Cr va mALB fermenti bilan bog'langan immunoassay to'plamlarini tekshirish uchun ishlatishdan oldin ularni xona haroratiga keltiring. To'plamdagi ko'rsatmalardagi usullar va qadamlarga qat'iy rioya qiling.

2.9 Oshqozon osti bezi va buyrak patologik kesmalarini HE bo'yash orqali kuzatish

10% paraformaldegid fiksatorida 24 soat davomida namlangan oshqozon osti bezi va buyrak to'qimalari olib tashlanadi, distillangan suv bilan yuviladi va 70% etanolda saqlanadi. To'qimalar namunalari olib tashlandi, gradusli etanol bilan suvsizlandi, tozalandi, kerosinga solingan, kesilgan, so'ngra gematoksilin va eozin bilan bo'yalgan (H&E bo'yash). Bo'lim elim quriganidan so'ng, bo'limlarni kuzatish va suratga olish uchun yuqori aniqlikdagi raqamli tasvirlash tizimidan foydalaning.

2.10 Buyrak to'qimalarining IV-toifa kollagenini immunohistokimyo yordamida aniqlash

Ifoda qilish uchun buyrak bo'limlari suvga dewakslangan va keyin antigen olish uchun qilingan. Ular 10% echki zardobi bilan bloklandi va bir kechada 4 daraja asosiy antikor bilan inkubatsiya qilindi. Yuvishdan keyin ikkilamchi antikor inkubatsiya qilindi. Hozirgi yechim rangni rivojlantirish uchun DAB edi. Yuvish, suvsizlantirish va yopish optik mikroskop ostida amalga oshirildi. Buyrak to'qimalarida IV turdagi kollagen oqsili ifodasini kuzating.

2.11 Statistik usullar

Ma'lumotlar va natijalarni tahlil qilish uchun GraphPad Prism Version 5.01 (2007, GraphPad Software re inc) dasturidan foydalanish

Natija o'rtacha ± SEM Ikki guruh o'rtasidagi farq bir tomonlama ekanligini ko'rsatadi

ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ bir juft ustun testi) usuli, P<0.05 is a significant difference and has statistical significance.