ABSTＲACT

Maqsad: umumiy yoki yo'qligini aniqlashsistanozidlar(GC) yaxshilaydikognitiv disfunktsiyatez qariydigan sichqonlar (SAMP8) organizmdagi maxsus androgen retseptorlari (AＲ) vositachiligida.sinaptik oqsilning ifodalanishini tartibga solish． 

Usullar: jami 76 7-oylik erkak SAMP8 sichqonlari tasodifiy ravishda model guruhiga, GCs guruhiga, GCs + flutamid (F) guruhiga, GCs + fulvestrant (ICI) guruhiga, F guruhiga va ICI guruhiga bo'lingan. Har bir guruhdagi sichqonlarning o'rganish va xotira funktsiyalari Morris suv labirintida sinovdan o'tkazildi. Sinash uchun Western blotting va RT-PCR ishlatilgansinaptofizinning ifoda darajasi(SYN), postsinaptik zichlik - 95 (PSD - 95) va har bir guruhdagi sichqonlarning miyadan olingan neyrotrofik omili (BDNF).

Natijalar: GCs SAMP8 sichqonlarining o'rganish va kognitiv funktsiyasini sezilarli darajada yaxshiladi.

GCsgroup bilan solishtirganda, GCs + F guruhi va GCs + ICI guruhidagi sichqonlarning o'rganish va xotira funktsiyasi sezilarli darajada kamaydi. Western blotting va RT-PCR natijalari shuni ko'rsatdiki, BDNF, SYN va PSD－ 95 ning ekspressiya darajasi Model guruhiga nisbatan GC guruhidagi protein darajasi va gen darajasida sezilarli darajada oshgan ( P ＜ 0（ {{ 11}}5). GC + F va GCs + ICI guruhida SYN ifodasi darajasi oshdi va BDNF va PSD - 95 ifoda darajalari GCs guruhiga nisbatan GC + F va GCs + ICI guruhida sezilarli darajada kamaydi (P ＜ 0． 05) .

Xulosa: GClar SAMP8 sichqonlarida sinaptik plastisitni kuchaytirish uchun AＲ maxsus vositachilik qilishi mumkin, bu esa o'z navbatida o'rganish va kognitiv funktsiyani yaxshilaydi.

Kalit so'zlar:Umumiy sistanozidlar; Androgen retseptorlari; Sinaptik plastika; SAMP8 sichqonlari

Cistanche qo'shimchasi Kognitiv funktsiyani yaxshilash uchun parhez qo'shimchasi PhGs75% Ech 30% Act 12%

Altsgeymer kasalligi(AD) keng tarqalgannevrologik degenerativ kasallik, klinik jihatdan progressiv kognitiv funktsiyaning pasayishi va aqliy va psixologik holatdagi o'zgarishlar bilan tavsiflanadi [1]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, AD bo'lgan erkaklarda testosteron darajasi oddiy erkaklarnikiga qaraganda ancha past.

Thebemorlarning kognitiv funktsiyasikeyin turli darajada yaxshilandiketon almashtirish terapiyasi[2], bu androgen darajasining yoshga bog'liq pasayishi keksa erkaklarda AD uchun xavf omili bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.

Cistanche deserticola umumiy glikozidlari (umumiy sistanozidlar, GCs) Cistanche deserticola ning asosiy ekstraktlaridan biri bo'lib, AD bilan bog'liq o'rganishni yaxshilash vakognitiv disfunktsiya[3]. Bundan tashqari, GC ni gavaj orqali yuborish hayvonlarda testosteron darajasini sezilarli darajada oshirdi [4]. GClar, shuningdek, yangni targ'ib qilish funktsiyasiga ega va ta'sir qilishi mumkin

Androgenga o'xshash farmakodinamik ta'sir. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, testosteron AD modeli hayvonlarining o'rganish va kognitiv funktsiyalarini yaxshilashi mumkin va bu jarayon maxsus androgen retseptorlari (androgen retseptorlari, AR) vositachiligiga tayanadi [5].

Ma'lumki, AD kasalliklarida kognitiv disfunktsiya sinaptik plastika bilan chambarchas bog'liq. Biroq, GC sinaptik plastisiyani tartibga soluvchi va shu bilan o'rganish va kognitiv funktsiyalarni yaxshilaydigan o'ziga xos mexanizm hali ham noaniq. Ushbu tadqiqot GClarning sinaptik plastisiyaga ta'sir qilish uchun o'ziga xos ARＲ ga vositachilik qilishini va shu bilan ADda o'rganish va kognitiv funktsiyalarni yaxshilashni o'rganishga qaratilgan.

1 Materiallar va usullar

1. 1 Tajriba hayvonlari va jihozlari

Erkak 3-oylik SAMP8 sichqonlari Pekin universiteti tibbiyot fakultetidan (SCXK [Pekin] 2016-0010) sotib olindi va ular 7 oylik bo'lgunga qadar o'stirildi. Hayvonlar toza muhitda (24 ± 1) daraja va

Hayvonlar tabiiy yorug'lik bilan ta'minlandi, oziq-ovqat va suvdan bepul foydalanish imkoniyati yaratildi va eksperimental hayvonlardan foydalanishning 3R tamoyillariga muvofiq insonparvarlik yordami ko'rsatildi. Ushbu eksperimental tadqiqot Baotou tibbiyot kollejining (Baotou tibbiyot kolleji № 20201102) Eksperimental hayvonlar etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Tajribadagi asosiy reagentlar:Cistanche deserticola umumiy glikozidlari(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); androgen retseptorlari antagonisti-flutamid (Sigma kompaniyasi, AQSh); estrogen retseptorlari antagonisti-fulvestrant (ICI 182780, AQSh) Med Chem Express); Quyon sichqonchaga qarshi BDNF antikori,

PSD-95 antikor, SYN antikor, -aktin antikor (AQSh Proteintech kompaniyasi); oqsil elektroforezi eritmasi, oqsilni uzatish eritmasi, TEMED, akrilamid tampon, ammoniy persulfat, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNK sintezi to'plami, Talent floresan miqdorini aniqlash

Reagentlar to'plami (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) va boshqalar. Asosiy eksperimental asbob-uskunalar vertikal plastinka elektroforez tanki, elektroforez apparati, uzatish tanki, destaining shaker (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), oqsil jeli tasvirini tahlil qilish tizimini o'z ichiga oladi. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), real vaqtda floresan miqdoriy PCR asbobi (AQSh Roche) va boshqalar.

1. 2 Guruhlash va boshqarish

Oziqlantirish jarayonida ikkita sichqon tabiiy ravishda vafot etdi va qolgan 78 sichqon tasodifiy model guruhiga, GCs guruhiga, GCs + flutamid (F) guruhiga, GCs + fulvestrant (ICI) guruhiga, F guruhiga, ICIga bo'lingan.

Har birida 13 ta hayvonlardan iborat guruhlar. Model guruhi, F guruhi va ICI guruhidan tashqari, boshqa guruhlar 30 kun davomida 50 mg / (kg · d) dozada doimiy ravishda GC qo'llanilgan.

GK qo'llanilgandan keyin 24-kundan boshlab, GC + flutamid (F) guruhi va GCs + fulvestrant (ICI) guruhiga F (5 mg / kg / kun) 3{7}} daqiqadan so'ng qorin bo'shlig'iga yuborildi. gavaj orqali. ), ICI (1 mg / kg / kun), 7 kun davomida doimiy in'ektsiya. Sichqonlarning maksimal oshqozon hajmi 0, 5 ml, 1 marta / kun bo'lishini ta'minlash uchun dozalash konsentratsiyasini sozlang.

1. 3 Morris suv labirint testi

Sichqonlar bir kun oldin suv muhitiga moslashgan. Morris suv labirintasi 6 kun davom etdi. Dastlabki 5 kun joylashishni aniqlash va navigatsiya testi edi. Sichqonlar kuniga bir marta to'rt kvadrantning har birida har safar 1 daqiqadan o'qitildi. Har bir mashg'ulot oralig'i 15 daqiqani tashkil etdi va yozuvlar bir vaqtning o'zida qayd etildi. Hayvonlarning joylashishini aniqlash va navigatsiya testining kechikishidan qochish; 6-kuni platformani suvdan olib tashlang va kosmik tadqiqot sinovini o'tkazing. Platformani kesib o'tishlar sonini va sichqonchaning maqsadli kvadrantida o'tkazilgan vaqt foizini yozing. maqsadli kvadrant) va fazoviy tadqiqot suzish traektoriyasi (Spatialprobe testining suzish traektoriyasi) va boshqa ko'rsatkichlar.

1. 4 Western blot aniqlash

SYN, PSD-95 va BDNF sinaps bilan bog'liq oqsillarning ifodasi. Morris suv labirintini sinovdan o'tkazgandan so'ng, barcha sichqonlar muntazam ravishda behushlik qilindi, boshlari kesildi, miyalari olib tashlandi va gippokamplari olib tashlandi. Hipokampal to'qima oqsil lizidi, ultratovush yordamida 4 daraja buziladi, 30 daqiqa muzda qoldiriladi va 12,{5}} r/min tezlikda 15 daqiqa davomida 4 daraja santrifüj qilinadi. Supernatant olindi va protein konsentratsiyasi BCA usuli yordamida o'lchandi. Proteinni yuklagandan so'ng, 80 V doimiy kuchlanishda stacking gel elektroforezini, 120 V doimiy kuchlanishda ajratish jel elektroforezini va 300 mA doimiy oqimda nam uzatishni amalga oshiring; PVDF membranasini oling, uni xona haroratida 80 daqiqa davomida 5% yog'siz sut bilan to'sib qo'ying va membranani TBST bilan uch marta yuving. 15 min/vaqt, birlamchi antikor bir kechada 4 daraja tebranish stolida inkubatsiya qilindi; ertasi kuni membrana TBST bilan 3 marta yuvildi.

15 min/vaqt, ikkilamchi antikor xona haroratida 2 soat davomida inkubatsiya qilindi, so'ngra ECL rangini ishlab chiqish amalga oshirildi va xemiluminesans ko'rish tizimi bilan tasvirlash amalga oshirildi. -aktin ichki mos yozuvlar sifatida ishlatilgan va tarmoqli optik zichlik qiymati Image J dasturi yordamida tahlil qilingan.

1. 5ＲRT－PCRＲAniqlash

SYN, PSD-95 va BDNF ning mRNK ifodasi hipokampal to'qimalarning umumiy RNKsidan Trizol ekstraksiya usuliga muvofiq ajratildi va teskari transkripsiyadan so'ng cDNK hosil qilindi. Talent floresan miqdorini aniqlash to'plami nisbiy floresans miqdoriy aniqlash uchun ishlatilgan. Tajriba uch marta takrorlandi va natijalar 2 - DCT ga aylantirildi va tahlil qilindi. Sichqoncha -aktin, SYN, PSD-95 va BDNF primerlari Shanxay Sangon kompaniyasi tomonidan ishlab chiqilgan va primer ketma-ketligi 1-jadvalda keltirilgan.

1. 6 Statistik tahlil

SPSS 25. 0 ishlov berish uchun statistik dasturiy ta'minot orqali statistik grafiklarni chizish uchun Graphpad Prism 8 dasturidan foydalanilgan va bir tomonlama ANOVA bir nechta namunalarning juftlik o'rtachalarini solishtirish uchun ishlatilgan. P < 0. 05 farq statistik ahamiyatga ega ekanligini anglatadi.