Elastin kollagenli epidermal biriktiruvchi to'qimalarning elastik oqsilini tashkil qiladi

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Annotatsiya:Misrda oʻsadigan Mangifera Indica (Anacardiaceae) barglarining metanol ekstraktidan yangi ksanton glikozid 135,6-tetragidroksiksanton-C-4-D-glyukopiranozid ajratib olindi. Tuzilish 1D va 2D-NMR spektroskopik ma'lumotlari bilan aniqlandi. Lipofillik, eruvchanlik va formulalar kabi birikmaning fizik-kimyoviy xususiyatlari SwissADME serveridan foydalangan holda silico ADMET texnikasi orqali bashorat qilingan. Ushbu uslub Lipinskiyning GITning so'rilishi, tarqalishi, metabolizmi va teriga o'tishi kabi beshlik qoidasini ta'minladi. Kollagenaza, elastaz, gialuronidaza va tirozinaza kabi qarish vositachiligidagi fermentlarga qarshi in vitro inhibitiv faollik baholandi. Murakkab ijobiy nazorat bilan solishtirganda IC50 qiymatlari mos ravishda 1,06,419,10,1,65 va 0,48 ug/ml bo'lgan ajoyib anti-kollagenaza, anti-elastaz, anti-gialuronidaza va tirozinazaga qarshi ta'sir ko'rsatdi. Murakkab istiqbolli prognoz qilingan suvda eruvchanligini va teriga oqilona kirib borishini ko'rsatdi, bu aralashmaning kosmetik preparatlar uchun qarishga qarshi vosita sifatida topikal formulaga muvofiqligini ko'rsatdi.

Kalit so‘zlar:ksanton; Mangifera ko'rsatkichi; qarish; seollagenaza; elastaz; tirozinaza; gialuronidaza; silico ADMET ichida

1.Kirish

Qarish jarayoni - bu umr ko'rish davomiyligi davomida hosil bo'lgan endogen kislorod va azotli erkin radikallar tomonidan qo'zg'atiladigan oksidlovchi stress bilan bog'liq bo'lgan murakkab biokimyoviy jarayon bo'lib, bu yoshga bog'liq namoyonlarning rivojlanishiga hissa qo'shishi mumkin [1]. Ajinlar, giperpigmentatsiya, qarish dog'lari, ajinlar, melazma, sepkillar, lentigo, efelidlar, nevus, jigarrang va melanoma kabi terining qarishi patologiyalari reaktiv kislorod turlarining (ROS) faollashishi bilan davom etadi [2]. Erkin radikallar yoki ROS potentsial ravishda teri hujayralari tarkibining o'zgarishiga olib kelishi va lipidlar va oqsillarning oksidlanishini rag'batlantirish orqali hujayra membranalariga zarar etkazishi mumkin, bu DNKning shikastlanishiga va hujayra o'limiga olib keladi [3,4]. Bundan tashqari, ROS kollagenaza va elastaz fermentlarini faollashtirish orqali kollagen va elastin kabi asosiy teri oqsillariga zarar etkazish orqali terining qarishi jarayonida muhim rol o'ynaydi. Bundan tashqari, erkin radikallar gialuronidazalarni faollashtirish orqali gialuron kislotasining parchalanishiga olib keladi, bu esa terining noto'g'ri namlanishiga olib keladi [5,6]. Ushbu dinamik jarayonlarni kutish dermo-kosmetika sohasi uchun asosiy masala hisoblanadi va yangi himoya formulalarini topish uchun katta tadqiqot mehnati sarflanadi[7]. Antioksidantlar terida mavjud bo'lgan tabiiy himoya fermentlari bo'lib, organizmda ishlab chiqarilgan ortiqcha erkin radikallarga qarshi turadi. Shu bilan birga, oksidlovchi muvozanat bir necha omillar, jumladan, oksidlovchi stressga olib keladigan ovqatlanish va havoning ifloslanishi tufayli buzilishi mumkin. Ushbu oksidlovchi stressda tanadagi erkin radikallarning yuki tabiiy antioksidantlarga qaraganda sezilarli darajada yuqori. Shuning uchun erkin radikallarni zararsizlantirish va terining qarish jarayoniga qarshi turish uchun parhez, kosmetika yoki farmatsevtika kabi manbalardan tashqi antioksidantlardan foydalanish juda muhimdir [5,8]. Zamonaviy tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bir nechta tabiiy ikkilamchi metabolitlar, asosan flavonoidlar va polifenollar ko'plab o'simliklarning umumiy antioksidant faolligiga sezilarli hissa qo'shadi [9]. Bu ko'plab o'simliklarning antioksidant faolligini o'rganishga qiziqish uyg'otdi [10]. Mevalar ushbu fenolik moddalar va flavonoidlarga, shuningdek vitaminlarga boyligi haqida xabar berilgan [11].

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Elastin kollagen bilan epidermal biriktiruvchi to'qimalarning elastik oqsilini tashkil qiladi va terining ajinlari va qattiqligining oldini olishda muhim rol o'ynaydi[12]. Hujayra qarishi jarayonida kollagenaza, elastaz va gialuronidaza kabi matritsa metalloproteinazalari yuqori darajada tartibga solinadi [13]. Ushbu fermentlarni bostirish qarish paytida teri holatining yomonlashuvini boshqarishning eng samarali terapevtik strategiyalaridan biridir [14]. O'simlikdan olingan fenolik birikmalar tirozinazni inhibe qiluvchi xususiyatlari tufayli kuchli oqartiruvchi vositachilar sifatida tavsiflangan [15] va ba'zilari (ularning ba'zilari elastaz inhibitiv ta'siri orqali matritsani qayta qurishda rol o'ynashi mumkin) [16].

Mangifera indica L. koʻplab mamlakatlarda, xususan, tropik mintaqalarda tarqalgan Anacardiaceae oilasiga mansub eng muhim yeyiladigan oʻsimliklardan biridir [17]. Mango mevalari 4000 yildan ortiq vaqt davomida qishloq xo'jaligi, oziq-ovqat, farmatsevtika va ozuqaviy sohalarda muhim rol o'ynagan [18]. Bundan tashqari, mango mevasi texnik ekinlar orasida ishlab chiqarish va qamrov bo'yicha balanadan keyin 2-o'rinda turadi [19]. Mangifera indikatorining turli qismlari turli xil fitokonstitutsiyalarning boy manbasini ifodalaydi, shu jumladan flavonoidlar, ksantonoidlar, fenolik kislotalar va funktsional molekulalar sifatida potentsial qiymatga ega triterpenoidlar [18]. Bundan tashqari, mevalar inson tanasini uglevodlar, oqsillar, yog'lar, minerallar, vitaminlar, muhim aminokislotalar, karotinoidlar, xun tolalari va fenollar kabi muhim tarkibiy qismlar bilan ta'minlaydi [20]. An'anaga ko'ra, turli madaniyatlarda barg infuzioni diareya, qonli dizenteriya, kamqonlik, astma, bronxit, gipertoniya, uyqusizlik, revmatizm, ovqat hazm qilish buzilishi, gepatit, tetanoz, homiladorlik va qon ketish kabi bir qancha kasalliklarda qo'llanilganligi haqida xabar berilgan [21]. Bundan tashqari, yonayotgan barglarning bug'lari hiqichoq va tomoq og'rig'i uchun nafas oldi [18]. Po'stlog'i diuretik sifatida va antirevmatik kiyimlarda ishlatilgan. Urug'lar shamollash, astma, diareya va qon ketishni davolashda yaxshi ma'lum. Mangifera indica o'simlik qismlarining antioksidant faolligi, yuqori umumiy fenolik (TPC), umumiy flavonoid tarkibi (TFC), 2,{10}}difenil-1-pikrilgidrazil (DPPH) tozalash faolligi va linoleik inhibisyon qobiliyati haqida xabar berilgan. 22].

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Ushbu tadqiqot Mangifera indica L.leaves ning 70 foizli metanolik ekstraktidan olingan yangi ksanton birikmasining kollagenaz, elastaz, tirozinaz va gialuronidazaga qarshi in vitro inhibitiv xususiyatlarini o'rganish uchun mo'ljallangan. Bundan tashqari, so'rilish, tarqatish, metabolizm va toksiklik (silico ADMET bashoratida) kabi farmakokinetik xususiyatlar SwissADME va Lipinskining besh qoidasi yordamida preparatning eruvchanligi, o'tkazuvchanligi va formulaga bo'lgan ehtiyojni baholash uchun o'tkazildi.

2.Natijalar va muhokama

2.1. Izolyatsiya qilingan birikmaning tuzilishini yoritish

Murakkab sariq kristallar (18,29 mg) shaklida olingan. Xromatografik tahlil DCM:MeOH (7:3) va BAW erituvchi tizimlarida uzun ultrabinafsha nurlar (365 nm) ostida TLC da och-to'q sariq-sariq dog'ni aniqladi. 1 foizli metanolik temir xlorid eritmasi bilan ishlov berilganda, u to'q yashil rangga aylandi va ammiak eritmasi bilan sariq rangga aylandi. Murakkabning lH-NMR, APT va HMBC spektral ma'lumotlari 1-jadvalda jamlangan. lH-NMR spektral tahlili (DMSO-dg, xona harorati) (Sl va S2-rasmlar) oH da ikkita quyi maydon aromatik dublet signallari mavjudligini aniqladi. 7.57 va 6.79 8.24 Hz ulanish doimiysi bilan ikkita orto-ulangan proton mavjudligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, H-NMR spektrining aromatik hududi Su 5.96 da yagona protonning aromatik halqada mavjudligini ko'rsatadigan yagona signal mavjudligini ko'rsatdi. C-glyukozil birligining anomerik protoni Su 4,60 ppm da -anomer uchun tayinlangan 7 Gts birikish doimiy qiymati bilan aniqlandi. Izolyatsiya qilingan birikmaning H-NMR spektridagi aromatik protonlarning bu namunasi ksanton tuzilishiga o'xshaydi. Bundan tashqari, lH-NMR (shakar hududi) ning 3,21 dan 4,60 gacha bo'lgan glyukozaning xarakterli kimyoviy siljishi bilan 4,60 ou da -anomerik proton mavjudligi shakar va ksanton o'rtasida C-glikozid aloqasi mavjudligini ko'rsatdi. S3-rasmda ko'rsatilganidek, birikmaning APT spektri ksanton va C-glyukozid tuzilishini ifodalovchi o'n to'qqizta uglerod signalining mavjudligini aniqladi.cistanche tubulosa sharhlariAPT tajribasi ksanton qismi va anomerik C-1' tarkibida uchta CH guruhini (C-8,131.95;C-7,115.10;C-2, 95.35 ppm) aniqladi. C-glyukoza miqdori SH75,13 ppm. Ksantonning C-4da C-glyukozaning glikozid bogʻlanishini tasdiqlash uchun ikki oʻlchovli NMR tajribalarini (HMBC; S4-rasm) oʻtkazdik. Mo'l-ko'l 2,3JCH log diapazonidagi korrelyatsiya signallari ksanton magistralini H-1'(6) 4.60) dan C-4 (6c 104.13 ppm) va C-3gacha bo'lgan kuzatilgan cho'qqilar bilan tasdiqladi. (6c 158,95).tsitrus bioflavonoidlariKsanton qismi uchun H-2(8) dan C-4(6c 104,13 ppm), C-3 (8c 158,95) gacha 2,3JCH uzoq masofali korrelyatsiya ham aniqlandi. va C-4b(6c 107.45).Bundan tashqari, H-8(8)7.57)dan C karbonil guruhiga 2-37-uzoq masofali korrelyatsiya aniqlandi-9( 6c 195.14), C-8a(6c 131.22) va C-6 （6c161.87）. Xuddi shu halqa uchun aJcH signallari H-7（6m 6.79） dan C{ {39}}a（6c 131,22） kuzatildi. Bu korrelyatsiyalar birikmaning strukturasida 1-rasmda tasvirlangan. Murakkabning HSQC S5-rasmda ko'rsatilganidek, har bir proton va uning joylashgan uglerod o'rtasida 1JcH korrelyatsiyasini ko'rsatdi. H,H COZY tajribasi (S6-rasm) H-7 （du 6.79） va H-8（8H7.57） oʻrtasida kuchli oʻzaro bogʻliqlikni aniqladi. Bundan tashqari, birikma ESI-MS tahlilining salbiy rejimida CgHngOrin molekulyar formulasini ko'rsatuvchi m/z 421 da psevdomolekulyar ion cho'qqisi [MH]-ni aniqladi (S7-rasm). 1H-NMR, APT, IH, H COSY, HMBC va HSQC maʼlumotlari bizni bu birikma 1,3,5,6-tetragidroksiksanton-C-4- -D-glyukopiranozid boʻlishi mumkinligini taxmin qilishga olib keldi. Bu adabiyotda izomangiferin haqida xabar berilgan NMR ma'lumotlari bilan taqqoslangan holda tasdiqlangan [23,24].

2.2. Silico Farmakokinetikasida Izolyatsiya qilingan birikmaning bashorati

SwissADME onlayn serveridan Lipinskining doriga o'xshashligi uchun besh (RO5) qoidasini baholash orqali izolyatsiya qilingan birikmaning dori qobiliyatini baholash uchun foydalanilgan [25]. Lipinskiyning ma'lum qilishicha, II faza klinik holatiga yetgan og'iz orqali qabul qilinadigan faol dori vositalarining 90 foizi MWT 500 dan kam yoki teng, logp 5 dan kam yoki teng, H-bog' donorlari 5 dan kam yoki teng, H-bog'lari qabul qiluvchilar dan kamroq. yoki 10 [26] ga teng. SwissADME lipofillik [27], o'lcham, qutblanish [28], eruvchanlik [29,30], moslashuvchanlik va to'yinganlik [31,32] kabi dori o'xshashligi bilan bog'liq qo'shimcha oltita fizik-kimyoviy parametrni bashorat qiladi. 2-rasm va 2-jadvalda tasvirlanganidek.Cistanche Buyuk BritaniyaIzolyatsiya qilingan birikmaning dorivor oʻxshashligining SWISSADME syujeti shuni koʻrsatdiki, birikmaning fizik-kimyoviy xossalarining aksariyati istalgan diapazonda [33] boʻlib, H-bogʻlari qabul qiluvchilar soni, H-bogʻlari donorlari va birikmaning qutbliligi bundan mustasno. PSA qiymati 201,28 A2 (kerakli diapazon (20 dan 130 A2 oralig'ida)[28]. Bu yuqori qutblanish shakar qismi mavjudligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Izolyatsiya qilingan birikma istiqbolli bashorat qilingan topologik suvda eruvchanligi log S(Ali) ko'rsatdi [29] ] va Log S (ESOL)[30]. Bu ushbu birikmaning kelajakdagi formulasini osonlashtiradi. Bashorat qilingan farmakokinetika shuni ko'rsatdiki, ushbu birikma Dania tomonidan qabul qilingan qaynatilgan tuxum modeli [34] bo'yicha BBB ga o'tmagan holda GITning past prognozli so'rilishiga ega. SwissADME onlayn serveri[33].cistanche wirkungBundan tashqari, birikma P450 sitoxromining (1A2, 2C19, 2C9, 2D6 va 3A4) beshta izoformasiga inhibitor ta'sirini ko'rsatmadi [35], bu dori vositalarining o'zaro ta'sirining past ehtimolini ko'rsatadi. Prognoz qilingan teri o'tkazuvchanligi molekulyar o'lcham va lipofillikni terining o'tkazuvchanligi bilan bog'laydigan ko'p chiziqli regressiya modeli bilan hisoblanadi [36]. Log Kp (sm/s da Kp bilan) qanchalik salbiy bo'lsa, molekula teri o'tkazuvchanligi shunchalik kam bo'ladi [33,36].cistanche tubulosa ekstraktiTeri o‘tkazuvchanligining bashorat qilingan logi Kp sm/s.da -9,14 sm/s.

2.3.Teri qarishiga qarshi xususiyatlarni baholash

2.3.1.Kollagenaza va elastazga qarshi faollikni aniqlash

Kollagen va elastin epidermisning muhim tarkibiy oqsillari bo'lib, gialuron kislotasi bilan birgalikda shkinning elastikligini, kapillyar ohangini va mustahkamligini ta'minlaydi [39]. Qarish jarayonida oksidlovchi stress va ultrabinafsha nurlarining haddan tashqari ta'siri elastaz, kollagenaza va gialuronidaza kabi gidrolizlovchi fermentlarning faollashishiga olib keladi, natijada terining mustahkamligi va moslashuvchanligi yo'qoladi, ajinlar paydo bo'ladi[40] . Kollagenaza va elastaz faolligini inhibe qilish terini terining qarishi namoyon bo'lishidan himoya qilishning samarali strategiyalaridan biridir [41]. 3A-rasmda aniqlanganidek, birikma standart sifatida fenantrolin (IC50=182.80ug/mL) bilan solishtirganda ICso qiymati 419,10 ug/ml bo'lgan o'rtacha anti-kollagenaza xossasini ko'rsatdi. Elastazni inhibe qiluvchi ta'sirga kelsak (3B-rasm) ICso qiymati 1,06 ug/ml bo'lgan ajoyib ta'sir ko'rsatdi, ijobiy nazorat N-metoksisutsinil-Ala-Pro-Val-xlorometil keton esa 0,63 ug ICso qiymatiga ega. /mL. Ushbu natijalarga muvofiq, oldingi tadqiqot mangoning metanol barglari ekstrakti mangiferinning raqobatbardosh bo'lmagan inhibisyon xususiyatiga bog'liq bo'lgan standart tokoferolga qaraganda 10-katta kuchli elastaz inhibitori ekanligi haqida xabar berdi[42]. Bundan tashqari, oldingi hisobotlar fermentlarning raqobatbardosh inhibisyoniga ijobiy ta'sir ko'rsatishi mumkin bo'lgan gidroksil yoki karboksil kabi hidrofilik guruhlar mavjudligi sababli polifenolik birikmalarning anti-elastaz faolligini isbotladi [43].

2.3.2.Antigialuronidaza va antitirozinaz faolligini aniqlash

Gialuron kislotasi terining namligini saqlaydigan keng tarqalgan glikozaminoglikandir[44]. U gialuronidaza ta'sirida fermentativ gidrolizlanadi, natijada teri strukturasining yaxlitligi buziladi va to'qimalarning o'tkazuvchanligi buziladi [45]. Gialuronidazaning bostirilishi terining yaxlitligini saqlaydi, terining qarish jarayonini kechiktiradi va terining namligini saqlaydi [13]. Ilgari olib borilgan tadqiqotlar tabiiy gialuronidaza ingibitorlari terining sog'lig'i bilan bog'liq mahsulotlarni ishlab chiqish uchun qarishga qarshi vosita sifatida xizmat qilishi mumkinligini ma'lum qildi [46]. 4A-rasmda ko'rsatilganidek, ajratilgan birikma 1,65 ug/ml ICso qiymati bilan gialuronidaza faolligini sezilarli darajada susaytirishi mumkin, bu esa ijobiy nazorat sifatidagi 6-O-palmitoil L-askorbin kislotasi (2,55 ug/mL) bilan solishtirganda.

Terining qarishining klinik ko'rinishlari orasida terining giperpigmentatsiyasi reaktiv kislorod turlari (ROS) mavjudligida tirozinaza fermenti tomonidan tezlashishi mumkin [46]. Tirozinaza, mis o'z ichiga olgan glikoprotein, L-tirozinning 34-dihidroksifenilalanin (DOPA) ga gidroksillanishi, so'ngra DOPA ning DOPAkinonga oksidlanishi orqali melanin sintezida hal qiluvchi rol o'ynaydi [47]. Shuning uchun tirozinaz faolligini bostirish terining giperpigmentatsiyasini potentsial ravishda kamaytiradi [48]. Shu nuqtai nazardan, ushbu birikma kojik kislota bilan solishtirganda ICso qiymati 0,48 ug/ml boʻlgan tirozinazni potentsial ravishda inhibe qilgan, bunda koʻrsatilganidek, ijobiy nazorat (0.82 ug/ml) 4B-rasm. Mangifera indica urug'i ekstrakti bo'yicha o'tkazilgan oldingi tadqiqot polifenolik tarkib bilan bog'liq bo'lgan anti-tirozinaz va gialuronidazaga qarshi ajoyib natijalarni ko'rsatdi [47]. Molekulyar darajada, tirozin ham, DOPA ham tirozinazni faollashtirish uchun muhim proton donorlari sifatida ifodalangan gidroksil guruhlarini o'z ichiga oladi [49]. Xuddi shunday, birikma o'z skeletida to'rtta gidroksil qismini o'z ichiga oladi, ular tirozinazaga substrat sifatida reaksiyaga kirishib, raqobatbardosh inhibitorlar sifatida harakat qilishlari mumkin.

3. Materiallar va usullar

3.1.O'simlik materiallari

Mangifera indica L.leavesning yangi barglari meva berish bosqichida Abo-Zabal hududidagi xususiy bog‘dan (N 30 daraja 1743.5336"E 3128.254), Qualiobya hukumati, Misr, 2021-yil 20-iyulda olingan. Ular tomonidan tasdiqlangan. Treize Labib xonim, El-Orman botanika bog‘ining taksonomiya bo‘yicha mutaxassisi, Giza, Misr. PHG-P-MI-362 kodli vaucher namunalari Ayn Shams universiteti farmatsiya fakulteti Farmakognoziya bo‘limi galereyasiga joylashtirildi.

3.2.Ekstraktsiya va xromatografik izolyatsiya

Mangifera indica L. (1,56 kg) havoda quritilgan barglari 5 kun davomida 7{24}}% metanolda (27L) singdirilgan, keyin filtrlangan. Filtrlangan quritilgan qoldiq hosil qilish uchun 47 gradus haroratda vakuumda to'liq bug'langanda quritilgan qoldiq (9 0, 36 g; 5,79 foiz og'irlik); ekstraksiya hosildorligi quyidagi tenglama sifatida hisoblandi: [quritilgan ekstraktning umumiy og'irligi/resh o'simlikining umumiy og'irligi] × 100. Keyin olingan ekstrakt Diaion HP-20 fraksiyasiga qo'llanildi. Gradientli elyusiya (suv/metanol) ishlatilgan. Beshta asosiy fraksiya olingan: 100 foiz suv, 25 foiz metanol, 50 foiz metanol, 75 foiz metanol va 100 foiz metanol. 50% metanolda eruvchan fraksiya (26,38 g) poliamid bilan ta'sirlangan va dastlab 100% suv bilan, so'ngra gradient suv/metanol bilan (100:0 dan 0:100 gacha, w/o) bilan elut qilingan, olti subfraktsiyani olish uchun: 100 foiz suv, 20 foiz, 40 foiz, 60 foiz, 80 foiz va 100 foiz metanol. 40% metanolda eruvchan subfraktsiya (2,36 g) Sephadex LH{37}} ga MeOH (izokratik elutsiya) yordamida qo'llangan. Shunga o'xshash fraktsiyalar birlashtirilgan va to'rtta asosiy subfraktsiyani (A1-A4) olish uchun bug'langan. A3(0.86 g) preparativ yupqa qatlamli xromatografiya (TLC) plitalarida butanolsirka kislotasi:suv (BAW;4:1:5) yordamida birikmani yorugʻlik sifatida ajratib olish uchun mobil faza ishlab chiqaruvchisi sifatida qoʻllangan. sariq amorf kukun.

3.3.Yadro magnit-rezonans (YMR)spektrometri

Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Shveytsariya) spektrometri Ayn Shams universiteti farmatsiya fakultetining Dori-darmonlarni aniqlash, tadqiq qilish va rivojlantirish markazida ishlatilgan. 3.4.Mass-spektrometriya

Mass-spektrometrik tahlil uchun PDA detektoriga ulangan Finnigan LCQ-DECA massa spektrometri (San-Xose, CA, AQSh) ishlatilgan. Namunalar HzO: MeOH da aralashma sifatida eritildi va to'g'ridan-to'g'ri HPLC/ESI-MS tizimiga AOK qilindi. Ham salbiy, ham ijobiy ESI ionlash ionlash rejimlari quyidagi sharoitlarda qo'llanilgan: quritish va nebulizatsiya qiluvchi gaz, N2; kapillyar harorat, 250 daraja; purkash kuchlanishi, 4,48 kV; kapillyar kuchlanish, 39,6 V; quvur linzalari kuchlanishi,10.00 V; va m/z 100-2000 massa diapazonida to‘liq skanerlash rejimi. Izolyatsiya qilingan birikma uchun ESI-MS tahlili UPLC Acquity rejimiga ega (Milford, CT, AQSh) Waters Xevo TQD massa spektrometrida Ayn Shams universiteti farmatsiya fakulteti, Dori-darmonlarni aniqlash, tadqiqot va rivojlantirish markazida o'tkazildi.

3.5.In-Silico farmakokinetikasini bashorat qilish

Lipinskiyning beshlik qoidasi, lipofillik, eruvchanlik va farmakokinetik xususiyatlar kabi fizik-kimyoviy parametrlar, masalan, ajratilgan birikmaning GIT yutilishi, tarqalishi, metabolizmi va teriga o'tishi SwissADME onlayn serveri [36] yordamida o'tkazildi. 3.6. Terining qarishiga qarshi xususiyatlarni baholash

3.6.1.Kollagenazaga qarshi faollikni aniqlash

Izolyatsiya qilingan birikmaning kollagenaza faolligiga qarshi inhibitiv qobiliyati yuqorida tavsiflangan usul [50] bo'yicha florometrik kollagenaza inhibitori skrining to'plami (BioVision, katalog № № K833-100) yordamida baholandi. Malumot nazorati (1,10)-fenantrolin edi. Sinovdan o'tgan birikma va mos yozuvlar nazorati tahlil uchun 1,10,100 va 1000 ug/ml konsentratsiyalarda tayyorlangan. Sinovdan oʻtkazilgan aralashma tubi tekis boʻlgan 96-quduq plastinkasida tayyorlangan. Birinchidan, kollagenaza substrati kollagenaza assay buferida (CAB) eritildi. Tahlil uchun namuna aralashmani ham kollagenaz, ham CAB bilan aralashtirish orqali tayyorlangan. Inhibitorni nazorat qilish namunalarini tayyorlash inhibitor ((1,10)-fenantrolin (80 mM)) suyultirilgan kollagenaza fermenti va CAB buferi bilan aralashtirish orqali amalga oshirildi. Enzim nazorati suyultirilgan kollagenazni CAB bilan aralashtirish orqali tayyorlandi. Fon nazorati sifatida CAB buferi ishlatilgan. Barcha namunalar xona haroratida 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Bu vaqt davomida kollagenazni CAB bilan aralashtirish orqali reaksiya aralashmasi tayyorlandi. Keyingi bosqichda reaksiya aralashmasi tayyorlangan namunalar bilan yaxshilab aralashtiriladi. Floresans darhol 490 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligida va 520 nm emissiya to'lqin uzunligida mikroplastinka o'quvchi (FilterMax F5, Thermo Fisher) yordamida o'lchandi. O'lchov kinetik rejimda 37 daraja 60 daqiqa davomida o'tkazildi. Namunalar ikki nusxada tayyorlandi va sinovdan o'tgan birikmaning kollagenaza inhibitiv ta'siri quyidagi tenglama yordamida hisoblandi:

3.6.2.Elastaga qarshi faollikni aniqlash

Murakkabning antielastaz faolligi EnzChek§Elastase Assay Kit (E-12056) yordamida avval xabar qilingan usul [51] boʻyicha tekshirildi. Sinovdan o'tgan birikma va mos yozuvlar nazorati tahlil uchun 0,1,10 va 100 ug/ml konsentratsiyalarda tayyorlangan. Murakkab florometrik tahlil uchun 96-quduqlari aniq tubi bo'lgan plastinkalarda tayyorlangan. Qisqacha aytganda, elastaz fermenti eritmalari, elastaz substrati va inhibitor nazorati tavsiya etilgandek tayyorlangan. Keyin quduqlarga suyultirilgan elastaz eritmasi qo'shildi. Sinov qilingan birikma, inhibitor nazorati va ferment nazorati keyingi quduqlarga qo'shildi. Namunalar bir shakerda aralashtiriladi va keyin 37 daraja haroratda 5 daqiqa davomida inkübe qilinadi. Ftorometrik reaksiya aralashmasini tayyorlash uchun tahlil buferi substrat bilan aralashtirildi, keyin qo'shildi va har bir namuna bilan yaxshilab aralashtirildi. Floresans darhol 400 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligida va 505 nm emissiya to'lqin uzunligida mikroplastinka o'quvchi (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, AQSh) yordamida o'lchandi. O'lchov yorug'likdan himoyalangan 30 daqiqa davomida 37 daraja kinetik rejimda amalga oshirildi. Barcha sinovdan o'tgan namunalar ikki nusxada tayyorlandi va tahlil qilindi va sinovdan o'tgan birikmaning elastazni inhibe qiluvchi ta'siri quyidagi tenglama bo'yicha hisoblab chiqildi:

qayerda:

△RFU=nisbiy floresan birliklarining EC=ferment nazoratidagi o‘zgarishi

3.6.3.Tirozinazaga qarshi faollikni aniqlash

Yog'larning inhibitiv faolligi Abcam@Tyrosinase inhibitor skrining kolorimetrik tahlil to'plami (katalog № ab204715) yordamida kollagenazaga qarshi sinovdan o'tkazildi. Tahlil taqdim etilgan qo'llanmaga muvofiq amalga oshirildi. Standart tirozinaz inhibitori kojik kislota edi. Sinovdan o'tgan birikma tahlil qilish uchun 0,1 dan 10 ug/ml gacha bo'lgan konsentratsiyalarda tayyorlangan. Taxminan 2 uL taqdim etilgan tirozinaza 48 uL tirozinaz tahlil buferi bilan aralashtirildi. Efir moylari yoki stend namunalari (20 uL) ferment aralashmasi (50 mkl) bilan aralashtiriladi va 25 daraja haroratda 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Keyin efir moylari va standart quduqlariga 30 mkl tirozinaz substrat eritmasi qo'shildi. Keyinchalik, plastinka spektrofotometrik tarzda 510 nm to'lqin uzunligida 30-60 daqiqa davomida 25 daraja haroratda o'lchandi.

3.6.4.Gialuronidazaga qarshi faolligini aniqlash

Gialuronidaza faolligi natriy gialuronatdan hosil bo'lgan N-asetilglyukozamin miqdorini o'lchash orqali spektrofotometrik tarzda baholandi [52]. Sinovdan o'tgan birikma va mos yozuvlar nazorati tahlil uchun 0.1 dan 10 ug/ml gacha bo'lgan konsentratsiyalarda tayyorlangan. Ellik mikrolitr sigir gialuronidazasi (7900 birlik ml-1,(Sigma, Sent-Luis, MO, AQSH) 0,1 M asetat tamponida eritilgan (pH=3,5) 100 mkl belgilangan me'yor bilan aralashtirildi. birikma konsentratsiyasi 5% DMSO da eritiladi va keyin 37 daraja suv hammomida 20 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi.Nazorat guruhi namuna oʻrniga 100 mL 5% DMSO bilan ishlov berildi.Reaksiya aralashmasining optik zichligi 585 nm da oʻlchandi. spektrofotometriya yordamida.

3.7.Statistik tahlil

Barcha tajribalar uch nusxada amalga oshirildi. Fermentning inhibe qiluvchi faolligi ICso uchun ma'lumotlar bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida statistik tekshirildi. Statistik tahlillar GraphPad Prism 5.0 yordamida amalga oshirildi. 4. Xulosa va kelajak istiqbollari

O'simliklardan olingan tabiiy mahsulotlar jahon bozorida kosmetik dizaynlar uchun yangi vositalarni ishlab chiqish uchun yuqori talabga ega. Ushbu tadqiqotda M. indica barglari ekstraktidan yangi ksanton birikmasi, 1.3.5,6-tetragidroksiksanton-C-4- -D-glukopiranozid ajratib olingan. Fermentlarni inhibe qiluvchi tahlillarga asoslanib, bu birikma, ehtimol, yaxshi anti-kollagenaza, anti-elastaz, anti-gialuronidaza va tirozinazaga qarshi xususiyatlarni namoyon qilishi mumkin va shu bilan terining qarishi bilan bog'liq fermentlarga qarshi keng qamrovli zaiflashtiruvchi ta'sir ko'rsatadi. Bundan tashqari, kremniyning fizik-kimyoviy parametrlari va ADME tadqiqoti uning topikal dozalash shakllariga qo'shilishini qo'llab-quvvatlaydi, chunki u istiqbolli suvda eruvchanligini va asosli taxmin qilingan teriga kirishini ko'rsatadi. Shuning uchun bu birikma ozuqaviy va kosmetsevtik formulalar uchun qulay ko'p funktsiyali bioaktiv agent sifatida qo'llanilishi mumkin. Shunga qaramay, toksikologik va klinik baholashlar potentsial istiqbolli hisoblanadi.

Ushbu maqola Molecules 2022, 27, 2609 dan olingan. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules