Broyler tovuqlarida zaytun o'simliklaridan olingan fenolik birikmalarning ishlatilishi: ichak mikrobiotasiga va ko'krak filetosining saqlash muddatiga ta'siri 3-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.7.Lipidlarning oksidlanishi

Lipid oksidlanishi ikkilamchi (TBAR) va birlamchi (D232 va D270) o'lchovlari orqali o'rganildi.oksidlanishbirikmalar (7-jadval). Uchta eksperimental guruh o'rtasida sezilarli farqlar qayd etilmadi, ammo shuni ta'kidlash kerakki, L2 guruhidagi tovuqlar uchun TBARs qiymatlari L1 va L{3}} guruhlarga nisbatan biroz oshgan, D232 esa. qarama-qarshi tendentsiyani ko'rsatdi. Bu ikki analitik ko'rsatkich sezilarli darajada bog'liq edi (TBARs va D232 r=-0.5,p.<0.001 and="" tbars="" vs.="" d270r=""><0.05). the="" cooking="" treatment="" caused="" decreases="" in="" the="" primary="" oxidation="" products=""><0.01), which="" were="" followed="" by="" increases="" in="" the="" secondary="" ones="" (p=""><0.001). no="" interactions="" between="" diet="" and="" cooking="" were="" observed.="" on="" the="" contrary,="" [31]and="" [45]="" observed="" a="" significant="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" breasts="" from="" chickens="" whose="" diets="" were="" supplemented="" with="" either="" olive="" cake="" or="" omww.="" similarly,="" [46]="" observed="" a="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" quadriceps="" femoris="" of="" chickens="" whose="" diets="" were="" enriched="" with="" omww="" permeate="" and="" the="">

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Oke va boshqalar. [16] Abor akr shtammili broylerlarga beriladigan ichimlik suviga turli hajmdagi zaytun barglari ekstrakti (5, 10 va 15 ml/litr) qoʻshib, qonda malondialdegid (MDA) miqdorini kamaytirishga sezilarli taʼsir koʻrsatgan. Ibrohim va boshqalar. [42], fermentlangan yoki fermentlangan quritilgan zaytun pomasining darajasi ortib borayotgan dietaga qo'shilishi natijasida olingan tovuq ko'kragida MDA kontsentratsiyasining sezilarli darajada pasayishi kuzatildi. Boshqa tadqiqotlardan farqli o'laroq, hozirgi vaqtda mushak to'qimalarida mushak yog'ining oksidlanishiga qarshi himoya ta'siri kuzatilmadi. Tadqiqotlar o'rtasida o'zgaruvchanlik va farqlarni keltirib chiqaradigan ko'plab omillar mavjud. Hayvonlarning zoti va semizlik davrining davomiyligidan tashqari, dietaning ozuqaviy tarkibi, oziq-ovqat iste'moli, atrof-muhit harorati va boshqa stressli sharoitlar kabi boshqa omillar ko'pincha solishtirish qiyin bo'lgan juda boshqacha natijalarga olib kelishi mumkin. Faol moddalar kontsentratsiyasi va qo'shimcha moddalar mavjudligi sababli dietani fenollar bilan boyitgan matritsa turi oxirgi emas (zaytun keki, zaytun pomasi, zaytun barglari ekstrakti, o'simlik suvi ekstrakti, faqat bir nechtasini nomlash uchun). Xuddi shu matritsada mavjud bo'lgan sinergik yoki himoya ta'siri bilan, so'yilgandan keyin ham in vivo, ham go'sht to'qimalarida antioksidant ta'siriga sezilarli ta'sir ko'rsatishi mumkin [47]. Antioksidant qo'shimchalarni yangi go'sht va go'sht mahsulotlariga integratsiya qilishdan sog'liq uchun mumkin bo'lgan foyda har doim ham isbotlanmaydi [48]. Aksincha, ko'plab birlamchi va ikkilamchi lipid va oqsil oksidlanish birikmalari, masalangidroperoksidlar, epoksidlar,4-gidroksinonenal, malonaldegidUlar potentsial kanserogenlar sifatida tan olinadi yoki karbonil birikmalari kabi hujayra signallarining uzatilishiga ta'sir qilishi mumkin [49]. Yangi go'shtga kelsak, hayvonlarning ratsioni orqali antioksidant potentsialni oshirish imkoniyati, ayniqsa sintetik emas, balki tabiiy moddalardan foydalanishda juda yaxshi istiqboldir. Aslida, texnologiya antioksidant potentsialni oshirish uchun turli xil aralashuv imkoniyatlarini taklif qiladigan go'shtga asoslangan mahsulotlardan farqli o'laroq, yangi go'shtda hayvonlarning dietasi orqali aralashuvning yagona muqobili mahsulot yuzasiga qaratilgan davolashdir, ammo bo'lishi kerak. amaldagi qonun hujjatlariga muvofiq. Ushbu tadqiqotning ko'krak go'shtida o'lchangan fenollarning qoldiq miqdori to'g'ridan-to'g'ri sog'liq uchun foyda keltirishi dargumon, lekin bilvosita mumkin. Go'shtni pishirish, masalan, to'qimalarning antioksidant himoyasini yo'qotadi, shuning uchun go'sht to'qimalari issiqlik bilan ishlov berishdan keyin ham faol bo'lgan birikmalar bilan boyitiladi.fenollar, mahsulotning saqlash muddati va xavfsizligini oshirish nuqtai nazaridan katta qiziqish uyg'otadi. CPC bilan oziqlantirish sinovi natijasida na videoda, na sobiq video effektlari kuzatilmaganining sababi, ayniqsa, o'zaro ta'sirga oid qo'shimcha eksperimental tadqiqotlarga loyiqdir.dietali polifenollarva tovuqning ichak mikrobiotasi, u fenollarning potentsial biokimyoviy ta'sirining muhim qismini ishlatadi [9,10].

3. Materiallar va usullar 3.1. Tajriba inshootlari

Sinov 6 oylik tanaffusdan so'ng Padova universiteti (Legnaro, Padova, Italiya) Eksperimental fermasidagi parrandachilikda bo'lib o'tdi. Parrandachilik uyi sovutish tizimi, majburiy shamollatish, radiatsion isitish va boshqariladigan yorug'lik tizimlari bilan jihozlangan. Hammasi bo'lib 12 ta simli qalam (2,5×2,4 m; 6 m2) ishlatilgan, ularning har biri beshta ko'krak qafasi (masofa: 20 sm) va ozuqani qo'lda taqsimlash uchun dumaloq oziqlantiruvchi (diametri: 30 sm) bilan jihozlangan. Har bir ruchkada yog'och soqol bilan qoplangan beton pol bor edi (chuqurligi 5 sm, 2,5 kg / m).

Tovuqlar parrandachilik uyiga kelganidan keyin dastlabki 2 kun davomida yorug'lik kuniga 24 soat ta'minlandi. Keyin yorug'lik soatlari soni 18L: 6D fotoperiodga erishilgunga qadar asta-sekin kamaytirildi, keyin esa 12 kundan boshlab saqlanib qoldi.

Cistanche immunitetni yaxshilashi mumkin

3.2. Hayvonlar, Eksperimental Guruhlar va In Vivo Yozuvlar

Tadqiqot Padova universitetining (loyiha 17/2016; 2016 yil 10-maydagi № 154392) Hayvonlar ustida tajriba o‘tkazish bo‘yicha axloqiy qo‘mitasi (Organismo per la Protezione del Benessere Animale; OPBA) tomonidan tasdiqlangan. Eksperimental va boshqa ilmiy maqsadlarda foydalaniladigan hayvonlarni himoya qilish bo'yicha 2010/63/EU[50] Direktivasi. Hayvonlarga ishlov berish bilan shug'ullanadigan tadqiqotchilar hayvonlar bo'yicha mutaxassislar (hayvonot fanlari fanlari nomzodi yoki magistri) va/yoki veterinariya shifokorlari edi.

Jami 144 1-kunlik jo'jalar(Ross 308) Universitetning tajriba ob'ektlariga Kengashning (EC) 1/2005-sonli qoidalariga [51] muvofiq tijorat yuk mashinasida yetkazildi. Barcha jo'jalar inkubatsiya zavodida Marek kasalligi, yuqumli bronxit va Nyukasl kasalligiga qarshi emlangan edi. Jo'jalar kelgan kunida individual ravishda tortilib, oyoq belgisi bilan aniqlangan, 12 ta qamoqxona orasidan tasodifiy taqsimlangan (har bir qo'raga 12 ta qush va 10 ta qush/m²).）,va keyin tijorat so'yishgacha ularning tirik vaznini o'lchash uchun haftada bir marta tortiladi. Sinov davomida har kuni qalam yemi iste'moli o'lchandi. Sinov davomida uchta tijorat dietasi maydalangan shaklda qo'llanildi (Martini SpA Longiano, Forli-Cesena, Italiya): P1 dietasi 0 dan 23 kungacha, P2 dietasi 24 dan 37 kungacha va P3 dietasi 38 kundan boshlab 48 kun ichida so'yish (analitik ma'lumotlar uchun qo'shimcha materiallarga qarang, S1-jadval). Xom fenolik kontsentrat (CPC) [12] tomonidan tavsiflanganidek olingan, qisqacha, OVWlar pektinaza va hemitselüloz faolligi bo'lgan fermentlar yordamida ishlov berilgan va keyin mikrofiltratsiya, ultrafiltratsiya va teskari osmosga duchor qilingan. CPC dietaga quyidagicha qo'shilgan:( i)L0 Nazorat dietasi (P3), (ii)L1 Nazorat dietasi va CPC (nazariy umumiy fenollar sifatida 220 mg/kg ozuqa), (i) L2 Nazorat dietasi va CPC (nazariy sifatida 440 mg/kg ozuqa) umumiy fenollar). CPC va parhezlarning individual fenolik birikmalarining haqiqiy tarkibi S2-jadvalda keltirilgan. Har bir parhez to'rtta qalamda takrorlandi (boshlang'ich tirik vazn va o'zgaruvchanlik uchun bir hil). CPC 24 kunlik (d) yoshdan boshlab 48 d da tijorat so'yishgacha etkazib berildi (CPC ning fenolik tarkibi uchun qo'shimcha materialga qarang). Barcha hayvonlar sinov davomida ad libitum bilan oziqlangan va qo'shimcha dietalar har hafta tayyorlangan.

Ichak mikroblari jamoasining tarkibini aniqlash uchun 23,34 va 44 yoshda jami 12 ta hayvondan (har bir parhezda 4 tadan) kloakali tamponlar (4 ta hayvon/qalam) olindi, ular uch marta tekshirildi (36 ta tampon). jami yig'ilgan namunalar).

3.3. Tijoriy so'yish, tana go'shti va go'sht sifatini qayd etish

48 kunlik yoshda, ozuqa va suv tortib olingandan so'ng (mos ravishda 7 va 2 soat davomida) barcha tovuqlar savdo so'yish joyida so'yilgan. Tovuqlar qadoqlashdan oldin alohida tortilgan. Barcha tovuqlar qafasga joylashtirildi (balandligi, 62,5 sm × 160 sm × 25,0 sm; pol maydoni, 1 m²）. Tajriba ob'ektlaridan tijorat so'yish joyiga yuklash va tashish va so'yishdan oldin lairatsiya taxminan 3 soat davom etdi. Tovuqlar savdo so'yish joyining standart amaliyotiga muvofiq so'yilgan. Tana go'shtlari 2 soat sovutilgandan so'ng 2 darajadan so'ng olinadi va so'yish bo'yinbog'ini o'lchash uchun individual ravishda tortiladi [52].

So'yishdan yigirma to'rt soat o'tgach, tana go'shti ko'krakdan ajratilgan ko'krak qafasining asosiy mushaklarini olish uchun ajratildi [53].

Sud jarayonida o'lim tufayli 17,4 foiz (25 ta tovuq) yo'qolganligi qayd etilgan. 119 ta tana go'shtidan 72 tasi yaroqlilik muddati davomida mikrobiologik tahlillarga tayinlangan (2.4-bo'limda ko'krak mikrobiota tarkibini madaniyatga bog'liq va mustaqil usullar bilan aniqlash tushuntirilgan), qolgan 47 tasi muzlatilgan (-40 daraja) va keyinchalik xom va pishirilgan go'shtning proksimal tarkibi va lipid oksidlanish tezligini baholash uchun ishlatiladi (3.5-band).

3.4.Yaroqlilik muddatini baholash

3.4.1.Qadoqlangan tovuq go'shtini tayyorlash

P asosiy mushaklari 12 mkm qalinlikdagi PVX plyonkaga o'ralgan past zichlikdagi polietilen tovoqlarga alohida qadoqlangan.（Vaygel,KOEX412,Fabbri guruhi,Vignola,Modena,Italiya) va muzlatgichli shkafda 4±1 daraja haroratda saqlangan (Majolo" Plus 100 Ziravorlar nazoratchisi, Majolo, Kadoneghe, Padova, Italiya). Yorug'lik ta'siri 8 dan o'rnatildi:00 36 Vt lyuminestsent chiroq [54] yordamida 20:00 ga qadar. Saqlash sozlamalari savdo vaqtidagi sovutish sharoitlariga taqlid qilish maqsadida ishlab chiqilgan. Paketlardan tasodifiy tanlab olingan 24,72,120, 180, 216 va 264 soat. so'yish sanasi

3.4.2. Sensorli tahlil

Yangi ko'kraklarning sensorli bahosi [37]bo'yicha, yomon 3- ball tizimi (1=qabul qilinmaydi,2=qabul qilinadi, 3=yaxshi sifat) yordamida amalga oshirildi. Sintetik sezuvchanlik indeksi (SI) [(2 × hid ko'rsatkichi plyus 2 × rang ko'rsatkichi va 1 × tekstura balli)/5] sifatida hisoblab chiqilgan, 1,8 ball buzilgan namunalarni aniqlash uchun chegara vazifasini bajaradi. Sensorli tahlil sakkiz nafar o'qitilgan panelist tomonidan amalga oshirildi.

3.4.3. Yaroqlilik muddati davomida ko'krak go'shtining mikrobiologik tahlili

Mikrobiologik tahlillar [38] tomonidan tavsiflangan protseduralarga muvofiq amalga oshirildi. Ko'krak qafasining asosiy mushaklari (taxminan 2 sm uzunlikdagi × 1 sm chuqurlikdagi × 2 sm kengligida) har bir ko'krak bo'ylab 25 ta namunani olish uchun aseptik tarzda kesilgan. Namunalar 225 ml tamponlangan peptonli suv bilan oshqozon sumkasida aralashtiriladi va tegishli suyultirishdan keyin tahlil qilinadi. DNK ekstraktsiyasi uchun har bir gomogenatdan 1 ml 2 ml Eppendorf naychalarida to'plangan va 1 daqiqa davomida 13500 × g da santrifüj qilingan (Eppendorf santrifüj 5425, Gamburg, Germaniya). Keyin supernatant tashlab yuborildi va pellet -80 darajada muzlatildi. Yaroqlilik muddati davomida mikrob populyatsiyasining dinamikasini quyidagicha tavsiflash uchun bir nechta mikrobial maqsadlar o'rganildi: Jami yashovchan soni (TVC) va umumiy psixotrofik soni (TPC) Plate Count Agar (Biokar Diagnostics, Beauvais, Frantsiya) da baholandi. , va plitalar 30 gradusda 72 soat yoki 4 daraja 10 kun davomida inkubatsiya qilindi. Enterobacteriaceae 24 soat davomida 37 daraja haroratda Violet Red Safro Glyukoza Agar (Biokar Diagnostics, Beauvais, Frantsiya) bilan sanab o'tilgan. Sut kislotasi bakteriyalari (LAB) De Man, Rogosa va Sharpe Agarda (Biokar Diagnostics, Beauvais, Fransiya) anaerobik sharoitda 30 daraja 48 soat davomida tahlil qilindi. Pseudomonas spp. Hisoblash 48 soat davomida 25 gradusda setrimid, fusidin va sefaloridin bilan to'ldirilgan Pseudomonas Agar bazasida baholandi (Oxoid Ltd., Basingstoke, Xempshir, Buyuk Britaniya). H2S hosil qiluvchi bakteriyalarni (taxminan Shewanella spp.) hisoblash temir agarda (Lyngby, Laboratorios Conda, Torrejon de Ardoz, Ispaniya) 25 daraja haroratda 48 soat davomida o'tkazildi. Natijalar log10 CFU/g go'sht sifatida xabar qilinadi.

3.4.4.pH va tomchilab yo'qotish

Muayyan elektrod bilan jihozlangan pH o'lchagich (Portamess 910, Knick, Berlin, Germaniya) (Mettler Toledo, Milano, Italiya) pH qiymatlarini ko'krak qafasining asosiy mushaklariga uch marta qorin tomoniga kiritish orqali o'lchash uchun ishlatilgan. Tomchilashning yo'qolishi sumka usuli yordamida [55] tomonidan taqdim etilgan usulga muvofiq baholandi. Dorsal ko'krak yuzasidan kesilgan taxminan 2,5 sm bo'laklar polietilen qoplarga solingan va bir kechada 2±1 daraja C haroratda to'xtatilgan. Tomchilashning yo'qolishi (foiz) quyidagi tenglama bilan hisoblangan: [(boshlang'ich og'irlik - yakuniy og'irlik)/boshlang'ich og'irlik ].

3.4.5. Ratsionda va ko'krak mushaklarida fenol kontsentratsiyasi

Fenollarni ekstraksiyalash 5 g maydalangan parhez namunasida 50 ml metanol/suv (80/20(o/o) 20 mg/l butillangan gidroksi-toluol (BHT) ni o'z ichiga olgan) eritmasi bilan aralashtirilgan holda o'tkazildi. novda dispersator (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Germaniya) yordamida 7000 aylanish tezligida 1 minut davomida bir hil holga keltirildi, 9327 × g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi va supernatant tiklandi. Jarayon ikki marta takrorlandi va yig'ilgan ekstrakt so‘ng aylanma bug‘latgichda (Buchi Rotavapor, R-210, Shveytsariya) yakuniy hajmi 20 ml ga yetguncha konsentratsiya qilindi. An SPE Bond Elut Jr-C18,1 g patronlar (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, AQSH) ), ilgari 10 ml metanol va 10 ml suv bilan faollashtirilgan, 1 ml suvli ekstrakt bilan yuklangan edi, elutsiya 50 ml metanol bilan amalga oshirildi.Vakuum ostida erituvchi olib tashlanganidan so'ng, fenolik ekstrakt 1 ml eritmada eriydi. metanol/suvdan (50:50 v/v) tashkil topgan va poliviniliden ftorid (PVDF) shpritsli filtr (0,2 mm) orqali filtrlangan. Ekstraktning fenolik birikmalarining sifat va miqdoriy tahlili [31] ga muvofiq amalga oshirildi.

HPLC (Mod. 1100 Agilent Technologies, Santa Clara, CA, AQSH), C18 ustuni bilan jihozlangan (Spherisorb ODS-1(250 mm × 4,6 mm)5 um zarracha hajmi, Waters SpA (Milan, Italiya) tomonidan yetkazib beriladi. Fenolik birikmalar 280 nm da DAD yordamida aniqlandi.Polifenollarning miqdori har bir birikma uchun bitta kalibrlash egri chiziqlari yordamida aniqlandi va natijalar mg kg-1 sifatida ifodalandi.Gidroksitirozol (3,{{) 10}}DHPEA) Cabru SpA (Milan, Italiya), tirozol p-HPEA Merck Life Science Srl (Milan, Italiya) dan va verbaskozid Extrasynthese (Genay, Fransiya) dan olingan. Dialdegid shakli. de-karboksimetil oleuropein aglikon (3,4-DHPEA-EDA) toza zaytun moyidan [56] dan xabar qilingan protsedura bo'yicha olingan.

Jami 10 gramm go'sht 50 ml metanol va suv bilan aralashtiriladi（80/20,o/ø）tarkibida chumoli kislotasi {0}},2 foiz va 20 mg/l BHT mavjud. Eritma novda disperser (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Germaniya) yordamida 7000 aylanish tezligida 1 minut davomida bir hil holga keltirildi, 10 daqiqa davomida 4146 × g da santrifüj qilindi va supernatant tiklandi. Amaliyot ikki marta takrorlandi va ekstraktning ikki alikvoti yig'ildi va metanol aylanuvchi bug'lantiruvchi (Buchi Rotavapor, R-210, Shveytsariya) orqali chiqarildi. Yigirma ml suvli ekstrakt avval 20 ml metanol va 20 ml suv bilan faollashtirilgan SPE Bond Elut HF Mega BE-C18,5g patronlariga (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, AQSH) yuklandi; elutsiya 50 ml metanol bilan amalga oshirildi. Vakuum ostida erituvchi olib tashlanganidan so'ng, fenolik ekstrakt metanol/suvdan tashkil topgan 0,5 ml eritma bilan qaytarildi.（50∶50 o/ø）va poliviniliden ftorid orqali filtrlanadi（PVDF）shprits filtri (0,2 mm). Fenolik ekstraktlarning HPLC tahlillari [56] ga muvofiq yuqorida aytib o'tilgan uskunalar bilan o'tkazildi. Gidroksitirozol 280 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligida va 313 nm emissiyada ishlaydigan floresan detektori (FLD) yordamida aniqlandi. Gidroksitirozolning miqdori kalibrlash egri chizig'i yordamida amalga oshirildi va natijalar ug / kg sifatida ifodalanadi.

3.5. Taxminan tarkibi, pishirish yo'qotilishi va yog' kislotasi tahlili

Taxminan tarkibi, yog 'kislotasi profili va oksidlanish barqarorligi xom (o'ng tomon P. major) va pishirilgan (chap tomon P. maijor) namunalarida baholandi. Eritgandan so'ng, pishirish yo'qotilishi [53] ga muvofiq quyidagi o'zgartirishlar bilan baholandi: Har bir ko'krakning chap yarmi tortildi, vakuum bilan o'ralgan va suv hammomida 80 daraja 45 daqiqa davomida pishirilgan. Shundan so'ng, ko'kraklar 4 darajaga qadar sovutilgan va muzlatgichda (4 daraja) 72 soat davomida qadoqdan chiqarilgunga qadar ushlab turilgan va pishirish yo'qotilishini [(xom go'sht vaznida pishirilgan go'sht og'irligi) / xom go'sht vazni sifatida hisoblash uchun qayta tortilgan. ]×100). Xom va pishirilgan mushak yaxshilab maydalangan (ikki marta 2500 rpm × 10 s, Retsch, Dyusseldorf, Germaniya) va namlik, xom protein va kul [57] tahliliga topshirilgan, xom yog' miqdori esa taqdim etilgan usul yordamida aniqlangan. tomonidan [58]. Qisqacha aytganda, 5 g namunaga 200 ml diklorometan/metanol 1:1 aralashmasi qo‘shildi, 1 daqiqa davomida 11,000/daqiqada gomogenlashtirildi (Ultraturrax T25 Basic, Ika Werke. Staufen, Germaniya) va inkubatsiya qilindi. 60 C pechda (PID tizimi, M{21}}VF, MPN asboblari, Bernaggio, MB, Italiya) 20 daqiqa. Keyinchalik, yana 100 ml diklorometan qo'shildi va gomogenlashdan so'ng (11,{25}}/min 1 daqiqa davomida) namuna filtrlandi (tez filtr qog'ozi) va o'tkazuvchanlikka 100 ml KCl 1 M qo'shildi. Santrifüjdan so'ng (AvantiJ-E, Beckman Coulter, Brea, CA, AQSH) 1000 × g da 30 m uchun 4 daraja, supernatant chiqariladi va organik ekstrakt suvsiz natriy sulfat orqali filtrlanadi. Yog 'foizini gravimetrik aniqlash uchun alikvot (taxminan 10 g) ishlatilgan, qolgan qismi distillangan (Rotavapor"R-210, Büchi, Essen, Germaniya) va suvsiz yog' keyingi tahlil uchun ishlatilgan. Yog' kislotasi metil efirlari (FAMEs) 0,015 g suvsiz yog'ni 1 ml 3 M metanolik HCl (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSH) bilan erigan vintli qopqoqli shisha naychaga [39] tortish orqali tayyorlangan. va 2 soat davomida 60 darajada inkubatsiya qilinadi, so'ngra 1 ml deionlangan suv qo'shiladi va,aralashtirgandan keyin,FAMElar 1 ml n-geksanda qayta tiklandi. SHUNHLAR（1 μL）Olovli ionlanish detektori (250 darajaga o'rnatilgan) va bo'linmaydigan injektor (o'rnatilgan) bilan jihozlangan gaz xromatografi (Shimadzu Italia Srl, model 2014, Milano, Italiya) tomonidan tahlil qilindi. 280 daraja). Kapillyar ustunni (Supelco SP -2560; 100 m × 0,25 mm × 0,2 um) ushlab turadigan termal kamera 8 daqiqa davomida 60 darajada ushlab turildi. Keyin harorat 10 daraja / min tezlikda 1 daqiqa davomida 120 darajaga, keyin esa 2,5 daraja S / min tezlikda 120 dan 240 darajaga ko'tarildi. Yakuniy izoterm 20 daqiqa davomida 240 daraja haroratda saqlanadi. Yog 'kislotalari tashqi standart aralashmasi (37 Component FAME Mix, Supelco, Germaniya) yordamida aniqlangan. Tahlillar ikki nusxada amalga oshirildi.

3.6.Lipidlarning oksidlanishi

Birlamchi oksidlanish birikmalari konjugatsiyalangan dienlar sifatida ultrabinafsha nurlar maydonida spektrofotometrik tahlil orqali Kengash Reg.EU/2015/1833 [59] ilovasida koʻrsatilgan usulning oʻzgartirilgan versiyasidan foydalangan holda aniqlandi. Qisqacha,0.01±0,001 g suvsiz fatvo 10 ml hajmli kolbaga tortiladi va spektrofotometrik siklogeksan bilan belgilangan belgigacha eritiladi. UV/Vis spektrofotometri (Mod. 7800 Jasco UV/VIS, Oklahoma Siti, OK, AQSH) 232 (konjugatsiyalangan dienlar) va 270 nm (konjugatsiyalangan trienlar) da oʻziga xos yoʻq boʻlish qiymatlarini aniqlash uchun ishlatilgan. ma'lumotnoma. Lipid oksidlanishining ikkilamchi mahsulotlari [60] tomonidan taqdim etilgan o'zgartirishlar bilan quyidagi usul bo'yicha aniqlandi: santrifüj trubkasida 8 ml 5% (m/v) trikloroasetik kislota va 5 ml n-geksanning suvli eritmasi. taxminan 2 g gomogenlashtirilgan namunaga qo'shildi. Yuqori tezlikda 30-yillar uchun Ultraturrax bilan homogenlashdan keyin. namuna 4C da 3000 × g da 3 minut santrifüj qilindi (Eppendorf 5810R; Eppendorf, Gamburg, Germaniya) va supernatant olib tashlandi. Namuna tez qog'oz filtri orqali filtrlandi va 2,5 ml filtrat 2,5 ml 0,02 M tiobarbiturik kislotaning suvli eritmasiga qo'shildi va termostatli vannada 95 ° C da 35 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi (mehnat ED {{31} }; Zolbax, Baden-Vyurtemberg, Germaniya). Sovutgandan so'ng, absorbans 532 nm to'lqin uzunligida o'rnatilgan spektrofotometr yordamida olingan. Ma'lumotlar har bir kilogramm go'sht uchun milligramm malondialdegid sifatida ifodalanadi. O'lchovlar pishirilgan va xom tovuq ko'kraklarida ikki nusxada amalga oshirildi.

3.7.DNK ekstraktsiyasi va NGS kutubxonasini tayyorlash

DNK DNeasy PowerSoil DNK izolyatsiyasi to'plami (Qiagen, Hilden, Germaniya) yordamida ekstraksiya qilingan. Ko'krak go'shtining gomogenli granulalari to'plam tomonidan taqdim etilgan 600 uL Lizis buferi bilan muzdan tushirildi. Kloakal tamponlar steril qaychi bilan kesilib, 600uL Lizis buferi va 6 uL 2-merkaptoetanol (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSH)dan iborat mikrotubaga solingan. Naychalar vorteks yordamida 5 daqiqa davomida yaxshilab aralashtirildi va tamponlar olib tashlandi. Ham kloak namunalari, ham ko'krak go'shti pelletlari uchun jami 100 mg steril 0,1 mm boncuklar (BioSpec, Bartlesville, OK, AQSh) qo'shildi va munchoq tegirmoni (TissueLyser, Qiagen, Hilden, Germaniya) buzilishlarni amalga oshirish uchun ishlatilgan. yuqori tezlikda silkitish bosqichlari (30 Gts da 2 × 30 s). Jami 40 uL proteinaz K (Qiagen, Hilden, Germaniya) qo'shildi va 90 daqiqa davomida 56 darajada inkubatsiya qilindi. Ushbu qadamdan so'ng, DNeasy PowerSoil9DNA izolyatsiya to'plami ishlab chiqaruvchisi ko'rsatmalariga amal qilindi. DNK kontsentratsiyasi va tozaligi spektrofotometr (NanoDrop ND-1000, Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSh) yordamida tahlil qilindi.

16S DNK kutubxonasini yaratish uchun ikki bosqichli kuchaytirish usuli qo'llanildi. Namunalar 20-mL reaksiyalarda kuchaytirildi,har biri 5 mL suyultirilgan DNK dan iborat,{0}} Har bir primerdan ,4 uM (1-jadval), 0,25 mM deoksinukleotid (dNTP), 1× Phusion HF buferi va 1 U Phusion yuqori aniqlikdagi DNK polimeraza (New England BioLabs, Inc., Ipswich) , MA, AQSh). PCR 2720 Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, CA, AQSH)da 30 soniya davomida 95 daraja, 60 daraja yoki 49 daraja C 30 soniya, 72 daraja C 45 soniya davomida 25 tsikl bilan o'tkazildi. 72 daraja haroratda 7 daqiqa. Har bir namuna uchun uchta PCR replikatsiyasi amalga oshirildi.

Mahsulotlar SPRIselect Purification Kit (Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, AQSH) yordamida tozalandi va boncuklarni tozalashdan so'ng maqsadli band 1,8 foizli agaroz jeli yordamida tasdiqlandi. Shtrix-kodlar platformaga xos shtrix-kodli primerlar bilan ikkinchi PCR tahlili orqali kiritildi. Har bir 50-uL PCR reaktsiyasi PCR mahsulotini o'z ichiga oladi, har bir primer 0,2 mMof（1-jadval）,0.3 mMdNTP,1×Phusion HFbuferi,va 1UPhusion yuqori aniqlikdagi DNK polimeraza. Yuqorida tavsiflangan PCR profilining o'nta tsikli amalga oshirildi.

PCR mahsulotlari SPRIselect tozalash to'plami (Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, AQSH) yordamida tozalandi. Yakuniy tozalashdan keyin har bir namuna Qubit 2.0 florometr (Invitrogen, Life Technologies, Monza, Italiya) yordamida miqdori aniqlandi. Amplikon kutubxonasi sifati Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, AQSh) yordamida sinovdan o'tkazildi. Kutubxonalar ketma-ketligi Illumina MiSeq platformasi yordamida juftlashtirilgan 300- sikl ishga tushirildi (Macrogen Inc., Seul, Koreya).

4. Xulosalar

24 kun davomida yog 'tegirmonining o'simlik suvini filtrlash va kontsentratsiyalash natijasida olingan tovuqlarning ratsionini fenollar bilan boyitish hayvonlarning o'sishi, ozuqani qayta ishlash tezligi yoki tana go'shti hosildorligidagi farqlar bilan bog'liq emas. Ichak mikrobiotasini o'rganish mikrobial guruhlarning almashinishiga dietaning emas, balki ovqatlanish vaqtining sezilarli ta'sirini ko'rsatdi. Boshqa tomondan, saqlash muddati davomida go'shtning mikrobiota tarkibi fenollar bilan boyitilgan ozuqa iste'mol qilgan tovuqlar namunalarida Pseudomonasning ko'proq o'sishini ko'rsatdi. Nihoyat, lipid oksidlanish jarayonining analitik belgilari (TBARlar va konjugat dienlar) bo'yicha dietalar o'rtasida farqlar kuzatilmadi. Buning o'rniga, qo'shilgan fenollar bilan ozuqa iste'mol qilgan tovuqlardan olingan namunalarning mushak to'qimalarida gidroksitirozol aniqlandi, bu dozaga bog'liq ichakda so'rilishini ko'rsatdi. Oksidlanish jarayoni asosan mushak hujayralarining membrana tuzilishida sodir bo'lganligi sababli, HTning hujayra va hujayradan tashqari bo'linmalarda tarqalishini yaxshiroq tushunish uchun keyingi tadqiqotlar zarur.

Ushbu maqola Molecules 2021, 26, 4307 dan olingan. https://doi.org/10.3390/molecules26144307 https://www.mdpi.com/journal/molecules