Tegishli oziq-ovqat darajasidagi tijorat fermentlari uchun fermentativ gidroliz ishlab chiqilgan

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.2. Kollagen gidrolizat xususiyatlariga ultrafiltratsiya ta'siri

Ultrafiltratsiya jarayoni boshlang'ich gidrolizat tarkibiga va o'rganilayotgan faollikka qarab, kerakli molekulyar kattalikka va yuqori bioaktivlikka ega bo'lgan kichik peptid fraktsiyalarini ishlab chiqarish uchun foydali, sanoat uchun foydali usul bo'lishi mumkin [19]. Liyofilizatsiyadan keyin CH ning eruvchanligi, erkin aminokislotalar tarkibi va unumi ko'rsatilgan (1-jadval). Nazoratning eruvchanligi va erkin aminokislotalar tarkibi mos ravishda 11,95 foiz va 0,79 foizni tashkil etdi. Enzimatik gidroliz va 3 kDa molekulyar og'irlik chegarasi bilan ultrafiltratsiyadan so'ng, CH-alkalazada eng yuqori eruvchanlik (21,17 foiz) va erkin aminokislota tarkibi (14,17 foiz) kuzatildi.<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

Protein gidrolizatlarining o'rtacha molekulyar og'irligi ularning biologik xususiyatlarini belgilovchi muhim omil hisoblanadi [19]. Odatda, MW bilan o'rtacha kasr<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa kollagenni ifodalaydi [20,21]. Nazoratning nisbiy molekulyar og'irligi taqsimoti (oldindan ishlov berish namunasi), CH-alkalaz va CH-alkalaza<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

CHlarda aminokislotalar tarkibi ko'rsatilgan (2-jadval). Turli proteazlar tomonidan CHS turli xil aminokislotalar tarkibiga va antioksidant xususiyatlarga ega edi [23]. Kollagenning aminokislotalar tarkibi glitsin (Gly), prolin (Pro) va glutamik kislotaga (Glu) boy edi. CH ning aminokislotalar tarkibi (CH-alkalaz va CH-alkalaz<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">cistanche poyasiUshbu aminokislotalarning lipidlarda eruvchanligi yoki erkin radikal reaktsiyalari tufayli antioksidant faolligini oshirishi haqida xabar berilgan [1,24].

2.3. Kollagen gidrolizatlarining antioksidant va qarishga qarshi faolligi

CHlarning antioksidant faolligi 2,2'-va-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) (ABTS) radikalni tozalash faolligi tahlili va quvvatni kamaytirish tahlili yordamida o'lchandi. Nazorat qiluvchi (kollagen suspenziyasi), CH-alkalaza va CH-alkalazaning ABTS radikalini tozalash faoliyati<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">cistanche salsa ekstraktiUmuman olganda, peptidlarning antioksidant faolligiga ularning aminokislotalar ketma-ketligi, mavjud bo'lgan erkin aminokislotalar soni, gidroliz darajasi va peptidlarning molekulyar og'irligi ta'sir qilishi mumkin [26,27]. Xususan, past molekulyar og'irlikdagi gidrolizatlar yuqori molekulyar og'irlikdagi gidrolizatlar bilan solishtirganda kuchli antioksidant xususiyatlarga ega edi [2,26].

5-rasm. 2,2'-va-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) (ABTS) radikalini tozalash (A) va kamaytirish quvvati (B) tarkibidagi kollagen gidrolizatlarining (CH) antioksidant faolligi tahlillar. Turli harflar (ac) bilan belgilangan ma'lumotlar turli xil davolash usullariga qarab statistik jihatdan muhim farqlarni ko'rsatadi (p<0.05).>cistanche tubulosa foydalari va yon ta'siriTurli harflar (AD) bilan belgilangan ma'lumotlar konsentratsiyaga qarab statistik jihatdan muhim farqlarni ko'rsatadi (p < 0.05).

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Boshqaruvning kamaytiruvchi kuchlari, CH-alkalaz va CH-alkalaz<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">cistanche tubulosa ekstraktiShunga o'xshash kuzatishlar shuni ko'rsatdiki, xom kollagen gidrolizati ultrafiltrlangan kollagen peptidlariga qaraganda quvvatni kamaytirishda samaraliroq bo'lishi mumkin [30].

Tirozinaza, kollagenaz va elastaz faolligini inhibe qilish ularning in vitro anti-aging ta'sirini tekshirish uchun ishlatilgan [20]. Nazorat qiluvchi CH-alkalaz va CH-alkalazaning tirozinaza, kollagenaz va elastaz faolligini inhibe qilish natijalari.<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastaz (faoliyat yo'q). CH-alkalaz<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastaz (faoliyat yo'q). Boshqa bir tadqiqotda ko'rsatilgan shunga o'xshash tendentsiyalar kollagen gidrolizatlari qarishga qarshi vositalar va kollagenaz inhibitörleri sifatida harakat qilish potentsialini ko'rsatdi [20].

3. Materiallar va usullar

3.1. Cho'chqa terisini oldindan davolash

Cho'chqa terisi mahalliy yetkazib beruvchidan (Seul, Koreya) sotib olindi va cho'chqa terisining barcha ko'rinadigan yog'lari va biriktiruvchi to'qimalari ustara yordamida olib tashlandi. Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan cho'chqa terisi biologik o'zgarishlarni minimallashtirish uchun bitta cho'chqadan olingan. Kesilgan cho'chqa terisi yog' va qoldiqlarni olib tashlash uchun 90 daraja suvda 1 daqiqa davomida to'rt marta yuvilgan. Keyin teri 1 sm kvadrat bo'laklarga bo'linib, to'rt qanotli pichoqli blender (CNHR-26, Bosch, Gonkong, Xitoy) yordamida 3 daqiqa davomida distillangan suvda maydalangan. Cho'chqaning maydalangan terisi Ultra Turrax (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Germaniya) yordamida 5 daqiqa davomida yuqori tezlikda (25,{8}}rpm) gomogenlashtirildi. Taxminan 100 g cho'chqa terisi aralashmasi (yakuniy qattiq tarkibning 50 foizi) vakuumda qadoqlangan va -20 darajada muzlatilgan va 1 oy ichida foydalanish uchun saqlangan.

3.2. Tijorat proteazlar va reagentlar

Alkalaz, Flavorzim, Neytraza va Protameks Novozymes (Bagsvaerd, Daniya) dan sotib olingan. Bromelain va Papain Daesong Sangsadan (Seul, Koreya) sotib olingan. Antioksidant va qarishga qarshi testlar uchun barcha kimyoviy moddalar Sigma-Aldrich Chemical Company (St.Louis, MS, AQSh) dan sotib olingan. Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan barcha boshqa reaktivlar va erituvchilar analitik darajada edi.

3.3. Ferment gidrolizi

Enzimatik gidroliz ishlatiladigan oziq-ovqat darajasidagi tegishli tijorat fermentlari uchun ishlab chiqilgan (ishlab chiqaruvchining tavsiyalari asosida; 4-jadval). Tayyorlangan cho'chqa terisi aralashmasi distillangan suv bilan 5 foiz yakuniy qattiq tarkibga qadar seyreltildi. Ushbu konsentratsiya past viskozitesi tufayli oqim harakatini ta'minlash uchun tanlangan. 5 foizli cho'chqa terisi aralashmasi kollagen suspenziyasi (yoki nazorati) deb nomlangan. Kollagen suspenziyasi reaktorlarda oziq-ovqat uchun moʻljallangan oltita tijorat fermenti yordamida ferment: substrat nisbati 1:100 boʻlgan holda gidrolizlandi. Namuna alikvotlari (5 ml) 1, 3,6, 12 va 24 soatlik gidrolizda olingan va fermentni faolsizlantirish uchun darhol 100 daraja 10 daqiqa davomida qizdirilgan, so'ngra muzli suv yordamida 0 darajaga sovutilgan. Namuna olish vaqtida pH mos ravishda 1 M NaOH yordamida nazorat qilindi. Sovutgandan so'ng, namunalar 4000 × g da 15 daqiqa davomida santrifüj qilindi va supernatant (kollagen gidrolizat; CH) yig'ildi. CH 3 kDa molekulyar og'irlik chegarasi (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, Katalog No. UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, AQSh) yordamida ultrafiltratsiya orqali yanada konsentratsiya qilindi. MA, AQSh) 60 psi azot gazida, 20 daraja.cistanche tubulosa sharhlariTayyorlangan CH muzlatilgan quritilgan va tahlilga qadar havo o'tkazmaydigan idishlarda 20 daraja haroratda saqlanadi.

3.4. PH, oqsilni qayta tiklash, eruvchan bo'lmagan aminokislotalar tarkibi va ishlab chiqarish rentabelligini aniqlash Namunalarning pH darajasi (nazorat va CHs) pH o'lchagich yordamida aniqlandi (Model S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, AQSH). Proteinning qayta tiklanishi yoki eruvchanligi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MS, AQSh) muvofiq, standart sifatida sarum albumini bilan bitsinxonin kislotasi (BCA) oqsil tahlilidan foydalangan holda protein tarkibini baholash orqali aniqlandi. Erkin aminokislota tarkibi standart sifatida L-leysindan foydalangan holda ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) muvofiq 2,4,{6}}trinitrobenzol sulfonik kislota (TNBSA) tahlili orqali aniqlandi. Ishlab chiqarish maydonini hisoblash uchun ho'l va quruq og'irliklar o'lchandi.

3.5. Molekulyar og'irlikning taqsimlanishi

3.5.1.Natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforez (SDS-PAGE)

Namunalarning SDS-PAGE namunalari (nazorat va CHs) avval xabar qilingan usul [10] bo'yicha o'lchandi. Namunalar 8 M karbamid bilan suyultirildi (oxirgi protein kontsentratsiyasi, 4 mg / ml). Har bir namuna KOMA Biotech Inc kompaniyasidan KTG 020 namuna buferining bir qismi (10 foiz glitserin, 2 foiz SDS, 0,003 foiz bromofenol ko‘k, 5 foiz merkaptoetanol va 63 mM Tris-HCl, pH6,8) bilan aralashtirildi. ., （Seul, Koreya） va 2 daqiqa qaynatiladi. Namuna aralashmasi （20 mkl） EzWayTM PAG 6 foizli akrilamid jellariga (KOMA Biotech Inc., Seul, Koreya) yuklandi. Elektroforezdan so'ng, jel mahkamlangan, bo'yalgan va bo'yalgan. Molekulyar og'irliklar 10 dan 210 kDa gacha bo'lgan keng diapazonli molekulyar og'irlik standartlari yordamida aniqlandi.

3.5.2. Jel o'tkazuvchanlik xromatografiyasi (GPC)

Namunalarning molekulyar og'irligi taqsimoti ilgari xabar qilingan usul bo'yicha aniqlandi [3]. Jel o‘tkazuvchanlik xromatografiyasi (GPC) uchta Ultrahydrogel TM 120 ustuni bilan jihozlangan YL91{10}}0 yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) tizimi (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Koreya) yordamida amalga oshirildi. 7,8×3000 mm) Uotersdan (Milford, MA, AQSh). Mobil faza 1,0 ml/min oqim tezligida distillangan/deionizatsiyalangan suv edi va kollagen peptidlarining molekulyar og'irligi taqsimoti YL 9100 sinishi indeksi detektori yordamida 40 gradusda kuzatildi. Molekulyar ogʻirlik standartlari toʻplami (106-67,500 Da, Polimer standartlar xizmati, Mayns, Germaniya) standart sifatida xizmat qildi.

3.6.Amin0 Kislota tarkibi

Namunalarning aminokislotalar tarkibi Ultimate 3000 HPLC tizimida {0}}ftorenil etoksi karbonil (FMOC)-xlorid va o-ftalik dialdegid (OPA) bilan derivatizatsiya orqali tahlil qilindi ( Dionex, Idstein, Germaniya)ikkita detektor (flüoresans detektori va UV detektori) va VDSpher 100 C18-E （4,6 mm × 150 mm, zarracha hajmi 3,5 mkm, VDS Optilab, Berlin, Germaniya) bilan jihozlangan. In'ektsiya hajmi 1,0 litrni tashkil etdi va mobil faza ikkita eluentdan iborat edi: ikki asosli 40 mM natriy fosfat (pH 7) va 45 foiz (o/v) asetonitril/45 foiz (h/v) metanol eritmasi. UV detektori va floresans detektorini ulash orqali ultrabinafsha nurlar 338 nm da, OPA hosilasi 450 nm emissiya to'lqin uzunligida va 340 nm qo'zg'alish to'lqin uzunligida, FMOC hosilasi emissiya to'lqinining 305 nm va emissiyasi 6 nm da aniqlandi. qo'zg'alish to'lqin uzunligining nm. Kalibrlash uchun aminokislotalar aralashmasi (har bir aminokislota uchun 1,0 nmol mL-I) ishlatilgan.

Bu erda Atotalamino kislotasi 6 M HCl (130 darajada 24 soat davomida) yordamida gidrolizdan so'ng tarkib bo'lgan va Afree aminokislotasi distillangan suvda erigandan keyin tarkib edi.

3.7. Antioksidant faolligini baholash

3.7.1.2,2'-Azino-bis-(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) (ABTS)Radikallarni tozalash faoliyati

CH ning ABTS radikalni tozalash faolligi ilgari xabar qilingan usul bo'yicha o'lchandi [20]. ABTS radikal kationi ABTS eritmasini (7.{7}} mM) kaliy persulfat (2.45 mM) bilan aralashtirish va hosil boʻlgan aralashmani qorongʻuda xona haroratida tun davomida inkubatsiya qilish orqali hosil boʻldi. ABTS radikal eritmasi 5.0 mM fosfat-buferli tuzli eritmada (pH7.4) 734 nm da 0.70±0.02 absorbans darajasiga suyultirildi. Bir ml suyultirilgan ABTS radikal eritmasi har bir namunadan 1 ml aralashtiriladi. O'n daqiqadan so'ng, namuna (namuna, namuna bilan) va nazorat (namunasiz nazorat) absorbanslari 734 nm da o'lchandi. ABTSning radikallarni tozalash faolligi (foiz) quyidagicha hisoblangan:

3.7.2.Quvvatni kamaytirish

CH ning kamaytiruvchi kuchi ilgari xabar qilingan usul bo'yicha o'lchandi [20]. Har bir namunadan bir ml 1 ml 0,2 M fosfat buferi (pH6,6) va 1 ml 1% kaliy ferrisiyanid bilan aralashtirildi. Aralash 20 daqiqa davomida 5{16}} inkubatsiya qilindi va keyin 1 ml 10% trikloroatsetik kislota qo'shildi. Ushbu inkubatsiya aralashmasidan 2 ml alikvot 2 ml distillangan suv va 0,4 ml 0,1% temir xlorid bilan aralashtiriladi. 10 daqiqadan so'ng, hosil bo'lgan eritmaning absorbsiyasi spektrofotometrda 700 nm da o'lchandi (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejon, Koreya) Reaksiya aralashmasining ortishi (700 nm) pasaytirish kuchini ko'rsatishi uchun ko'rib chiqildi.

3.8. Qarishga qarshi ta'sirni baholash

3.8.1. Tirozinaza faolligini inhibe qilish

Tirozinaza inhibisyonu ilgari tavsiflangan usul bilan aniqlandi [20]. 70 mL 0,1 M fosfat tampon （pH6,8）, 30uLof qo'ziqorin tirozinazasi（167U/ml ni o'z ichiga olgan dastlabki aralashma eritmasi; Sigma-Aldrich, AQSh) va 20 L namuna 5 daqiqa davomida 30 darajada inkubatsiya qilindi. Keyin fermentativ reaktsiyani boshlash uchun taxminan 100 mkl 3,{14}}digidroksifenil-L-alanin (L-DOPA) qo'shildi. L-DOPA hosil bo'lishini kuzatish uchun 20 daqiqa davomida 492 nm da so'rilish o'lchandi. Askorbin kislotasi (1 mg/ml) musbat nazorat sifatida xizmat qildi, u taqqoslash uchun ishlatilgan. Inhibisyon nisbati quyidagicha hisoblangan:

bu erda A namunasiz tirozinaza bilan aralashma edi; B namunasiz va tirozinazsiz aralashma edi; C namuna va tirozinaza bilan aralashmasi, D esa namunali, ammo tirozinazasiz aralashma edi.

3.8.2.Kollagenaza faolligini inhibe qilish

Kollagenaza inhibisyonu yuqorida tavsiflangan usul bilan aniqlandi [20]. Qisqacha aytganda, tarkibida 1{18}} mM kaltsiy xlorid va 400 mM natriy xlorid bo'lgan 50 mM trisin buferi (pH7,5) tayyorlandi. Keyin, 50 mLof 1,0 mM N-[3-(2-furil) akriloil]-Leu-Gly-Pro-Ala eritmasi va 0,2 mg/ml kollagenaz (Clostridium histolyticumdan, IA turi, 0.{ {19}} FALGPA U/mg qattiq; Sigma-Aldrich, AQSH) namunalar mavjudligi va yoʻqligida qoʻshilgan. Reaksiya limon kislotasi (6 foiz) qo'shilishi bilan to'xtatildi. Reaksiya aralashmasi etil asetat qo'shib ajratildi. Supernatantning absorbsiyasi 345 nm da o'lchandi. Askorbin kislotasi (1 mg/ml) ijobiy nazorat bo'lib xizmat qildi va taqqoslash uchun ishlatilgan. Inhibisyonning foizi quyidagicha hisoblanadi:

bu erda A namunasiz kollagenaz bilan aralashma edi; B namunasiz va kollagenazsiz aralashma edi; C namuna va kollagenaza bilan aralashmasi, D esa namunali, lekin kollagenazsiz aralashma edi.

3.8.3.Elastaza faolligini inhibe qilish

Elastazni inhibe qilish avval tavsiflangan usul bilan aniqlandi [20]. N-suksinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) substrat sifatida xizmat qildi va p-nitroanilinning chiqarilishi 2{{20}} davomida kuzatildi. IV turdagi cho'chqa pankreatik elastazasi (PPE) ning bir qismi (1 ug) 1 ml 0.2 M Tris-HCl buferida (pH 8.0) eritildi. reaktsiya aralashmasida 0,2 M Tris-HCl buferi (pH8,0), 1 ppm PPE, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA, namuna va yuqorida aytib o'tilgan substrat mavjud. 214 nm da yutilish o'lchandi. Taqqoslash uchun askorbin kislotasi (1 mg/ml) ijobiy nazorat sifatida xizmat qildi. Inhibisyon nisbati quyidagicha hisoblangan:

bu erda A elastazli va namunasiz aralashma edi; B namunasiz va elastazsiz aralashma edi; C namunali va elastazli aralashma edi, D esa namunali, ammo elastazsiz aralashma edi.

3.9.Statistik tahlil

Ma'lumotlar o'rtacha±standart og'ish (SD) sifatida taqdim etiladi. Guruhlar orasidagi farqlarning ahamiyati bir nechta taqqoslash va dispersiya tahlili (ANOVA), so'ngra Tukey halol muhim farq (HSD) testi yordamida baholandi. p qiymati 0.05 dan kichik bo'lgan farqlar statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi.

4. Xulosalar

Ushbu tadqiqotda kollagen gidrolizatlari, funktsional oziq-ovqat tarkibiy qismi, fermentativ gidroliz, so'ngra ultrafiltratsiya va tozalash orqali muvaffaqiyatli ishlab chiqarilgan. Turli xil savdo proteazlar to'g'ri kollagen gidrolizatlarini ishlab chiqarishda potentsial foydaliligi uchun sinovdan o'tkazildi. Alkalaz tomonidan gidrolizlangan CHS eng samarali gidrolizlangan CH edi va ultrafiltratsiyadan so'ng tozalash past molekulyar og'irlikdagi faol peptidlarni hosil qilishda samarali bo'ldi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CHs mukammal antioksidant va kollagenazni inhibe qilish faolligini ko'rsatdi. Shu sababli, ushbu tadqiqot natijasida olingan CHs oziq-ovqat, kosmetika yoki farmatsevtika sanoatida antioksidlovchi va qarishga qarshi xususiyatlarga ega bo'lgan tabiiy qo'shimcha sifatida ishlatilishi mumkin. Inson terisidagi faol peptidlarning qarish faolligini in vivo baholashni o'z ichiga olgan keyingi tadqiqotlar foydali bo'lishi mumkin.

Ushbu maqola Molecules 2019, 24, 1104 dan olingan; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules