Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol mikrogliya faollashuvini modulyatsiya qilish orqali AD defitsitlarini qutqaradi, ammo oksidlovchi stressni emas
Jul 24, 2023
Abstrakt: Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (EK100) Tayvanda oʻziga xos dorivor qoʻziqorin Antrodia kamforatidan ajratib olingan boʻlib, u oʻzining salomatlikni mustahkamlashi va antibakterial taʼsiri bilan mashhur. xalq tabobatida qarish ta'siri. Altsgeymer kasalligi (AD) qarilik bilan bog'liq bo'lgan asosiy kasallikdir. Biz ergosta-7,9(11),22-trien-3 -olning AD belgilari uchun samaradorligi va potentsial mexanizmini tekshirdik. AD modeli sifatida inson amiloidi- (A) ning pan-neyronal haddan tashqari ko'payishi bilan drozofila ishlatilgan. Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol-ning hayot davomiyligi, vosita funktsiyasi, o'rganish, xotira, oksidlovchi stress va mikrogliya faollashuvi va yallig'lanishining biomarkerlarini solishtirdik. davolangan guruhdan davolanmagan nazorat guruhiga. Ergosta-7,9(11), 22-trien{26}}ol davolash AD modelining ishlash muddatini, motor funktsiyasini, oʻrganishini va xotirasini ishlov berilmagan nazoratga nisbatan samarali yaxshiladi. Mikrogliya faollashuvi va yallig'lanishning biomarkerlari kamaydi, shu bilan birga hamma joyda lipid peroksidatsiyasi, katalaza faolligi va superoksid dismutaza faolligi o'zgarishsiz qoldi. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, ergosta-7,9(11),22-trien{31}}ol oksidlovchi stressni emas, balki mikrogliya faollashuvini modulyatsiya qilish orqali AD defitsitlarini qutqaradi.
Sistanx glikozidi, shuningdek, yurak va jigar to'qimalarida SOD faolligini oshirishi va har bir to'qimalarda lipofusin va MDA tarkibini sezilarli darajada kamaytirishi, turli xil reaktiv kislorod radikallarini (OH-, H₂O₂ va boshqalar) samarali tozalash va DNKning shikastlanishidan himoya qilishi mumkin. OH-radikallar tomonidan. Cistanche feniletanoid glikozidlari erkin radikallarni kuchli tozalash qobiliyatiga ega, S vitaminiga qaraganda yuqori darajada kamaytirish qobiliyatiga ega, sperma suspenziyasida SOD faolligini yaxshilaydi, MDA tarkibini kamaytiradi va sperma membranasi funktsiyasiga ma'lum bir himoya ta'siriga ega. Cistanche polisaxaridlari D-galaktoza sabab bo'lgan eksperimental qarigan sichqonlarning eritrotsitlari va o'pka to'qimalarida SOD va GSH-Px faolligini oshirishi, shuningdek o'pka va plazmadagi MDA va kollagen miqdorini kamaytirishi va elastin miqdorini oshirishi mumkin. DPPHga yaxshi tozalash ta'siri, qarigan sichqonlarda gipoksiya vaqtini uzaytirish, sarumdagi SOD faolligini yaxshilash va eksperimental qarigan sichqonlarda o'pkaning fiziologik degeneratsiyasini kechiktirish Hujayra morfologik degeneratsiyasi bilan tajribalar Cistanche yaxshi antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi. va terining qarish kasalliklarini oldini olish va davolash uchun dori bo'lish potentsialiga ega. Shu bilan birga, Cistanchedagi echinacoside DPPH erkin radikallarini tozalashning muhim qobiliyatiga ega va reaktiv kislorod turlarini tozalash va erkin radikallar keltirib chiqaradigan kollagen degradatsiyasini oldini olish qobiliyatiga ega, shuningdek, timin erkin radikal anionining shikastlanishiga yaxshi ta'sir ko'rsatadi.
Cistanche planshetlarining afzalliklarini bosing
【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
Kalit so'zlar: Altsgeymer kasalligi; drozofila; EK100; ergosta-7,9(11),22-sinab ko'rgan-3 -ol
1.Kirish
Antrodia camphorata Tayvanga xos dorivor qo'ziqorin bo'lib, 19-asrda Tayvan tashqi savdosi uchun muhim iqtisodiy ekin bo'lgan [1]. Tayvanning birinchi tarixi kitobi "Tâi-uan Thong-su" (so'zma-so'z Tayvanning umumiy tarixi) Antrodiya kamforatining mahalliy tibbiyotda qo'llanilishi, jumladan patogenlarni yo'q qilish, "sog'liqni yaxshilash", "qonni tetiklash", "spirtli ichimliklarni detoksifikatsiya qilish", " jigarni himoya qilish" va "qarishga qarshi" [2-4]. Biz qarish tufayli global aholi salomatligi muammosiga duch kelganimiz sababli [5], qarishga qarshi bilimlardan foydalanish uchun mahalliy tibbiyotni ilmiy o'rganish juda muhimdir.
Makula degeneratsiyasi, ateroskleroz, saraton va insult kabi qarish bilan bog'liq asosiy kasalliklar orasida Altsgeymer kasalligi (AD) o'zining patologik mexanizmi tufayli yorilishi qiyin yong'oq hisoblanadi. AD uchun kasallikni o'zgartiruvchi samarali davolash hali ham mavjud emas [6]. ADning hozirgi patologik gipotezalariga xolin atsetiltransferazasining pasayishi, glutamatning eksitotoksisitesi, amiloid beta (A) agregatsiyasi, tau fosforillanishi, miya insulin qarshiligi [7] va ichak mikrobiomidagi oʻzgarishlar [8] kiradi, lekin ular bilan cheklanmaydi. Shunga qaramay, ADni qo'zg'atuvchi sabablar qanday bo'lishidan qat'i nazar, oksidlovchi stress va yallig'lanish mikrogliyalarining faollashishi AD neyrodejeneratsiyasi bilan birga keladigan umumiy belgilardir [9,10]. Qizig'i shundaki, neyroinflamasyon va oksidlovchi stress ADda kuzatiladigan va AD patologiyasida faraz qilingan o'zaro bog'liq hodisalardir. Bir tomondan, A cho'kmasining keksa plaklari yallig'lanish reaktsiyalarini, mikrogliya faollashishini, sitokinlarni chiqarishni va astrositozni qo'zg'atadi, bu esa neyronlarning progressiv shikastlanishi va nihoyat, kognitiv disfunktsiyalar kabi noxush oqibatlarga olib keladi. Immunitet reaktsiyalarining faollashishi dastlab A bilan bostirib kiruvchi patogenlar bilan kurashishi yoki ortiqcha A konlarini yo'q qilishi mumkin; ammo bu jarayon muqarrar ravishda reaktiv kislorod turlarini (ROS) hosil qiladi, bu esa mikro muhitda neyronlarning shikastlanishiga olib kelishi mumkin. Boshqa tomondan, A yallig'lanishdan mustaqil ravishda ROSga olib kelishi mumkin. Masalan, A AD ning mitoxondriyal membranalarida o'limdan keyin topilgan va mitoxondriyaga kirib, elektron tashish zanjirining (ETC) buzilishiga olib kelishi va natijada ROS hosil bo'lishiga olib kelishi mumkin. Ko'tarilgan ROS, o'z navbatida, sitokinlarning chiqarilishini va yallig'lanishni boshlashi mumkin [7,9,10]. Shuning uchun antioksidlovchi va yallig'lanishga qarshi molekulalar AD uchun potentsial terapevtik bo'lishi mumkin.
Antrodia kofurati, ayniqsa uning suv ostidagi to'liq bulondan ajratilgan birikmalaridan biri ergosta-7,9(11),22-trien{6}}ol (shuningdek, EK100 nomi bilan ham tanilgan), chuqur antioksidant va antioksidlovchi ta'sir ko'rsatdi. -yallig'lanish faoliyati [11-13]. Bundan tashqari, Chang va boshqalar. [14] Antrodia kamforatining fermentlangan mitseliyasidan ajratilgan boshqa birikma bo'lgan antrokinonol astroglioz va oksidlanish stressini kamaytiradigan AD sichqoncha modelida o'rganish va xotirani yaxshilashini ko'rsatdi. Biroq, astrogliozning kamayishi va antrokinonol bilan davolashda oksidlovchi stress o'rtasidagi sababiy bog'liqlik tasdiqlanmadi va oksidlovchi stressning pasayishi vositachi omil sifatida qabul qilindi [14]. EK100 ning xavfsizligi avvalroq Iqtisodiy hamkorlik va taraqqiyot tashkilotining (OECD) 407 yo'riqnomasiga binoan kuniga 10 va 20 mg/kg sichqonlar modelida sinovdan o'tkazilgan [15]. Shuning uchun, biz ushbu tadqiqotda meva chivinlari uchun bepul oziqlantirishning taxminan ekvivalent konsentratsiyasini qabul qildik.
A 42 haddan tashqari ekspressiyasining meva chivinlari (Drosophila melanogaster) modeli yaxshi tasdiqlangan AD hayvonlar modelidir [16], xarakterli AD belgilari, jumladan, umr ko'rish davomiyligi, o'rganish va motor etishmovchiligi [17], oksidlovchi stress [18] va mikroglial faollashuv. [19]. Drosophila melanogasterda ADni modellashtirish muammolari Drosophila'da BACE faolligi va gender farqlarini o'z ichiga oladi, bu erkaklar fayllarida jiddiyroq alomatlarni ko'rsatadi. Bular inson ADda kuzatilmaydi [20]. Shuning uchun biz AD modeliga chivinlarni ifodalovchi A 42 peptidini qabul qildik, bu erda A 42 ishlab chiqarish BACE faolligini talab qilmaydi. Ushbu tadqiqotda biz EK100 AD belgilarini yaxshilaydimi yoki yo'qmi, va eng muhimi, oksidlovchi stress va astrogliozning ikkala modulyatsiyasi ADni yaxshilash uchun muhimmi yoki yo'qligini tekshirdik.
2. Natijalar
2.1. Ergosta-7,9(11),22-trien{6}}ol AD Drosophilaning omon qolishi va toqqa chiqishini qutqardi
AD diagnostikasi o'rtacha umr ko'rishning qisqarishi bilan bog'liq [21] va AD bilan og'rigan bemorlarning deyarli yarmi faollik buzilishidan aziyat chekmoqda [22]. Shuning uchun biz Antrodia camphorata ekstrakti ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (EK100) hayvonlarning yashash va toqqa chiqish qobiliyatini yaxshilaydimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik. AD Drosophila modeli. Biz 125 yoki 250 mkg/ml ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol bilan davolash AD Drosophilaning omon qolishini sezilarli darajada yaxshilaganini aniqladik (p <0,01) (rasm). 1A va qo'shimcha jadval S1), lekin bu faqat yuqori doza (250 mkg / ml) AD Drosophila ko'tarilishini yaxshiladi (1B-rasm). Omon qolish va harakatchanlik etishmovchiligi AD ning klinik belgilari bo'lganligi sababli, keyingi tadqiqotlarda ikkala simptomni yaxshilagan 250 mkg / ml kontsentratsiya ishlatilgan.
2.2. Ergosta-7,9(11),22-trien{6}}ol qutqarilgan o'rganish va AD Drosophilaning bir soatlik xotirasi
Keyinchalik, ergosta{0}},9(11),22-trien{4}}ol davolash ADning oʻziga xos belgisi boʻlgan oʻrganish va xotira nuqsonlarini yaxshilaydimi yoki yoʻqligini tekshirdik. AD chivinlari ergosta- 7,9(11),22-trien{9}}ol bilan 250 ug/ml 14 kun davomida davolandi va o'rganish va xotira sinovlaridan o'tkazildi. T-labirint. Shakl 2A da ko'rsatilganidek, yovvoyi turdagi boshqaruv (AD(-)/EK(-)) bilan solishtirganda, AD boshqaruvining o'rganish qobiliyati (AD( plus)/EK(-)) sezilarli darajada kamaydi (p <0,01), shu bilan birga ergosta-7,9(11),22-trien{22}}ol davolash ADni o'rganish qobiliyatini sezilarli darajada yaxshilagan (p <0,05). Bundan tashqari, ergosta-7,9(11), 22-trien{29}}ol davolash ham ADning pasaygan bir soatlik xotirasini yaxshilagan (2B-rasm).
2.3. Ergosta-7,9(11),22-ad Drosophila-da modulyatsiyalangan mikroglial faollashtirishni-3 -sinab ko'rdi
Keyinchalik, biz ergosta-7,9(11),22-trien{4}}ol bilan davolash ADda mikroglial faollashuvni kamaytiradimi yoki yo'qligini tekshirdik. ADda faollashtirilgan mikrogliya fagotsitoz va neyrodegeneratsiya bilan birga keladi [23]. Drosophila'da mikroglia hujayralarini yutish belgisi va shuning uchun mikroglial faollashuv belgisi draper (Drpr) va quyi oqim CED [24] ifodasidir. Ergosta-7,9(11),22-trien{11}}ol davolashdan so'ng, AD pashshalari yo'q qilindi va RT-qPCR uchun pashsha boshidan RNK olindi. 3A-rasmda ko'rsatilganidek, har ikkala Drpr ergosta-7,9(11),22-trien{19}}ol bilan davolash qilingan AD Drosophila da davolanmagan AD bilan solishtirganda sezilarli darajada pasaygan. Bu shuni anglatadiki, ergosta-7,9(11),22-trien{25}}ol AD Drosophilada mikroglial faollashuvni kamaytirdi. Bundan tashqari, ergosta-7,9(11), 22-trien{30}}ol davosi yallig'lanish bilan bog'liq genlarning pastga regulyatsiyasida aniqlanganidek, markaziy asab tizimining yallig'lanishini ham pasaytirgan (3B-rasm). .
2.4. Ergosta-7,9(11),22-sinab ko'rgan-3 -ol AD Drosophilada hamma joyda oksidlovchi stressni modulyatsiya qilmadi
Keyinchalik, biz ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol uchun ADni qutqarish uchun hamma joyda, ya'ni butun tanada oksidlanish stressining modulyatsiyasi zarurligini tekshirdik. Ergosta-7,9(11),22-sinab ko'rilgan{9}}davolash lipid peroksidatsiyasini (4A-rasm), katalaza faolligini (4B-rasm), superoksid dismutaza faolligini (4C-rasm) o'zgartirmadi. yoki oksidlovchi stress bilan bog'liq genlarning ifodasi (rasm
3. Munozara
Ushbu tadqiqot ergosta-7,9(11),22- Drosophila yordamida AD simptomlarini o'zgartirish uchun Antrodia kamforatidan olingan ekstrakt-3 -olning samaradorligi va mumkin bo'lgan asosiy mexanizmi haqida xabar beradi. inson-A haddan tashqari ifodalangan model. Ergosta-7,9(11),22-trien{10}}ol o'rganish va xotirani samarali yaxshiladi va AD bilan og'rigan bemorlarning umrini uzaytirdi. Bundan tashqari, mikrogliya faollashuvi va yallig'lanishning biomarkerlari kamaydi, shu bilan birga hamma joyda oksidlovchi stress o'zgarmadi.
ADda oksidlovchi stressning ko'plab manbalari mavjud, ular orasida tug'ma immunitetning faollashuvi, masalan, A to'planishi, mitoxondriyalarning A tomonidan buzilishi, giperfosforlangan tau va metallarning malmetabolizmi ham manbalardir [25]. Yallig'lanish va oksidlovchi stress o'zaro bir-birini qo'zg'atishi mumkin bo'lsa-da, biz ularning sinxron o'zgarishlarini faqat oksidlovchi stressning boshqa manbalari doimiy bo'lgan sharoitlarda sodir bo'ladi deb taxmin qilishimiz mumkin. Biroq, bu tadqiqotda bunday emas. Tug'ma immunitetning pasayishi, ayniqsa mikrogliya faollashuvi, ayni paytda, A ning tozalanishiga hissasini susaytiradi, bu esa A to'planishiga olib kelishi mumkin. Ajablanarlisi shundaki, to'planishning o'zi turli yo'llar bilan oksidlovchi stressni keltirib chiqaradi. Shunday qilib, EK1000 ning mikroglial faollashuvi va yallig'lanish reaktsiyalarining kamayishi qisman neyronlarni maqsaddan tashqari immunitet hujumlaridan himoya qilishi mumkin, ammo A klirensining susayishi narxini to'laydi. Shunday qilib, ushbu tadqiqot natijasi hech bo'lmaganda AD Drosophila modelida mikroglia-maqsadli strategiyaning cheklanishini aks ettirishi mumkin.
Mikroglia vositachiligida tug'ma immunitet tizimi neyrodegenerativ kasalliklarda, ayniqsa ADda ikki qirrali qilich sifatida tavsiflanadi [26,27]. Faollashtirilgan mikroglia A kabi toksik patogenlarni olib tashlashga harakat qiladi, lekin muqarrar ravishda mikro muhitda neyronlarning shikastlanishiga olib keladi. 35 kun ichida 250 mkg/ml EK100 ning ustunligi mikrogliya faollashuvini pasaytirish strategiyasi, hech bo'lmaganda, meva chivinlari AD modelida patologik bosqich bilan chegaralanganligini ko'rsatishi mumkin. Bundan tashqari, mikroglial faollashuv va yallig'lanish reaktsiyasi uchun biomarkerlarning sezilarli darajada pasayishi omon qolishning xuddi shunday sezilarli yaxshilanishiga olib kelmadi va CNS funktsiyasi qisman mikrogliyaning ikki qirrali qilich xususiyati bilan izohlanishi mumkin. Bu shuni anglatadiki, mikrogliya faollashuvi AD rivojlanishining yagona va hukmron omili emas. Mikroglial faollashuvning pasayishi, shuningdek, meva chivinlari modelida haddan tashqari ifodalangan A ning degradatsiyasi qisman o'chirilganligini anglatadi, bu 35 va 52 kunlar orasida yuqori EK100 konsentratsiyasi uchun yuqori o'limni ham tushuntirishi mumkin.
Antrodia kamforatining yana bir ekstrakti bo'lgan antrokinonol AD sichqonlarini davolashda samaradorligi haqida xabar berilgan, buning uchun oksidlovchi stressni kamaytirish vositachi omil sifatida qabul qilingan [14]. Demak, bu antrokinonol va ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol AD simptomlarini mos ravishda oksidlovchi stress vositachiligida yoki yo'q holda mustaqil yo'llar orqali yaxshilashini anglatishi mumkin. Demak, antrokinonol va ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol bilan birgalikda davolash ADni yaxshilashga sinergetik ta'sir ko'rsatadimi yoki yo'qligini tekshirish qiziq.
AD ning dastlabki bosqichida preparatni loyihalashda asosiy e'tibor A cho'kmasini yo'q qilishdir (masalan, yaqinda tasdiqlangan monoklonal antikor adukanumabda [28], uning minimal klinik foydasi va ikki fazali III klinik sinovlaridan birida samarasizligi haqidagi bahslarga qaramay. [29]), yoki A ning mikroglial o'zlashtirilishini oshirishga urinishlar [30-32]. Biroq, ADning o'rtacha yoki ilg'or bosqichlari uchun mikrogliyaning haddan tashqari faollashishi neyrodegeneratsiyani [33] kuchaytiradi va shuning uchun muqobil terapevtik strategiyalar talab qilinadi.
4. Materiallar va usullar
4.1. Fly Stokga texnik xizmat ko'rsatish va umr ko'rish muddatini o'lchash
A transgenik Drosophila shtammi H29.3/CyO [16] dan olingan va olti avlod davomida w(CS10) bilan kesib o'tgan. Pan-neyron haydovchi elav-GAL4c155 liniyasi olti avlod uchun w(CS10) bilan kesib o'tdi. Oq ko'z w1118 chizig'i (Bloomington Drosophila Stock Center #3605) Canton S chizig'idan (Bloomington Drosophila Stock Center # 64349) 10 marta (w (CS10)) kesib o'tgan standart zaxira sifatida ishlatilgan. Pan-neyron drayveri elav-GAL4c155 liniyasi Bloomington Drosophila Stock Center (#458) dan olingan. Eksperimental chivinlarning genotipi, ya'ni AD modeli [elav; H29.3/ plus ], bu F1 avlodidan CyO belgisisiz tanlangan. Chivinlar makkajo'xori uni standart muhitida 25 ◦C haroratda 12 soatlik yorug'lik-qorong'i tsiklda saqlangan. T-labirint uchun paydo bo'lgan [elav; H29.3/ plus ] pashshalar to'plangan (ikkala jins aralashgan va bokira bo'lmagan) va paydo bo'lganidan keyin d14 gacha EK100 bilan ishlov berilgan yoki bo'lmagan holda ekilgan. Omon qolish, toqqa chiqish va RT-qPCR uchun faqat erkak chivinlar ishlatilgan. RNK namunalari paydo bo'lgandan keyin d30 da to'plangan, qachonki umr ko'rish davomiyligi ham, ko'tarilish egri chiziqlari ham ishlov berilmagan AD modeliga nisbatan sezilarli ajralishni ko'rsatgan.
Hayot davomiyligini tahlil qilishda yigirma o'ttiz chivin CS bilan yoki bo'lmasdan oziq-ovqat flakonida ko'tarildi; har bir davolash uchun kamida to'rt flakon tayyorlangan. Oziq-ovqat flakonlari har 2-3 kunda almashtirilgan va o'sha paytda o'lik chivinlar hisoblangan. Har bir sinov uchun kamida uchta takrorlash o'tkazildi. Omon qolish ulushi tirik chivinlar sonining sinov boshida chivinlarning umumiy soniga bo'linishi sifatida aniqlanadi.
4.2. Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol (Ek100)
Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -ol yuqorida ta'riflanganidek, Antrodia camphorataning mehribon sovg'asidan olingan [34]. Ergosta-7,9(11),22-trien{10}}ol xona haroratida och sariq rangdagi kukun hosil qiladi. Birja eritmasi ishlatishdan oldin EtOHda 6,25 mg/ml konsentratsiyada tayyorlangan. Foydalanish muddati va antigeotaksis tahlillari uchun yakuniy konsentratsiyalar 125 va 250 mkg/ml ni tashkil etdi. Xotira va gen ekspressiyasini o'rganish uchun yakuniy konsentratsiya 250 mkg/ml ni tashkil etdi. EK100 ning molekulyar og'irligi 396,65 ni tashkil qiladi. Shunday qilib, mos keladigan molyar konsentratsiyalar mos ravishda 315 yoki 630 mkM ni tashkil qiladi. Pashshalar EK100 ning ikki dozasi bilan davolash qilingan, yakuniy konsentratsiyalari 125 va 250 mkg/ml bo'lgan oziq-ovqatga Ad libitum oziqlantirish orqali aralashtiriladi. Nazorat qiluvchi oziq-ovqat mahsuloti tajriba guruhlari bilan bir xil miqdordagi hal qiluvchi EtOHni o'z ichiga olgan, yakuniy EtOH kontsentratsiyasi 3% v/v. Davolash har bir tahlilning paydo bo'lishidan ma'lumotlarni yig'ish vaqtigacha boshlandi. Omon qolish va toqqa chiqish tahlili uchun davolash butun umr davomida amalga oshirildi. Har bir replikatsiya uchun chivinlar soni har bir tahlilning usul bo'limida tasvirlangan. Shuningdek, pashsha modellarida ergosta-7,9(11),22-trien{31}}ol xavfsizligini ta'minlash uchun davolash qilingan/davolanmagan yovvoyi chivinlar bilan umr ko'rish testlarini sinovdan o'tkazdik (Qo'shimcha rasm S1). ).
4.3. Antigeotaksis tahlillari
Ushbu protokol ba'zi o'zgartirishlar bilan ilgari nashr etilgan usulga asoslangan [35]. Qisqacha aytganda, geotaksis apparati sifatida diametri 2,5 sm va balandligi 9,5 sm bo'lgan shaffof silindrsimon plastik flakon (uzoqroq yaxshi bo'ladi, lekin ishlov berish qiyinroq bo'ladi) ishlatilgan. Flakonning pastki qismi yostiq sifatida bir qatlamli chivinli oziq-ovqat bilan qoplangan. Yostiqdan 5 sm balandlikdagi belgi flakonning tashqi yuzasiga biriktirilgan. Flakonning ikkinchi uchi ochiq edi va u yerdan pashshalar ortilgan. Tahlil omon qolish tahlili bilan bir vaqtda o'tkazilganligi sababli, yuklangan pashshalar soni o'sha paytda omon qolganlar bilan bir xil edi. Chivinlar flakonga solingan; ustki qismi qopqoq bilan yopilgan va flakonning pastki qismi u turgan qattiq yuzaga (bu holda laboratoriya dastgohi) qayta-qayta (ikki soniya) taqillatilgan. Taqillash chivinlarni qo'rqitish va flakon devorlari bo'ylab ko'tarilishga majbur qilish uchun etarlicha kuchli edi, lekin ularga jismoniy zarar etkazadigan darajada kuchli emas edi. Butun jarayon 18 soniya davomida videoga tushirildi, 5 sm belgidan yuqoriga ko'tarilgan chivinlar soni qayd etildi va har bir guruh uchun foiz sifatida ifodalandi. 5 sm belgidan oshib ketgan chivinlar soni hisoblandi. Har bir guruh uchun to'rtta takrorlash o'tkazildi. Ko'tarilish qobiliyatining ulushi toqqa chiqadigan chivinlar sonining sinov boshida chivinlarning umumiy soniga bo'linishi sifatida aniqlanadi. Toqqa chiqish qobiliyati, shuningdek, chivin modellarida ergosta-7, 9 (11), 22-trien-3 -ol xavfsizligini ta'minlash uchun davolangan/davolanmagan yovvoyi chivinlarda ham sinovdan o'tkazildi (Qo'shimcha rasm S2) .
4.4. Drosophila o'rganish va xotira platformasi (T-Maze)
Drosophila o'rganish va xotirasini kuzatish uchun birinchi navbatda 100 ga yaqin chivinlar elektr kuchlanish bilan ta'minlanishi va chivinlarga elektr toki urishi mumkin bo'lgan yuqori kosa kamerasiga joylashtirildi. Chivinlar birinchi bo'lib elektr zarba to'lqinlari bilan birga hid 1 (MCH) bilan etkazib berildi. Keyin chivinlarga elektr toki urishi to'lqinlarisiz hid 2 (OCT) yetkazib berildi. Treningdan so'ng, pashshalar quyidagi bo'shliqqa ko'chirildi, unda ikkita ochiq tomon mos ravishda hid 1 yoki hid 2 bilan ta'minlandi. Chivinlarning harakatlanish yo'nalishini kuzatish orqali hid 2 ning 1 hidga nisbatan moyilligini ikki hid o'rtasidagi pashshalar sonining pashshalarning umumiy soniga bo'linishi sifatida aniqlangan Ishlash indeksi (PI) bilan baholash mumkin. Ishlash indeksi Drosophilaning o'rganish va xotira qobiliyatini ifodalaydi [36]. Chivinlarning yana bir guruhi teskari hid juftliklari bilan shartlangan edi, shunda har bir hid bir marta elektr toki urishi va bir marta elektr toki urishi sifatida xizmat qiladi. Ushbu ikkita testning PI ko'rsatkichlari bitta replikatsiyaning yakuniy PI sifatida o'rtacha hisoblangan. "1 soat xotira" mashg'ulotgacha bo'lgan 1 soatlik oraliqdan so'ng sinovdan o'tkazildi, "o'rganish" esa, aksincha, mashg'ulotgacha bo'lgan 1,5 daqiqalik intervaldan keyin sinovdan o'tkazildi. Shuningdek, biz EK100 bilan davolash yoki davolashsiz AD pashshalarining MCH va OCT ning oldini olishni sinovdan o'tkazdik, bu davolash yoqimsiz hidlarga qarshi yondoshuvga olib kelishiga ishonch hosil qildik (Qo'shimcha rasm S3).
4.5. Miqdoriy PCR
RNK ekstraktsiyasidan oldin boshlar va tanalar ajratilgan. Bir replikatsiya uchun chivinlar CO2 bilan behushlik qilingan; to'plangan, bir vaqtning o'zida 100, Eppendorf naychalarida; so'ngra 1 daqiqa davomida suyuq azotga botiriladi va tanalar mo'rt bo'ladi. Keyin hosil bo'lgan muzlatilgan murdalar elak silkitgichlari (Bunsekifurui, № 40 va № 25) ustiga o'rnatilgan va aralashtiriladi. Jasadlar parchalanib, elak to'rlarining o'lchamiga ko'ra ikkita alohida fraktsiyaga ajratildi: "boshlar" va "tanalar". Umumiy RNK RNeasy Mini to'plami (Qiagen, Dyusseldorf, Germaniya) bilan ekstraksiya qilingan va keyin VersoTM cDNA sintez to'plami (Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSh) bilan cDNK sintez qilish uchun ishlatilgan. Tekshirilayotgan genlarning RNK ifoda darajalari real vaqt rejimida PCR (Applied Biosystems 7700, Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSH) Maxima SYBR Green qPCR Master Mix (Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSh) yordamida aniqlandi. Natijalar Gapdh yoki Rpl32 ning nisbiy miqdoriga normallashtirildi. Amaldagi primerlar quyida keltirilgan. Gapdh: 50 -GAAAAAGCGGCAGTCGTAAT-30 va 50 -AATTCCGATCTTCGACATGG-30 ; Doktor: 50 -TGTGATCATGGTTACGGAGGAC-30 va 50 -CAGCCGGGTGGGCAA-30 ; CED: 50 - CGTTTACAAGGAGCGACT-30 va 50 -TTCCCAGATTGAAGAGCAGG-30; Mushuk: 50 -TGACT ACAAAAACTCCCAAACG-30 va 50 -TTGATTCCAATGGGTGCTC-30 ; PHGPx: 50 -TGACA TCGGCGAGGTGT-30 va 50 -CGGTCTGCTTGGCCTTTA-30; Cnc: 50 -GCCAACTATGGTGG TGGAGT-30 va 50 -ACGCTGCGATTCAGACG-30 ; SOD1: 50 -GTCGACGAGAATCGTCAC CT-30 va 50 -GGAGTCGGTGATGTTGACCT-30 ; SOD2: 50 -AAATTTCGCAAACTGCAAGG- 3 0 va 50 -GGTCGCCATTTGTTGCTATT-30 ; SOD3: 50 -TCAGCATGGGTGCTCACTAT-30 va 50 -TAATGCCCGTGGAGTTGG-30; mkk3: 50 -CCGCTACCCATACGACAAT-30 va 5 0 -GAATTCCGGCGAAAATGT-30 ; mekk1: 50 -TTTAACGGCAGTGGAACTGT-30 va 50 - TGCATCTGCAACTGCTCAC-30 ; imd: 50 -AGATCGACCAGGCCATAATC-30 va 50 -AATCC ACTGGAGCAACAGC-30; rac1: 50 -CCGTGTTCGACAACTACTCG-30 va 50 -AGTCGGTCG TAGTCCTCCTG-30 ; lazzatlanish: 50 -GCCATACTCCCTTGGAATTG-30 va 50 -TCTCCCTTCTCCG GATACAC-30 ; Rpl32: 50 -CGGATCGATATGCTAAGCTGT-30 va 50 -CGACGCACTCTGTTG TCG-3.
4.6. Oksidlanish stress tahlillari
Lipid peroksidatsiyasi, katalaza faolligi va superoksid dismutaza faolligining uchta nusxasi BIOXYTECH LPO-586 (OxisResearch, OXIS International, Beverly Hills, CA, AQSH), Katalaz tahlil to'plami (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) tomonidan o'lchandi. , AQSh) va superoksid dismutaz tahlil to'plami (Kayman) mos ravishda ishlab chiqaruvchilarning ko'rsatmalariga muvofiq. Qisqacha aytganda, SOD faolligi to'plam bilan ta'minlangan ksantin oksidaza tomonidan ishlab chiqarilgan superoksid radikallarining dismutatsiyasini o'lchash yo'li bilan baholandi va tetrazolium tuzini formazan bo'yog'iga aylantirish orqali aniqlandi, so'ngra 440-460 nm da absorbans bilan miqdori aniqlandi. CAT faolligi metanoldan formaldegid hosil bo'lishini CAT tomonidan katalizlangan H2O2 ishtirokida o'lchash yo'li bilan baholandi, bu to'plam bilan ta'minlangan xromogen 4-amino-3-gidrazino-5-merkapto-1 tomonidan aniqlandi. ,2,{12}}triazol, so'ngra 540 nm da absorbans bilan miqdori aniqlanadi. Lipid peroksidlanish faolligi ko'p to'yinmagan yog'li kislota peroksidlarining malonaldegid (MDA) va 4-gidroksialkenallarga parchalanishini o'lchash yo'li bilan baholandi, ular to'plam bilan ta'minlangan xromogen N-metil{17}}fenilindol tomonidan aniqlandi, so'ngra 586 da yutilish orqali miqdori aniqlandi. nm. SOD, Cat va LPO tahlillari uchun har bir replikatsiyaning butun homogenlangan chivinlari soni mos ravishda 50, 50 va 100 ni tashkil etdi.
4.7. Statistik tahlil
Ergosta-7,9(11),22-trien-3 -omon qolish egri chiziqlari va ko'tarilish egri chiziqlari o'rtasidagi farqning ahamiyati, ishlov berilgan va nazorat guruhlari log-darajali (Mantel-) bo'yicha baholandi. Cox) va Gehan-Breslow-Wilcoxon testlari. Ishlangan ergosta-7,9(11),22-trien{10}} va nazorat guruhlarining o'rganish xotirasi samaradorligi indeksi o'rtasidagi farqning ahamiyati Student's t-test orqali baholandi.
5. Xulosalar
Antrodia kamforatidan olingan ergosta-7,9(11),22-trien{4}}ol (EK100) ADning Drosophila modelida biomarkerlar kamaygan holda omon qolish, o‘rganish va xotirani yaxshilashini tasdiqladik. mikrogliyaning faollashishi va yallig'lanishi. Bundan tashqari, simptomning o'zgarishi hamma joyda oksidlovchi stressni kamaytirish orqali sodir bo'lmadi, ya'ni ergosta-7,9(11) va 22-trien-3 -ol boshqa yo'llar orqali AD belgilarini yaxshilaydi. Antrodia kofurat ekstrakti, antrokinonol. EK100 mikroglial faollashuv va yallig'lanishni samarali ravishda kamaytirdi, bu esa o'rganish va xotira kamchiliklari kabi AD bilan bog'liq odatiy kognitiv kamchiliklarni bartaraf etishga yordam beradi.
Qo'shimcha materiallar:Quyidagilar onlaynda mavjud. Shakl S1: EK100 bilan davolash qilingan yovvoyi chivinlarning omon qolishi; S2-rasm: EK100 bilan ishlov berilgan yovvoyi chivinlarning ko'tarilishi; Shakl S3: EK100 bilan davolash qilingan AD chivinlarining yoqimsiz hididan qochish; S1-jadval: Omon qolish egri chiziqlari statistikasi.
Muallif hissalari:H.-PL, Y.-HK va W.-YL tajribalarni ishlab chiqdi. Y.-HK EK100 ni tayyorlashga hissa qo'shdi. JC, L.-ZC, M.-SC, L.-WS va T.-NC tajribalarini amalga oshirdi. Qo'lyozmani tayyorlashda barcha mualliflar ishtirok etdi. Barcha mualliflar qo'lyozmaning nashr etilgan versiyasini o'qib chiqdilar va rozi bo'ldilar.
Moliyalashtirish: Bu ish Tayvan Fan va Texnologiya Vazirligi grantlari hisobidan qoʻllab-quvvatlandi (Eng 108-2320-B-039-031-MY3, ENG 109-2314-B-039-030, ENG 110-2314- B-039-009), Xitoy tibbiyot universiteti va kasalxonasi (CMU109-MF-85, CMU108-MF-68, CMU108-MF{{12} }}, CMU109- AWARD-02 va DMR-109-150) hamda Ta'lim vazirligi (MOE) tomonidan "Oliy ta'lim niholini rivojlantirish" loyihasi doirasidagi Tanlangan yo‘nalishlar tadqiqot markazi dasturidan Tayvanda (CMRC-CHM-2-1).
Institutsional nazorat kengashi bayonoti:Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.
Axborotlangan rozilik bayonoti:Qo'llanilmaydigan, qo'llab bo'lmaydigan.
Ma'lumotlar mavjudligi to'g'risidagi bayonot:Ushbu tadqiqot natijalarini qo'llab-quvvatlash uchun foydalanilgan ma'lumotlar maqolaga kiritilgan.
Manfaatlar to'qnashuvi:Y.-HK ixtirochilardan biri, ammo "Aniridiya kamforatidan ergostatrien-3- -ol hosilalari va ularning glikemik, antihiperlipidemik va jigarda yog' iste'molini kamaytiradigan" nomli US-9757393-B2 patentining egasi emas. Boshqa mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar. Tadqiqotni loyihalashda moliyachilarning roli yo'q edi; ma'lumotlarni yig'ish, tahlil qilish yoki talqin qilishda; qo'lyozmani yozishda yoki natijalarni nashr etish to'g'risidagi qarorda.
Namuna mavjudligi:Murakkablarning namunalari mualliflardan mavjud.
Ma'lumotnomalar
1. Davidson, JW Formosa oroli, o'tmish va hozirgi: tarix, odamlar, manbalar va tijorat istiqbollari. Choy, kofur, shakar, oltin, ko‘mir, oltingugurt, xo‘jalik zavodlari va boshqa ishlab chiqarishlar; Macmillan & Company: Nyu-York, NY, AQSh, 1903 yil.
2. Tsay, Z.; Liaw, S. Ganodermaning qo'llanilishi va ta'siri; Sheng-Yun Publishers, Inc.: Taichung, Tayvan, 1985; 116–117-betlar.
3. Chen, C.-J. Antrodia camphorata ning qattiq o'sishi va bioaktivligini o'rganish. Qo'ziqorin. Sci. 2001, 16, 65–72.
4. Geethangili, M.; Tzeng, Y.-M. Antrodia kamforat va uning bioaktiv birikmalarining farmakologik ta'sirini ko'rib chiqish. Dalilga asoslangan to‘ldiruvchi. Muqobil. Med. 2011, 2011, 212641. [CrossRef] [PubMed]
5. Ogura, S.; Jakovljevic, MM Global aholining qarishi-sog'liqni saqlash, ijtimoiy va iqtisodiy oqibatlar. Old. Jamoat salomatligi 2018, 6, 335. [CrossRef] [PubMed]
6. Kammings, J.; Li, G.; Ritter, A.; Zhong, K. Altsgeymer kasalligi dori ishlab chiqish quvuri: 2018. Altsgeymer dementi. Tarjima. Res. Klin. Interv. 2018, 4, 195–214. [CrossRef] [PubMed]
7. Sharma, P.; Srivastava, P.; Set, A.; Tripathi, PN; Banerji, AG; Shrivastava, SK Altsgeymer kasalligi bilan bog'liq patogenez mexanizmlarini va potentsial terapevtik strategiyalarni har tomonlama ko'rib chiqish. Prog. Neyrobiol. 2019, 174, 53–89. [CrossRef] [PubMed]
8. Sochokka, M.; Donskou-Łysoniewska, K.; Diniz, BS; Kurpas, D.; Brzozovska, E.; Leszek, J. Ichak mikrobiomidagi o'zgarishlar va Altsgeymer kasalligining yallig'lanishga asoslangan patogenezi - tanqidiy sharh. Mol. Neyrobiol. 2019, 56, 1841–1851. [CrossRef]
9. Agostinyo, P.; A Cunha, R.; Oliveira, C. Neyroinflammation, oksidativ stress va Altsgeymer kasalligining patogenezi. Curr. Farm. Des. 2010, 16, 2766–2778. [CrossRef]
10. Galasko, D.; Montine, TJ Altsgeymer kasalligida oksidlovchi zarar va yallig'lanishning biomarkerlari. Biomark. Med. 2010, 4, 27–36. [CrossRef]
11. Kuo, Y.-H.; Lin, T.-Y.; Siz, Y.-J.; Wen, K.-C.; Sung, P.-J.; Chiang, H.-M. Antrodia camphorata’dan ajratilgan ergostatrien-3 -olning tuksiz sichqon terisiga yallig‘lanishga qarshi va fotozararga qarshi ta’siri. Molekulalar 2016, 21, 1213. [CrossRef]
12. Chao, T.-Y.; Hsieh, C.-C.; Xsu, S.-M.; Van, C.-H.; Lian, G.-T.; Tseng, Y.-H.; Kuo, Y.-H.; Xsieh, S.-C. Antrodia camphorata dan Ergostatrien{9}}ol (EK100) in vitro va in Vivo oksidlovchi stressni, yallig'lanishni va jigar shikastlanishini engillashtiradi. Oldingi. Nutr. Oziq-ovqat fanlari. 2021, 26, 58. [CrossRef]
13. Tsay, T.-C.; Tung, Y.-T.; Kuo, Y.-H.; Liao, J.-V.; Tsay, H.-C.; Chong, K.-Y.; Chen, H.-L.; Chen, C.-M. Sichqon terisi ishemiyasi modelida Antrodia camphorata va uning faol birikmasi, ergostatrien{10}}olning yallig'lanishga qarshi ta'siri. FASEB J. 2015, 29, LB444.
14. Chang, W.-H.; Chen, MC; Cheng, IH Antroquinonol miya amiloid darajasini pasaytiradi va Altsgeymer kasalligining transgenik sichqon modelida fazoviy o'rganish va xotirani yaxshilaydi. Sci. Rep. 2015, 5, 1–12. [CrossRef] [PubMed]
15. Chen, Y.-M.; Sung, H.-C.; Kuo, Y.-H.; Xsu, Y.-J.; Huang, C.-C.; Liang, H.-L. Antrodia kamforatidan Ergosta-7, 9 (11), 22-trien{11}}olning sichqonlarning biokimyoviy profili va mashqlar samaradorligiga ta'siri. Molekulalar 2019, 24, 1225. [CrossRef]
16. Finelli, A.; Kelkar, A.; Song, H.-J.; Yang, X.; Konsolaki, M. Drosophila melanogasterda Altsgeymerning A 42-induktsiyali toksikligini o'rganish uchun model. Mol. Hujayra. Nevrologlar. 2004, 26, 365–375. [CrossRef] [PubMed]
17. Ping, Y.; Xam, E.-T.; Varo, G.; Song, Q.; Vo-Ba, D.-A.; Likursi, A.; Bao, X.; Ganoe, L.; Finch, K.; Tsunoda, S. Altsgeymer modelida 42-induktsiya qilingan giperqo'zg'aluvchanlikni neyrodegeneratsiya, o'rganish va vosita etishmovchiligi va qisqa umr ko'rish bilan bog'lash. PLoS Genet. 2015, 11, e1005025. [CrossRef] [PubMed]
18. Raqib, T.; Page, RM; Chandraratna, DS; Sendall, TJ; Rayder, E.; Liu, B.; Lyuis, H.; Rozahl, T.; Hider, R.; Camargo, L. Fenton kimyosi va oksidlovchi stress Altsgeymer kasalligining Drosophila modelida -amiloid peptidning toksikligiga vositachilik qiladi. Yevro. J. Neurosci. 2009, 29, 1335–1347. [CrossRef]
19. Rey, A.; Speese, SD; Logan, MA Glial draper Altsgeymer kasalligining Drosophila modelidagi toksiklikni qutqaradi. J. Neurosci. 2017, 37, 11881–11893. [CrossRef]
20. Jeybmann, A.; Paulus, W. Drosophila melanogaster miya kasalliklarining namunaviy organizmi sifatida. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 407–440. [CrossRef] [PubMed]
21. Brukmeyer, R.; Korrada, MM; Kuryero, FK; Kawas, C. Altsgeymer kasalligi tashxisidan keyin omon qolish. Ark. Neyrol. 2002, 59, 1764–1767. [CrossRef]
22. Lam, LC; Tang, V.; Leung, V.; Chiu, HF. Xitoy keksalarida Altsgeymer kasalligining xulq-atvori profili - Altsgeymer kasalligi xulq-atvori patologiyasi reytingining xitoycha versiyasini tekshirish. Int. J. Geriatr. Psix. 2001, 16, 368–373. [CrossRef] [PubMed]
23. Shvab, C.; McGeer, PL Altsgeymer kasalligi va boshqa neyrodegenerativ kasalliklarning yallig'lanish aspektlari. J. Altsgeymer kasalligi. 2008, 13, 359–369. [CrossRef] [PubMed]
24. MakDonald, JM; Plyaj, MG; Porpiglia, E.; Sheehan, AE; vatt, RJ; Friman, MR Drosophila xujayrasining jasadini yutish retseptorlari Draper kesilgan aksonlarning glial tozalanishida vositachilik qiladi. Neyron 2006, 50, 869–881. [CrossRef]
25. Chen, Z.; Zhong, C. Altsgeymer kasalligida oksidlovchi stress. Nevrologlar. Buqa. 2014, 30, 271–281. [CrossRef]
26. Stankovich, ND; Teodorchik, M.; Ploen, R.; Zipp, F.; Shmidt, MH Microglia-qon tomirlarining o'zaro ta'siri: miya patologiyalarida ikki qirrali qilich. Acta Neuropathol. 2016, 131, 347–363. [CrossRef]
27. Konishi, X.; Kiyama, H. Microglial TREM2 / DAP12 signalizatsiyasi: asab kasalliklarida ikki qirrali qilich. Old. Hujayra. Nevrologlar. 2018, 12, 206. [CrossRef] [PubMed]
28. Sevigny, J.; Chiao, P.; Bussier, T.; Weinreb, PH; Uilyams, L.; Mayer, M.; Dunstan, R.; Salloway, S.; Chen, T.; Ling, Y. Antikor adukanumab Altsgeymer kasalligida A plaklarini kamaytiradi. Tabiat 2016, 537, 50–56. [CrossRef]
29. Lalli, G.; Shott, JM; Hardi, J.; De Strooper, B. Aducanumab: Altsgeymer kasalligi uchun terapevtik rivojlanishning yangi bosqichi? EMBO Mol. Med. 2021, 13, e14781.
30. Takata, K.; Kitamura, Y.; Saeki, M.; Terada, M.; Kagitani, S.; Kitamura, R.; Fujikava, Y.; Maelicke, A.; Tomimoto, X.; Taniguchi, T. Mikroglial nikotinik atsetilxolin retseptorlarini rag'batlantirish orqali vositachilik qilingan Galantamin tomonidan qo'zg'atilgan amiloid-klirens. J. Biol. Kimyo. 2010, 285, 40180–40191. [CrossRef] [PubMed]
31. Mandrekar-Koluchchi, S.; Karlo, JK; Landreth, GE Altsgeymer kasalligining sichqoncha modelida amiloid klirensi va kognitiv nuqsonlarni bartaraf etish vositachiligida tezkor peroksisoma proliferatori tomonidan faollashtirilgan retseptor- -vositachiligida yotgan mexanizmlar. J. Neurosci. 2012, 32, 10117–10128. [CrossRef]
32. MakGir, PL; McGeer, EG Altsgeymer kasalligini davolash uchun mikrogliyani maqsadli. Ekspert fikri. U erda. Maqsadlar 2015, 19, 497–506. [CrossRef] [PubMed]
33. Song, WM; Colonna, M. Neyrodegeneratsiyada mikrogliyaning o'ziga xosligi va funktsiyasi. Nat. Immunol. 2018, 19, 1048–1058. [CrossRef] [PubMed]
34. Kuo, Y.-H.; Lin, C.-H.; Shih, C.-C. Antrodia camphorata'dan ergostatrien{4}}ol jigar bilan bog'liq genlar, glyukoza tashuvchisi 4 va AMP bilan faollashtirilgan protein kinaz fosforillanishini tartibga solish orqali yuqori yog'li dietali sichqonlarda diabet va giperlipidemiyani inhibe qiladi. J. Agrik. Oziq-ovqat kimyosi. 2015, 63, 2479–2489. [CrossRef] [PubMed]
35. Le Burg, E.; Lints, FA Gipergravitatsiya va Drosophila melanogasterda qarish. 4. Toqqa chiqish faoliyati. Gerontologiya 1992, 38, 59–64. [CrossRef]
36. Waddell, S.; Quinn, WG Chivinlar, genlar va o'rganish. Ann. Rev. Neurosci. 2001, 24, 1283–1309. [CrossRef] [PubMed]
【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
