Aloqa:jerry.he@wecistanche.com

Vinita D. Apraj1, Nensi S. Pandita2

1Biologiya fanlari boʻlimi, 2Kimyo boʻlimi, Sunandan Divatiya fan maktabi, SVKM NMIMS, Vile-Parle (W), Mumbay, Maxarashtra, Hindiston

Cistanche qarishga qarshi ta'sirga ega

ANTRACT

Ma'lumot uchun: Citrus reticulata Blanco po'stlog'i an'anaviy ravishda tonik, oshqozon, biriktiruvchi va karminativ sifatida ishlatiladi. Bu terini parvarish qilishda ham foydalidir. Maqsad: o'rganishqarishga qarshiC. reticulata Blanco po'stlog'ining alkogolli ekstraktlarining in vitro antioksidant va antienzim tahlillari yordamida potentsiali.

Materiallar va usullar: O'simlik ekstraktlari sokslash (CR HAE‑ Citrus reticulata issiq spirtli ekstrakti) va maseratsiya usuli (CR CAE‑ Citrus reticulata sovuq alkogolli ekstrakti) bilan olingan. Sifatli va miqdoriy fitokimyoviy tahlil o'tkazildi. Bundan tashqari, in vitroantioksidant, fermentga qarshi va gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi (GC‑MS) tahlillari o'tkazildi. Natijalar: CR HAE ning umumiy fenolik va flavonoid tarkibi CR CAE dan yuqori ekanligi aniqlandi. 1,1‑Difenil‑2‑pikrilgidrazil, Superoksid anioni va 2,2'‑azino‑bis (3‑etilbenzotiyazolin-6‑sulfonik kislota tahlili) uchun CR HAE va CR CAE ning EC50 qiymati25 {55}},33 ± 40,16 µg/ml va 254,73 ± 15,78 µg/ml, 221,27 ± 11,25 µg/ml va 354,20 ± 23,79 µg/ml va mos ravishda 59,16 ± 5,6 µg/ml, va 59,16 ± 9,1 µg/ml, CR HAE va CR CAE uchun kislorodning radikal yutish qobiliyati qiymatlari mos ravishda 1243 va 1063 mkmol 6-gidroksi-2,5,7,8-tetra metilkroman-2-karboksilik kislota ekvivalenti/g moddaga teng ekanligi aniqlandi. Anti-kollagenaz va anti-elastaz faolligi ham CR HAE, ham CR CAE uchun baholandi. Anti-kollagenaza va anti-elastaz uchun CR HAE va CR CAE ning EC50 qiymatlari mos ravishda 329,33 ± 6,38 µg/ml, 466,93 ± 8,04 µg/ml va 3,22 ± 0,24 mg/ml, 5,09 mg/ml ni tashkil etdi. CR HAE CR CAEga qaraganda kuchliroq anti-kollagenaz va anti-elastaz faolligini namoyish etdi. CR HAE ning GC‑MS tahlili o'tkazildi, chunki CR HAE yuqoriroq namoyon bo'ldiantioksidantva CR CAE ga qaraganda fermentga qarshi potentsial. Xulosa: C. reticulata peelidan foydalanish mumkinajinlarga qarshiterini parvarish qilish formulalari.

Kalit so'zlar: 1,1-Difenil-2-pikrilgidrazil, 2, 2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota), ajinlarga qarshi, elastaz, gaz xromatografiyasi-mass-spektrometriya

XULOSA

• Citrus reticulata Blanco po'stlog'ining terining qarishga qarshi potentsiali baholandi.

• In vitroantioksidantva fermentlarga qarshi tahlillar

• Ikki turdagi ekstraktsiya amalga oshirildi va ekstraktlar sifat va miqdoriy fitokimyoviy tahlildan o'tkazildi. Soxhlation (CR HAE) bilan olingan ekstrakt maseratsiya (CR CAE) orqali olingan ekstraktga qaraganda yuqori umumiy fenolik va flavonoid tarkibini ko'rsatdi.

• CR HAE kuchli DPPH va Superoksid erkin radikallarni tozalash faolligini ko'rsatdi, shu bilan birga ikkala ekstraktning ABTSni tozalash faolligi o'xshashligi aniqlandi. CR HAE ning kislorodli radikal assimilyatsiya qilish qobiliyati (ORAC) ko'proq ekanligi aniqlandi; kuchli antioksidant salohiyatidan dalolat beradi

• In vitro kollagenaza va elastaz fermentini inhibe qilish faoliyati ikkala ekstrakt uchun ham baholandi va CR HAE kuchli anti-kollagenaz va elastazga qarshi potentsialni ko'rsatdi, bu uning qarishga qarshi qobiliyatini ko'rsatadi.

• CR HAE ning GC‑ MS tahlili turli birikmalar mavjudligini aniqladi

asosan polimetoksiflavonlar kiradi. CR HAE istiqbolli antioksidant va antienzimatik faollikni namoyish etdi va potentsial sifatida ishlatilishi mumkin.ajinlarga qarshiagentiqarishga qarshiterini parvarish qilish formulalari.

Ishlatilgan qisqartma: ECM: Hujayradan tashqari matritsa, UV: Ultrabinafsha, ROS: Reaktiv kislorod turlari, MMP: Matritsa metalloproteinaz, Chc: Clostridium histolyticum kollagenaza, DPPH: 2, 2-difenil‑ 1‑ ‑ ‑ ‑ hromatyl s : G ‑ 1‑ hromatylography Spektroskopiya, RT: Xona harorati, µg GAE/ mg: Mikrogram Galli kislotasi ekvivalenti / milligram, Vt/V: Og‘irligi hajmi bo‘yicha, µg QE/

mg: Mikrogram Quercetin ekvivalenti / milligram, CR HAE: Citrus reticulata Blanco issiq alkogolli ekstrakti, CR CAE: Blanco tsitrus retikulasining sovuq alkogolli ekstrakti, EC50: Yarim maksimal samarali konsentratsiya, PMS NADH: Fenazin nitrozolid NBT NADH: Fenazin nitrozolid NBT, NBT tetkotinu , DMSO: dimetil sulfoksid, APS: ammoniy persulfat, AAPH: 2,2-azobis(2-amidino-propan) dihidroklorid, TROLOX: (±) 6-gidroksi-2,5,7,8-xol-tetrametilboks kislota, ORAC: Kislorodning radikal yutilish qobiliyati, FALGPA: N‑[3‑(2‑Furil) akriloil)]‑Leu‑Gly‑Pro‑Ala, SANA: Succinil‑Ala‑ Ala‑Rea‑Ala‑nitard,pnitrat: Faktor, MSD: Mass-selektiv detektor

KIRISH

Inson uchun terining eng muhim roli tananing ichki va tashqi muhiti o'rtasida to'siq yaratishdir. Ichkarida teri hayot uchun zarur bo'lgan butun fizikokimyoviy hodisani himoya qiladi va himoya qiladi, tashqi tomondan u mexanik kuchlarga qarshi to'siqdir. Teri tananing eng katta organidir.[1] Bu juda sezgir organ bo'lib, infektsiya va kasalliklardan osongina zararlanishi mumkin.

Bu Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3 shartlari asosida tarqatilgan ochiq maqoladir.0 Litsenziya, boshqalarga asarni notijorat tarzda remiks qilish, sozlash va yaratish imkonini beradi, agar muallifga kredit beriladi va yangi ijodlar bir xil shartlar ostida litsenziyalanadi.

Teri muammolari atrof-muhitning ifloslanishi, ultrabinafsha nurlarining haddan tashqari ta'siri, insonning yoshi, zararli mikroorganizmlar, ovqatlanish odatlari, stress va kimyoviy moddalar kabi turli omillar tufayli yuzaga kelishi mumkin. Terini davolash va parvarish qilish nafaqat sog'lom teriga ega bo'lish, balki insonning umumiy farovonligi uchun ham muhimdir.[2]

Zamonaviy dunyoda terining asosiy muammolaridan biri terining erta qarishidir. Terining qarish jarayoni ikki toifaga bo'lingan: ichki va tashqi qarish. Terining ichki qarishi yoki tabiiy qarishi terining elastikligining vaqt o'tishi bilan o'zgarishi natijasida yuzaga keladi. Terining tashqi qarishi asosan quyosh nurlari ta'sirining natijasidir (foto qarish). Oksidlanish stressi natijasida hosil bo'lgan erkin radikallar ichki va tashqi qarish jarayonida katta rol o'ynaydi.[3] Teri uchta asosiy qatlamdan iborat; epidermis, dermis va subkutis. Dermisning asosiy tarkibiy qismlari kollagen va elastin tolalaridir. Kollagen va elastin miqdorining pasayishiga olib keladiajinshakllanishi.[4] Terining osilib, shakllana boshlaganining asosiy sababiajinlarelastin va kollagenning parchalanishi. Kollagenaza va elastaz fermentlari hujayradan tashqari matritsaning (ECM) turli komponentlarini, ya'ni kollagen va elastinni parchalash uchun javobgardir. Elastin terining elastik va mustahkam bo'lishiga yordam beradigan oqsildir. Teringiz cho'zilganida, uni normal holatiga qaytaradigan elastindir. Kollagen tolali oqsildir. Kollagen oqsillar orasida alohida o'rin tutadi, chunki teriga mustahkamlikni ta'minlaydigan katta kuchlanish kuchi.Ajinlarichki va tashqi qarish, shuningdek, kollagenaza va elastaz fermentlari darajasining oshishi natijasida yuzaga keladi.[5]

Go'zallikni oshirish uchun kosmetika turli shakllarda muntazam va universal tarzda qo'llaniladi. Terini parvarish qilish uchun kosmetika vositalari terining sirt qatlamini davolanmagan teriga qaraganda atrof-muhitdan yaxshiroq himoya qiladi.[6] Yuz terisini parvarish qilish uchun kosmetika vositalariga talab ortib bormoqda. Ma'lumotlar monitorining ma'lumotlariga ko'ra, 2012 yilda terini parvarish qilish vositalariga global xarajatlar 82 milliard dollarni tashkil etdi, bunda xarajatlarning uchdan ikki qismi yuz terisini parvarish qilishga to'g'ri keldi. Tadqiqotlar va bozorlar hisoboti 2018-yilda terini parvarish qilish sanoatining global daromadi 100 milliard dollardan oshishini kutmoqda. Yuzni parvarish qilish segmenti bozorda hukmronlik qilishda davom etishi kutilmoqda. ga ortib borayotgan talabqarishga qarshimahsulotlar va tabiiy va organik terini parvarish qilish vositalaridan foydalanishga bo'lgan qiziqish ortib borayotgani terini parvarish qilish sanoatini boshqaradigan asosiy omillardir.[7] Teri va tana qismlarini parvarish qilish uchun faqat kosmetika etarli emas; terining shikastlanishi va qarishini tekshirish uchun faol moddalar assotsiatsiyasini talab qiladi. Faol moddalarni o'z ichiga olgan bu o'simlik faol moddalar terining sog'lig'ini saqlash uchun juda muhimdir. Hozirgi vaqtda o'simlik faollari bo'lgan kosmetika mavjud muammoga mos yechim sifatida paydo bo'lmoqda.[8] Ushbu tadqiqotda teriqarishga qarshiCitrus reticulata Blanco peelining alkogolli ekstraktlarining salohiyati in vitro antioksidant, anti-kollagenaz va anti-elastaz tahlillari bilan baholandi. C. reticulata Blanco (Rutaceae) odatda Narangi yoki Santra (Apelsin) nomi bilan tanilgan. Mevasi ichni yumshatuvchi, afrodizyak, og‘riq qoldiruvchi, tonik va qusishni yo‘qotadi.[9] Meva qobig'i an'anaviy ravishda tonik, oshqozon, biriktiruvchi, karminativ va antikorbutik sifatida ishlatiladi. Tsitrus qobig'i tsitrus mevalar sanoatining qo'shimcha mahsuloti sifatida qabul qilingan, ammo uning tarkibida pulpadan ancha yuqori konsentratsiyada bir nechta faol komponentlar borligi xabar qilingan.[10] Meva qobig'i terini parvarish qilishda ham foydalidir.

MATERIALLAR VA USLUBLAR

Kimyoviy moddalar va reagentlar

Askorbin kislotasi, kversetin, temir xlorid, natriy karbonat (Na2CO3), natriy nitrit (NaNO2), natriy gidroksid (NaOH), alyuminiy xlorid (AlCl3), 1,1-Difenil-2-pikrilgidrazil (DPPH), cho'chqa pankreazasi .3.4.21.36), Suksinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (SANA), Clostridium histolyticum kollagenaz (ChC) (EC.3.4.23.3), N‑(3‑[2‑Furyl)‑Iu Gly-Pro-Ala (FALGPA), flüoresan natriy tuzi, 2,2-azobis (2-metil propionamidin) dihidroklorid (AAPH) va gal kislotasi Sigma Chemical Co. (Sent-Luis, AQSH) dan sotib olingan 2, 2 '-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) diammoniy

tuz (ABTS), (±) 6-gidroksi-2,5,7,8-tetra metilxroman-2-karboksilik kislota (TROLOX) Fluka, AQShdan sotib olingan. Nitro ko'k tetrazolium (NBT), fenazin metosulfat (PMS) va nikotinamid adenin dinukleotid - qaytarilgan disodiy tuzi (NADH) SRL Pvt. Ltd., Mumbay, Hindiston. Ammoniy per sulfat (APS) Hindistonning Rankem shahridan sotib olingan.

O'simlik materiallarini yig'ish

C. reticulata Blanco, Rutaceae mevalari 2013 yil yanvar oyida Mumbaydan (Hindiston) olingan. O'simlik materialining taksonomik identifikatsiyasi Mumbay universiteti doktori CS Latto tomonidan tasdiqlangan. Autentifikatsiya Pune shtatidagi Agharkar tadqiqot institutida amalga oshirildi.

O'simlik materialini qazib olish

Mevalar suv ostida yaxshilab yuviladi. Peellar mevalardan ajratilgan va soyada quritilgan. Shundan so'ng, quritilgan material kukun shakliga o'tkaziladi va xona haroratida havo o'tkazmaydigan idishda saqlanadi. 300 ml metanol bilan taxminan 50 g quritilgan kukun ajratildi. O'simlik ekstraktlari Sokslash (CR HAE‑ Citrus reticulata issiq alkogolli ekstrakti) va maseratsiya usuli (CR CAE‑ Citrus reticulata sovuq alkogolli ekstrakti) bilan olingan. Soxhlet ekstraktsiyasi 65 gradusda 10-12 soat davomida amalga oshirildi. Sovuq maseratsiya doimiy chayqalish orqali amalga oshirildi; bu erda o'simlik kukuni va metanol aralashmasi aylanadigan chayqagichda (REMI CIS‑24 PLUS) saqlangan va RT da 100 aylanish tezligida 72 soat davomida o'rnatildi. Ekstraktlar Whatman filtr qog'ozi № yordamida filtrlangan. Keyin filtratlar past bosim ostida bug'lanadi va 50 darajaga o'rnatilgan aylanuvchi bug'latgich (R-205, Buchi Laboratory Equipment, Flawil, Shveytsariya) yordamida quritiladi. Quritilgan ekstraktlar keyingi foydalanishgacha etiketli, steril, qopqoqli idishlarda 4 daraja haroratda saqlangan.

Ekstraktlarning dastlabki fitokimyoviy tahlili

Yuqorida aytib o'tilganidek, ekstraktlar tavsiflangan usullar bo'yicha o'simlik materialida mavjud bo'lgan kimyoviy tarkibiy qismlarni aniqlash uchun turli xil sifatli fitokimyoviy sinovlardan o'tkazildi.[11]

Jami fenolik tarkibini aniqlash

Jami fenolik tarkib (TPC) Folin-Ciocalteu reaktivi yordamida berilgan usul yordamida aniqlandi.[12] Har bir namunadan 0.5 ml ga 2,5 ml 1:10 suyultirilgan Folin - Ciocalteau reaktivi va 2 ml Na2CO3 (7,5 foiz og'irlik/v) qo'shildi va ultrabinafsha rangga ko'rinadigan spektrofotometr yordamida 765 nm da inkubatsiya qilindi. Natijalar mkg gallik kislota ekvivalentining mg ekstrakti (µg GAE/mg ekstrakti) sifatida ifodalangan.

Flavonoidlarning umumiy miqdorini aniqlash

Jami flavonoid miqdori (TFC) AlCl3 kolorimetrik tahlili bilan o'lchandi.[13]

Bir alikvot (1 ml) ekstrakt yoki kversetinning standart eritmalari (20, 40, 60, 80 va 100 mkg/ml) 10 ml hajmli oʻlchov kolbasiga 4 ml solingan idishga qoʻshildi. distillangan suv. Kolbaga 0,30 ml 5 foizli NaNO2 va 5 daqiqadan so'ng 0,3 ml 10 foizli AlCl3 qo'shildi. 5 daqiqadan so'ng 2 ml 1M NaOH qo'shildi va hajmi distillangan suv bilan 10 ml ga yetkazildi. Eritma aralashtirildi va absorbans 510 nm da blankaga nisbatan o'lchandi. TFC har bir mg ekstrakt uchun mkg kversetin ekvivalenti sifatida ifodalangan (mkg QE/mg ekstrakti).

Antioksidant tahlillari

1, 1-Difenil-2-pikrilgidrazil erkin radikallarni tozalash tahlili

Erkin radikallarni tozalash faolligi berilgan usul bo'yicha ba'zi o'zgartirishlar bilan baholandi.[14] Erkin radikallarni tozalash faoliyati berilgan usul bo'yicha ba'zi o'zgartirishlar bilan baholandi. Har xil konsentratsiyadagi 1 ml hajmdagi (1{5}}0–800 µg/ml) sinov namunalari 200 µl (0,36 mg/ml) DPPH metanol eritmasi bilan aralashtirildi. Chayqalgandan so'ng, aralashma qorong'i joyda xona haroratida 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi va keyin absorbans 517 nm da o'lchandi. Ijobiy nazorat sifatida askorbin kislotasi ishlatilgan.

Fenazin metosülfat-NADH tizimi superoksid anionini tozalash tahlili

Superoksidni tozalash faolligi berilgan usul bilan baholandi.[15] Tris HCl buferi (3 ml, 16 mM, pH 8.0), tarkibida 0,75 ml NBT (50 mM) eritmasi, 0,75 ml NADH ( 78 µM) eritma va 0,3 ml namunali ekstrakt eritmasi (50–350 mkg/ml) metanolda aralashtirildi. Reaksiya aralashmaga 0,75 ml PMS eritmasi (10 mkM) qo'shilgach boshlandi. Reaksiya aralashmasi 25 daraja haroratda 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi va absorbans mos keladigan bo'sh namunalarga nisbatan 560 nm da o'qildi. Standart sifatida askorbin kislotasi ishlatilgan.

2, 2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) radikalini tozalash tahlili

Tahlil berilgan usulga muvofiq amalga oshiriladi.[16] ABTS radikal kationlari ABTS va APS bilan reaksiyaga kirishib, aralashmani xona haroratida qorong'i joyda 16 soat davomida inkubatsiya qilish orqali hosil bo'ldi. Qisqacha aytganda, reaksiyaning umumiy hajmida turli konsentratsiyali 10 mM PBS pH 7,4 (musbat nazorat yoki sinov eritmalari) mavjud. ABTS radikal eritmasi 0,219 mM yakuniy konsentratsiyaga qo'shildi. Reaksiya aralashmasi aralashtirildi va darhol mikroplata o'quvchi (VERSA max, Molekulyar qurilmalar, AQSh) yordamida 734 nm da o'qildi. Nazorat reaktsiyasi sinov namunasisiz amalga oshirildi. Gallik kislotasi ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan.

Ekstraktlarning DPPH, PMS‑NADH va ABTS erkin radikallarini tozalash qobiliyati quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan:

Radikal tozalash faolligi (foiz)=([Nazoratning abs - namunaning abs]/Nazoratning abs) ×100, bu erda Abs - sinov ekstraktlari mavjudligi yoki yo'qligida ko'rsatilgan to'lqin uzunligidagi absorbans.

Kislorod radikalini yutish qobiliyatini tahlil qilish

Bu tahlil tavsiflangan usulga muvofiq amalga oshirildi.[17] 140 µl inkubatsiyadan oldingi aralashmada - 20 µl sinov eritmasi yoki turli konsentratsiyali TROLOX mavjud. 75 mM natriy fosfat buferi, pH 7,4; 120 µl natriy floressein (117 nM) aralashtiriladi va 37 darajada 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Preinkubatsiyadan keyin 60 µl AAPH (40 mM) qo‘shildi va 15 soniya davomida aralashtirildi. Reaksiya 37 darajada 90 daqiqa davomida amalga oshirildi. Floresan o'lchovlari 485 nm qo'zg'alish va 520 nm emissiya filtrlarida olingan.

Ferment tahlillari

Kollagenazaga qarshi tahlil

Kollagenazani inhibe qilish tahlili avval tavsiflangan usul bilan amalga oshirildi [18], bu FA-Leu va Gly-Pro-Ala ishlab chiqarish uchun kollagenaz tomonidan FALGPA gidroliziga asoslangan. Tahlil 50 mM Tricine buferida (400 mM NaCl va 10 mM CaCl2, pH 7,5) amalga oshirildi. ChC 0,8 birlik / ml boshlang'ich konsentratsiyasida foydalanish uchun buferda eritildi. Sintetik substrat, FALGPA, Tricine buferida 2 mM gacha eritildi. Namuna ekstraktlari reaktsiyani boshlash uchun substrat qo'shilishidan oldin buferdagi ferment bilan 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Yakuniy reaksiya aralashmasi (umumiy hajmi 75 µl) 25 µl 50 mM Tricine buferi, 25 µl sinov ekstrakti (250–4000 µg/ml) va 25 µl 0,1 birlik ferment ChC o‘z ichiga olgan. Sinov ekstrakti sifatida 50 mM Tricine buferi bilan bajarilgan nazoratlar Tricine buferida (50 mM) eritildi, katexin esa ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. 50 µl 2 mM FALGPA substrati qo‘shilgandan so‘ng, kollagenaza faolligi 96 quduqli mikro plastinka o‘quvchi (Bio-Tek M Quant, FLX 800) yordamida darhol 340 nm da 20 daqiqa davomida o‘lchandi.

Anti-elastaz tahlili

Ishlatilgan tahlil adabiyotdagi usullarga asoslangan edi.[19] Ushbu tahlil 0.2 mM Tris‑HCL buferida (pH 8.0) amalga oshirildi. Cho'chqa pankreatik elastazasi (PE – EC 3.4.21.36) {{10}}.2 mM Tris‑HCL buferida 1 mg/ml eritma hosil qilish uchun eritildi. N‑Suksinil‑Ala‑Ala‑Ala‑p‑nitroanilid (SANA) substrati 0,8 mM da buferda eritildi. Sinov ekstraktlari (0,156-10 mg / ml) reaktsiyani boshlash uchun substrat qo'shmasdan oldin ferment bilan 20 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Yakuniy reaksiya aralashmasi (jami 250 µl) 50 µl o‘simlik ekstrakti, 160 µl bufer, 20 µl ferment va 20 µl substratdan iborat edi. Katexin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. Salbiy nazorat Tris‑HCL buferi yordamida amalga oshirildi. Absorbsiya darhol 410 nm da, so'ngra 96 ​​quduqli mikro plastinka o'quvchi (Bio-Tek M Quant, FLX 800) yordamida 20 daqiqa davomida doimiy ravishda o'lchandi. Bu ikkala tahlil uchun foiz inhibisyonu quyidagicha hisoblanadi: Ferment inhibisyon faolligi (foiz )=(1− [B/A]) ×100

Bu yerda, A=Namunasiz ferment faolligi, B=Namuna borligidagi faollik.

Gaz xromatografiyasi-mass-spektrometriya tahlili

Gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi (GC‑MS) tahlili uchun quyidagi shartlar qabul qilindi.[20]Komponentni identifikatsiyalash Agilent 7890 A gaz xromatografi va 5975 C inert Mass-selektiv detektor (MSD) bilan birlashtirilgan TriplelesAmped Agentli Agilent yordamida amalga oshirildi. 7693 avtomatik namuna oluvchi Agilent 19091S‑433: HP‑5MS ustuni (30 m × 250 µm × 0,25 µm). Tashuvchi gaz sifatida geliy ishlatilgan (1 ml/min). Enjektör va detektor harorati 250 daraja ushlab turildi. Ustun harorati 3 daqiqa davomida 60 darajaga dasturlashtirildi va keyin 10 daraja / min tezlikda 2 daqiqa davomida 160 darajaga ko'tarildi. Keyinchalik harorat 300 darajaga ko'tarildi (15 daraja / min). Mass spektrlari EI rejimida 40-500 amu oralig'ida olingan. Olingan birikmalar ommaviy spektr ma'lumotlarini Milliy standartlar va texnologiyalar instituti kutubxonasida mavjud bo'lgan standart ma'lumotlar bilan taqqoslash yo'li bilan aniqlandi. C. reticulata Blanco qobig'ining (CR HAE) Soxhlet metanolik ekstraktining asosiy tarkibiy qismlari GC-MS tahlili orqali aniqlandi.

Statistik tahlil

EC50 qiymatlari o'rtacha ± standart og'ish sifatida ifodalangan, statistik tahlil o'zgaruvchanlikning bir tomonlama tahlili, so'ngra Tukeyning ko'p taqqoslash testi (P ​​< 0.05)="" orqali="" amalga="" oshirildi,="" bunda="" barcha="" namunalar,="" ya'ni="" test="" ekstraktlari="" va="" ijobiy="" standart="" bir-biri="" bilan="" solishtirildi.="" barcha="" hisob-kitoblar="" graphpad="" prism="" (versiya="" 5.0,="" graphpad="" software,="" aqsh)="" yordamida="" amalga="">

NATIJALAR VA MUHOKAMA

Ekstraktlarning dastlabki fitokimyoviy tahlili

C. reticulata Blanco ning metanolik ekstraktlarining dastlabki fitokimyoviy tahlili uglevodlar, aminokislotalar, flavonoidlar, taninlar va fenolik hosilalar, steroidlar va boshqalar mavjudligini ko'rsatadi [1-jadval].

1-jadval: Citrus reticulata Blanco qobig'ining metanolik ekstraktlarining dastlabki fitokimyoviy tahlili

FeCl3: Temir xlorid; CR HAE: Citrus reticulata Blanco issiq alkogolli ekstrakti; CR CAE: Citrus reticulata Blanco ning sovuq alkogolli ekstrakti

Jami fenolik tarkibini aniqlash

Fenolik moddalar, xususan, polifenollar sutemizuvchilarda turli xil foydali biologik faolliklarni namoyon etadi, jumladan, antiviral, antibakterial, immuno-stimulyatsiya, antiallergik, antihipertenziv, ishemik, aritmik, anti-trombotik, anti-trombotik, anti-trombotik. , gepatoprotektiv, yallig'lanishga qarshi va kanserogenga qarshi ta'sir ko'rsatadi.[21,22] Bir qator tadqiqotlar flavonoidlarning superoksid anionlari, yagona kislorod, gidroksil radikallari va lipid peroksil radikallarini tozalash vositasi sifatida harakat qilishini ko'rsatdi.[23,24] TPC va TFC. har ikkala ekstrakt uchun standart egri chiziqlar yordamida aniqlandi [1-rasm]. CR HAE ko'proq fenolik tarkibni ko'rsatdi, ya'ni CR CAE ga qaraganda 187,93 ± 4,69 µg GAE/mg ekstrakti, ya'ni 58,66 ± 2,40 µg GAE/mg ekstrakti. CR HAE va CR CAE uchun TFClar deyarli o'xshashligi aniqlandi, ya'ni mos ravishda 171,72 ± 4,13 µg QE/mg ekstrakti va 169,88 ± 9,79 µg QE/mg ekstrakti.

Flavonoidlarning umumiy miqdorini aniqlash

Antioksidant faolligi bittaga asoslanib xulosa qilinmasligi kerakantioksidantsinov modeli. Amalda, baholash uchun bir nechta in vitro sinov protseduralari o'tkaziladiantioksidantqiziqish namunalari bilan faoliyat.[25] Ushbu tadqiqotda biz buni baholadikantioksidantCR HAE va CR CAE ning turli xil potentsiallariantioksidanttahlillar, shu jumladan DPPH erkin radikallarni tozalash tahlili, superoksid anionini tozalash tahlili, ABTS radikalini tozalash tahlili va kislorod radikalini yutish qobiliyati (ORAC) tahlili.

Antioksidant tahlillari

1, 1-Difenil-2-pikrilgidrazil erkin radikallarni tozalash tahlili

DPPH-erkin radikallarni tozalash tahlili o'simlik ekstraktlarining dastlabki radikallarni tozalash faolligini sinash uchun eng ko'p qo'llaniladigan tahlillardan biridir. TheantioksidantPolifenol komponentlarini o'z ichiga olgan o'simlik ekstraktlarining faolligi ularning vodorod atomlari yoki elektronlarini berish va erkin radikallarni tozalash qobiliyatiga bog'liq.[26] Shunday qilib, DPPH ning binafsha rangi ‑ difenil‑ pikrilgidrazin (sariq) ga kamayadi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, CR HAE va CR CAE DPPH erkin radikallarini tozalashning 85 foizigacha ko'rsatdi [2-rasm]. Askorbin kislotasi ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan va 92 foizgacha tozalash faolligini ko'rsatdi. CR HAE biroz yuqoriroq ko'rsatdiantioksidantCR CAE ga qaraganda faollik. EC50 qiymatlari (µg/ml) 2-jadvalda ifodalangan.

Fenazin metosülfat-NADH tizimi superoksid anionini tozalash tahlili Superoksid anioni zaif oksidlovchi bo'lsa ham, u oxir-oqibatda

2-jadval: DPPH, superoksid, ABTS, anti-kollagenaza va anti-elastaz tahlillari uchun Citrus reticulata Blanco Peel metanolik ekstraktlarining EC qiymati

kuchli va xavfli gidroksil radikallari, shuningdek, oksidlovchi stressga hissa qo'shadigan yagona kislorod.[27] PMS-NADH birikmasi orqali erigan kisloroddan hosil bo'lgan superoksid radikallari va ularning NBTni kamaytirish qobiliyati bilan o'lchanishi mumkin. O'simlik ekstrakti bilan absorbansning 560 nm da kamayishi ularning reaksiya aralashmasidagi superoksid radikallarini o'chirish qobiliyatini ko'rsatadi. CR HAE CR CAE ga qaraganda kuchli superoksidni tozalash faolligini ko'rsatdi [3-rasm]. Askorbin kislota ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan va superoksid anionini 52 foizgacha tozalaydi. EC50 qiymatlari (µg/ml) hisoblab chiqilgan va 2-jadvalda ifodalangan. CR HAE CR CAEga qaraganda samaraliroq (P < 0,05)="" deb="" topildi,="" chunki="" u="" ec50="" qiymatini="" (µg/ml)="" kamroq="" va="" kuchli="" ekanligini="">antioksidantfaoliyat.

2, 2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota) radikalini tozalash tahlili

ABTS tahlili ABTS radikallari tomonidan nurni tozalashga asoslangan. Anantioksidantvodorod atomini berish qobiliyati bilan barqaror erkin radikalni so'ndiradi, bu yutilishning o'zgarishi bilan bog'liq bo'lib, uni spektrofotometrik tarzda kuzatish mumkin.[28] ABTS faolligi ABTS erkin radikal kationining foiz inhibisyoni bo'yicha hisoblanganantioksidantlarhar bir namunada. CR HAE, CR CAE va gallik kislotaning ABTS qiymatlari 2-jadvalda keltirilgan. CR HAE va CR CAE konsentratsiyaga bog'liq holda ABTS radikallarini tozalash faolligini ko'rsatdi va 59 foizgacha kuzatildi. Gallik kislota ABTSni tozalash qobiliyatining 79 foizigacha ko'rsatdi [4-rasm]. CR HAE va CR CAE uchun olingan EC50 qiymatlari (µg/ml) sezilarli farq yo‘qligini ko‘rsatdi (P <0,05) va="" har="" ikkala="" ekstrakt="" abtsni="" tozalash="" potentsialiga="" deyarli="" o‘xshashligini="">

Kislorod radikalini yutish qobiliyatini tahlil qilish

ORAC tahlili boshqa o'lchash usullariga qaraganda biologik jihatdan muhimroq tahlil hisoblanadiantioksidantkuchli, chunki u vodorod-atom o'tkazish reaktsiyalarini o'lchaydi va in vivo taqlid qiladiantioksidantharakat.[29] Shuningdek, u tabiiy moddaning suvda eriydigan va lipidda eriydigan komponentlari standartlashtirilgan maqsadni peroksil nitrit, gidroksil radikallari, superoksid anioni va oksidlanishdan qanchalik yaxshi himoya qilishini o'lchaydi.

singlet kislorod, va bir bilan solishtirish asosida ball hosil qiladiantioksidantnazorat.[30]Ushbu tadqiqotda biz CR HAE va CR CAE uchun ORAC qiymatlarini o'lchadik va TROLOX (mmol TROLOX ekvivalenti/g modda) bilan ifodalangan [5-rasm]. CR HAE CR CAE (1063 mkmol TROLOX ekvivalenti/g modda) dan yuqori ORAC qiymatini (1243 mmol TROLOX ekvivalenti/g modda) ko‘rsatdi [2-jadval].

Ferment tahlillari

Kollagenazaga qarshi tahlil

Matritsali metalloproteinazalar (MMP) - bu ECMning turli qismlarini buzadigan proteolitik fermentlar oilasi. Kollagenaza MMP oilasining a'zolaridan biri bo'lib, kollagenning degradatsiyasi uchun javobgardir. C. histolyticum (ChC) bakteriyalaridan olingan kollagenaza (C 3.4.24.3) fiziologik sharoitlarda va in vitro sharoitlarda sintetik peptidlardan substrat sifatida foydalangan holda mahalliy kollagenning uch spiral mintaqasini parchalashga qodir bo'lgan kam sonli proteinazlardan biridir. O'simlik ekstraktlarining kollagenaza fermentiga qarshi himoya ta'sirini ChC va sintetik substrat FALGPA yordamida o'rganish mumkin.[31] Ushbu tadqiqotda kollagenazni inhibe qilish faolligi CR HAE va CR CAE uchun baholandi. Katexin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CR HAE ekstrakti kollagenaza fermentini inhibe qilishda CR CAEga qaraganda samaraliroq bo'lib, 76 foizgacha inhibisyonni ko'rsatdi [6-rasm]. Samaradorlik EC50 (mkg/ml) qiymatida o'lchandi va 2-jadvalda ifodalangan.

Anti-elastaz tahlili

Elastaz elastinni parchalashga qodir yagona fermentdir. Elastaz fermentini inhibe qilish terining elastikligi va elastikligini saqlab qolishi mumkin.[32] Xususidaqarishga qarshi, elastaz fermentlarining ingibitorlarini topish foydali bo'lishi mumkin

terining elastikligini yo'qotishining oldini olish va shuning uchun terining sarkması. Anti-elastaz tahlilida cho'chqa pankreatik elastazasi substrat sifatida [N‑Succ‑(Ala) 3‑p‑nitroanilid] yordamida spektrofotometrik tarzda tekshirildi va p‑nitroanilin miqdori absorbsiyani 41{{ bilan o'lchash orqali aniqlandi. 6}} nm. CR HAE va CR CAE ning elastaz faolligiga inhibitiv ta'siri o'rganildi. Katexin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. CR HAE CR CAE bilan solishtirganda kuchli foizli elastazni inhibe qilish faolligini ko'rsatdi va 80 foizgacha inhibisyon kuzatildi [7-rasm]. EC50 qiymatlari (mg/ml) 2-jadvalda ifodalangan va CR HAE CR CAE dan kuchliroq ekanligi kuzatilgan (P <0,05). katexin="" uchun="" olingan="" ec50="" qiymati="" uning="" kuchli="" anti-elastaz="" faolligini="" va="" kuchli="" ta'sirga="" ega="" bo'lgan="" rolini="" ko'rsatadigan="" juda="" kam="" ekanligi="">qarishga qarshikomponent. Kim va boshqalar, 2004 yil yashil choydan (Camellia sinensis) ajratilgan katexin va epigallokatexin gallat kuchli anti-elastaz inhibitörleri ekanligini ko'rsatdi.

Gaz xromatografiyasi-mass-spektrometriya tahlili

CR HAE yuqoriroq ko'rsatdiantioksidantva CR CAE bilan solishtirganda qarishga qarshi qobiliyat; shuning uchun uning tarkibidagi tarkibiy qismlarni tushunish uchun CR HAE ning GC-MS tahlili o'tkazildi. Jami 20 xil birikma aniqlangan va 3-jadvalda keltirilgan. Xromatogramma 2,95 daqiqadan 44,45 minutgacha bo'lgan ushlab turish vaqtidagi 20 ta cho'qqini ko'rsatdi [8-rasm]. 44,37 foiz maydonga ega bo'lgan 44,11 minutdagi eng katta cho'qqi butilfosfonik kislota, pentil 4-(2-fenilprop-2-il) fenil efiri sifatida aniqlandi. Zab va boshq., 2012[33] xabar berdiantioksidantva C.reticulata etanolik ekstraktida mavjud bo'lgan butilfosfonik kislota, pentil 4-(2-fenilprop-2-il) fenil esterning o'simtaga qarshi faolligi. dihidro) yoki 4-xromanon (21,43 foiz maydon) bir turi hisoblanadi.

flavanon. Di Majo va boshq., 2005 [34] tsitrus mevalaridan flavanonlarni ajratib oldi va tuzilishga bog'liqligini ko'rsatdi.antioksidantfaoliyat. Boshqa birikmalar 3', 4', 5, 7, 8-Pentametoksiflavon va 4', 5, 7, 8-Tetrametoksiflavon polimetoksiflavon (PMF) turlaridir. PMF biologik faollikning keng spektrini namoyish etadi. Yaqinda Xo va boshq., 2012[35] tsitrus po'stlog'idan gidroksillangan PMFlarni ajratib oldi va aniqladi va ularning biologik faolligini, shu jumladan yallig'lanishga qarshi va saraton kimyo-profilaktika xususiyatlarini o'rgandi. Boshqa aniqlangan birikmalar orasida D-Limonen (1,46 foiz maydon), 4H-Pyran-4-on, 2, 3-dihidro-3, 5-dihidroksi-6-metil (1,46 foiz maydon), 2-metoksi-vinilfenol (1,46 foiz maydon) mavjud. 1,67 foiz maydon) va n-geksadekanoik kislota (2,51 foiz maydon) bilan bog'liq bo'lishi mumkin.qarishga qarshiC. reticulata Blanco po'stlog'ining salohiyati. Barcha aniqlangan birikmalarning tuzilishi 9-rasmda keltirilgan.

XULOSA

C. reticulata Blanco ekstraktlari in vitro orqali terining qarishiga qarshi baholandiantioksidant, anti-kollagenaz va anti-elastaz tahlillari. Tadqiqot shuni ko'rsatdiki, metanolik ekstrakt (Soxhlation) istiqbolli ekanligini ko'rsatdiantioksidantva anti-enzimatik faollik va kuchli vosita sifatida foydalanish mumkinajinlarga qarshiagentiqarishga qarshiterini parvarish qilish formulalari.

Tasdiqlash

Mualliflar Underwriters Lab (UL), Bangalor, Hindiston, GC‑MS Analysis and Natural Remedies, Bangalor, Hindiston, ORAC tahlili uchun minnatdorchilik bildiradilar.

Moliyaviy yordam va homiylik

Nil.

Manfaatlar to'qnashuvi

Hech qanday manfaatlar to'qnashuvi yo'q.