Cistanche Desertikolaning sportga qarshi charchoq ta'sir mexanizmlarini eksperimental o'rganish
Dec 04, 2021
Aloqa: emily.li@wecistanche.com
YANG Hong-xin1, YANG Yong2, YAN Xiao-hong1 (1.Sitobiologiya boʻlimi, Ichki Moʻgʻuliston tibbiyot kolleji, Xoxxot 010059, Xitoy; 2. Onkologiya boʻlimi, Ichki Moʻgʻuliston avtonom viloyati kasalxonasi, Huxhot 010017, Xitoy)
Annotatsiya:Maqsad. ta'sirini o'rganishcistanche deserticolasichqonlar yuk suzishda laktat dehidrogenaz (LDH) izoenzimi, glikogen va azot oksidi sintaza 3 (NOS3) bo'yicha jigar va sport charchoqqa qarshi tegishli molekulyar mexanizmlarini o'rganish. Usullar Sichqonlar oddiy nazorat guruhiga, sport nazorati guruhiga va boshqa guruhga bo'lingancistanche deserticolaeksperimental guruh. Og'iz nazorati guruhi va sport nazorati guruhining har bir sichqoniga kuniga 0,2 ml sho'r suv berildi. Cistanche deserticola tajriba guruhining har bir sichqoniga suv qaynatmasi berildicistanche deserticola0, kuniga 2 ml (3 g/kg). Ma'muriyat 15 kun davom etdi. 90 daqiqa davomida yuk suzish sport nazorati guruhi va cistanche deserticola eksperimental guruhining sichqonlarida oxirgi administratsiyadan 1 soat o'tgach amalga oshirildi. Sichqonlarning jigarlari 10 soatlik suzishdan keyin olib tashlandi. Jigarning bir qismi parafin bo'laklarini tayyorlash uchun neytral formalin suyuqligida o'rnatildi, qolgan qismi esa LDH faolligini o'lchash uchun ishlatilgan. Jigarning tuzilishi HE ni bo'yash orqali kuzatildi va jigar glikogeni glikogenni bo'yash orqali o'lchandi. NOS3 SP immunohistokimyoviy usuli bilan tekshirildi. Natijalar: Sport nazorati guruhining jigar tuzilishi jiddiy shikastlangan, LDH4 va LDH5 izoenzimi yuqori, jigar glikogeni kamaygan, NOS3 normal nazorat guruhiga nisbatan pasaygan (P).<0.05). the="" liver="" structure="" of="" the="" cistanche="" deserticola="" experimental="" group="" was="" good,="" ldh5="" isoenzyme="" was="" low,="" the="" glycogen="" was="" rich="" and="" expression="" of="" nos3="" was="" upregulated="" compared="" with="" the="" sport="" control="" group="" (p=""><0.05). conclusions="">Cistanche deserticolaLDH5 ni kamaytirishi, sichqonlarning jigarini suzish yukini himoya qilishi va jigarni himoya qilish va jismoniy imkoniyatlarni tiklashni yaxshilash uchun NOS3 ifodasini oshirish orqali glikogen to'planishini tezlashtirishi mumkin.
Kalit so'zlar:cistanche deserticola;jigar glikogeni;azot oksidi sintaza 3;sichqoncha.
Cistanche rasm
Cistanche,Dayun nomi bilan ham tanilgan, Ledanaceae oilasining ikki yillik parazit o'ti. Uning tarozi bilan quruq go'shtli poyalari bor. U asosan Ichki Mo'g'uliston, Gansu, Shinjon, Qinghai va boshqa joylarda qumli tuproqlarda va yarim qumli o'tloqlarda ishlab chiqariladi. Ichki Mo'g'ulistonCistanchebarcha ishlab chiqarish sohalari orasida eng yaxshi sifatga ega.Cistanchetabiatan shirin, sho'r va issiq. ga kiradibuyraklarva yo'g'on ichak meridiani. Uning asosiy vazifalari buyraklarni oziqlantirish va yangni mustahkamlash, mohiyat va qonni oziqlantirish va ichaklarni namlashdir. Ko'pincha iktidarsizlik, bepushtlik, zaif bel va tizzalar, mushaklar va suyaklarning zaifligi, quruq ichak va qabziyatni davolash uchun ishlatiladi. Ushbu tadqiqot ta'sirini kuzatishga qaratilganCistancheyuk ko'taruvchi suzuvchi sichqonlarda jigar laktat dehidrogenaza (LDH), jigar glikogeni va azot oksidi sintaza 3 (NOS3) sichqonlarda yuk ko'taruvchi suzish testi orqali va uning jigarda himoya mexanizmini o'rganish. Shuning uchun u chuqur tadqiqot, ishlab chiqish va foydalanish uchun nazariy asos bo'lishi mumkinCistanche sportda sog'lom ovqatlanish.
1 Eksperimental materiallar
1.1 Hayvonlar
30 erkak Kunming kalamushlari, toza sinf, tana vazni (20±0,5) g, Ichki Mo'g'uliston universitetining Hayvonlar markazi tomonidan taqdim etilgan.
1.2 Dori vositalari
Cistanche deserticolaYCMa, Ejina Banner, Ichki Mo'g'ulistonda ishlab chiqarilgan va aniqlangan. Asl dorivor materialga ko'ra: suv=100 g: 400 ml, avval 30 daqiqa davomida namlanadi, isitiladi va qaynatiladi, so'ngra 30 daqiqa davomida iliq olovda qaynatiladi. Suyuq dorini to'kib tashlang va 100 g: 200 ml nisbatda qayta qaynatib oling. Ikki qaynatma aralashtiriladi va ikki qatlamli doka bilan filtrlanadi, so'ngra har bir mililitr suv qaynatma eritmasi uchun 1 g asl dorivor material ekvivalentiga kontsentratsiya qilinadi, muzlatgichda 4 daraja haroratda saqlanadi.
1.3 Reaktivlar va asboblar
NOS3 poliklonal antikori Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd kompaniyasidan sotib olingan. SP to'plami Fujian Maixin Reagent kompaniyasidan sotib olingan. Laktat dehidrogenaza izoenzimi to'plami Ichki Mo'g'uliston Tongri Reagent kompaniyasidan sotib olingan (faqat Nissanga tegishli). Nankin JD-80 rangli tasvir analizatori. Amerika UVP jel tasvirni tahlil qilish tizimi.
2 Eksperimental usul
2.1 Guruhlash va dozalash
Kunming sichqonlari tasodifiy ravishda oddiy nazorat guruhiga, mashqlarni nazorat qilish guruhiga vaCistancheeksperimental guruh, har bir guruhda 10 sichqon. Oddiy nazorat guruhi va mashqlarni nazorat qilish guruhi kuniga bir marta, 0,2 ml / vaqtga oddiy sho'r suv berildi; theCistancheeksperimental guruh berildicistancheqaynatma (3 ml asl suv qaynatmasidan oling va 10 ml suv qo'shing). Kuniga bir marta, 0,2 ml / vaqt, sutkalik dozasi 3 g / kg, ketma-ket 15 kun. Oxirgi dozadan bir soat o'tgach, mashqlarni nazorat qilish guruhidagi sichqonlar vaCistancheTajriba guruhining dumlariga 1 g qo‘rg‘oshin og‘irligi yuklangan va ular 30±0,5 daraja haroratda suzish uchun balandligi 50 sm, uzunligi 50 sm va eni 35 sm bo‘lgan hovuzga joylashtirilgan. , Sichqonlarni doimiy ravishda kuzatib boring, agar ular suzishni to'xtatganligi aniqlansa, ularning harakatini 90 daqiqa davomida rag'batlantirish uchun yog'och tayoqdan foydalaning. Mashqdan so'ng, oddiy ovqatlaning, 10 soat dam oling va keyin sichqonlarni oddiy nazorat guruhi sichqonlari bilan evtanizatsiya qiling. Jigarni chiqarib oling, bir qismini 10 foiz neytral formaldegid bilan mahkamlang va suvsizlanish, shaffoflik, mumga botirish va joylashtirishdan keyin uni 4 mkm qalin qilib qo'ying. Har bir guruhning jigar to'qimalarining tuzilishini kuzatish uchun HE bo'yash usulidan foydalaning. Boshqa qismi oddiy sho'r suv bilan yuvilib, -20 darajada muzlatilgan holda saqlangan va o'lchash vaqtida xona haroratida eritilgan. Filtr qog'ozi bilan quriting va torting, so'ngra oddiy fiziologik eritma bilan jigar gomogenatini tayyorlang, 15 daqiqa davomida 3 500 rpm / min tezlikda santrifüj qiling. Supernatantni oling va laktat dehidrogenaz izoenzim faolligini elektroforez bilan o'lchang.
2.2 Laktat dehidrogenaza faolligini aniqlash
Poliakrilamid gel elektroforezi yordamida LDH izoenzimlari elektroforetik harakatchanlik farqlariga ko'ra ajratiladi. Namuna ajratish jeli konsentratsiyasi 7 foiz, pH 8,9 va konsentrlangan jel konsentratsiyasi 4 foiz, pH 6,8. 10 mkl namuna 1 tomchi glitserin va bromofenol ko'k indikatori bilan aralashtiriladi. Elektrod buferi Tris-glisin (pH 8,7), kuchlanishni 100-150 V da barqarorlashtirishni boshlang, 30 daqiqadan so'ng 200-250 V ga qo'shing va 4 soat davomida elektroforez qiling. Elektroforezdan so'ng u laktat dehidrogenaz izoenzim to'plami bilan bo'yalgan va 30 daqiqa davomida 37 darajada bo'yalgan, ko'k laktat dehidrogenaz izoenzim tasmasi ko'rsatilgan, keyin suv bilan yuvilgan, muzli sirka kislotasi bilan mahkamlangan. Nihoyat, ma'lumotlarni tahlil qilish uchun UVP gel tasvir tahlil tizimidan foydalaning.
2.3 Glikogenli bo'yash
Qalinligi 4 mkm bo'lgan ketma-ket qismlar muntazam ravishda suvga parafinsizlanadi. 15 daqiqa davomida 37 daraja haroratda 1 foizli davriy kislota eritmasiga soling. oqadigan suv bilan yuviladi. Shiff eritmasiga 60 daqiqa qo'ying. oqadigan suv bilan yuviladi, gradient etanol, shaffof ksilen bilan suvsizlanadi va neytral saqich bilan o'rnatiladi. Keyin mikroskop ostida binoni natijalarini kuzating.
2.4 Immunogistokimyoviy bo'yash
Dilimlar muntazam ravishda suvga deparafinizatsiya qilinadi va antijen mikroto'lqinli sitrat tampon yordamida tuzatiladi. Endojen peroksidazani olib tashlash uchun A eritmasi bilan 10 daqiqa davomida harakat qiling va B eritmasi (suyultirilgan echki zardobi) bilan 10 daqiqa davomida blokirovka qiling. Bir kechada 4 daraja namlangan qutiga birlamchi antikor qo'shing va ikkinchi kuni pH 7,4 PBS eritmasi bilan 5 min × 3 marta yuving. Keyin biotin bilan belgilangan C eritmasi (ikkilamchi antikor ishlaydigan eritma) qo'shing va 10 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, PBS eritmasi bilan 5 min × 3 marta yuving. Horseradish peroksidaza yorlig'i D eritmasini qo'shing va 10 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, PBS eritmasi bilan 5 min × 3 marta yuving. Nihoyat, u DAB eritmasida 5 daqiqa davomida ishlab chiqilgan, musluk suvi bilan yuvilgan, HE qarshi bo'yalgan, gradient etanol bilan suvsizlangan, ksilen bilan shaffof va neytral saqich bilan o'rnatilgan. Filmni o'rnatgandan so'ng, yorug'lik mikroskopi ostida kuzating. Tajribalarning har bir partiyasida asosiy antikor o'rniga manfiy nazorat sifatida fosfat tamponlangan sho'r suv (PBS) ishlatilgan.
2.5 Azot oksidi sintaza 3 ifodasini tahlil qilish
Yorug'lik mikroskopi ostida vizual yarim kantitativ usul bilan dastlabki kuzatish, NOS3 musbat mahsulot to'q jigarrang yoki jigarrang. Ijobiy mahsulot gepatotsitlar sitoplazmasida yoki gepatotsitlar orasidagi endotelial hujayralarda joylashgan bo'lib, ko'k fon salbiy. Keyin musbat reaktivning kulrang qiymatini o'lchash uchun rangli tasvirni tahlil qilish tizimidan foydalaning. 40x ob'ektiv linzalari ostida har bir film uchun 4 ta ko'rish maydonining parametrlari tasodifiy o'lchanadi va o'rtacha qiymat olinadi. Ushbu parametr NOS3 bo'yash intensivligining o'zgarishini aks ettirish uchun ishlatiladi.
2.6 Statistik usullar
Barcha ma'lumotlar x-±s sifatida ifodalanadi va SPSS11.0 statistik dasturiy ta'minot to'plami t-test uchun ishlatiladi va P<0.05 is="" considered="" as="" significant="">
3 Natijalar
3.1 Optik mikroskop ostida to'qimalar tuzilishini kuzatish
Oddiy guruhdagi jigar lobulalarining tuzilishi aniq, hujayra kordonlari tartibli joylashgan, jigar sinusoidlari normal, jigar hujayralarida aniq jarohatlar yo'q, yadro tuzilishi aniq. Jismoniy mashqlar nazorat guruhining normal to'qimalarining tuzilishi yo'qoldi, lobula chegaralari aniq emas va hujayra shnuri buzilgan, jigar sinusoidlarining ko'pchiligi yo'qolgan va gepatotsitlarning keng vakuolyar degeneratsiyasi hujayra hajmining oshishi bilan namoyon bo'ladi. Sitoplazma bo'shashgan, engil bo'yalgan, hatto shaffof va shaffof bo'lib, ba'zi jigar hujayralari odatdagi balon o'zgarishini ko'rsatadi, oz miqdorda o'choqli yoki punktat nekroz bilan. ning jigar hujayralariCistancheeksperimental guruh engil loyqa edi, lekin ular muntazam ravishda tashkil etilgan. Hujayralarda aniq vakuolalar va bo'shliqlar bo'lmagan, hujayra kordonlari tartibli joylashtirilgan, yadro tuzilishi aniq edi.
3.2 Sichqonlarda yuk ostidagi laktat dehidrogenaza izoenzimlarining faolligiga ta'siri (1-jadvalga qarang)
3.3 Jigarning glikogenli bo'yalishini optik mikroskop ostida kuzatish
Oddiy nazorat guruhida glikogen miqdori yuqori bo'lmasa-da, har bir jigar hujayrasida glikogen mavjud, taqsimlanishi bir xil, vakuol hodisasi yo'q. Jismoniy mashqlar nazorati guruhida kamroq glikogen bor edi, jigar hujayralarida tarqalgan va ba'zi joylarda vakuolalar paydo bo'lgan; Cistanche eksperimental guruhi glikogenga boy edi, lekin hujayraning bir tomonida juda ko'p to'plangan.
3.4 Optik mikroskop va miqdoriy tasvir tahlili orqali azot oksidi sintaza 3 ifodasini kuzatish
Oddiy nazorat guruhidagi gepatotsitlar sitoplazmasida kuchli ijobiy ifoda mavjud bo'lib, u diffuz tarzda, ayniqsa ikki yadroli hujayralarda va endotelial hujayralarda ijobiy ifodalanadi. Mashqni nazorat qilish guruhidagi gepatotsitlar va endotelial hujayralar sitoplazmasidagi ifoda zaiflashdi.Cistancheeksperimental guruh gepatotsitlar sitoplazmasida ijobiy, endotelial hujayralarda esa kuchli ijobiy ifodaga ega edi. Rangli tasvir analizatorining tahlil natijalari 2-jadvalda keltirilgan.
4 Munozara
Inson tanasining harakati energiyaga muhtoj va organizm metabolizm jarayonida ham energiyaga muhtoj Hujayra almashinuvi adenozin trifosfat (ATP) ning parchalanishidan to'g'ridan-to'g'ri energiya sarflaydi va ATP sintezi uchun zarur bo'lgan energiya, asosan, shakarning katabolizmi bilan ta'minlanadi. . Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, mashaqqatli mashqlardan so'ng tanada ko'p miqdorda H plyus, erkin radikallar, sut kislotasi va hujayralarning normal metabolizmiga ta'sir qiluvchi boshqa moddalar paydo bo'ladi. Shu bilan birga, hujayralardagi glyukoza etishmasligi jismoniy mashqlar charchashiga va hujayraning shikastlanishiga olib keladi. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, jigar to'qimalarining strukturasining shikastlanishi juda ko'p mashqlardan keyin juda jiddiy bo'lib, u jigar glikogen sintezini kamaytirish kabi hujayra anabolizmiga ham ta'sir qiladi. Cistanche qabul qilgan sichqonlar, asosan, LDH5 ning kamayishi tufayli ko'p jismoniy mashqlar so'ng jigar shikastlanishini kamaytirishi kuzatilishi mumkin va jigar glikogen miqdori mashqlarni nazorat qilish guruhiga qaraganda ancha yuqori.CistancheLDH5 funktsiyasini kamaytirish orqali jigar himoyasiga erishish va normal fiziologiyani saqlab turishi mumkin. Glikogenli bo'yash natijalaridan glikogen tarkibiCistancheeksperimental guruh oddiy nazorat guruhidan yuqori. qiladiCistanchejismoniy mashqlar oldidan jigar glikogen zahiralarini oshirish yoki mashqdan keyin stress ostida glikogen sintezini tezlashtirish? Xulosa chiqarish mumkin emas, chunki mashq qilmaydigan nazorat guruhi yo'qCistanchetajribada. Keyingi bosqichda u hali tasdiqlanmagan, ammo Cistanche ning jigarga himoya ta'siri va ko'p mashqlardan keyin glikogen sintezini rag'batlantirish aniq.
NO so'nggi yillarda sport jamoatchiligi tomonidan yuqori baholangan kichik molekulali moddadir. NOS NO ishlab chiqarish uchun asosiy tezlikni cheklovchi omil hisoblanadi. NOSda 3 turdagi izofermentlar mavjudligi tasdiqlangan. NOS1 neyron azot oksidi sintaza deb ataladi. U neyron hujayralarida, skelet mushak hujayralarida va boshqalarda mavjud bo'lib, asosan neyrorivojlanish, neyrosekretsiya, o'rganish va xotira jarayonlarida ishtirok etadi. NOS2 asosan silliq mushak hujayralari, makrofaglar va limfotsitlarda topilgan induksiyalangan azot oksidi sintazasidir. Bu ferment induktsiya qilingandan so'ng, u substrat tugamaguncha yoki hujayra o'lguncha NO ni sintez qilishda davom etishi mumkin. Hozirgi vaqtda u hujayra shikastlanishiga aloqador deb hisoblanadi; NOS3 - bu endotelial azot oksidi sintazasi bo'lib, u asosan endotelial hujayralar va gepatotsitlarda tarqalgan. Ishlab chiqarilgan NO asosan fiziologik funktsiyalarda ishtirok etadi. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, endotelial hujayralar va gepatotsitlarda NOS3 ning ekspressiyasi ko'p mashqlardan so'ng zaiflashadi va natijada NO kamayadi, shuning uchun qon tomirlari samarali ravishda kengaytirilmaydi, qon oqimi kamayadi va xom ashyo sintetik glikogenni jigar hujayralariga olib borib bo'lmaydi, shuning uchun glikogen sintezi kamayadi.
Cistanche charchoqqa qarshi funksiya
Cistancheendotelial hujayralar va jigar hujayralarida NOS3 ifodasini ko'tarishi mumkin. Qon tomirlarini reaktiv ravishda kengaytiring. Qon oqimini oshirish, glikogen sintezi xom ashyosini tashish qobiliyatini tezlashtirish. Glikogen sintezini tezlashtiring va tanani normal fiziologik metabolizm darajasida saqlang. Shu sababli, jigarni himoya qilish uchun LDH5 ni kamaytirish va sut kislotasi glyukoneogenezini rag'batlantirish uchun NOS3 ekspressiyasini oshirish muhim mexanizm bo'lishi mumkin.Cistanchejigarni himoya qilish va jismoniy tiklanishni rag'batlantirish. Ushbu tadqiqot uni yanada rivojlantirish va qo'llash uchun ilmiy eksperimental asos yaratadiCistanchesport tibbiyoti sohasida, shuningdek, rivojlanishi va tozalanishi uchun asos yaratadiCistanche ta'sirimoddalar.
Maqoladan: YANG Hong-xin1 tomonidan "Cistanche Desertikolaning sport charchoqqa qarshi ta'sir mexanizmlarini eksperimental o'rganish" va boshqalar.
-----Xitoyning TCM haqida ma'lumot jurnali, 2008 yil aprel, 15-jild, №4
