Gao-Zi-Yao eski spontan gipertenziv kalamushlarda o'rganish va xotira funktsiyasini yaxshilaydi 2-qism

Eksperimental hayvonlar

O'n ikki oylik va sakkiz haftalik erkak spontan gipertonik kalamushlar (SHR) Nanjing Hayvon modeli markazidan sotib olindi.

8-haftalik erkaklar va xotira o'rtasida kuchli bog'liqlik bor. Bu davrda erkak jonzotning miyasi jadal rivojlanib, uning neyronlari orasidagi aloqalar asta-sekin kuchayib boradi, bu esa uning xotirasining rivojlanishiga ta'sir qiladi.

Tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, erkak mavjudotlarning xotirasi yoshga qarab yaxshilanishda davom etmoqda. Bu nafaqat ularning yashashi va ko'payishiga sezilarli ta'sir ko'rsatadi, balki ularga atrof-muhitga yaxshiroq moslashishga va yangi qiyinchiliklarni engishga yordam beradi.

Shuning uchun biz yosh erkaklarni jumboqlarni echish, yangi ko'nikmalarni o'rganish va yangi sohalarni o'rganish kabi turli xil foydali tadbirlarda ishtirok etishga faol rag'batlantirishimiz kerak. Bu harakatlar ularning miyasini rag'batlantiradi, tezroq rivojlanishiga va xotira qobiliyatlarini yaxshilashga imkon beradi.

Shu bilan birga, biz yosh erkak mavjudotlar uchun mos muhit va muhitni ham ta'minlashimiz kerak. Ularni xavfsiz va yaqin his qilish ularning miya rivojlanishiga yordam beradi va xotirasini yaxshilaydi.

Muxtasar qilib aytganda, biz yosh yigitlarga aqlli, o'ziga ishongan va qobiliyatli mavjudotlar bo'lishlari uchun xotirasini yaxshilashga yordam berish uchun qo'limizdan kelganini qilishimiz kerak. Bu nafaqat ularning shaxsiy rivojlanishiga, balki butun turning gullab-yashnashi va omon qolishiga ham yordam beradi. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche deserticola xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche deserticola antioksidant, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirga ega bo'lib, miyadagi oksidlovchi va yallig'lanish reaktsiyalarini kamaytirishga yordam beradi va shu bilan miyani himoya qiladi. asab tizimining salomatligi. Bundan tashqari, Cistanche deserticola nerv hujayralarining o'sishi va tiklanishiga yordam beradi, shu bilan neyron tarmoqlarning ulanishi va funktsiyasini oshiradi. Ushbu ta'sirlar xotira, o'rganish va fikrlash tezligini yaxshilashga yordam beradi, shuningdek, kognitiv disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarning rivojlanishiga to'sqinlik qilishi mumkin.

Xotirani kuchaytirish uchun bilish qo'shimchalarini bosing

Ushbu modelda gipertenziya 4 oylik yoshda rivojlana boshlaydi, 6 oyligida miya mikrotomirlarida gipertoniya bilan bog'liq o'zgarishlar paydo bo'ladi [37].

Kalamushlar standart gigiyena bilan maqbul sharoitlarda joylashtirildi, 25 daraja haroratda 12/12 yorug'lik / qorong'u tsikl bilan saqlangan va standart kalamush cho'mi va ad libitum suv bilan oziqlangan.

Barcha protseduralar SoochowUniversity tomonidan tasdiqlangan hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha ko'rsatmalarga muvofiq tasdiqlangan va amalga oshirilgan, bu bizning oldingi hisobotimizga mos keladi[35].

Tajribalar Milliy Sog'liqni saqlash institutlarining Laboratoriya hayvonlaridan foydalanish bo'yicha ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi (NIH, nashr raqami 85-23, 1996 yil qayta ko'rib chiqilgan). Ushbu tadqiqot ARRIVE ko'rsatmalari tomonidan xabar qilingan.

Sakkiz haftalik SHR qarishni nazorat qilish uchun qo'llanildi (SHR-Young, n =10). O'n ikki oylik kalamushlar distillangan suv (Eski SHR-C, n=10), past dozasi (Eski SHR-L, n=10), o'rtacha doza uchun Gao-Zi-Yao bilan yoki bo'lmasdan davolandi. (Eski SHR-M, n=10), yuqori doza (Eski SHR-H, n=10) oshqozon bilan oziqlantirish orqali.

Past, o'rta va yuqori Gao-Zi-Yao dozalari 1/2-, 1- ga teng, bemorning klinik qo'llanilishi uchun tana yuzasi maydoniga qarab hisoblab chiqilgan uch baravar doza. Gao-Zi-Yao qo'llashdan oldin 5 ml distillangan suvda eritildi va 4 hafta davomida bir martalik sut mahsulotlari iste'mol qilindi.

Qon bosimi va yurak urish tezligi har hafta quyruq manjeti usuli bilan kuzatilgan va tana vazni ham oldingi kuzatishimizga ko'ra har hafta kuzatilgan [35].

4 hafta o'tgach, Morris suv labirintida tajriba o'tkazildi va kalamushlar natriy pentobarbital (50 mg / kg ip) bilan behushlik ostida qurbon qilindi, keyingi tahlil qilish uchun hipokampus to'qimalari yig'ildi. Barcha eksperimental protokollar Soochow universitetining axloqiy litsenziyalash qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Morris suv labirintidagi tajriba

Morris suvli labirint tajribasi (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanxay, Xitoy) ilgari tasvirlanganidek, ba'zi o'zgartirishlar bilan amalga oshirildi [38]. Sinov 6 kunga rejalashtirilgan bo'lib, 1 dan 5 kungacha o'quv davri uchun, 6 kun esa test natijalari uchun edi.

Kalamushlar 2 daqiqalik sut mahsulotlari uchun mashg'ulotlar oldilar, platformaga chiqish vaqtini kechikish vaqti sifatida qayd etishdi. 6-kuni platforma olib tashlandi. Kalamushlar eng uzoq masofali kvadrantga joylashtirildi va suzish traektoriyasi 2 daqiqa davomida qayd etildi.

O'rganish va xotira funktsiyasi uchun parametrlar dasturiy ta'minot tomonidan hisoblab chiqilgan.

Elishay yordamida NO va yallig'lanish omillarining sarum darajasini o'lchash

Sarumdagi NO darajalari (Katalog No: S0023), IL-1 (Katalog raqami: A301BH80153), IL-2 (Katalog raqami:A31038348), IL-6 (Katalog raqami: A30681042), andTNF- (Katalog raqami: A38280855) savdoda mavjud bo'lgan Elishay to'plamlarini o'lchadi (BiotechnologyCo., Ltd. Shanxay ferment tadqiqoti. ​​Shanxay, Xitoy). Barcha qadamlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi.

Nissl bo'yash

Sichqonchaning hipokampus to'qimasi izolyatsiya qilingan, mahkamlangan, kerosin bilan qoplangan, so'ngra xona haroratida 5-10 daqiqa davomida 1% toluidin ko'k bo'yash eritmasida inkubatsiya qilingan. O'n qism distillangan suvda yuvilgan, 5-30 daqiqa davomida 95% etanolda namlangan va 100% etanolda suvsizlangan.

Suvsizlanishdan so'ng, bo'lak ksilenga solingan va qatronli muhitdan foydalangan holda qopqoq bilan qoplangan. Hipokampusning CA1, CA2 va dentat girus (DG) hududlaridagi neyronlar soni ImageJ tahlil dasturi yordamida kuzatildi va tahlil qilindi.

O'rganish va xotira bilan bog'liq oqsillar uchun Western blot

O'rganish va xotira bilan bog'liq oqsillar uchun Western blot bizning oldingi hisobotimizda ta'riflanganidek, ba'zi o'zgartirishlar bilan amalga oshirildi [39].

Hipokampus to'qimalari fenilmentansülfonil ftorid (R&D Systems Inc., Minneapolis, AQSh) o'z ichiga olgan RIPA buferi (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7.0) bilan homogenlashtirildi. Gomogenatlar 12,000 × g haroratda 10 daqiqa davomida 4 gradusda santrifüj qilindi.

Hujayra oqsillari SDS-PAGE orqali ajratildi va PVDF membranalariga o'tkazildi (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membranalar PBS dagi 5% yog'siz sutda va xona haroratida 0.1% Tween-20da bloklangan.

Keyin dog'lar birlamchi antikor bilan inkubatsiya qilindi: Anti-glutamat retseptorlari 1 (1:1000, Abcam, Inc., Katalog №: ab183797), AntiNMDAR2B antikorlari (1:1000, Abcam, Inc., Katalog №: ab28373), Anti-fosfo -CaMKII antikori (1:1000, Abcam, Inc., Katalog №: ab171095), Antifosfo-CREB antikori (1:1000, Abcam, Inc., Katalog №: 32096) yoki anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Katalog raqami: sc-47724).

Keyin membranalar ikkilamchi antikor bilan 1 soat davomida inkubatsiya qilindi (HRPkonjugatsiyalangan quyonga qarshi Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Katalog №: ab205718). Keyin membranalar TBS-T yordamida 15 daqiqa davomida uch marta yuvildi va xemiluminesans reagentlar (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, AQSh) bilan 1 daqiqa davomida inkubatsiyadan oldin ortiqcha antikorlarni olib tashladi.

Bundan tashqari, immunoreaktiv bantlar elektroforez gel tahlil tizimi (GL2200 Pro, Crestream Inc. AQSh) tomonidan aniqlandi. Tarmoqlarning intensivligi Image J dasturi tomonidan tahlil qilindi. Maqsadli oqsillar miqdori GAPDH ifodasi bilan normallashtirildi [39].

Statistik tahlil

Statistik tahlil uchun SPSS 18.0 dasturidan foydalanildi. Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM Grouped ma'lumotlari bir tomonlama dispersiya tahlili, so'ngra Student-Nyuman-Keuls testi yordamida tahlil qilingan holda taqdim etiladi. Pvalue < 0.05 oldingi hisobotimizdagi [35] statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblangan.

Natijalar

Yosh SHR va eski SHR o'rtasidagi sistolik qon bosimi (SBP), yurak tezligi va tana vazni

Yong SHR eski SHR bilan solishtirganda dastlabki ikki haftada past SBPni ko'rsatdi, so'ngra keyingi uch haftada ikki guruh o'rtasida farq yo'qgacha oshdi (2A-rasm).

Aksincha, dastlabki ikki haftada yurak urish tezligi ikki guruh o'rtasida farq qilmadi, keyin yosh SHR keyingi uch hafta ichida eski SHR bilan solishtirganda sezilarli darajada oshdi (2B-rasm). Butun kuzatish davrida yosh SHR eski SHR bilan solishtirganda kamroq tana vaznini ko'rsatdi (2C-rasm).

Yosh SHRand eski SHR o'rtasidagi Morris suv labirint parametrlari

Gippokampalga bog'liq o'rganish va xotirani aniqlash uchun Morris suv labirintida tajriba o'tkazildi. Eski SHR yosh SHR bilan solishtirganda dastlabki to'rt kun ichida uzoqroq qochish kechikishini ko'rsatdi (3A-rasm).

Maqsadli kvadrantni kesib o'tish vaqti eski SHRda yosh SHRga qaraganda kamroq edi (3B-rasm).

Maqsadli platforma kvadrantida ishlash vaqti yosh SHR bilan solishtirganda eski SHRda qisqaroq edi (3C-rasm). Kvadrantdagi yo'l uzunligi ulushi ham eski SHRda eski SHR bilan solishtirganda qisqaroq edi (3D-rasm). Ushbu natijalar eski SHR kognitiv funktsiyaning buzilishini ko'rsatadi.

Yosh SHR va eski SHR o'rtasidagi hipokampusdagi neyronlar soni

Gippokampning turli sohalaridagi neyronlar soni Nissl binoni bilan hisoblangan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, eski SHR ning CA1, CA2 va DGregionlarida yosh SHR bilan solishtirganda neyronlar soni kamroq (4-rasm).

O'rganish va xotira bilan bog'liq protein ifodasi yosh SHR va eski SHR o'rtasidagi hipokampusni o'rnatdi

Western blot natijalari shuni ko'rsatdiki, eski SHR hipokampusida o'rganish va xotira bilan bog'liq oqsillar (GluR1, NMDAR 2B, fosforlangan-CaMK II va fosforlangan-CREB) yosh SHRhipokampusdagiga qaraganda pastroq bo'lgan (5-rasm).

Gao-Zi-Yaoning eski SHRda SBP, yurak urishi va tana vazniga ta'siri

Gao-Zi-Yaoning SBPga ta'siri tahlil qilindi. Gao-Zi-Yaoning past dozasi bilan davolash, eski SHR guruhida ikkinchi haftadan to'rtinchi haftagacha SBPni sezilarli darajada kamaydi, Gao-Zi-Yaoning o'rta va yuqori dozalari eski SHRda birinchi haftadan to'rtinchi haftagacha SBPni sezilarli darajada kamaytirdi. to'rtinchi hafta nazorat eski SHR bilan solishtirganda (6A-rasm). Tese natijalari Gao-Zi-Yaoning antihipertenziv ta'sir ko'rsatishini ko'rsatadi.

Shuningdek, biz Gao-Zi-Yaoon yurak tezligi va tana vaznining ta'siri haqidagi ma'lumotlarni solishtirdik. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, butun kuzatish davrida barcha guruhlar o'rtasida yurak urish tezligi va tana vaznida sezilarli farq yo'q (6B, C-rasm).

Gao-Zi-Yaoning eski SHRda NO, IL-1, IL-2 va TNF-ning sarum darajalariga ta'siri

GAO-ZIYAO ning o'rta va yuqori dozalari bilan davolash SHR nazorat guruhidagi darajalarga nisbatan sarum NO darajasini oshirdi (7A-rasm). GAO-ZI-YAO ning barcha sinovdan o'tgan dozalari bilan davolash SHR nazorat guruhidagi darajalarga nisbatan qon zardobidagi IL-1, IL-2 darajasini pasaytirdi (7B, C-rasm); ammo, faqat GAO-ZI-YAO ning yuqori dozasi TNF- ning sarum darajasini bostirdi (7D-rasm).

Ushbu natijalar GAO-ZI-YAO oksidlovchi stress va yallig'lanishni tartibga solishi mumkinligini ko'rsatadi.

For more information:1950477648nn@gmail.com