Graham-2023-Ta'lim noyob transkriptni keltirib chiqaradi

Annotatsiya:
O'rganish ko'p vaqt oralig'ida eshitish korteksida neyrofiziologik plastisiyani keltirib chiqarishi mumkin. Eshitish kortikal funktsiyasining kunlar, haftalar yoki hatto umr bo'yi davom etadigan doimiy o'zgarishlari o'rganish natijasida kelib chiqqan gen ekspressiyasini talab qiladi. Haqiqatan ham, de novo transkripsiya o'tkinchi tajribalar xulq-atvorga doimiy ta'sir ko'rsatadigan uzoq muddatli xotiralarga aylanadimi yoki yo'qmi, molekulyar determinantdir.

Fan va texnologiyaning uzluksiz rivojlanishi bilan inson hayoti davomida ko'plab sehrli hayot hodisalari paydo bo'ldi, ular orasida tadqiqot uchun eng qimmatli narsa xotiradir. Xotira insonning ilg'or nerv faoliyatining muhim qismi bo'lib, u shuningdek, inson evolyutsiyasidan keyin sodir bo'lgan turli hodisalarni qayd etish va to'plashdir. Xo'sh, gen ifodasi va xotira o'rtasida bog'liqlik bormi? Javob ha.

Birinchidan, genlarning xotiraga ta'siri aniq. Yagona nukleotid polimorfizmlari (SNP) va boshqa usullar orqali xotira bilan bog'liq bo'lgan turli molekulalar va oqsillarning ifodasini tartibga solishi mumkin. Bu neyronlar orasidagi aloqa samaradorligiga ta'sir qilishi mumkin va shu bilan insonning kognitiv, kontseptual, hissiy va boshqa xususiyatlariga ta'sir qiladi, bu xotira sifatini ko'rsatadi.

Ikkinchidan, xotira ham gen ifodasiga ma'lum ta'sir ko'rsatishi mumkin. Bizning o'rganishimiz, xotiramiz va fikrlashimiz jarayonida bu nafaqat miyaning asabiy faoliyatidagi o'zgarishlar, balki ko'plab genlar va molekulalarning tartibga solinishi va aralashuvidir. Ushbu genlar va molekulalarning tartibga solinishi bizning uzoq muddatli xotiramizda mavjud bo'lgan his-tuyg'ular va tajribalarga mos keladigan izlarni yozib oladi va oxir-oqibat genlarda saqlanadi.

Nihoyat, ijobiy munosabat va uzoq muddatli xotira qobiliyati o'rtasida o'zaro bog'liqlik mavjud. Quvonchli kayfiyat o'rganish va fikrlash jarayonida ko'proq diqqatni jamlashga va diqqatni jamlashga yordam beradi va shu bilan xotira qobiliyatini yaxshilashga yordam beradi. Uzoq muddatli qasddan xotira, shuningdek, miyada yangi neyron aloqalar va tuzilmalarning shakllanishiga yordam beradi, bu ham kelajakda o'rganish va xotira uchun juda foydali.

Shunday qilib, gen ifodasi va xotira o'rtasida bog'liqlik bor degan xulosaga kelishimiz mumkin. Biz qasddan xotira, nekbinlik va ijobiy fikrlash orqali xotira qobiliyatimizni rivojlantirishimiz va yaxshilashimiz mumkin, bu bizga jismoniy va ruhiy salomatlikni yaxshilashga yordam beradi. Shundagina biz jamiyat va inson taraqqiyotiga yanada yaxshi xizmat qila olamiz. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche deserticola xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche deserticola an'anaviy xitoylik dorivor material bo'lib, u juda ko'p noyob ta'sirga ega, ulardan biri xotirani yaxshilashdir. Qiymaning samaradorligi uning tarkibidagi turli faol moddalar, jumladan kislota, polisakkaridlar, flavonoidlar va boshqalardan kelib chiqadi. Bu ingredientlar turli yo'llar bilan miya salomatligini mustahkamlashi mumkin.

Xotirani yaxshilash uchun bilish qo'shimchalarini bosing

Biroq, eshitish, xotira va orttirilgan tovushga xos xatti-harakatlarni qo'llab-quvvatlaydigan eshitish kortikal genlari asosan noma'lum. Ushbu hisobot birinchi bo'lib eshitish xotirasining shakllanishiga asos bo'ladi deb o'ylangan eshitish korteksida o'rganish natijasida kelib chiqqan gen ekspressiyasidagi genom miqyosidagi o'zgarishlarni aniqlaydi. RNK ketma-ketligidan kelib chiqadigan genenrichment profillari bo'yicha bioinformatik tahlillar xolinergiksinapslar va neyroaktiv retseptorlarning o'zaro ta'sirini o'z ichiga olgan biologik yo'llarni aniqladi.

Topilmalar kattalar miyasida uzoq muddatli eshitish xotirasini shakllantirishni qo'llab-quvvatlovchi kortikal funktsiyadagi o'zgarishlarning asosiy nomzodini tavsiflaydi. Aniqlangan molekulalar va mexanizmlar balog'at yoshidagi eshitish funktsiyasidagi uzoq muddatli va ovozga xos o'zgarishlarni engillashtirish uchun potentsial terapevtik maqsadlar bo'lib, kelajakda genlarga qaratilgan tadqiqotlar uchun asosiy hisoblanadi.

Qo'lyozma:

O'rganish va xotira sohasida yaxshi qabul qilingan tushuncha shundan iboratki, xotiralar qayta ishlangan joyda saqlanadi (Nadel va Hardt, 2011). Xotirani konsolidatsiyalash deb nomlanuvchi biologik hodisalar hissiy tajribadan kelib chiqqan vaqtinchalik neyron tasvirlarni barqarorlashtirishi mumkin (Lechner, Squire va Byrne, 1999; McGaugh, 2000; Dudai, 2012). Xotira konsolidatsiyasini boshlaydigan asosiy va evolyutsion jihatdan saqlanib qolgan mexanizmlar mos ravishda genlar va ularning keyingi protein mahsulotlarining faol ifodasi sifatida tavsiflangan transkripsiya va tarjimadir (Alberini va Kandel, 2014; Kosta-Mattioli va boshq., 2009).

Biz ovozli diskriminatsiyani o'rganish eshitish korteksida de novo gen ifodasini keltirib chiqaradi, deb faraz qildik. Ovoz signallarining o'ta o'ziga xos tasvirlari uzoq muddatli xotiraga (soatdan kungacha) birlashish orqali tajribaning o'tkinchiligini (soniyalar va daqiqalar) ortda qoldirishi mumkin, bu keyinchalik ovozli xatti-harakatni boshqaradi. O'ziga xos mintaqaviy transkriptomik profillar xotira konsolidatsiyasi uchun javobgar deb hisoblansa-da (Katzman va boshq., 2021), markaziy eshitish tizimida xotira shakllanishini qo'llab-quvvatlaydigan o'rganish natijasida kelib chiqqan transkripsiya hodisalari juda kam ta'riflangan.

Bundan farqli o'laroq, eshitish korteksi, ayniqsa, retseptiv maydonlar va tonotopik xaritalarda neyrofiziologik o'zgarishlar darajasida eshitishni o'rganish va xotirani o'rganishda juda yaxshi tasvirlangan (Schreiner & Polley, 2014; Weinberger NM, 2015; Pienkowski va Eggermont, kortiko), kortikal va kortiko-fugal ulanish (Souffi va boshq., 2021; Lesicko & Geffen, 2022; Schreiner & Polley, 2014; Liu va boshqalar, 2011; Xiong, Znamenskiy, & Zador, 2015), shu jumladan bir necha vaqt shkalalarida (Froemkeke & Martin) , 2011; Froemke & Schreiner, 2015; Fritz, Elhilali, Devid va Shamma, 2007; Tchernichovski & Margoliash, 2013). Bundan tashqari, neyrofiziologik o'zgarishlar xatti-harakat bilan bog'liq, masalan, ishoraga yo'naltirilgan harakatlar (Letzkus, Wolff, & Lüthi, 2015), diqqat (Fritz va boshq., 2007; Elhilali va boshq., 2007) va ovoz signallari uchun xotira (Bieszczad & Weinberger 2010; Grosso va boshq., 2015; Aschauer & Rumpel, 2016; Concina, Renna, Grosso, & Sacchetti, 2019; Letzkus, Wolff, & Lüthi, 2015; Ghosh & Zador, 2021).

Eshitish korteksida o'rganish natijasida kelib chiqqan neyrofiziologik plastisiyaning o'nlab yillardagi dalillari eshitish xotirasining umumiy xulq-atvor xususiyatlarini ko'rsatdi (Weinberger 2007a; 2007b), bu uni eshitish xotirasini mustahkamlash uchun eng yaxshi nomzod hududga aylantirdi. Eshitish korteksini bioinformatik jihatdan o'rganib, biz moslashuvchan eshitish funktsiyasi asosida yotgan nevroplastiklikning miya bo'ylab keng tarqalgan yoki alohida biologik darvozabonlarini aniqlash uchun noaniq imkoniyatdan foydalanamiz. Kengroq nuqtai nazardan, mintaqaviy transkriptomik profilni yaratish xotira xizmatidagi tajriba orqali hissiy tizim qanday o'zgarishini to'liqroq tushunishga olib kelishi mumkin.

Eshitish korteksida aniqlangan o'rganish natijasida paydo bo'lgan transkriptomik profil moslashuvchan eshitish jarayonini qo'llab-quvvatlaydigan yoki buzadigan jarayonlarning yangi biologik modellarini tasdiqlashi, kengaytirishi yoki olib kelishi mumkin. Eshitish xotirasining konsolidatsiyasi, ehtimol, eshitish korteksidagi hujayra funktsiyalariga ta'sir qiluvchi gen ekspressiyasidagi tajribaga bog'liq bo'lgan o'zgarishlarning mahsulidir, bu esa o'z navbatida tovush bilan bog'liq xatti-harakatlarni o'zgartiradigan tovush bilan qo'zg'atiladigan neyrofiziologik ta'sirchanlikdagi doimiy o'zgarishlarga yordam beradi.

O'rganish bilan bog'liq transkriptlarni aniqlash uchun anatomik jihatdan aniqlangan eshitish korteksi (Bregma -3.10 mm, Interaural 6,90 mm; Paxinos & Watson, 2007) namunalarida RNK ketma-ketligi (RNAseq) yordamida ifoda profilini tahlil qilish amalga oshirildi. ) suv mukofotlari uchun sof ohanglari uchun bar pressiga o'rgatilgan suv cheklangan kattalar dan. Maqsadli sof ohang chastotasiga (5,0 kHz; 65 dB SPL) javoblar mukofotga olib keldi, maqsadli bo'lmagan (11,5 kHz; 65 dB SPL)ga berilgan javoblar esa mukofotlanmagan va keyingi sinovgacha bo'lgan vaqtni uzaytiradigan vaqt oralig'ini boshlagan.

Bu ikki rangli diskriminatsiya vazifasi (2TD) idrok etishda qiyin emas; akustik chastotalar bir-biridan oktavadan ortiq masofada joylashgan va kemiruvchilar tomonidan osongina ajratiladi (Talwar & Gerstein, 1998). Aksincha, xulq-atvor muammosi assotsiativ edi: 2TD ishlashi uchun ohang mukofot bilan bog'liq bo'lgan xotirani talab qiladi (mukofotsiz). O'qitilgan kalamushlar (N=8) ketma-ket uch kunlik 45-daqiqalik 2TD mashg'ulotidan so'ng qurbonlikka keltirildi va ular tovushsiz kalamushlar guruhi (N=4) ​​bilan solishtirildi. Bu hayvonlar hali ham 2TD vazifasini o'zlashtirayotgan mashg'ulotlarning dastlabki vaqti. Dastlabki vazifani o'zlashtirish, bir necha haftalik mashg'ulotlar davomida kuzatilgan xulq-atvorda kuzatilgan 2TD unumdorligining keyingi o'sishi uchun zamin yaratadigan dastlabki o'rganish bilan bog'liq transkripsiya hodisalarini qo'lga kiritishga qaratilgan edi.

Masalan, oʻrtacha koʻrsatkich 3 kundan soʻng 66±7.81% ni tashkil etdi, bu esa kengaytirilgan mashgʻulotdan soʻng 90% dan yuqori yoki unga teng edi (Shang, Bylipudi, & Bieszczad, 2019). Muvaffaqiyatli tovushga xos assotsiativ xotiraga tegishli genlarning ifodasini aniqlash imkoniyatidan foydalanish uchun biz o'rganish va xotirani shakllantirishda faollikka bog'liq gen ekspressiyasini sepigenetik tartibga solishga qaratilgan HDAC inhibitoridan foydalandik (McQuown, va boshq., 2011; Kwapis va boshqalar). boshq., 2017; Malvaez, va boshq., 2012). Muhimi shundaki, o'n yillik ish HDAC-inhibisyonu tovush bilan qo'zg'atiladigan eshitish kortikal javoblarida (avtomobilga nisbatan) o'rganish natijasida kelib chiqqan neyrofiziologik plastisitni osonlashtirishi va eshitish diskriminativ xatti-harakatlarini kuchaytirishi mumkinligini ko'rsatdi (Bieszczad va boshq., 2015; Phan va boshq., Shang, 2017; Bylipudi, & Bieszczad, 2019; Rotondo & Bieszczad, 2020; Rotondo & Bieszczad 2021a; 2021b), shu jumladan g'ayriinsoniylar (Gervain va boshq., 2013).

O'qitilgan hayvonlarning yarmi HDAC inhibitori RGFP966 (N=4; 10 mg/kg, ApexBio, cat#A8803; sub. kub in'ektsiya) bilan davolandi. , qolgan yarmi esa xuddi shunday o'qitilgan, ammo boshqariladigan avtomobil eritmasi (N=4; mos keladigan hajm, sub. kub inyeksiya; 1a-rasm). Miya yig'ish vaqtida guruhlar o'rtasida 2TD ishlashida farqlar yo'q edi (RGFP966: 61±5,0% va avtomobil: 71±7,0%; t(5,9166)=-1.21, p=0.272 ; Welch t-testi). Miyalar zudlik bilan yig'ildi va ingibitorning eshitish po'stlog'idagi eng yuqori kontsentratsiyasiga mos keladigan vaqt oralig'ida, HDAC inhibitori yoki transport vositasini seansdan keyingi in'ektsiyadan bir soat o'tgach, muzlatib qo'ydi (Bieszczad va boshq., 2015).

Bu erda topilmalar eshitish korteksidagi assotsiativ o'rganishning transkriptomik profilini aniqlash uchun birinchi bo'lib hisoblanadi. Ikki tonnali diskriminatsiya vazifasini o'rganish yuzlab genlarning transkripsiya darajasidagi o'zgarishlarga olib keldi (tovushsiz bilan solishtirganda) (1b-rasm). Ierarxik klasterlash algoritmi genlarning o'ziga xos tarzda yuqori yoki pastga regulyatsiya qilinganligini ko'rsatdi, bu eshitish orqali o'rganish natijasida yuzaga keladigan kortikal gen ekspresyon hodisalarining kompleks tarmog'ini ochib beradi (2a-rasm).

Boyitish tahlillari (iPathwayGuideTM; Impact Analysis method) xolinergiksinapsni (differensial ravishda ifodalangan genlar (DEG) / barcha genlar (ALL): 22/101; p=0.004, Bonferronicorrection) eng yuqori biologik yo'l sifatida aniqladi (1-jadval) . Bu natija 1990-yillardan buyon neyrofiziologik plastisiya va tegishli eshitish xatti-harakati uchun eshitish korteksida xolinergik signalizatsiyaning etarliligini ta'kidlaydigan tadqiqotlar bilan mos keladi (Froemke & Martins, 2011; Weinberger, 2003; Bakin & Weinberger, 1996; Kilgard & Merzenich). HDAC-inhibisyoni ostida o'rganish natijasida hosil bo'lgan transkript darajalari bir xil yo'nalishda kuchaytirildi (beyk gen transkript darajasining yanada oshishi yoki pasayishi) (2b-rasm) yoki yolg'iz o'rganish bilan solishtirganda to'mtoq (2c-rasm). Bunday sharoitlarda asosiy biologik yo'llardan biri neyroaktiv ligand-retseptorlar o'zaro ta'siri edi (DEG/ALL: 30/194; p=0.016; 1-jadval), bu nerv faollashuvi uchun muhim bo'lgan effektorlarni o'z ichiga oladi.

Yana bir yuqori yo'l hujayradan tashqari matritsa retseptorlari (ECM-retseptorlari) o'zaro ta'siri edi (DEG/ALL: 14/69; p=0.04; 1-jadval). ECM komponentlari kortikal plastisiya va xotira konsolidatsiyasi uchun juda muhimdir (Happel va boshq., 2014; Banerjee va boshq., 2017; El-Tabbal, va boshq., 2021; Sonntag, va boshq., 2015). Ushbu yo'llar eshitish funktsiyasidagi doimiy tajribaga bog'liq o'zgarishlarni osonlashtirishi mumkin bo'lgan xolinergik signalizatsiya uchun potentsial alternativalarni taklif qiladi (Ji, Gao va Suga, 2001; Luo & Yan, 2013; Metherate, 2011). Eshitishni o'rganish bilan ifodasi o'zgargan, ammo HDAC inhibisyoni bo'lmagan boshqa genlar, ehtimol, tovushga xos assotsiativ xotiraga emas, balki vazifaning protsessual shartlariga bog'liq edi. Masalan, apelin signalizatsiya yo'li aniqlandi (DEG/ALL: 20/116; p=0.0005), bu miyada suv olishning gomeostatik tartibga solinishi uchun muhim (Hu, va boshq., 2021). O'qitilgan kalamushlarning ikki guruhi o'rtasidagi transkript darajasini to'g'ridan-to'g'ri taqqoslash (HDAC inhibisyoni bilan yoki bo'lmasdan o'rganish) juda kam sonli noyob differensial ifodalangan genlarni (DEG) ko'rsatdi.

Eng mumkin bo'lgan DEGlarni aniqlash uchun sezilarli darajada foydalaniladigan chegara (p =0.05) faqat Adamts13, U6, Rexo4 va Cabin1 differensial tarzda ifodalanganligini aniqladi (2d-rasm). Shunday qilib, HDAC inhibisyonining asosiy ta'siri ko'rinadi. Ovozga xos xotirani kuzatish uchun noyob genlarni yangidan jalb qilish o'rniga, normal sharoitda eshitish orqali o'rganish natijasida kelib chiqqan genlarning ifodasini modulyatsiya qilish. Birgalikda, bu topilmalar katta miqyosdagi transkriptomik o'zgarishlar eshitish po'stlog'ida mashg'ulotning boshida sodir bo'lishini ko'rsatadi, chunki kattalar hayvonlar tovush signallari orasidagi assotsiativ munosabatlarni farqlashni o'rganadilar. Eshitish funktsiyasini rag'batlantirish uchun HDAC inhibisyonining aniqlangan neyrofiziologik va xulq-atvori hisobotlari bilan birgalikda bu topilmalar ekspressiyasi eshitish xotirasini shakllantirish muvaffaqiyatini belgilaydigan genlarni ajratish uchun HDAC inhibitorini qo'llash taktikasini qo'llab-quvvatlaydi.

Genlarga yo'naltirilgan yondashuv bilan genom bo'ylab ketma-ketlikni tasdiqlash uchun inbiologik yo'llarni boyitish tahlillaridan bir nechta qiziqish genlari (GOI) tanlangan. real vaqt rejimida miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qRT-PCR) yordamida gen ekspressiyasini tahlil qilishda foydalanish uchun trening vaqti (ya'ni, uchinchi 2TD mashg'ulotidan bir soat keyin). Takroriy kogortalarda 2TD unumdorligi farqlari yoʻq (RGFP9661: 61±5.0% va RGFP9662: 67±6.0%; t(8.441)=-0.834, p. {{20}}.4274; va Avtomobil1:71±6.0% va 2. Avtomobil: 74±3.0%; t(4.0809)=-0.444, p {{ 34}}.6796; Welch t-testi).

Birinchi GOI Egr1 edi, yaxshi o'rganilgan, faoliyatga bog'liq bo'lgan "darhol-erta gen" o'rganishning birinchi soatlarida eng yuqori cho'qqiga chiqadi va xotira shakllanishi uchun juda muhim (Duclot & Kabbaj, 2017). Bu genga yo'naltirilgan tadqiqotda hayvonlarning alohida kogortida HDAC-inhibisyonu bilan kuchaytirilgan, tasdiqlangan ko'paygan ifodaga ega bo'lgan toplearning induktsiyali gen edi (3-rasm). Xuddi shu narsa miyadagi sirkadiyalik ritmlar va serotoninergik yo'llarni tartibga solishda ishtirok etadigan Per2 geniga ham tegishli edi (Bae va boshq., 2001; Albrecht va boshq., 2001; Cuesta va boshq., 2009; Reh va boshqalar. , 2020). Per2 miyaning boshqa hududlarida HDAC modulyatsiyasi bilan bog'langan "soat geni" oilasining bir qismidir (Kwapis va boshq., 2018) va eshitish funktsiyasida ham rol o'ynashi mumkin (Reh va boshq., 2020). Aksincha, genom bo'yicha aniqlangan ba'zi GOIlar qisman tasdiqlangan.

Chrna7 dinamik nikotinik atsetilxolin retseptorlari (nAChR) ning neyrofiziologik dalillarga mos keladigan eshitish o'rganish bilan tartibga solinmaganligi aniqlangan bo'linmasini kodlaydi (Takesian, etal., 2018; Kuchibhotla, va boshq., 2017). Shunday qilib, biz genga yo'naltirilgan tadqiqot barcha 2TD bilan o'qitilgan hayvonlarda Chrna7 pastga regulyatsiyasini tasdiqlashini kutgan edik, ammo pastga regulyatsiya faqat HDAC inhibisyonusiz 2TDni o'rgangan transport vositasida davolangan hayvonlarda aniq edi. Qo'shimcha tanlangan GOIs Nr4a etim yadro retseptorlari oilasi Nr4a1 va Nr4a2 bo'lib, ular RGFP966 ning selektiv HDAC maqsadini miyaning boshqa hududlarida targ'ib qilish uchun zarur bo'lgan dastlabki genlardir (McQuown va boshq., K. va boshqalar, 2011; ., 2019).

Nr4a oilasining genekspressiyasidagi vazifaga bog'liq mintaqaviy farqlar to'g'risidagi oldingi hisobotlarga muvofiq (McNulty va boshq., 2012), Nr4a1, lekin Nr4a2 emas, balki eshitish qobiliyatini o'rganishdan keyin eshitish korteksida yuqori tartibga solindi. Boshqa DEGlar, Htr1a yoki Adamts13, gen-maqsadli tadqiqot tomonidan tasdiqlanmagan, ehtimol bizning maxsus ishlab chiqilgan gen-maqsadli zondlarimiz tomonidan aniqlanmagan ma'lum transkript variantlaridagi farqlar yoki I turdagi xatolik yoki hayvonlarning o'qitilgan kohortlari o'rtasidagi nozik xatti-harakatlar farqlari tufayli. 2TD ishlash ko'rsatkichlarida aniqlanmadi. Shuningdek, biz Lynx1 genini, ehtimol uning xolinergik va serotonergikmodulyatsiyaga ta'siri tufayli sezgi korteksida "tanqidiy davr"ga o'xshash plastisiyani qayta ochish uchun uzoq tarixga ega bo'lgan genni tekshirdik (Takesian va boshq. , 2018). Biroq, genom bo'yicha uni aniqlash muvaffaqiyatsiz bo'lgan oldingi hisobotlarga mos kelsa ham (Kalish va boshq., 2020), u bizning RNAseq ma'lumotlar to'plamimizda ham, genga qaratilgan tadqiqotda ham aniqlanmagan.

Hayvonlar orasidagi haqiqiy biologik yoki individual o'zgaruvchanlik yoki texnik o'zgaruvchanlik tufayli kam ko'pligi yoki hujayra tipidagi o'ziga xos ekspressiv transkriptlar tufayli nomuvofiqliklarni tushuntirish qiyin bo'lib qolsa-da, biz ba'zi GOIlar uchun juda izchil natijalar haqida xabar beramiz. Chrna7, Egr1 va Per2 ning o'rganish natijasida paydo bo'lgan ifodasi genga yo'naltirilgan va genom bo'yicha yondashuvlar va o'qitilgan hayvonlarning turli kogortalari o'rtasida mos bo'lganligi sababli, bu genlar doimiy o'zgarishlar uchun eng asosiy o'yinchilar bo'lishi mumkin. Eshitish funktsiyasi va xotira hozirda kelajakdagi tadqiqotlar uchun asosiy hisoblanadi.

Birgalikda ko'rib chiqilsa, topilmalar neyrofiziologiya va xulq-atvorda paydo bo'ladigan eshitish funktsiyasini qo'llab-quvvatlashi mumkin bo'lgan kattalar eshitish korteksida dinamik transkripsiyaviy landshaftni ochib beradi.Sezgi tizim funksiyasini epigenetik nazorat qilishning ortib borayotgan dalillarini hisobga olgan holda (qarang, Shang va Bieszczad, 2022), ko'rib chiqish juda hayajonli. epigenetik mexanizmlar eshitish kortikal davrlarining tajribaga bog'liq plastikligi bilan barqarorlikni muvozanatlashda qanday rol o'ynaydi. Misol uchun, joriy genom bo'yicha ma'lumotlar to'plami, shuningdek, HDAC inhibisyonu bilan bo'lmagan Hdac9 ning ispressiv giston deatsetilazasi ekspressiyasining o'rganish natijasida yuzaga kelgan qisqarishini aniqladi.

HDAC9 ifodasining kamayishi ta'sirini farmakologik jihatdan inhibe qiluvchi HDAC ta'siriga o'xshatish jozibador. Epigenetik regulyatorlarning yana bir muhim klassi gistonlarni emas, balki DNKni o'zgartiradi. Misollar Tet1 va Gadd45b bo'lib, ular ikkalasi ham DNK metilatsiyasiga ta'sir qiladi (Bayraktar va Kreutz, 2018) va HDAC inhibisyoni ostida o'rganish bilan mos ravishda pastga va yuqoriga tartibga solinishi aniqlandi. Bundan tashqari, mikroRNKlar sinfi HDAC-inhibisyonini o'rganish natijasida yuzaga kelgan yuqori biologik yo'l sifatida paydo bo'ldi (1-jadvalga qarang), bu sohada asab transkripsiyasini boshqarishning asosiy epigenetik regulyatorlari sifatida jalb qilingan (Saab & Mansuy, 2014). Epigenetik o'yinchilar va ifodalangan genlarning oqsil mahsulotlari o'rtasidagi yuqori darajadagi molekulyar o'zaro ta'sirlar ham mumkin. Masalan, aniqlangan yuqori tartibga solinadigan Egr1 quyi oqim genlarini faollashtirish uchun repressiv metilatsiya belgilarini olib tashlash uchun Tet1 ni jalb qilishi mumkin (Sun va boshq., 2019). O'rganish jarayonida eshitish tizimidagi epigenetik regulyatorlar o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarning ahamiyatini tahlil qilish uchun keyingi molekulyar tadqiqotlar kerak bo'ladi. Bundan tashqari, ushbu hisobot tanlangan eshitish kortikal genlari va ularning quyi oqim effektorlari o'rtasida aloqalarni o'rnatish uchun darhol imkoniyatni taqdim etadi.

Ushbu genlar va molekulalar o'rtasidagi bo'shliqni ularning tovush bilan qo'zg'atadigan neyrofiziologik hodisalarga ta'siriga ko'paytirish kattalar eshitish tizimi xatti-harakatlarni o'zgartirish uchun tajribaga qanday moslashishini tushunish uchun juda muhimdir. Darhaqiqat, de novo transkripsiyaning tarjimasi xulq-atvor funktsiyasidagi uzoq muddatli o'zgarishlar uchun talab qilinadi, chunki ular hujayra funktsiyasida doimiy o'zgarishlarni keltirib chiqaradi. Misol uchun, o'rganish bilan bog'liq transkripsiya jarayonlarining asosiy maqsadli effektorlari tovushlar ichidagi kanallar yoki retseptorlarning mavjudligini o'zgartirishi mumkin (Metherate, Intskirveli, & Kawai, 2012; Brown & Kaczmarek, 2011; Henton, Zhao va Tzounopoulos, 2023). Eshitish tizimidagi ostona chegarasi, sezgirlik va retseptiv maydon arxitekturasini uyg'otdi. Turli xil eshitish vazifalari vazifaga tegishli tovush xususiyati yoki vazifa tuzilishini o'rganishni qo'llab-quvvatlaydigan muayyan uyali funktsiyalarga tegishli biologik yo'llar uchun noyob genetik tarmoqlarni jalb qiladi deb taxmin qilish oqilona.

Umuman olganda, ushbu hisobot o'quv, kattalar va eshitish korteksidan RNAseq ma'lumotlar to'plamini mavjud qilish uchun boshlang'ich nuqta bo'lib xizmat qiladi (Ma'lumotlar omboriga qarang). Katta yoshdagi eshitish po'stlog'idagi molekulyar genetik jarayonlarga qaratilgan tadqiqotlarning jiddiy etishmasligi tufayli kuchaygan bilimlar bo'shlig'ini qisqartirish bo'yicha urinish hozir ma'qul. Biz sezgirligi texnik jihatdan, shuningdek, o'qish chuqurligi (Li & Wang, 2021) bilan cheklangan ommaviy RNK ketma-ketligining fazoviy-vaqtinchalik cheklovlaridan tashqari o'rganishni rag'batlantiramiz, ayniqsa zamonaviy Omics texnologiyalari tez rivojlanib, takomillashib bormoqda.

Eshitish korteksidagi tadqiqotlar molekulyar genetikada muhim molekulyar kaskadlarni (Schicknick va boshq., 2008), ruxsat beruvchi IEG profillarini (Mello, Velho va Pinaud, 2006; de Hoz va boshq., 2018) aniqlagan molekulyar genetikada ba'zi dastlabki qadamlarni qo'ygan bo'lsa-da. ; Piter va boshq., 2011) va hatto xromatindinamika (Piter va boshq., 2021), transkripsiya dinamikasi yaxshi o'rganilgan eshitish periferiyasida pretsedent mavjud (Kwan, 2016; Barta, va boshq., 2018; Li, va boshqalar. boshq., 2020; Ebeid, va boshq., 2017). Bir hujayrali RNK ketma-ketligi (RNK-Seq) va kichik molekulyar floresan in situ gibridizatsiyasi (smFISH) kabi mavjud molekulyar vositalar tajribaga bog'liq bo'lgan hujayradan hujayra o'zgarishi va eshitish kortikal hujayralar va zanjirlar ichidagi molekulyar o'zaro ta'sirlar haqida tushuncha berish uchun foydali bo'ladi. Ommaviy RNKseqdan farqli o'laroq, bu usullar chuqur hujayrali xilma-xillikni va eshitish po'stlog'idagi yuqori tartibli tashkilotni, masalan, qatlamga xos mikrosxema va lemniskal topografiyani hurmat qiladi.
Faqat yaqinda faol bo'lgan eshitish kortikal hujayralarining (Cho, Huang va Grey, 2016) transkriptlarini teg va ketma-ketlashtirishga aqlli yondashuvlar sezgirlikni etarli darajada oshirishi va eng funktsional mos keladigan hujayra turlari va populyatsiyalaridan eng funktsional genlar to'plamini olish uchun etarli darajada sezgirlikni oshirishi mumkin. Shunga o'xshash yondashuvlar korteksdagi faoliyatga bog'liq bo'lgan mintaqaviy transkriptomik profillarni qo'lga olish va kontrastlash uchun subkortikal tarzda ham qo'llanilishi mumkin, bu kortikalning eshitish tizimining subkortikal funktsiyasi bilan turli xil tinglash sharoitlarida yoki xatti-harakatlar talablarida ajoyib integratsiyani sharaflaydi. Kattalar miyasida eshitish qobiliyatini o'rganishga asoslangan genetik va molekulyar mexanizmlar bo'yicha uyali va mintaqaviy farqlarni to'liq tavsiflash hayot davomida muayyan eshitish va tinglash qobiliyatini qo'llab-quvvatlash uchun mustahkam va doimiy funktsional o'zgarishlarni ta'minlaydigan joyni tanlab olish va molekulaga yo'naltirilgan aniq terapevtiklarni ishlab chiqish uchun muhim ahamiyatga ega.

Usullari

Mavzular: Xulq-atvor va molekulyar tajribalarda jami 24 ta katta yoshli erkak Sprague-Dawley kalamushlari (kelganida 250 - 300 g; Charlz RiverLaboratories, Wilmington, MA) ishlatilgan. Barcha hayvonlar alohida harorat bilan boshqariladigan (24 ˚C) koloniya xonasiga 12-soatlik yorug‘lik/qorong‘i tsiklda joylashtirildi. Mavzular xulq-atvorni o'rganishdan oldin oziq-ovqat va suvdan ad libitum foydalanish huquqiga ega edi. Barcha protseduralar Nyu-Jersi shtatidagi Rutgersdagi Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasi (IACUC) tomonidan ko'rsatmalarga muvofiq tasdiqlangan va o'tkazilgan (Protokol No: 999900026 (KMB)).

Xulq-atvor apparati va ovozli ogohlantirishlar: Barcha xatti-harakatlar seanslari ikkita bir xil instrumental konditsioner kameralarda (H{{0}}TC-NSF; Coulbourn Instruments, Holliston, MA) ovozni zaiflashtirilgan quti ichida o'tkazildi. Har ikki palataga teng ta'sir ko'rsatishni ta'minlash uchun kundalik mashg'ulotlar muvozanatlashtirildi. Har bir kamera (12" V x 10" D x 12" H; sim to'rli polga javob dastagi (H21-03R), uy chiroqi (H11-01R), karnay (H{) o'rnatilgan. {8}}R) va suv yetkazib berish tizimi (H14-05R). Mashg‘ulot bosqichida hayvonlar javob dastagini ("barpress") bosishlari mumkin edi, bu esa suv idishi (~0,02 sm) ko‘rinishini keltirib chiqardi. mukofot portida (1,25"W x 1,625"H). Dastlabki seans davomida qo'l tugmasi (H21-01) suv idishining taqdimotini ishga tushirish uchun hayvonning bar bosish reaktsiyasini shakllantirish uchun ishlatilgan. Xulq-atvor javoblari oflayn tahlil qilish uchun Graphic State 4 dasturi (CoulbournInstruments, Holliston MA) yordamida qayd etilgan.

Barcha eshitish stimullari Tucker-Davis Technologies (TDT, Alachua, FL) va RPvdsEx dasturlari yordamida yaratilgan va operant kameraning devorga o'rnatilgan karnay orqali taqdim etilgan. Whitenoise (protsessual trening paytida; 1a-rasm) 7 yoki 9 soniya davomida (75 dB SPL) taqdim etildi. Sof ohanglar (ikki tonnali diskriminatsiya mashg'ulotlari paytida; 1a-rasm) har doim 8 soniya (70dB SPL) uchun taqdim etilgan. Ovoz darajalari har kuni raqamli ovoz o'lchagich (Larson DavisSoundTrack LxT1) yordamida kalibrlangan.

Xulq-atvorni o'rgatish va HDAC3 ning farmakologik inhibisyonu: Bir kunlik vivariumga moslashgandan so'ng, kalamushlar har kuni kamida 3 kun davomida davolandi. Xulq-atvorni o'rgatish boshlanishidan oldin, kalamushlar yoshga mos keladigan nazorat hayvonlarining cheklanmagan og'irligining 85% ga yetguncha cheklangan suv jadvaliga joylashtirildi. Keyin suv bilan cheklangan kalamushlar suv mukofotlari uchun bosim o'tkazish uchun ovozni susaytiruvchi xonalarni shakllantirdilar (1a-rasm). Barpressni shakllantirish va keyingi tovushni o'rgatish yuqorida tavsiflanganidek bo'ldi (Shang, Bylipudi, & Bieszczad, 2019). Qisqasi, barcha hayvonlar 5 kun davomida barpress qilish uchun shakllantirilgan va keyin bu bosqichda tovushni bar-bosishni o'rganish uchun protsessual vazifaga o'rgatilgan. suv mukofotini olish uchun keng diapazonli Gauss shovqin stimulyatori (1-12,5 kHz tarmoqli filtrli oq shovqin; 75 dB SPL) edi. Barcha hayvonlar treningning keyingi bosqichiga o'tishdan oldin bu tovushni mukofot bilan bog'lashni muvaffaqiyatli o'rgandilar. Protsessual mashg'ulotlar hayvonlarning topshiriqni qanchalik tez o'rganishi, yuqori darajadagi ishlashga erishishi mumkin bo'lgan individual o'zgaruvchanlikni ko'rsatdi. Shunga qaramay, barcha hayvonlar o‘rtacha 12,67 kundan so‘ng ketma-ket ikki kun davomida 90% dan yuqori yoki unga teng ishlash darajasiga erisha oldi (o‘rtacha=92.85%, sem =0.01%) ( sd=2.85 kun). Ishlash 100% yordamida hisoblab chiqilgan.

Treningning keyingi bosqichi ikki tonna kamsitish (1A-rasm) vazifasi edi (1A-rasm), unda ikkita ajoyib aniq chastotalarni ajratishga o'rgatilgan. Barpresses s + ohangi (5 Yorug'lik) va "vaqt o'tishi" (qo'shimcha 6 s Keyingi sinov boshlanishini kuting). S + va s-sinovlar yakunlandi va 8 s uchun davom etdi. Sinovlararo interval (ITIS) o'rtacha 15 s edi Zarripresslar jimgina III ahamiyatsiz edi (vaqt yo'q, xato signal, na suv mukofoti). Kundalik mashg'ulotlar uzunligi 45 daqiqa edi. Barcha hayvonlar ketma-ket uch kun davomida 2tdtakni ijro etishdi. Kalamushlar tayyorlangan kuzatuvchi tomonidan birlashtirildi, shuning uchun protsessual topshiriqni sotib olishning o'xshash sur'atlari 2T-bosqichda turli xil davolash usullariga berildi. Amalga oshirilgan juftliklar, men bu erda engillashtiruvchi juftliklar, men bu erda engillashtiradigan i inhibitor RGFPPPT.94819; 10 mg / kg; sc; n=9) har biridan keyin darhol (n=9) 2-sessiya. 2td vazifasining bajarilishi oldindan aytilganidek hisoblangan: 100% (Shang, Vlipudi, 20).

).To'qimalarni yig'ish va RNK izolyatsiyasi: Hayvonlar RGFP966 ning uchinchi va yakuniy in'ektsiyasini olganidan bir soat o'tgach, 2TDning uchinchi sessiyasidan so'ng, miyalar tezda parchalanib, quruq muz ustiga qo'yilgan 2-metilbutan stakanida muzlatilgan. Muzlatilgan miyalar keyinchalik qayta ishlanmaguncha -80˚C haroratda saqlanadi. Miyalarni kriyoseksiyaga tayyorlash uchun miyalar kesish uchun optimal bo'lmagan haroratli birikma (OCT) bilan o'ralgan va miya to'qimasini kesish uchun -20˚C darajaga yetishini ta'minlash uchun -20˚ C da 12-24 soat davomida saqlangan. OKT bilan qoplangan miyalar kriostatda (Leica CM 3050S) 250 mikron qalinligida gorizontal ravishda kesiladi. 1 mm dumaloq to'qimali mikro punch yordamida RNK ekstraktsiyasi uchun har bir yarim shardan 2 mm3 eshitish kortikal to'qimalari (miya hududiga jami 4 mm3 uchun bitta namunaga birlashtirilgan) namunasi olindi. Eshitish kortekslokatsiyasi Paxinos va Watsonning The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates (6-nashr) yordamida aniqlangan (taxminan A/P=-3,6 dan -5,8 mm, M/L {{20} } ±6,4 mm D/V=-4,2 dan -5,8 mm gacha; va gippokampusni diqqatga sazovor joy sifatida ishlatish

Har bir namunaning umumiy RNN, ishlab chiqaruvchining protokoli yordamida PurelinkTm RNA mini to'plamidan (termofisher) ishlatilgan. Keyin RNA namunalari RNK bilan toza anconcentratm -25 to'plam (Zymo tadqiqotlari) bilan tozalandi.

Gene expression analysis, Gene Ontology (GO) biological process analysis, and gene set enrichment analysis (GSEA): RNA-seq analysis was conducted by the Iowa Institute of Human Genetics (IIHG; Iowa City, IA, USA). Briefly, using 500 ng total RNA (all RIN values >8), ketma-ketlik kutubxonalari ishlab chiqaruvchi tomonidan tavsiya etilgan protokollarga muvofiq Illumina TruSeq® Stranded mRNA Library Prepkit yordamida yaratilgan. Kutubxonalar birlashtirildi va ketma-ketlik 100 bp juftlashgan SBSchemistry ishlaydigan Illumina NovaSeq 6000 qurilmasida amalga oshirildi. O'qishlar, asosan, Ayova universitetidagi Argon HPCresourceda ishlaydigan Garvard Chan Bioinformatika (v.1.2.4) da ishlab chiqilgan "bcbio-nextgen.py" ochiq manbali informatika quvuri yordamida qayta ishlandi. Ushbu quvur liniyasi o'qish sifatini nazorat qilish, o'qishni moslashtirish va miqdorni aniqlash uchun "eng yaxshi amaliyot" yondashuvlarini o'z ichiga oladi. "bcbio-nextgen.py" quvur liniyasi tanlangan genom tuzilmasi sifatida "rn6" kaliti bilan "RNK-seq" rejimida ishga tushirildi (ichki Ensembl yig'ilishi va genebuild "Rnor_6.0" ga murojaat qiladi). Hizalangan quvur liniyasi Rnor_6.0genomiga ulanishdan xabardor, ultra tez hisat2 aligner (2.2.1) yordamida o‘qiydi va bir vaqtning o‘zida “losos” (1.4.0) tekislagich yordamida transkriptomaga miqdoriy o‘qiladi. Qualimap (2.2.2), hisat2 BAM moslashtirish fayllarini tekshiradigan hisoblash vositasi, sifat nazorati uchun o'qilgan ma'lumotlarni tekshirish uchun ishlatilgan. Ketma-ketlik sifati ballari asosiy tekshiruvlardan o'tdi va ketma-ketlikni takrorlash tezligi maqbul parametrlar doirasida edi. Barcha namunalar oʻqishni ekzonik hududlarga moslashtirish uchun QCdan oʻtdi. Salmondan olingan transkript miqdori (TPM yoki “millionga transkript”) import qilindi va Rstudio’da tximport (1.12.3) yordamida gen darajasidagi taxminiy hisoblarga umumlashtirildi. DESeq2 vinyetkasini ishlatadi(https://bioconductor.org/packages/release/bioc/vignettes/DESeq2/inst/doc/DESeq2.html).

Barcha namunalar bo'yicha 5 dan kam hisoblangan genlar tavsiya etilgan protsedura bo'yicha quyi oqim tahlilidan oldindan filtrlangan. Differentsial gen ekspressiyasi tahlili DESeq2 (v.1.24.0) bilan taxminiy genlar darajasida hisoblab chiqilgan. FDR 5% va X< abs(logFC) < 10 was set as a cutoff for differential expression (DEGs). Heatmaps, line graphs, and volcano plots were generated using clusterProfiler packages in R/Bioconductor. Gene level, pathway, and DEG analyses were generated using iPathwayGuide (Advaita Bioinformatics, https://www.advaitabio.com/ipathwayguide; last accessed November 15, 2022). iPathwayGuide scores pathways using the Impact Analysis method (Draghici et al., 2007); Tarca et al., 2009, Khatri et al., 2007). The underlying pathway topologies, comprised of genes and their directional interactions, are obtained from the KEGG database (Kanehisa et al., 2000; Kanehisa et al., 2010; Kanehisa et al., 2012; Kanehisa et al., 2014).

qRT-PCR bilan RNK-seq ma'lumotlarini tekshirish: RNK-seq ma'lumotlari kalamushlarning alohida kogortalaridan olingan mRNAda qRT-PCR bilan tasdiqlangan. Beshta transkript har bir mintaqada boyitilgan yangi DEGlar ro'yxatidan tanlab olindi. Genlarning uchtasi gipotezaga asoslangan eshitish kortikal fiziologik va xulq-atvorga oid adabiyotlar edi, yana uchta gen esa Drug va Vehiclegroups o'rtasidagi taqqoslashda gen darajasi va DEG tahlillari natijasida aniqlangan yangi genlar edi. Barcha primer ketma-ketliklari kalamushlarda miya to'qimalariga oid oldingi adabiyotlardan tanlangan (quyidagi jadvalda keltirilgan ketma-ketliklar) yoki NCBI Primer Blast yordamida ishlab chiqilgan va erish egri chiziqlari va PCR amplikon mahsuloti ketma-ketligini baholash orqali maqsadli maqsadning o'ziga xosligi tasdiqlangan. qRT-PCR tahlillari QuantStudio 3 (Applied Biosystems) da SsoAdvancedTMUniversal SYBR Green Supermix (Bio-Rad) bilan amalga oshirildi. Har bir namuna uchun iScriptTM cDNA sintez to'plami (Bio-Rad) yordamida 500 ng cDNK kuchaytirildi.

Minnatdorchilik

Mualliflar doktor Andrea Shang, Shon Tsaur va Sooraz Bylipudiga xulq-atvor protseduralari va tahlillaridagi yordamlari uchun minnatdorchilik bildiradilar; Doktor Mimi L. Phan RNK ekstraktsiyasi va namuna yig'ish protokollari bo'yicha yordami uchun; Doktor Troy A. Roepke, Ali Yasrebi va Kristofer O'Brayenga RNK namunasini tozalash tahlilida yordam bergani uchun; va texnik yordam uchun Alisa Rey. Yordam va qo'llab-quvvatlash uchun barcha hozirgi va sobiq CLEF Lab xodimlariga minnatdorchilik bildiramiz.

Bu ish Milliy sog'liqni saqlash institutlari, Karlik va aloqa kasalliklari milliy instituti tomonidan qo'llab-quvvatlandi [R01-DC014753 - KMB]; Rutgers universiteti san'at va fanlar maktabi; Rutgers universiteti qoshidagi Aresty fondi bakalavriat tadqiqotlari uchun kichik grant mablag'lari bilan; va Rutgers universitetida bakalavriat tadqiqotlari uchun kichik grant mablag'lari bilan Project SUPER dasturi.

Adabiyotlar:

Alberini, CM va Kandel, ER (2014). Xotirani konsolidatsiyalashda transkripsiyani tartibga solish. ColdSpring Harbor Perspectives in Biology, 7(1), a021741.doi:https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021741

Albrecht, U., Zheng, B., Larkin, D., Sun, Z., & Li, C. (2001). MPer1 va mper2 sirkadiyalik soatni normal o'rnatish uchun zarurdir. J Biol Ritmlari, 16, 100-104. doi: 10.1177/074873001129001791.

Aschauer, D. va Rumpel, S. (2016). Sensor neokorteks va assotsiativ xotira. O'rganish va xotiraning xulq-atvor nevrologiyasi, 37, 177-211.doi:https://doi.org/10.1007/7854_2016_453

Bae, K., Jin, X., Maywood, ES, Hastings, MH, Reppert, SM, & Weaver, DR (2001). SCN sirkadiyalik soatida mPer1, mPer2 va mPer3 ning differentsial funksiyalari. Neyron, 30, 525-536.doi:10.1016/S0896-6273(01)00302-6.

Bakin, JS va Weinberger, NM (1996). Yadro bazalini stimulyatsiya qilish orqali miya yarim korteksida fiziologik xotiraning paydo bo'lishi. Amerika Qo'shma Shtatlari Milliy Fanlar Akademiyasi materiallari, 93(20), 11219-11224. doi:https://doi.org/10.1073/pnas.93.20.11219

Banerjee, SB, Gutzeit, VA, Baman, J., Aoued, HS, Doshi, NK, Liu, RC, & Ressler, KJ (2017) .Kattalar hissiy korteksdagi perineronal tarmoqlar qo'rquvni o'rganish uchun zarurdir. Neyron, 95(1), 169-179. doi:10.1016/j.neuron.2017.06.007

Barta, CL, Liu, H., Chen, L., Giffen, KP, Li, Y., Kramer, KL,. . . U, DZ (2018). Voyaga etgan zebrafish ichki quloq soch hujayralarining RNK-seq transkriptomikanalizi. Ilmiy ma'lumotlar, 5, 180005.doi:https://doi.org/10.1038/sdata.2018.5

Bayraktar, G. va Kreutz, MR (2018). Katta yoshdagi miya va nevrologik kasalliklarda faoliyatga bog'liq DNK demetilatsiyasining roli. Molekulyar nevrologiyadagi chegaralar, 11, 169.doi:10.3389/fnmol.2018.00169

Bieszczad, KM, Bechay, K., Rusche, JR, Jacques, V., Kudugunti, S., Miao, W.,. . . Wood, MA (2015). RGFP966 orqali histon deasetilazni inhibe qilish hissiy kortikal plastisite va xotira shakllanishining o'ziga xosligi bo'yicha tormozlarni bo'shatadi. J Neurosci, 35(38), 13124-13132.doi:https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.0914-15.2015

Braun, MR va Kaczmarek, LK (2011). Kaliy kanallarini modulyatsiya qilish va eshitishni qayta ishlash. Eshitish tadqiqoti, 279(1-2), 32-42. doi:https://doi.org/10.1016/j.heares.2011.03.004

Bychkov, ML, Vasilyeva, NA, Shulepko, MA, Balaban, PM, Kirpichnikov, deputat va Lyukmanova, EN(2018). Lynx1 uzoq muddatli potentsial blokadani va A 1-42 va JNK faollashuvi natijasida kelib chiqqan neyromodulyator ifodasini kamaytirishni oldini oladi. Acta Naturae, 10(3), 57-61.

Reference:1950477648n@gmail.com