Jigar saratoni bilan qanday samarali kurashish mumkin? Cistanche Deserticola faol moddasi feniletanoid glikozidlari muammoni hal qilishga yordam beradi

Abstrakt

Fon:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Uayt - an'anaviy xitoy tabobati bo'lib, Tamarix o'simligining ildizlarini parazitlashtiradi va erkaklar ojizligini, bepushtligini, tana zaifligini davolashda va tonik sifatida ishlatilgan. Biroq, uning gepatotsellyulyar karsinomaga qarshi ta'siri hali ham tushunarsiz. Bu erda biz C ning o'smaga qarshi ta'sirini tekshirdik.tubulosafeniletanoidglikozidlar(CTPG) H22 gepatotsellyulyar karsinoma hujayralarida ham in vitro, ham in vivo va uning mexanizmlari.

Usullari: H22 hujayralarining morfologiyasi, hayotiyligi, apoptozi, hujayra sikli va mitoxondriyal membrana potentsiali (Dphm) mos ravishda teskari mikroskop, MTT tahlili va oqim sitometriyasi orqali tahlil qilindi. Apoptoz yo'lidagi oqsillarning ifodasi va faollashuvi Western blot tomonidan aniqlangan. In vivo antitumor ta'siri erkak Kunming sichqonlari yordamida yaratilgan o'simta sichqonchasi modelida baholandi.

Natijalar: CTPG bilan davolash H22 hujayra o'sishini dozaga va vaqtga bog'liq holda sezilarli darajada bostirdi, bu G0/G1 va G2/M fazalarida apoptoz va hujayra siklining to'xtab qolishi bilan bog'liq edi. Bundan tashqari, CTPG bilan ishlov berilgan H22 hujayralarida xromosoma kondensatsiyasi kuzatildi. CTPG bilan davolash Bax/Bcl-2 nisbatini sezilarli darajada oshirdi, DM ni kamaytirdi va c sitoxromining chiqarilishini kuchaytirdi. Tashqi va ichki signalizatsiya yo'llarida ajralgan kaspaza-8 va kaspaza-9 darajasi sezilarli darajada oshdi, bu esa PARPni ajratish uchun ketma-ket faollashtirilgan kaspaza-7 va -3 edi. Nihoyat, CTPG sichqonlarda H22 hujayralarining o'sishini inhibe qildi va o'simta sichqonlarining omon qolish darajasini yaxshiladi.

Xulosa: Ushbu natijalar CTPG H22 hujayra o'sishini tashqi va ichki apoptoz yo'llari orqali bostirishini ko'rsatdi.

Kalit so‘zlar:Cistanchetubulosa, Feniletanoidglikozidlar, apoptoz, signalizatsiya yo'li, o'simta sichqonchasi modeli

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola juda ko'p effektlarga ega, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Fon

Jigar saratoni dunyo bo'ylab saraton kasalligi bo'yicha oltinchi va saraton kasalligidan o'lim bo'yicha to'rtinchi o'rinni egalladi. Bundan tashqari, u past ijtimoiy-demografik indeksli mamlakatlarda saraton kasalligi bo'yicha to'rtinchi va saraton o'limi bo'yicha birinchi o'rinda turadi [1]. Xitoyda jigar saratoni 2015 yilda saraton bilan bog'liq o'limning uchinchi asosiy sababidir [2]. Dunyoda birlamchi jigar saratonlarining 90 foizdan ortig'i gepatotsellyulyar karsinoma (HCC) hisoblanadi [3]. Hozirgi vaqtda jigar rezektsiyasi HCC terapiyasining asosiy variantidir. Shu bilan birga, HCC bilan og'rigan bemorlarning 30 foizdan kamrog'i davolovchi jigar rezektsiyasi mezonlariga javob beradi va yuqori takrorlanish darajasi tufayli umumiy 5-yillik omon qolish darajasi hali ham 35-50 foizgacha pastdir [4, 5]. ]. O'rta va yuqori darajadagi HCC bo'lgan bemorlarni davolash imkoniyatlari juda cheklangan. Sorafenib, molekulyar maqsadli dori, FDA tomonidan ilg'or HCC uchun birinchi darajali davolash sifatida tasdiqlangan. Biroq, sorafenib atigi 3 oylik omon qolishni uzaytiradi va javob darajasi 4 foizdan kamroqdir [6, 7]. HCCga qarshi yangi dorilar yoki strategiyalarni ishlab chiqish shoshilinchdir. An'anaviy xitoy tibbiyoti (TCM) yakka o'zi yoki boshqa strategiyalar bilan birgalikda HCCni davolashda qo'llanilgan va omon qolish muddatini uzaytirish, hayot sifatini yaxshilash, salbiy reaktsiyalarni kamaytirish va boshqalarni o'z ichiga olgan klinik imtiyozlarni ko'rsatdi [8, 9].Cistanche, TCMning bir turi turli xil biologik funktsiyalarga ega, masalan, oksidlanishga qarshi, yallig'lanishga qarshi, qarishga qarshi va neyroproteksiya [10, 11].Feniletanoidglikozidlarning asosiy faol komponentlari hisoblanganCistancheantioksidlanish, yallig'lanishga qarshi, gepatoproteksiya va neyroproteksiya kabi turli xil faoliyatga ega [12-15]. Bizning guruhimiz Cistanche tubulosa haqida xabar berdifeniletanoidglikozidlar(CTPG) melanoma B16-F10 hujayralarida apoptozni keltirib chiqarishi va sichqonlarda o'smalarning o'sishini inhibe qilishi mumkin [16]. Ushbu tadqiqotda biz CTPG ning HCC H22 hujayralariga in vitro va in vivo jonli ravishda antitumor ta'sirini o'lchadik va uning mexanizmlarini o'rgandik. Biz CTPG tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali H22 hujayralarida apoptozni keltirib chiqarganini va sichqonlarda H22 o'smalarining o'sishini bostirganini aniqladik.

Usullari

Hujayra chizig'i

Sichqoncha H22 gepatotsellyulyar karsinoma hujayralari Shinjon universiteti (Urumchi, Shinjon, Xitoy) Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasidan olindi va 100 U/ml penitsillin va 100 ug/ml qo'shilgan RPMI 1640 muhitida (Gibco) yetishtirildi. streptomitsin va 10 foiz issiqlik bilan inaktivlangan homila sigir zardobi (Gibco) 37 daraja haroratda 5 foiz CO2 namlangan atmosferada.

MTT tahlili

CTPG Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Shinjon, Xitoy) dan sotib olindi va CTPG ning asosiy birikmalari yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi orqali malakali va miqdoriy aniqlandi [16]. Hujayra hayotiyligi 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolium bromid (MTT) (Sigma, Sent-Luis, MO) tomonidan baholandi. , AQSh) tahlil. H22 hujayralari har bir quduq uchun 1{20}}0 ul muhitda 2 × 104 hujayra zichlikdagi 96-quduq plastinkalariga inokulatsiya qilindi va 37 daraja haroratda kulturalandi. 24 soatdan so'ng hujayralar mos ravishda 24, 48 va 72 soat davomida turli konsentratsiyalarda CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO (400 ug/ml CTPGdagiga teng) bilan ishlov berildi. . 1000 rpm tezlikda 7 daqiqa davomida santrifüj qilingandan so'ng, supernatant tashlandi va har bir quduqqa 100 ul MTT eritmasi (PBSda 5 mg / ml) qo'shildi. Plitalar 37 daraja haroratda 4 soat davomida inkubatsiya qilindi va hosil bo'lgan formazan kristallarini eritish uchun 100 ul DMSO qo'shildi. OD490 qiymatlari 96- quduqli mikroplastinka o'quvchi (Bio-Rad Laboratories, CA, AQSh) tomonidan aniqlandi. Hujayra hayotiyligi quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan: Hujayra hayotiyligi (foiz )=(ODT bilan ishlov berilgan/Ota ishlov berilmagan) × 100 foiz.

Apoptozni aniqlash

H22 hujayralari 24 soat davomida CTPG (0, 1{6}}0, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO ning turli konsentrasiyalari bilan ishlov berildi va keyin Annexin V FITC/ bilan bo'yalgan. Propidium yodid (PI) apoptozni aniqlash to'plami (YEASEN, Xitoy) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Namunalar oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) orqali tahlil qilindi.

Mitoxondriyal membrana potentsialini aniqlash

H22 xujayralari 24 soat davomida turli konsentratsiyali CTPG (0, 200 va 400 ug/ml) bilan ishlov berildi, so'ngra membrana o'tkazuvchan JC-1 bo'yog'i (Beyotime, Xitoy) bilan 20 vaqt davomida bo'yalgan. min. 37 daraja. JC-1 buferi bilan ikki marta yuvilgandan so'ng, namunalar 300 ul JC-1 buferi bilan qayta suspenziya qilindi va oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) bilan tahlil qilindi.

Hujayra siklini tahlil qilish

H22 xujayralari 60 mm kulturali idishlarga emlangan va turli konsentratsiyalarda CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO bilan ishlov berilgan. 24 soat. Barcha hujayralar to'plangan va ikki marta PBS bilan yuvilgan. Hujayralar 2 soat davomida 70% muzli sovuq etanolda - 20 darajada mahkamlangan va ikki marta PBS bilan yuvilgan, so'ngra 300 ul Propidium yodid/RNase bo'yash buferida (BD Biosciences) qayta suspenziya qilingan. Xona haroratida 10 daqiqadan so'ng, namunalar oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) orqali yig'ildi va hujayra sikli taqsimoti ModFit LT 3.0 dasturi bilan tahlil qilindi.

Hoechst 33,258 bo'yash

H22 hujayra yadrolarining morfologik o'zgarishlari membrana o'tkazuvchan DNK-bog'lovchi bo'yoq Hoechst 33,258 bo'yash orqali tahlil qilindi. H22 xujayralari 6-quduq plastinkasiga 2 ml muhitda 1 × 105 hujayra/quduq konsentratsiyasida ekilgan. 60% ~ 70% qo'shilishdan so'ng, hujayralar 24 soat davomida CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug / ml) bilan ishlov berildi. Hujayralar to'plangan va 4 foiz muzli Paraformaldegid bilan 4 daraja haroratda 10 daqiqa davomida mahkamlangan. PBS bilan yuvilgandan so'ng, hujayralar Hoechst 33,258 (Beyotime, Xitoy) bilan 4 daraja 10 daqiqa davomida bo'yalgan. Namunalar teskari floresan mikroskop (Nikon Eclipse Ti-E, Yaponiya) tomonidan kuzatildi.

G'arbiy dog'

Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 va anti-Bax Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanxay, Xitoy) dan xarid qilingan. Antikaspaz-7, yorilishga qarshi-7, kaspazaga qarshi-8, yorilishga qarshi-8, kaspazaga qarshi-9, antikaspaz-9 -cleaved-caspase-9, anti-PARP, anti-cleaved PARP, anti-sichqoncha IgG-HRP va anti-quyon IgG-HRP Cell Signaling Technology kompaniyasidan xarid qilindi. Anti{28}}aktin Beijing ComWin Biotech Co., Ltd.dan (Pekin, Xitoy) xarid qilingan.

H22 xujayralari 24 soat davomida turli konsentratsiyali CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO bilan ishlov berildi. Hujayralar yig'ildi va 30 daqiqa davomida muz ustida Cell Lysis Solution RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) bilan lizing qilindi. Namunalar 4 daraja haroratda 15 daqiqa davomida aylantirildi (12,{11}} g) supernatantlarni yig'ish uchun va oqsil kontsentratsiyasi BCA to'plami (Thermo Fisher Scientific, AQSh) yordamida o'lchandi. Har bir namunadagi oqsilning teng miqdori 12 foiz SDS-PAGE tomonidan ajratildi va PVDF membranalariga (Biosharp, Xitoy) o'tkazildi. TBST tamponida 5 foiz yog'siz sut mavjud bo'lganidan so'ng, membranalar mos ravishda horseradish peroksidaza (HRP) bilan konjugatsiyalangan mos keladigan birlamchi antikorlar va ikkilamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. TBST bilan yuvilgandan so'ng, maqsadli oqsillar ECL tahlil to'plami (Beyotime, Xitoy) tomonidan aniqlandi.

Hayvonlar va axloqiy bayonot

6-8 haftalik erkak Kunming sichqonlari Shinjon tibbiyot universiteti hayvonlar laboratoriya markazidan (Urumchi, Shinjon, Xitoy) xarid qilindi. Sichqonlar Shinjon universitetining standart harorat bilan boshqariladigan, yorug‘lik aylanishiga ega hayvonlar muassasasida saqlangan. Hayvonlarning barcha tadqiqotlari Shinjon universiteti hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi. Protokol Shinjon universitetining Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasi (BRGE-AE001) Hayvonlar tajribasi etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

O'simta sichqonchasini o'rganish

O'simta sichqoncha modelini induktsiya qilish uchun erkak Kunming sichqonlariga teri ostiga 1 × 106 H22 hujayrasi 100 ul PBSda o'ng qanotga yuborildi. 3 kundan keyin sichqonlar tasodifiy 3 guruhga bo'lingan (7 sichqon / guruh). Nazorat guruhiga o'simta atrofida teri ostiga 0,1 ml DMSO yuborildi. CTPG-200 va CTPG- 400 guruhlari o'simta atrofida 0,1 ml DMSOda 200 yoki 400 mg/kg CTPG bilan teri ostiga yuborildi. Sichqonlar har 2 kunda 21 kungacha davolandi. O'simta o'lchamlari 25 kungacha bo'lgan kaliperlar yordamida o'lchandi va o'simta hajmi quyidagi formula bo'yicha hisoblandi: o'simta hajmi (mm3 )=(uzunlik × kenglik2 )/2. 25 kundan so'ng, o'simta sichqonlarining omon qolishi ushbu tadqiqot oxirigacha har kuni kuzatildi.

Statistik tahlil

Statistik ahamiyatlilik davolash va nazorat guruhlari o'rtasidagi tafovutni bir tomonlama tahlil qilish yo'li bilan hisoblab chiqilgan. Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida ifodalangan. p < 0.05="" statistik="" jihatdan="" ahamiyatli="" deb="">

Natijalar

CTPG in vitro H22 hujayralarining hayotiyligini pasaytirdi

CTPG ning HCC ga antitumor ta'sirini o'rganish uchun H22 hujayralari in vitroda turli konsentratsiyali CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) bilan ishlov berildi. 24 soatdan keyin H22 hujayralarining morfologiyasi teskari mikroskop yordamida kuzatildi. Biz H22 hujayralarining morfologiyasi CTPG bilan davolash orqali keskin o'zgarganligini aniqladik. CTPG konsentratsiyasining oshishi bilan hujayralar kichik va yumaloq bo'lib qoldi va hujayralar soni ham sezilarli darajada kamaydi (1a-rasm). MTT tahlili mos ravishda 24, 48 va 72 soat davomida CTPG bilan davolashdan keyin H22 hujayralarining hayotiyligini tahlil qilish uchun ishlatilgan. CTPG dozaga bog'liq va vaqtga bog'liq holda H22 hujayra hayotiyligini sezilarli darajada kamaytirdi (1b-rasm). 300 ug/ml dagi CTPG eng yaxshi inhibitiv tezlikka erishdi (1c-rasm). H22 hujayralari uchun CTPG ning IC50 qiymatlari 24 soatda 236 ug / ml va 48 soatda 169,8 ug / ml ni tashkil qiladi.

CTPG H22 hujayralarida apoptozni keltirib chiqardi

H22 hujayralarining hayotiy qobiliyatining pasayishi apoptoz induksiyasi bilan bog'liqligini tekshirish uchun H22 hujayralari 24 soat davomida turli konsentratsiyalarda CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) bilan ishlandi va bo'yaldi. PI va Annexin V bilan. Oqim sitometriyasi natijalari CTPG H22 hujayralarining apoptozini (erta va kech apoptozni o'z ichiga olgan) dozaga bog'liq holda sezilarli darajada indüklaganligini ko'rsatdi (2a-rasm). CTPG ning yuqori dozasi H22 hujayralari nekrozini sezilarli darajada oshirgan bo'lsa-da, nekroz apoptozga (52,6 foiz) nisbatan pastroq nisbati (8,3 foiz) tufayli H22 hujayralari o'sishini inhibe qilishda kichik rol o'ynaydi. Bundan tashqari, H22 hujayralarining umumiy oqsillari CTPG bilan davolashdan so'ng ajratildi va antiapoptotik B hujayrali limfoma 2 (Bcl-2) va proapoptotik BCL-2-bog'langan X oqsili (Bax) ifodalari aniqlandi. G'arbiy dog'. Kulrang skanerlash ma'lumotlari Bax va Bcl-2 ifoda darajalari mos ravishda oshirilgan va pasayganligini ko'rsatdi. Bax/Bcl-2 nisbati sezilarli darajada oshdi (2b-rasm). Ushbu natijalar CTPG H22 hujayralarida apoptozni keltirib chiqarishini ko'rsatadi.

CTPG H22 hujayralarida xromosoma kondensatsiyasini va hujayra siklini to'xtatishni keltirib chiqaradi.

Dorilar tomonidan qo'zg'atilgan DNK shikastlanishi va hujayra siklini to'xtatish o'simta hujayralari o'sishini inhibe qilishi va o'simta hujayralarida apoptozni keltirib chiqarishi mumkinligi xabar qilingan [17, 18]. 24 soat davomida CTPG bilan davolashdan so'ng H22 hujayralarida yadrolarning morfologiyasini aniqlash uchun H22 hujayralari Hoechst 33,342 tomonidan bo'yalgan va teskari floresan mikroskop yordamida kuzatilgan. CTPG bilan ishlov berilgan hujayralar yadrolarning yorqin kondensatsiyalangan xromatinining dozaga bog'liq o'sishini ko'rsatdi, ishlov berilmagan hujayralar esa bir hil bo'yalgan yadrolarni ko'rsatdi (3a-rasm). H22 hujayralarida hujayra siklining tarqalishi 24 soat davomida CTPG bilan davolashdan keyin PI bo'yash orqali tahlil qilindi. 3b-rasmda ko'rsatilganidek, CTPG bilan davolash G0/G1- va G2/M-fazali hujayralar ulushini sezilarli darajada oshirdi va S-fazali hujayralar ulushini sezilarli darajada kamaytirdi, bu CTPG G'ni keltirib chiqarganligini ko'rsatadi. 0/G1 va G2/M fazalari H22 kameralarida. CTPG ning yuqori dozasi ham sub G1 hujayralari ulushini sezilarli darajada oshirdi.

CTPG mitoxondriyal membrana potentsialini pasaytirdi va sitoxrom c ning chiqarilishini oshirdi

mitoxondriyal bog'liq yo'l apoptozning induktsiyasida muhim rol o'ynaydi [19, 20]. Mitoxondriyal membrana potentsialidagi o'zgarishlar (Dsm) JC{3}} bo'yalishi bilan kuzatilishi mumkin, chunki JC-1 agregati (qizil floresans) DM ning kamayishi bilan monomerga (yashil floresans) parchalanishi mumkin [21]. 24 soat davomida CTPG bilan davolashdan so'ng, H22 hujayralari JC{8}} bo'yoq bilan bo'yalgan. Oqim sitometriyasi ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, FL-2 kanalidagi qizil lyuminestsent va FL-1 kanalidagi yashil lyuminestsent CTPG bilan davolashda sezilarli darajada pasaygan va ortgan. PE-FITC plyus hujayralarining ulushi sezilarli darajada oshdi (4a-rasm), bu CTPG H22 hujayralarida DM ni kamaytirganligini ko'rsatadi. Bu oshgan Bax/Bcl-2 nisbatiga mos keladi. Shunday qilib, biz CTPG bilan davolashda sitoxrom c ning chiqarilishi sezilarli darajada oshganini kuzatdik (4b-rasm). Ushbu natijalar CTPG mitoxondrialga bog'liq (ichki) yo'l orqali H22 hujayralarida apoptozni qisman qo'zg'atishi mumkinligini ko'rsatdi.

CTPG kaspaz yo'lini faollashtirdi va DNKni tiklashni oldini oldi

Keyinchalik, tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali CTPG tomonidan qo'zg'atilgan kaspazaning faollashuvi tahlil qilindi. 24 soat davomida CTPG bilan davolashdan so'ng, umumiy oqsillar H22 hujayralaridan ajratildi va pro-va bo'lingan-kaspazalar darajalari Western blot yordamida aniqlandi. Ishlov berilmagan yoki DMSO nazorati bilan solishtirganda, CTPG bilan davolash nafaqat bo'lingan kaspaza-8 darajasini (tashqi yo'l), balki parchalangan kaspaza-9 (ichki yo'l) darajasini ham sezilarli darajada oshirdi (1-rasm). 5). Ketma-ket faollashtirilgan kaspaza-8 va -9 5-rasmda kuzatilgan quyi oqim pro-kaspazani-3 va -7 ajratib oldi. Faollashtirilgan kaspaza-3 DNKni parchalab tashladi. poli (ADP-riboza) polimeraza (PARP) ning ta'mirlash fermenti DNK ta'mirlanishini oldini olish va shakl 3a da ko'rsatilganidek, DNKning shikastlanishini to'plash.

Ushbu natijalar CTPG H22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali apoptozni keltirib chiqarganligini ko'rsatdi.

CTPG in vivo H22 HCC o'sishini bostiradi va o'simta sichqonlarining omon qolish darajasini yaxshilaydi.

Nihoyat, CTPG ning HCC ga antitumor ta'siri H22 hujayralarini teri ostiga yuborish orqali o'rnatilgan o'simta sichqonchasi modelida baholandi. H22 hujayrali in'ektsiyadan 3 kun o'tgach, o'simta sichqonlari CTPG bilan 8 marta davolandi. Sichqonlarning tana vazni va o'simta o'lchamlari belgilangan vaqt nuqtalarida kuzatildi. 6a-rasmda ko'rsatilganidek, har bir guruhdagi sichqonlarning tana vaznida sezilarli farq yo'q, bu CTPG ning tanlangan dozalari aniq nojo'ya ta'sirlarga ega emasligini ko'rsatadi. Qizig'i shundaki, 200 mg/kg va 400 mg/kg CTPG bilan davolash qilingan sichqonlarda o'simta o'sishi sezilarli darajada inhibe qilingan (6b-rasm). Bundan tashqari, CTPG davolashning ikki dozasi tajriba oxirida nazorat guruhiga (0/7) nisbatan o'simta sichqonlarining (3/7, 3/7) omon qolishini sezilarli darajada yaxshiladi (6b-rasm). Shuningdek, biz CTPG erkak Kunming sichqonlaridan ajratilgan splenotsitlarning ko'payishini dozaga bog'liq tarzda sezilarli darajada kuchaytirganligini aniqladik (6c-rasm), bu CTPGning immunostimulyator ta'siriga ega ekanligini ko'rsatdi.

Munozara

TCM uzoq vaqt davomida turli kasalliklarni, shu jumladan saratonni davolash uchun ishlatilgan. TCM antitumor ta'sir ko'rsatish uchun tashqi (o'lim retseptorlari vositachiligida) va ichki (mitoxondriyaga bog'liq) signalizatsiya yo'llari orqali turli xil turdagi o'simta hujayralarida apoptozni qo'zg'atishi mumkinligi haqida xabar berilgan [22-25]. Ikkala yo'l mos ravishda kaspaz-8 va -9 ni faollashtirishi mumkin [24, 26]. Bu erda biz CTPG apoptoz induksiyasi va hujayra siklini to'xtatish orqali H22 hujayra o'sishini sezilarli darajada bostirganini aniqladik. Yorilgan kaspaza-8 va -9 darajalari CTPG bilan davolash orqali sezilarli darajada ko'tarildi, bu apoptozning induktsiyasida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari ishtirok etganligini ko'rsatadi. Oldingi tadqiqotimiz shuni ko'rsatdiki, CTPG melanoma B16-F10 hujayralarida mitoxondriyaga bog'liq yo'l orqali apoptozni keltirib chiqargan, bu esa kaspazani emas-8 bo'linish darajasini oshirgan-9. CTPG har xil turdagi o'simta hujayralarida aniq signal yo'llarini faollashtirishi mumkin.

Mitoxondriyal membrananing yaxlitligi BCL-2 oqsillar oilasi a'zolari, jumladan Bax va Bcl-2 tomonidan qattiq tartibga solinadi [27, 28]. Bax va Bcl-2 nisbati mitoxondriyaga bog'liq apoptoz yo'lida hal qiluvchi rol o'ynaydi [29]. CTPG bilan ishlov berilgan H22 hujayralarida Bax/Bcl-2 nisbati sezilarli darajada ko'tarildi, bu esa Dsm ning pasayishiga va ushbu tadqiqotda kuzatilgan sitoxrom c ning chiqarilishiga olib kelishi mumkin. Natijada, pro-caspase{11}} ajraldi va faollashtirildi. Nihoyat, faol kaspaza-8 va -9 tashabbuskorlari DNK taʼmirlanishining oldini olish uchun PARPni parchalash uchun kaspaza-3 ijrochisini faollashtirdilar. Birgalikda bu natijalar CTPG H22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali apoptozni keltirib chiqarganligini ko'rsatdi.

O'simta sichqonchasi modelida CTPG H22 HCC o'sishini sezilarli darajada bostirdi va o'simta sichqonlarining omon qolishini sezilarli darajada yaxshiladi. Qizig'i shundaki, CTPG dozaga bog'liq ravishda Kunming sichqonlaridan splenotsitlarning ko'payishiga yordam berdi, bu bizning oldingi tadqiqotimizga mos keladi [16].

Ushbu natijalar CTPG sichqonlarda H22 HCC o'sishini to'g'ridan-to'g'ri antitumor ta'siri va bilvosita immunitetni oshirish orqali bostirishi mumkinligini ko'rsatdi.

Xulosa

CTPG in vitro va in vivo H22 hujayralarining o'sishini bostirdi va tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali H22 hujayralarida apoptozni keltirib chiqardi. Ushbu ma'lumotlar CTPG HCCni davolash uchun potentsial nomzod bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi.

Qisqartmalar

Bax: BCL-2-bog'langan X oqsili; Bcl-2: B hujayrali limfoma 2; CTPG: Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlari; HCC: gepatotsellyulyar karsinoma; HRP: horseradish peroksidaza; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5- difeniltetrazolium bromid; PARP: poli (ADP-riboza) polimerazasining DNKni tuzatuvchi fermenti; TCM: an'anaviy xitoy tibbiyoti; Dym: mitoxondriyal membrana potentsiali.

Moliyalashtirish

Bu ish Shinjon-Uyg‘ur avtonom viloyatining JLga yuqori darajadagi iste’dodlarni joriy etish loyihasi, JLga Xitoy milliy tabiiy fanlar jamg‘armasi granti (31460241) va Shinjon universitetining doktoranturani boshlash jamg‘armasi (BS160261 to XW va BS150236) tomonidan qo‘llab-quvvatlandi. YL).

Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi

Ushbu tadqiqot uchun dastlabki ma'lumotlar tegishli muallifning asosli so'roviga binoan mavjud.

Mualliflarning hissalari

JL va JL tajribalarni ishlab chiqdilar. PY, JL, AA va YY tajribalarni amalga oshirdi. LX, XW va YL ma'lumotlarni tahlil qildi. PY, JL va JL qo'lyozmani yozgan. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmaga o'z hissalarini qo'shdilar va tasdiqladilar.

Etikani tasdiqlash

Hayvonlarni o'rganish Shinjon universitetining Shinjon Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasining hayvonlar tajribalari etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Raqobatdosh manfaatlar

Mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar.

Nashriyot eslatmasi

Springer Nature nashr etilgan xaritalar va institutsional birlashmalardagi yurisdiksiyaviy da'volarga nisbatan betaraf qoladi.

Muallif tafsilotlari

1 Shinjon Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasi, Hayot fanlari va texnologiyalari kolleji, Shinjon universiteti, 666 Shengli Road, Urumchi, Shinjon 830046, Xitoy.

2 Hayot fanlari kolleji, Shinjon Oddiy universiteti, 102 Xinyi Road, Urumchi 830054, Shinjon, Xitoy.

Shinjon tibbiyot universitetining 3 bog'liq tumor kasalxonasi, Urumchi 830011, Xitoy.