Tabiiy polifenol antioksidantlarining fotoreaktivligi va fototoksikligini in vitro baholash

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comko'proq bilish uchun.

Annotatsiya:Polifenollar antioksidant va yallig'lanishga qarshi foydali xususiyatlari va ultrabinafsha nurlanishidan kelib chiqadigan oksidlovchi stressni oldini olish qobiliyati tufayli kosmetik mahsulotlarda keng qo'llaniladigan tabiiy birikmalarning katta oilasidir. Ushbu birikmalar xromoforlarni o'z ichiga olganligi va to'g'ridan-to'g'ri teriga qo'llanilishi sababli ular quyosh nurlari bilan reaksiyaga kirishishi va fototoksik ta'sir ko'rsatishi mumkin. Ushbu tabiiy birikmalarning fototoksik salohiyati to'g'risida mavjud ilmiy ma'lumotlar juda kam, shuning uchun ushbu tadqiqotning maqsadi beshta fenolik moddalarning fotoreaktivligi va fototoksikligini baholash edi.antioksidantlarkosmetik mahsulotlarda hujjatlashtirilgan foydalanish bilan. Standart ROS tahlili tasdiqlangan va tabiiy fenolik antioksidantlar kofein kislotasi, ferul kislotasi, p-kumar kislotasi, 3, 4-dihidroksifenilatsetik kislota (DOPAC) va rutinning fotoreaktivligini tekshirish uchun qo'llanilgan. Fototoksiklik potentsiali 3T3 Neytral Red Uptake fototoksiklik testi asosida inson keratinotsit hujayra liniyasi (HaCaT) yordamida aniqlandi. Hammasi bo'lsa-dafenolik antioksidantlarni o'rgangan290 dan 700 nm gacha bo'lgan ultrabinafsha nurlanishini yutgan, faqat DOPAC yagona kislorod hosil qila olgan. Reaktiv kislorod turlarining paydo bo'lishi fototoksiklik mexanizmining bir qismi sifatida erta bosqichdagi kimyoviy reaktsiya hisoblanadi. Shunga qaramay, o'rganilgan birikmalarning hech biri nurlanishdan keyin keratinotsitlarning hayotiyligini kamaytirmadi, bu ularning fototoksik potentsialga ega emasligi haqidagi xulosaga olib keldi. Ushbu ish bilan olingan ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, ushbu birikmalar kosmetik mahsulotlarga kiritilganda xavfsizdir.

Kalit so‘zlar:fotosurat xavfsizligi; fotoreaktivlik; fototoksiklik; polifenollar;tabiiy fenolik antioksidantlar; reaktiv kislorod turlari; keratinotsitlar; teri parvarishi; kosmetika mahsulotlari

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Kirish 

Polifenollar (PP) o'simliklar olamidagi eng ko'p va keng tarqalgan tabiiy mahsulotlar guruhlaridan birini tashkil qiladi. PPlarning kimyoviy tuzilishi bir yoki bir nechta benzol halqalari tizimiga bog'langan bir yoki bir nechta fenolik gidroksil guruhlarning mavjudligi bilan tavsiflanadi [1]. Polifenollar odamlarda antiviral, antibakterial, antikarsinogen, gepatoprotektiv, yallig'lanishga qarshi va antioksidant ta'sirni o'z ichiga olgan turli xil foydali biologik faolliklarni namoyish etadi [2-5].Antioksidantlar sifatida, polifenollar hujayra tarkibiy qismlarini reaktiv kislorod turlarining (ROS) oksidlovchi zararli ta'siridan himoya qilishi mumkin, masalan, yagona kislorod, superoksid va gidroksil radikallari, oksidlovchi stress bilan bog'liq bir qancha kasalliklar xavfini cheklaydi [6,7]. Kimyoviy xossalari tufayli PPlar ROS va xelat o'tish metallari ionlarini, masalan, temir va misni tozalashga qodir, bu esa terini parvarish qilish formulalarida foydalanish uchun kosmetika sanoatining qiziqishini uyg'otdi [8-10]. Ultrabinafsha nurlar (UV) ta'siri teri saratonini qo'zg'atuvchi asosiy omillardan biri bo'lib, teri hujayralari to'g'ridan-to'g'ri ultrabinafsha nurlanishi yoki bilvosita ultrabinafsha nurlanishi bilan ROSning haddan tashqari ishlab chiqarilishi bilan zararlanishi mumkin [11]. Eksperimental va epidemiologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, polifenollar terini ultrabinafsha nurlanishining salbiy ta'siridan ko'p yo'llar orqali himoya qiladi [12]. Shu sababli, ushbu oilaga tegishli bo'lgan bir nechta birikmalar bozorda mavjud bo'lgan bir qator tijorat kosmetika mahsulotlarining tarkibiy qismlari sifatida allaqachon ishlatilgan [13]. Iste'molchilarning tabiiy kosmetikaga bo'lgan talabining ortishi sanoatni terini parvarish qilish uchun istiqbolli va samarali yechim sifatida polifenollar kabi faol moddalarga ega tabiiy ekstraktlardan foydalangan holda formulalarni ishlab chiqishga undadi [13]. Biroq, polifenollar tarkibida mavjud bo'lgan xromoforlar UV/Vis nurlanishini o'zlashtirish qobiliyatiga ega va fototoksik reaktsiyalarga olib kelishi mumkin bo'lgan hodisalar kaskadiga olib keladigan kimyoviy reaksiyalarga kirishadi [14]. Fototoksiklik organizmga atrof-muhit nuri ta'siridan keyin mahalliy yoki tizimli ravishda yuboriladigan fotoreaktiv kimyoviy moddalar tomonidan yuzaga keladigan toksik reaktsiya sifatida aniqlanadi [15]. Faol farmatsevtik tarkibiy qismlar va tizimli qo'llash uchun yordamchi moddalar, topikal qo'llash uchun klinik formulalar, teri yamoqlari va boshqalar fototoksik potentsialga ega va sezilarli fototoksik reaktsiyalarni keltirib chiqarishi mumkin. Shunday qilib, tartibga soluvchi idoralar, AQSh FDA, EI EMA va ICH, sinov usullari va baholash strategiyalarini joriy etgan holda fotosuratlar xavfsizligi bo'yicha ko'rsatmalar beradi [15-17]. Kosmetik mahsulotlarning xavfsizligini baholash Evropa Ittifoqi qonunchiligiga muvofiq majburiydir [18]. Kerakli xavfsizlikni baholash kosmetik ingredientlar bo'yicha tegishli toksikologik tadqiqotlarni, shu jumladan fotosurat bilan zaharlanishni baholashni o'z ichiga oladi [18]. Kosmetik mahsulotlar uchun hayvonlarni sinovdan o'tkazish taqiqlanganligi sababli, so'nggi yillarda in vitro foto xavfsizligi bo'yicha bir qator sinovlar taklif qilindi, jumladan UV spektri tahlili, 3T3 Neytral Red Uptake fototoksiklik testi (3T3 NRU PT) va reaktiv kislorod turlari ( ROS) tahlili [18-20]. ROS tahlili dorilarning fotoreaktivligini baholash uchun mo'ljallangan bo'lib, uning printsipi simulyatsiya qilingan quyosh nuri ta'sirida sinov kimyoviy moddalaridagi fotokimyoviy reaktsiyalarni kuzatishdir [19,20]. Ushbu fotokimyoviy reaktsiyalar orqali ROS, masalan, superoksid anioni va singlet kislorod hosil bo'lishi mumkin va bu fotokimyoviy jarayonlar dori-darmonli fototoksiklik uchun tetik bo'lishi mumkin [19,20]. Yuqori darajadagi ROS oksidlovchi stress tufayli DNK, lipidlar va oqsillarga zarar etkazish orqali sitotoksiklikka olib kelishi mumkin.https://www.voachinese.com/a/us-lawmakers-united-condemn-russias-ukraine-invasion-20220224/6458599.htmlIn vitro metodologiyasi 3T3 NRU-PT sitotoksiklikning so'nggi nuqtasi sifatida sichqonchaning fibroblastlari Balb/c 3T3 hujayra liniyasi va neytral qizil o'zlashtirishdan foydalanadi. Keyin fototoksiklik quyosh nurini simulyatsiya qiluvchi yorug'lik mavjudligi va yo'qligida sinov kimyoviy ta'siriga duchor bo'lgan hujayralar hayotiyligining nisbiy qisqarishi bilan aniqlanadi. Adabiyotlarda e'lon qilingan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bu test haddan tashqari sezgir, hayvonlar va odamlarning fotosuratlari xavfsizligi xavfini noto'g'ri bashorat qiladi, bu in vivo natijalar bilan solishtirganda ko'p noto'g'ri musbatlarga olib keladi [21-23]. Ushbu cheklovni hisobga olgan holda, bizning guruhimiz tomonidan 3T3 NRU-PT metodologiyasining modifikatsiyasi inson keratinotsit hujayra liniyasidan (HaCaT) foydalanishga asoslangan [24] taklif qilindi. Ushbu metodologiya inson keratinotsit hujayralaridan foydalanganligi sababli, bu topikal birikmalar qo'llaniladigan va quyosh nurlari ta'siriga duchor bo'lgan terining tashqi qatlamida mavjud bo'lgan hujayralarning eng ko'p turi ekanligini hisobga olsak, u yanada real modelni ifodalaydi [24]. Ushbu tadqiqotning maqsadi tabiiy polifenollar p-kumar kislotasi, kofein kislotasi, 3{16}}dihidroksifenilsirka kislotasi (DOPAC), ferul kislotasi va rutinning foto-induktsiyali toksiklik potentsialini baholash edi (1-rasm), allaqachon kosmetik ingredientlar sifatida ishlatilgan yoki qiziqarli kimyoviy va antioksidant xususiyatlari tufayli ko'rib chiqilmoqda [25-27]. ROS tahlili tasdiqlandi va birikmalarning foto-xavfsizligini baholash uchun amalga oshirildi va ularning sitotoksikligi va fototoksikligi inson keratinotsit hujayra liniyasi (HaCaT) yordamida qo'shimcha baholandi.

2. Natijalar va muhokama 

Fotoreaktiv potentsialni baholash uchun dastlabki e'tibor, birikmaning 290 va 700 nm oralig'idagi har qanday to'lqin uzunligidagi fotonlarni yutishi yoki o'zlashtirmasligidir. 290 dan 700 nm gacha bo'lgan har qanday to'lqin uzunligida 1000 L mol-1 sm-1 dan katta molyar so'nish koeffitsienti (MEC) bo'lgan birikma to'g'ridan-to'g'ri fototoksiklikka olib kelishi uchun etarli darajada fotoreaktiv hisoblanadi [15]. Kofein, p-kumar va ferul kislotalarning, DOPAC va rutinning DMSO tarkibidagi ultrabinafsha nurda ko‘rinadigan nurda yutilish spektrlari 2-rasmda ko‘rsatilgan. 290 nm dan yuqori va MEC bilan odatda 4000 L mol-1 sm-1 dan katta (1-jadval). Polifenollar - fenolik gidroksil guruhlari bilan p konjugatsiyalangan tizimlarni o'z ichiga olgan biologik birikmalar. p tipidagi molekulyar orbitallarning elektron o'tishlari ushbu birikmalar guruhining UV-ko'rinadigan spektri uchun javobgardir [28]

Sinovdan o'tkazilgan barcha birikmalar MEC ni 1000 L mol-1 sm-1 dan yuqori ko'rsatdi, bu ularning barchasi o'rganishga arziydigan fototoksik birikmalar ekanligini anglatadi [15]. ROS tahlilini o'tkazishdan oldin quyosh simulyatori baholandi va eksperimental sharoitlar yagona kislorod (SO) va superoksid anionining (SA) o'lchangan qiymatlari adabiyotda qayd etilganlarga yaqin bo'lishini ta'minlash uchun optimallashtirildi [29]. ROS ishlab chiqarish tahlilini optimallashtirish ijobiy va salbiy nazorat yordamida amalga oshirildi va mos yozuvlar kimyoviy moddalari yordamida texnik-iqtisodiy asoslash o'tkazildi. Amaldagi eksperimental sharoitlarda, texnik-iqtisodiy asosda sinovdan o'tgan barcha moddalar ruxsat etilgan qiymat oralig'ida SO va SA uchun qiymatlarni beruvchi qabul qilish mezonlariga javob berdi [29].

Polifenolik birikmalar uchun ROS tahlili o'tkazildi va sinovdan o'tgan moddalarning 200 mkM konsentratsiyada ROS hosil qilish qobiliyati 2-jadvalda ko'rsatilgan. 2-jadval. Sinovdan o'tgan birikmalar uchun natijalar ROS tahlili yordamida olingan.

Olingan natijalar shuni ko'rsatadiki, DOPACdan tashqari, barcha birikmalar fotoreaktiv bo'lmagan deb tasniflanishi mumkin. Garchi bu moddalar ultrabinafsha nurda ko'rinadigan yorug'likni yutish va MEC 1{9}}00 L mol−1 sm−1 dan yuqori bo'lsa-da, ular sinovdan o'tgan sharoitlarda SO yoki SA turlarida ROS hosil qilmadi. Ajablanarlisi shundaki, DOPAC SO turlarining paydo bo'lishini qo'zg'atishga muvaffaq bo'ldi va shuning uchun bu birikma o'rganilgan barcha birikmalar orasida UV-ko'rinadigan diapazonda eng past MEC qiymatiga ega bo'lishiga qaramay, fotoreaktiv deb tasniflandi. DOPAC uchun olingan natijalarni tushunish uchun ko'proq tadqiqotlar talab qilinadi, bu ham yaqin kelajakda birikmaning kimyoviy tuzilishi va uning fotoreaktiv bo'lish qobiliyati o'rtasidagi bog'liqlikni o'rnatish uchun muhim bo'lishi mumkin. Fototoksik ta'sirlarni baholash uchun ishlatiladigan DMSO ning sitotoksikligi, nurlanishning mavjudligi va yo'qligida, 1 soat ta'sir qilishdan keyin baholandi. Nurlanmagan plastinka uchun DMSO salbiy nazoratga nisbatan statistik jihatdan muhim farqni ko'rsatmadi. Shu bilan birga, nurlangan plastinka uchun 1 foizli DMSO va solvent nazorati o'rtasida salbiy nazoratga nisbatan sezilarli farq bor edi (p <0,0001), bu="" hujayra="" hayotiyligidagi="" farqlarni="" kafolatlash="" uchun="" barcha="" tajribalarda="" hal="" qiluvchi="" nazoratidan="" foydalanishni="" oqladi.="" faqat="" o'rganilayotgan="" birikmalarga="" tegishli="" edi.="" inson="" keratinotsit="" hujayra="" liniyasi="" (hacat)="" yordamida="" fototoksiklik="" tahlilining="" maqsadga="" muvofiqligini="" taʼminlash="" uchun="" 5-metoksi="" psoralen,="" xlorpromazin="" gidroxloridi="" va="" xinin="" musbat="" nazorat="" sifatida,="" atsetilsalitsil="" kislotasi,="" geksaxlorofen="" va="" natriy="" lauril="" sulfat="" salbiy="" nazorat="" sifatida="" sinovdan="" oʻtkazildi.="" [24].="" hacat="" hujayralarining="" nurlangan="" va="" nurlanmagan,="" sinovdan="" o'tgan="" (poli)fenol="" birikmalari="" mavjudligida="" hujayra="" hayotiyligini="" solishtirganda="" fototoksiklik="" tahlilidan="" olingan="" natijalar="" 3-rasmda="" tasvirlangan.="" (irr="" plyus)="" va="" yorug'likning="" yo'qligi="" (irr−)="" maksimal="" kontsentratsiyasi="" 1000="" mkmni="" hisobga="" olgan="" holda="" doza="" oralig'ini="" aniqlash="" tajribalarida="" aniqlandi.="" geometrik="" suyultirish="" seriyasidan="" foydalanilgan="" va="" kerak="" bo'lganda,="" nurlanish="" mavjudligi="" va="" yo'qligida="" konsentratsiya-javob="" funktsiyasi="" sifatida="" sozlangan.="" sinov="" qilingan="" kontsentratsiya="" oralig'ida="" (12,5;="" 31,25;="" 62,5;="" 125;="" 250;="" 500="" va="" 1000="" mkm)="" tekshirilayotgan="" moddalarning="" hech="" biri="" hujayra="" hayotiyligining="" 50="" foizga="" kamayishiga="" olib="" kelmadi,="" shuning="" uchun="" tegishli="" ic50="" va="" pif="" qiymatlarini="" hisoblash="" mumkin="" emas="" edi.="" .="" aksincha,="" sinovdan="" o'tgan="" moddalar="" mavjud="" bo'lganda,="" nurlangan="" hujayralar="" hayotiyligining="" dozaga="" bog'liq="" o'sishini="" sezish="" mumkin="" edi,="" ehtimol="" bu="" antioksidantlarning="" nurlanish="" natijasida="" kelib="" chiqadigan="" oksidlovchi="" zararga="" qarshi="" fotoprotektiv="" ta'siri="" tufayli="" yuqori="" foizga="" olib="" keladi.="" nazorat="" bilan="" solishtirganda="" (davolanmagan="" nurlangan="" hujayralar)="" hayotiy="" hujayralar="" soni.="" adabiyotda="" ultrabinafsha="" nurlanishi="" ros="" hosil="" bo'lishiga,="" azot="" oksidining="" haddan="" tashqari="" ko'payishiga="" va="" keratinotsitlarda="" antioksidant="" himoyaning="" pasayishiga="" olib="" kelishi="" tasvirlangan="" [30].="" shu="" sabablarga="" ko'ra="" antioksidant="" qobiliyatiga="" ega="" polifenollar="" fotoprotektiv="" vositalar="" sifatida="" o'rganilgan.="" ko'pgina="" tadqiqotlar="" polifenollarning="" fotoprotektiv="" qobiliyatiga="" qaratilgan="" bo'lsa-da,="" ular="" fototoksik="" salohiyatini="" o'rganmagan.="" oldingi="" tadqiqotlar="" kofeik,="" ferulik="" va="" p-kumar="" kislotalarining="" ros="" va="" reaktiv="" azot="" turlarini="" (rns)="" tozalash="" qobiliyatini="" tasdiqladi.="" bundan="" tashqari,="" ultrabinafsha="" nurlanishining="" zararli="" ta'siridan="" himoya="" ham="" ushbu="" uchta="" fenolik="" birikma="" uchun="" in="" vivo="" yoki="" teri="" hujayralarida="" o'rnatildi="" [31-34].="" ushbu="" ma'lumotlar="" o'rganilayotgan="" birikmalar="" ishtirokida="" nurlanish="" ta'sirida="" hayotga="" qodir="" hujayralar="" foizining="" oshishini="" tushuntirishi="" mumkin.="" rutin,="" kofeik,="" ferul="" va="" p-kumar="" kislotalari="" kabi="" ros="" avlod="" tahlilida="" salbiy="" sinovdan="" o'tdi="" va="" hacat="" hujayra="" liniyasida="" fototoksiklikni="" keltirib="" chiqarmadi.="" adabiyotda="" rutinning="" fototoksik="" potentsialiga="" oid="" ba'zi="" qarama-qarshi="" ma'lumotlar="" mavjud,="" shuning="" uchun="" olingan="" natijalar="" qiziqish="" uyg'otadi.="" keratinosit="" hujayra="" tizimi="" (hacat)="" yordamida="" fototoksik="" potentsialni="" baholash="" rutinning="" fototoksikligini="" ko'rsatdi="" [35].="" aksincha,="" elektrokimyoviy="" va="" ultrabinafsha="" nurlanishi="" bilan="" kapillyar="" elektroforezni="" qo'llaydigan="" eksperimental="" qurilma="" yordamida="" o'simlik="" ekstraktlari="" va="" komponentlarining="" kislorod="" iste'moli="" va="" ko'rinadigan="" yorug'lik="" bilan="" nurlanishida="" reaktiv="" kislorod="" turlarini="" hosil="" qilish="" nuqtai="" nazaridan="" fototoksikligini="" tekshirish="" uchun="" rutinning="" o'ziga="" xosligi="" haqida="" xulosa="" qilish="" mumkin="" edi.="" fototoksik="" emas="" [36],="" bu="" ishda="" olingan="" natijalarga="" mos="" keladi,="" bunda="" rutin="" fotoreaktivlikni="" ko'rsatmaydi,="" chunki="" u="" ros="" avlod="" tahlilida="" so="" yoki="" sa="" hosil="" qilmagan.="" boshqa="" tomondan,="" bu="" ishda,="" shuningdek,="" rutin="" o'z-o'zidan="" hacat="" hujayra="" chizig'ida="" fototoksik="" potentsialga="" ega="" emasligi="" ko'rsatildi.="" ushbu="" qarama-qarshi="" topilmalar="" noto'g'ri="" natijalarga="" yo'l="" qo'ymaslik="" uchun="" standartlashtirilgan="" sinov="" shartlaridan="" foydalanish="" va="" tegishli="" yorug'lik="" manbasidan="" foydalanish="" muhimligini="" ta'kidlaydi.="" qizig'i="" shundaki,="" dopac="" va="" o'rganilgan="" boshqa="" pplar="" o'rtasidagi="" tizimli="" o'xshashlikka="" qaramay,="" dopac="" ros="" avlod="" tahlilida="" so="" ni="" yaratdi="" va="" fotoreaktiv="" deb="" tasniflandi.="" biroq,="" hacat="" hujayra="" liniyasida="" sinovdan="" o'tkazilganda,="" dopac="" fototoksik="" emasligini="" ko'rsatdi.="" olingan="" natijalarga="" ko'ra,="" dopac="" fotoreaktiv,="" ammo="" fototoksik="" emas,="" shuning="" uchun="" ushbu="" birikmani="" topikal="" qo'llashdan="" keyin="" fototoksik="" reaktsiyalar="" paydo="" bo'lishi="">

3. Materiallar va usullar

3.1. Reaktivlar

3,4-Digidroksifenilatsirka kislotasi (DOPAC), kofein kislotasi, transferul kislotasi, p-kumar kislotasi, rutin, xlorpromazin gidroxloridi, disodiy vodorod fosfat dodekahidrat, natriy fosfat monobazik monohidrat, neytral qizil dimetil (NR sulf), (DMSO) Sigma-Aldrichdan (Madrid, Ispaniya) sotib olingan. Xinin gidroxloridi, benzokain, diklofenak va eritromitsin Acofarma kompaniyasidan (Madrid, Ispaniya) sotib olindi. O'lmas inson keratinotsitlari (HaCaT) hujayra liniyasi Cell Lines Service (CLS) (Eppelheim, Germaniya) dan olingan. 4,5 g/l D-glyukoza, L-glutamin, 25 mM HEPES va 4,5 g/l D-glyukoza, L glutamin, 25 mM HEPES, fenol qizilsiz, Dulbeklin salqinli Dulbecco modifikatsiyalangan burgut muhiti (DMEM) (DPBS), Fetal Bovine Serum (FBS) va tripsin EDTA Gibco Life Technologies (Waltham, MA, AQSH) kompaniyasidan sotib olingan. Etanol Aga (Lissabon, Portugaliya) tomonidan yetkazib berildi. N, N-Dimetil{14}}nitroguanidin (RNO), imidazol va Nitro Blue Tetrazolium (NBT) Alfa Aesardan (Kandel, Germaniya) xarid qilingan.

3.2. Spektral yutilish 

Har bir o'rganilayotgan birikmaning yutilish spektri OECD 101 sinov yo'riqnomasiga muvofiq, Jasco V650 UV/VIS spektrofotometri [37] yordamida 290 dan 700 nm oralig'ida aniqlangan. Yakuniy kontsentratsiyani 10 µg/ml olish uchun moddalar DMSO da eritildi va yutilish spektrlari UV shaffof kvarts kyuvetlari (yo‘l uzunligi=10 mm) yordamida o‘lchandi. Har bir spektr erituvchiga xos asosiy yutilish uchun tuzatildi. Molyar so'nish koeffitsientlari (MEC) 290 dan 700 nm gacha bo'lgan eng yuqori yutilish cho'qqilari yordamida hisoblab chiqilgan [15].

3.3. Reaktiv kislorod turlari (ROS) tahlili 

ROS tahlil protokoli o'rnatildi va tekshirish ishlari adabiyotda tasvirlangan protsedura bo'yicha o'tkazildi [19,29]. Barcha sinovdan o'tgan moddalarning eritmalari DMSOda 10 mM konsentratsiyada tayyorlangan va shu kun ichida yorug'likdan himoyalangan holda ishlatilgan. Qisqacha aytganda, singlet kislorod (SO) hosil bo'lishi imidazol yordamida 440 nm da p-nitrosodimetilanilin (RNO) oqartirishni spektrofotometrik o'lchash yo'li bilan aniqlangan. 20 mM natriy fosfat tamponida (PB, pH 7,4) sinovdan o'tgan kimyoviy moddalar (200 mkM), RNO (50 mkM) va imidazol (50 mkM) o'z ichiga olgan namunalar kolba ichiga joylashtirildi va vorteks mikser bilan aralashtirildi va sonikatsiya qilindi, yorug'likdan himoyalangan, 10 daqiqa. Aralash yuqori samarali Hellma kvarts shishasiga o'tkazildi va yorug'lik ta'siridan oldin mikroskop ostida yog'ingarchilik borligi tekshirildi. Keyin namunalar sakkizta Repti Glo (20 Vt) UV-Vis lampalar bilan jihozlangan Fitoclima S600PL termostatik quyosh simulyatori (Aralab, Portugaliya) yordamida 25 ◦C da 90 daqiqa davomida nurlandi. Nurlanishdan so'ng absorbans 440 nm da qayta o'qildi. Superoksid anioni (SA) hosil bo'lishi nitroko'k tetrazoliumning (NBT) monoformazana (NBT plyus) qisqarishini kuzatish orqali aniqlandi, uning shakllanishi 560 nm da spektrofotometrik tarzda kuzatilishi mumkin. 20 mM NaPB da sinovdan o'tgan birikmalar (200 mkM) va NBT (50 mkM) bo'lgan namunalar nurlantirildi va NBT ning kamayishi SO ni aniqlashda bo'lgani kabi 560 nm da absorbansning oshishi bilan o'lchandi. Tajribalar uch nusxada o'tkazildi. Amaldagi quyosh simulyatori tavsiya etilgan modellardan farq qilganligi sababli, nurlanish sharoitlarini tekshirish kerak edi. Ijobiy (xinin) va salbiy nazorat (sulisobenzon) va referent kimyoviy birikmalar [29] yordamida nurlanish sharoitlarining tavsiya etilgan mezonlarga javob berishini ta'minlash uchun ROS tahlili o'tkazildi. ROS tahlilining natijasiga (uch martalik aniqlashlar o'rtacha) ko'ra, sinovdan o'tgan polifenol birikmalar SO qiymati 25 yoki undan ko'p va/yoki SA qiymati 20 yoki undan yuqori bo'lganida fotoreaktiv moddalar sifatida tasniflangan; o'z navbatida, SO uchun 25 dan kam va SA uchun 20 dan kam qiymatlar qayd etilganda u fotoreaktiv bo'lmagan modda sifatida aniqlandi [29].

3.4. Hujayra madaniyati 

HaCaT hujayralari 10% FBS va 1% antibiotiklar bilan DMEMdagi inkubatorda 95% havo va 5% CO2 namlangan atmosferada 37 ◦C da saqlangan. Invert mikroskop yordamida hujayralar qoʻshilishi kuzatildi va agar hujayralar 7{85}}-80 foiz qoʻshilish darajasiga yetsa, hujayra oʻlimini oldini olish uchun subkultura oʻtkazildi. Shu maqsadda madaniyat muhiti aspiratsiya qilindi va hujayralar DPBS bilan yuvildi, 2 ml tripsin 0,25 foiz qo'shildi va 5 foizli CO2 atmosferasida 37 ◦C da 7 dan 8 minutgacha inkubatsiya qilindi. Hujayralar ajratilgandan so'ng, tripsin ta'sirini blokirovka qilish uchun yangi vosita qo'shildi. Hujayralarni hisoblash uchun 10 mkL hujayra suspenziyasi hujayralar hisoblangan Neubauer kamerasiga joylashtirildi. Keyin olingan hujayra suspenziyasi yangi hujayra madaniyati muhiti bilan yangi kolbalarga bo'lindi. Hujayrani muzlatish uchun DMSO (v/v 5 foiz) saqlash bosqichida kristallarning shakllanishiga yo'l qo'ymaslik uchun kriyo-saqlovchi sifatida ishlatilgan. Hujayralarning ko'payishi uchun zarur bo'lgan vaqtni aniqlash uchun 1 × 106 hujayra beshta 75 sm2 kolbalarga ekilgan va to'liq yopishish uchun 5% CO2 atmosferasida 37 ◦C da 24 soat davomida inkubatsiya qilingan. Keyin har bir kolbaning hujayralari turli vaqtlarda hisoblangan. Natijalar vaqtga nisbatan hujayralar sonini ifodalovchi grafikda chizilgan, shundan ikki baravar ko'paytirish vaqti chiziqli regressiya tahlili yordamida hisoblangan. Olingan hisoblangan ikki baravar ko'paytirish vaqti 20,43 soatni tashkil etdi, bu adabiyotda ko'rsatilgan qiymatlarga mos keladi, bu esa ishlatilgan hujayralar normal o'sish sharoitida ekanligini tasdiqlaydi [38]. 3.5. Fototoksiklik tahlili Fototoksiklikni o'rganish uchun laboratoriyamizda joriy qilingan avvalgi protokolga amal qilindi [24]. UVA/UVB Osram chiroqining balandligi (240V E27) OECD yoʻriqnomasiga muvofiq 1,7 mVt/sm2 (Cosmedico radiometer, UVM-7) nurlanish UVA dozasi bilan hujayralarni nurlantirish uchun sozlangan [23] . Nurlanish paytida (10 minut) plitalar suvni sovutish tizimiga ega bo'lgan strafor qabul qiluvchi ichida saqlangan va protsedura davomida harorat nazorat qilingan. Qisqacha aytganda, NR qabul qilish tahlilini o'tkazish uchun HaCaT hujayralari ekilgan (2 × 104 hujayra / quduq) va 37 ◦C da 5 foiz CO2 atmosferasida 24 soat davomida inkubatsiya qilingan. Shundan so'ng, muhit olib tashlandi, sinov moddalarining turli konsentratsiyasi qo'shildi va hujayralar bir xil sharoitda 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. Bir plastinka qorong'ida, ikkinchisi esa 29-32 ° C haroratda 10 daqiqa davomida nurlantirildi. Keyinchalik, hujayra muhiti fenol qizil holda yangi DMEM bilan almashtirildi va 18-22 soat davomida inkubatsiya qilindi. Ushbu inkubatsiya davridan keyin ikkala plastinkadagi hujayralar DPBS bilan yuvildi va har bir quduqqa 50 mkg / ml NR o'z ichiga olgan to'liq DMEM qo'shildi va 3 soat davomida inkubatsiya qilindi. NR bilan inkubatsiyadan so'ng NR eritmasi olib tashlandi va hujayralardan NR bo'yog'ini olish uchun NR desorb eritmasi (50 foiz etanol: 1 foiz sirka kislotasi: 49 foiz distillangan suv) qo'shildi. O'qish jarayoni uchun absorbans 540 nm da o'lchandi. Har bir plastinka ichida DMSO boshqaruvlari sinovdan o'tkazildi. Har bir plastinkadan olingan hujayra hayotiyligi ma'lumotlari davolangan hujayralarning erituvchi nazorat hujayralariga singdirish nisbati sifatida ifodalangan va keyinchalik chiziqli regressiya tahlili yordamida IC50 qiymatlarini baholash uchun ishlatilgan. Har bir sinov moddasi uchun Foto-tirnash xususiyati faktori (PIF) qiymati nurlangan (Irr plus) ning IC50 qiymati bilan nurlanmagan (Irr−) hujayralarning IC50 qiymati o‘rtasidagi nisbat sifatida hisoblab chiqilgan. OECD yo'riqnomasiga ko'ra, 2 dan past PIF indeksi fototoksik ta'sirning yo'qligini, 2 dan 5 gacha bo'lgan PIF indeksi ehtimoliy fototoksik ta'sirni va 5 dan yuqori PIF fototoksik ta'sirni bashorat qiladi [23]. Sinov qilingan birikmalar konsentratsiyalar oralig'ida baholandi: 12,5; 31,25; 62,5; 125; 250; 500 va 1000 mkM. 3.6. Statistik tahlil Barcha ma'lumotlar uch nusxada o'tkazilgan kamida uchta mustaqil eksperimentdan olingan o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida taqdim etiladi. Dispersiyaning normalligi va bir xilligini tasdiqlash uchun D'Agostino-Pirson omnibus normallik testi qo'llanildi, so'ngra bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA), so'ngra Dunnettning post hoc testi (hal qiluvchi bilan salbiy nazorat hujayralari bilan taqqoslash), ijro etildi. Grafiklar Windows uchun GraphPadPrism dasturi yordamida yaratilgan (versiya 6.0, GraphPad Software, Inc. (San-Diego, CA, AQSh).

4. Xulosalar

Ushbu tadqiqotda tabiiy fenolik antioksidantlarning fotoreaktivligi va fototoksikligini o'rganish uchun quyosh nuriga taqlid qiluvchi radiatsiya ta'sirida ularning xatti-harakatlarini o'rganish uchun Reaktiv kislorod turlari (ROS) va 3T3 neytral qizil fototoksiklik tahlili (3T3 NRU-PT) ishlatilgan. salohiyat. Olingan natijalar, rutin va kofeik, p kumarik va ferul kislotalari UV-ko'rinadigan yorug'lik nurlanishini o'zlashtiradigan va MEC 1000 L mol-1cm-1 dan yuqori bo'lsa-da, ular fotoreaktiv bo'lmagan deb tasniflanadi degan xulosaga kelishga imkon berdi. Bundan tashqari, bu birikmalar HaCaT hujayra liniyasi yordamida sinovdan o'tkazilganda fototoksiklikni keltirib chiqarmadi. Topilgan ma'lumotlar shundan dalolat beradibu antioksidantlarO'z-o'zidan fototoksiklikka olib kelishi kutilmaydi va shuning uchun ular kosmetik formulalarda foydalanish uchun xavfsiz deb hisoblanishi mumkin. Boshqa tomondan, radiatsiya ta'siriga uchragan hujayraning yashovchanligi oshishini kuzatish mumkin edi, agar bu antioksidantlar mavjud bo'lsa, fotoprotektiv ta'sir ko'rsatildi, bu ularni kosmetik formulalarda mumkin bo'lgan fotoprotektiv vositalar sifatida qo'llashni qo'llab-quvvatlash uchun o'rganish qiziqarli bo'lishi mumkin. DOPAC holatida, bu birikma fotoreaktiv ekanligini ko'rsatdi, ammo 3T3 neytral qizil qabul qilish tahlilida fototoksiklik kuzatilmagan. Biroq, DOPAC fotoreaktivligi orqasidagi mexanizmlarni tushunish, uning foto xavfsizligini ta'minlash, shuningdek, kimyoviy tuzilish va birikmaning fotoreaktiv bo'lish potentsiali o'rtasidagi rol va munosabatlarni tushunish uchun ko'proq tadqiqotlar o'tkazish kerak. Muallif hissalari: Rasmiy tahlil, BA; Yozish — asl loyihani tayyorlash, BA; IFA, HC va JG kontseptsiyasi: Resurslar, IFA, HC, JMSL va JG; Yozish — ko‘rib chiqish va tahrirlash, IFA, HC, JMSL va JG; Nazorat, IFA, HC va JG; Funding Acquisition, IFA, HC, JMSL va JG Barcha mualliflar qo‘lyozmaning chop etilgan versiyasini o‘qib chiqdilar va unga rozi bo‘lishdi. Moliyalashtirish: Bu tadqiqot hech qanday tashqi mablag‘ni olmagan. Institutsional ko‘rib chiqish kengashi bayonoti: tegishli emas. Axborotlangan rozilik bayonoti: qo‘llanilmaydi. Ma’lumotlar Mavjudlik to'g'risida bayonot: Ushbu tadqiqotda keltirilgan barcha ma'lumotlar maqolada keltirilgan. Minnatdorchilik: Bu ish FCT-Fundação para a Ciência ea Tecnologia, IP, UIDP/04378/2020, UIDB loyihasi doirasida milliy jamg'armalar tomonidan moliyalashtiriladi. /04378/2020 Amaliy molekulyar biosciences tadqiqot bo'limi-UCIBIO va AssociateLaboratory Institute for Health and Bioeconomy-i4HB va UIDB/00081/2020 LA/P/0140/2020 loyihasi (FCPID/MCSTESD) tomonidan grant asosida moliyalashtiriladi. Manfaatlar to'qnashuvi: Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qiladilar. Namuna mavjudligi: Qo'llash mumkin emas.

Ma'lumotnomalar

1. Zillich, OV; Shvaygert-Vays, U.; Eisner, P.; Kerscher, M. Kosmetik mahsulotlar uchun faol moddalar sifatida polifenollar. Int. J. Kosmet. Sci. 2015, 37, 455–464. [CrossRef]
2. Jelena, CH; Giorgio, R.; Justina, G.; Neda, M.-D.; Natasa, S.; Artur, B.; Juzeppe, G. Polifenollarning surunkali kasalliklarga va qarishga foydali ta'siri. Polifenollarda: xususiyatlari, qayta tiklash va ilovalar; Galanakis, CM, Ed.; Woodhead nashriyoti: Kidlington, Buyuk Britaniya, 2018; 69–102-betlar.
3. Kori, X.; Passarelli, S.; Szeto, J.; Tamez, M.; Mattei, J. Polifenollarning inson salomatligi va oziq-ovqat tizimlaridagi roli: mini-tadqiq. Old. Nutr. 2018, 5, 87. [CrossRef]
4. Fraga, CG; Croft, KD; Kennedi, DO; Tomas-Barberan, FA Polifenollar va boshqa biologik faol moddalarning inson salomatligiga ta'siri. Oziq-ovqat funktsiyasi. 2019, 10, 514–528. [CrossRef]
5. Bertelli, A.; Biagi, M.; Korsini, M.; Baini, G.; Kappelluchchi, G.; Miraldi, E. Polifenollar: nazariyadan amaliyotga. Oziq-ovqatlar 2021, 10, 2595. [CrossRef]
6. Chen, K.; Lu, P.; Beeraka, NM; Sukocheva, O.A; Madhunapantula, SV; Liu, J.; Sinelnikov, MY; Nikolenko, VN; Bulygin, KV; Mixaleva, LM; va boshqalar. Mitoxondriyal mutatsiyalar va mitoepigenetika: ko'krak saratonida oksidlovchi stressdan kelib chiqadigan javoblarni tartibga solishga e'tibor qarating. Semin. Saraton Biol. 2020. [CrossRef] [PubMed]

7. Forman, HJ; Zhang, H. Kasallikdagi oksidlovchi stressni nishonga olish: antioksidant terapiyaning va'dasi va cheklovlari. Nat. Rev. Drug Discov. 2021, 20, 689. [CrossRef] [PubMed]
8. Boo, YC O'simlik fenolik birikmalari terini havodagi zarrachalardan himoya qila oladimi? Antioksidantlar 2019, 8, 379. [CrossRef]
9. Jesumani, V.; Du, H.; Pei, P.; Aslam, M.; Huang, N. Sargassum vachellianumning polifenolga boy ekstrakti va polisakkaridga boy ekstraktining terini himoya qilish faoliyati bo'yicha qiyosiy tadqiqot. PLoS ONE 2020, 15, e0227308. [CrossRef] [PubMed]
10. Saraf, S.; Kaur, CD Phytoconstituents fotoprotektiv yangi kosmetik formulalar sifatida. Farmakologiya. Vahiy 2010, 4, 1–11. [CrossRef]