Hujayraga mo'ljallangan nanozarrachani o'pkaga yuborish orqali shilliq qavat immunitetining paydo bo'lishi

ANTRACT

Ilgari biz antigen, benzalkoniy xlorid (BK) va c-poliglutamik kislota (c-PGA) bilan tuzilgan nanozarracha teri ostiga yuborilgandan so'ng yuqori Th1 va Th2-tipdagi immun induktsiyasini ko'rsatganini aniqlagan edik. Nafas olish yo'llari infektsiyalarining oldini olish uchun esa, shilliq qavatning immunitetini kuchaytirish kerak. Ushbu tadqiqotda biz ovalbuminni (OVA) o'z ichiga olgan nanopartikulni o'pkaga yuborishning o'pka va sarumda shilliq qavat immunitetini induktsiya qilishda namunaviy antijen, BK va c-PGA sifatida ta'sirini o'rgandik.

Kompleks RAW264.7 va DC2.4 hujayralari tomonidan kuchli qabul qilindi. O'pkaga yuborilgandan so'ng, OVA / BK / c-PGA kompleksi uchun o'pkaning tutilishi faqat OVAga qaraganda uzoqroq edi. OVA ga xos zardob immunoglobulini (Ig)G kompleksi tomonidan yuqori darajada induktsiya qilingan. Bronxoalveolyar yuvish suyuqligida ham yuqori IgG va IgA darajalari paydo bo'ldi va in vivo toksiklik kuzatilmadi. Xulosa qilib aytganda, biz OVA / BK / c-PGA kompleksini o'pkaga yuborish orqali shilliq qavat immunitetini samarali va xavfsiz tarzda qo'zg'atdik.

So'nggi yillarda tobora ko'proq tadqiqotlar shilliq qavatning immuniteti tananing immunitet tizimida muhim rol o'ynashini ko'rsatdi. Shilliq qavat immuniteti inson organizmidagi shilliq pardaga asoslangan immunitet tizimini bildiradi va uning mudofaa qobiliyatlari, asosan, nafas olish yo'llari, ovqat hazm qilish tizimi va jinsiy yo'l kabi inson shilliq pardalarida patogenlarning kirib borishiga qaratilgan.

Shilliq qavat immunitetining o'zi tanani ko'proq immunitetga aylantirmaydi, lekin u bizning tanamizga begona patogenlarning kirib kelishi bilan samarali kurashishga yordam beradi. Shilliq qavat immunitetini doimiy ravishda rag'batlantirish orqali tanamiz ko'proq antikorlarni ishlab chiqaradi, bu bizning immunitetimizni oshiradi.

Xo'sh, shilliq qavatning immunitetini qanday rag'batlantirish mumkin? Mana bir nechta takliflar:

1. S vitamini etarli miqdorda oling. Vitamin C immunitet hujayralari faoliyatini kuchaytiruvchi tabiiy antioksidant bo'lib, infektsiyalarga qarshi kurashda yordam beradi. Limon, apelsin va qulupnay kabi mevalar va yashil bargli sabzavotlar S vitaminiga boy.

2. Sut kislotasi bakteriyalarini iste'mol qilishni ko'paytirish. Laktik kislota bakteriyalari ichak florasining muvozanatini rag'batlantirishi va zararli bakteriyalarning ko'payishiga to'sqinlik qilishi mumkin. Sut kislotasi bakteriyalarining keng tarqalgan ovqatlariga yogurt, tuzlangan karam, kimchi va boshqalar kiradi.

3. Nafas olishni mashq qiling Chuqur nafas olish. Chuqur nafas olish o'pkaning kislorod bilan ta'minlanishini va ventilyatsiyasini oshiradi, bu o'pkadan to'plangan patogenlarni olib tashlashga yordam beradi.

Muxtasar qilib aytganda, shilliq qavatning immunitetini rag'batlantirish immunitetni yaxshilashning muhim vositasidir. Biz xun va turmush odatlari orqali shilliq immunitetimizni yaxshilashga, sog'lig'imizni saqlashga harakat qilishimiz kerak. Shu nuqtai nazardan, biz immunitetni yaxshilashimiz kerak. Cistanche immunitetni sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki go'sht kulida immunitet tizimini rag'batlantirishi mumkin bo'lgan polisakkaridlar, ikkita qo'ziqorin va Huang Li kabi turli xil biologik faol komponentlar mavjud. Har xil turdagi hujayralar, ularning immunitet faolligini oshiradi.

Cistanche deserticola qo'shimchasini bosing

1.Kirish

O'tkir respiratorli infektsiyalar rivojlanayotgan mamlakatlarda 5 yoshgacha bo'lgan bolalar o'limining asosiy sababidir (Williams va boshqalar, 2002). Nafas olish yo'llari infektsiyalari uchun gripp, ko'k yo'tal va pnevmokokk kabi bir nechta vaktsinalar ishlab chiqilgan (White, 1988; Pittman, 1991; Chen va boshq., 2020). Ushbu vaktsinalarning aksariyati mushak ichiga va teri ostiga kiritiladi, bu esa qon zardobida immunoglobulin (Ig) G ni samarali ravishda qo'zg'atishi mumkin. Biroq, boshqa yo'llar o'tkir respiratorli infektsiyalarning oldini olish uchun shilliq qavatning immunitetini rag'batlantirish uchun foydalidir. Intranazal va o'pka kabi shilliq qavatlarni qabul qilish shilliq qavat IgA ni samarali ravishda qo'zg'atadi va nafas olish yo'llari infektsiyalarining oldini oladi (Giri va boshq., 2005; Ainai va boshq., 2017).

Boshqa tomondan, intranazal va o'pkaga yuborish uchun vaktsinalar yuborish joyida yallig'lanish reaktsiyalari va yaralarni keltirib chiqaradigan yordamchi moddalarni o'z ichiga olmaydi (Tamura va boshq., 1988; McKee va boshq., 2007). Yordamchi moddalarsiz vaktsinalarning samaradorligini oshirishning yana bir yondashuvi vaktsinalarni shilliq qavat antigenlarini taqdim etuvchi hujayralarga (APC) samarali etkazib beradigan tizimni ishlab chiqishdir.

Oldingi tadqiqotda biz antijen, benzalkonium xlorid (BK) va c-poliglutamik kislota (c-PGA) bilan tuzilgan yangi vaktsina etkazib berish vektorini ishlab chiqdik. Model antijeni sifatida ovalbuminni (OVA) o'z ichiga olgan kompleks, BK va c-PGA (OVA/BK/c-PGA kompleksi) OVA ni dendritik hujayralarga samarali etkazib berdi va sichqonlarga teri ostiga kiritilgandan so'ng OVA-ga xos sarum IgG induktsiyasini yaxshiladi (Kurosaki va boshqalar) ., 2012). Ushbu tadqiqot OVA / BK / c-PGA kompleksini o'pkaga yuborishning o'pka va qon zardobida shilliq qavat immunitetini keltirib chiqarishga ta'sirini o'rganishga qaratilgan.

2. Materiallar va usullar

2.1. Kimyoviy moddalar

OVA Sigma-Aldrichdan (Sent-Luis, MO, AQSh) sotib olingan. BK Nacalai Tesque, Inc.dan (Kyoto, Yaponiya) olingan. c-PGA Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Tokio, Yaponiya) tomonidan taqdim etilgan. Invitrogen (Carls, CA, AQSH) dan floressein izotiosiyanat bilan belgilangan OVA (FITC-OVA) va Alexa Fluor 647-yorliqli OVA (Alexa647- OVA) olingan. Homila sigir zardobi (FBS) Biological Industries Ltd. (Kibbutz Beit Haemek, Isroil) dan sotib olindi. OPTI-MEM I GIBCO BRL (Grand Island, NY, AQSH) dan olingan va penitsillin, streptomitsin va L-glutaminni o'z ichiga olgan premiks antibiotiklar eritmasi Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Yaponiya) dan olingan. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) va RPMI1640 muhiti Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Tokio, Yaponiya) dan olingan.

2.2. Kompleks tayyorgarlik

Ilgari biz 1:0.2:0.2 vazn nisbatida OVA/BK/c-PGA kompleksini qurdik (Kurosaki va boshq., 2012). OVA/BK kompleksini tayyorlash uchun 5 foizli glyukozada erigan tegishli miqdorda BK eritmasi (pH 5.0) 5 foizli glyukozada eritilgan OVA eritmasi (pH 7.0) bilan aralashtiriladi va 4 C da 15 daqiqaga qoldiriladi. OVA/BK kompleksini c-PGA bilan qoplash uchun OVA/BK kompleksiga 5% glyukozada erigan c-PGA eritmasi (pH 7,0) qo'shiladi va yana 15 daqiqaga qoldiriladi. 4 C. Har bir kompleksning zarracha hajmi va f-potentsiali Zetasiser Nano ZS (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, Buyuk Britaniya) yordamida o'lchandi.

2.3. Hujayralar

Sichqoncha makrofagi hujayra liniyasi RAW264.7 va dendritik hujayra liniyasi DC2.4 ishlatilgan. RAW264.7 hujayralari 10 foiz FBS va antibiotiklar bilan to'ldirilgan DMEMda o'stirildi. DC2.4 hujayralari 10 foiz FBS, antibiotiklar, 1 mM muhim bo'lmagan aminokislotalar va 1 nM 2-merkaptoetanol bilan to'ldirilgan RPMI1640 muhitida o'stirildi. Bu hujayralar 37C da havodagi 5 foiz CO2 namlangan atmosferada baholandi.

2.4. In vitro hujayralarni qabul qilish tajribasi

RAW264.7 xujayralari va DC2.4 xujayralari 24-quduq plastinkalariga (Korning, NY, AQSH) zichligi 2.0 104 hujayra/quduqqa yotqizildi va 50{da kultivatsiya qilindi. {21}} ml madaniy muhit. 24-soatlik inkubatsiyadan so'ng muhit OPTI-MEM I muhiti bilan almashtirildi va hujayralar 5 mg FITC-OVA va 5 mg FITC-OVA o'z ichiga olgan kompleks bilan 2 soat davomida inkubatsiya qilindi. Inkubatsiyadan so'ng, bu hujayralar PBS bilan yuvildi va floresan mikroskop ostida kuzatildi (BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Osaka, Yaponiya). Kuzatishdan so'ng, bu hujayralar 300 lL lizis buferida (pH 7,8 va 0,05% Triton X-100 va 2 mM EDTA ni o'z ichiga olgan 0,1 M Tris/HCl buferida) lizing qilindi. Lizatlar 96-quduq plastinkalariga joylashtirildi va FITC-OVA floresansi 530 nm emissiya to‘lqin uzunligida, 480 nm qo‘zg‘alish to‘lqin uzunligida, florometrik mikroplata o‘quvchi (Infinite{29}}Pro) yordamida o‘lchandi. M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., Kanagava, Yaponiya). Lizat tarkibidagi protein miqdori standart sifatida BSA yordamida Bredford tahlili bilan aniqlandi. Absorbans 570 nm da mikroplastinka o'quvchi yordamida o'lchandi. FITC-OVA ni qabul qilish mg protein uchun mg sifatida ko'rsatilgan.

2.5. Hayvonlar

Hayvonlarni parvarish qilish va eksperimental protseduralar Nagasaki Universitetining Hayvonlarni Tajriba qilish Qo'llanmasi tomonidan Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasining roziligi bilan amalga oshirildi. Erkak C57BL/6N sichqonlari (5 haftalik) Japan SLC (Shizuoka, Yaponiya) dan sotib olingan. Tashishdan keyin sichqonlarga tajribadan 1 kun oldin yangi muhitga moslashishga ruxsat berildi. O'pka administratsiyasi (40 ml) izofluran inhalatsiyasi bilan behushlik qilingan sichqonlarda o'z-o'zidan nafas olish yo'li bilan yorug'lik bilan tilni depressor yordamida amalga oshirildi (Horiguchi va boshq., 2015).

2.6. O'pkada kompleksning to'planishi

OVA to'planishini tekshirish uchun sichqonlarga 40 mg Alexa{1}}OVA va 40 mg Alexa647- OVA ni o'z ichiga olgan kompleks sichqonchaga 40 ml hajmda o'pka orqali yuborildi. Ma'muriyatdan olti kun o'tgach, sichqonlar qurbonlik qilindi va o'pkalari parchalandi. Sichqoncha o‘pkasidagi Alexa{5}}OVA ning lyuminestsent intensivligi Xenogen IVIS Lumina tizimi va ma’lumotlarni yig‘ish uchun Living Image dasturiy ta’minoti (Xenogen, Co, Almeda, CA, AQSh) yordamida kuzatilgan. Kuzatishdan so'ng, bu o'pkalar lizis buferi bilan homogenlashtirildi va gomogenatlar 15,{7}} rpm (Kubota-3500, Kubota korporatsiyasi, Tokio, Yaponiya) 5 daqiqa davomida santrifüj qilindi va bu supernatantlarda Alexa647 floresansi. qo'zg'alishda va mos ravishda 640 va 670 nm emissiya to'lqin uzunligida mikroplastinka yetakchisi bilan aniqlandi.

2.7. Immunizatsiya

Sichqonlar 5 foizli glyukoza eritmasi, 40 mg OVA, 8 mg BK va 8 mg c-PGA (avtomobil) bo'sh kompleksi va 40 mg OVA o'z ichiga olgan OVA/BK/c-PGA kompleksi bilan o'pka orqali 4 marta immunizatsiya qilindi. haftalik. Oxirgi emlashdan ikki hafta o'tgach, bronxoalveolyar yuvish suyuqligi (BALF) va sarum olindi. BALF va sarum fermentga bog'liq immunosorbent tahlillari (ELISA) uchun ishlatilgan.

2.8. OVA ga xos antikorlarning induksiyasini aniqlash

OVA qoplamasi uchun ELISA plitalarining har bir qudug'iga 100 ml OVA eritmasi (10 mg/ml, 1 M natriy vodorod karbonatda) qo'shildi (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, AQSh) va kechasi 4 C da inkubatsiya qilindi. Plitalar 0,05% Tween{7}} (PBST), 200 ml blokirovka qiluvchi reagent N 102 (Nichiyu, Co., Ltd., Tokio, Yaponiya) o'z ichiga olgan fosfat tamponli sho'r suv bilan uch marta yuvildi. ) o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishni blokirovka qilish uchun qo'shiladi va keyin 4 C da 6 soat davomida inkubatsiya qilinadi. Plitalar PBST bilan ikki marta yuviladi. Keyin, har bir quduqqa 100 ml alikvota suyultirilgan sarum va suyultirilmagan BALF namunalari qo'shildi va bir kechada 4 C da inkubatsiya qilindi. Besh marta PBST bilan yuvilgandan so'ng, har biri 100 ml xren peroksidazasi (HRP) - konjugatsiyalangan echkiga qarshi. -sichqoncha IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b va IgG3 (1:10,000) (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya) - har bir quduqqa qo'shildi va xona haroratida 1 soat davomida inkubatsiya qilindi va keyin besh marta PBST bilan yuviladi. TMB One eritmasi (Promega, WI, AQSh) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq ishlatilgan va tayyorlangan. Keyin reaksiya 1 n xlorid kislota qo'shilishi bilan 15 daqiqada to'xtatildi. Absorbsiya 450 nm da mikroplata o'quvchi yordamida o'qildi.

2.9. OVA/BK/c-PGA kompleksining in vivo toksikligi

OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksi sichqonlarga o'pka yo'li bilan kiritildi. BALF sichqonlardan administratsiyadan 3 va 24 soat o'tgach olingan. Qo'llashdan 24 soat o'tgach, o'pka ham ajratildi. BALFdagi laktat dehidrogenaza (LDH) faolligi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq QuantiChromTM Lactate dehydrogenase Kit (BioAssay Systems, CA, AQSH) yordamida o'lchandi. O'pka namunalari 4 foizli paraformaldegid fosfat tampon eritmasida o'rnatildi. Kesish va gematoksilin-eozin (HE) bo'yash GenoStaff (Tokio, Yaponiya) ga topshirildi. O'pkaning HE-bo'yalgan bo'limlari mikroskopda 20 kattalashtirishda kuzatildi.

2.10. Statistik tahlil

Ikki guruh o'rtasidagi farqlarning statistik ahamiyati Student t-testini o'tkazish orqali baholandi. Tukey testini o'tkazish orqali guruhlar o'rtasida bir nechta taqqoslashlar amalga oshirildi. p-qiymatlari < .05 statistik ahamiyatga ega ekanligidan dalolat beradi.

3. Natijalar

3.1. Kompleksning fizik-kimyoviy xossalari

Biz 1:0.2:0.2 vazn nisbatida anion OVA/BK/c-PGA kompleksini qurdik. c-PGA bilan qoplangan kompleks taxminan 105,4 nm zarracha hajmiga va taxminan 35,5 mV f-potentsialga ega edi.

3.2. Kompleksning hujayrali o'zlashtirilishi

RAW264.7 xujayralari va DC2.4 hujayralari FITC-OVA va FITC-OVA/BK/c-PGA kompleksi bilan ishlov berildi va FITC-OVA ning hujayrali qabul qilinishi 1-rasmda ko'rsatilganidek ko'rsatildi. FITC-OVA/BK/ c-PGA kompleksi RAW264.7 hujayralari va DC2.4 hujayralari tomonidan yuqori darajada qabul qilindi va FITC-OVA ning kuchli yashil floresansi kuzatildi (mos ravishda 1-rasm (A, B)). Shu bilan birga, FITC-OVA bilan davolash qilingan ikkala hujayrada ham oz miqdorda FITC-OVA kuzatildi.

FITC-OVA ning hujayrali qabul qilinishi RAW264.7 va DC2.4 hujayralarida aniqlangan (1-rasm (C)). FITC-OVA/BK/ c-PGA kompleksi ikkala hujayradagi FITC-OVAga qaraganda ancha yuqori o'zlashtirishni ko'rsatdi (p <.01).

3.3. O'pkaga yuborilgandan keyin o'pkada Alexa{2}}OVA to'planishi

Alexa647-OVA va Alexa647-OVA/BK/c-PGA kompleksi sichqonlarga Alexa647-OVA ning antigen sifatida o'pkada to'planishini aniqlash uchun o'pka yo'li orqali yuborildi. Qo'llashdan 6 kun o'tgach, o'pkalar dissektsiya qilindi va ularning floresan intensivligi Xenogen IVIS Lumina tizimi yordamida vizualizatsiya qilindi. Ex-vivo lyuminestsent tasvir 2 (A)-rasmda ko'rsatilgan. Taloq, yurak, buyrak va jigarda (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) floresans intensivligi o'pkaga yuborilganidan keyin 6 kun o'tgach, butun o'pkada yuqori floresans intensivligi kuzatildi. Oʻpka toʻplanishi 6-kuni Alexa647-OVA/BK/c-PGA kompleksi uchun Alexa647-OVAga qaraganda yuqoriroq boʻlgan. 2(B-rasm) koʻrsatilganidek, oʻpka toʻplanishi Alexa uchun sezilarli darajada yuqori boʻlgan. 647-OVA/BK/c-PGA kompleksi Alexaga qaraganda647- OVA (p < .05).

3.4. Kompleksning o'pkaga kiritilishidan so'ng sarumda OVA ga xos antikor

5 foizli glyukoza eritmasi, BK/c-PGA kompleksi (avtomobil), OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksi o‘pka yo‘li orqali sichqonlarga to‘rt marta, so‘ngra sarum OVAga xos IgG, IgA, IgM, va IgE 3-rasmda ko'rsatilganidek Elishay tomonidan aniqlangan. OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksining o'pkaga ma'muriyati sichqonlarda IgG darajasini oshirdi, garchi OVA-ga xos IgG 5 foiz glyukoza va transport vositasini qo'llagan sichqonlarda aniqlanmadi. Bundan tashqari, IgG va IgA ishlab chiqarilishi OVA / BK / c-PGA kompleksini qo'llashdan keyin OVA (p <.05 yoki .01) qo'llanilgandan keyin sezilarli darajada yuqori bo'ldi. Boshqa tomondan, OVA-ga xos IgM va IgE OVA yoki OVA/BK/c-PGA kompleksi tomonidan induktsiya qilinmagan.

3.5. Kompleksni o'pkaga yuborishdan keyin BALFda OVAga xos antikor

Shakl 4da ko'rsatilganidek, BALFdagi OVAga xos IgG, IgA, IgM va IgE ham aniqlandi. IgG darajasi nazorat va transport vositasidan keyingi darajalarga nisbatan OVA tomonidan sezilarli darajada oshdi (p <.05 yoki .01). Shunga qaramay, OVA / BK / c-PGA kompleksi BALFda nafaqat IgG, balki IgA ni ham sezilarli darajada oshirdi (p <.01). Biroq, OVA-ga xos IgM va IgE OVA yoki OVA/BK/c-PGA kompleksi tomonidan induktsiya qilinmagan.

3.6. Kompleksni o'pkaga yuborishdan keyin sarumda IgG subtiplari

Sarumdagi IgG1, IgG2a, IgG2b va IgG3 kabi OVAga xos IgG subtiplarining indüksiyon ta'siri 5-rasmda ko'rsatilganidek aniqlandi. Nazorat va vosita bilan solishtirganda, OVA faqat IgG1 ni sezilarli darajada oshirdi (p <.01). OVA/BK/c-PGA kompleksi tomonidan qo'zg'atilgan barcha kichik tiplarning antikor darajalari nazorat va vosita tomonidan qo'zg'atilgan darajadan sezilarli darajada yuqori edi (p <.05 yoki .01).

3.7. Kompleksni o'pkaga yuborishdan keyin BALFda IgG subtiplari

6-rasmda ko'rsatilganidek, BALFdagi IgG1, IgG2a, IgG2b va IgG3 kabi OVAga xos IgG subtiplari ham aniqlandi. OVA nazorat va vosita tomonidan qo'zg'atilganlarga nisbatan faqat IgG1 darajasini sezilarli darajada oshirdi (p < .01) . Nazorat, vosita va OVA bilan solishtirganda, OVA/BK/ c-PGA kompleksi barcha kichik tiplarning antikor darajasini sezilarli darajada oshirdi (p < .05 yoki .01).

3.8. OVA/BK/c-PGA kompleksining in vivo toksikligi

Sichqonlarga 5 foizli glyukoza eritmasi, OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksi kiritildi. BALFdagi LDH faolligi administratsiyadan 3 yoki 24 soat o'tgach aniqlandi (7-rasm). OVA va OVA/BK/c-PGA komplekslarini kiritish BALFdagi LDH darajasiga kam ta'sir ko'rsatdi.

Qo'llashdan yigirma to'rt soat o'tgach, gistologik tahlil qilish uchun o'sha sichqonlarning o'pkalari ajratildi. HE-bo'yalgan o'pka bo'limlari 8-rasmda ko'rsatilgan. OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksi bilan davolash qilingan sichqonlarda gistologik anomaliyalar kuzatilmagan.

4. Munozara

O'pka nafas olishni nazorat qiladi va nafas olish yo'llari infektsiyasini keltirib chiqaradigan viruslar va bakteriyalar kabi ko'plab patogenlarga ta'sir qiladi. Ushbu patogenlar o'pka shilliq qavati orqali yuqadi, shuning uchun nafas olish yo'llari infektsiyalaridan himoya qilish uchun shilliq qavat immunitetini qo'zg'atish kerak. Nafas olish yo'llari infektsiyalarining oldini olish, shilliq qavatning immuniteti muhim rol o'ynaydi; ammo, vaktsinani intradermal va mushak ichiga yuborish shilliq qavatning immunitetini kuchli rag'batlantira olmaydi (Ito va boshq., 2003; Amorij va boshq., 2007). Sekretor IgA ni qo'zg'atuvchi shilliq qavatning immun tizimi shilliq qavat yuzasida rivojlangan. Dendritik hujayralar va makrofaglar kabi bir nechta APClar shilliq qavat yuzasida joylashganligi haqida xabar berilgan (Kopf va boshq., 2015). Bundan tashqari, bronx bilan bog'langan limfoid to'qima (BALT) bronxiolalar shilliq qavatida joylashgan va nafas yo'llarining shilliq qavatining immunitetida markaziy rol o'ynaydigan limfoid follikuladir (Bienenstock, 1980). Vaktsinani o'pkaga yuborish mukozal immunitet tizimini samarali rag'batlantirishi kutilmoqda. Shuning uchun biz OVA/BK/c-PGA kompleksini o'pka yo'li orqali yuboriladigan vaktsina sifatida foydaliligini baholash uchun qurdik.

4-rasmda OVA va OVA/BK/c-PGA kompleksining o'pkaga kiritilishidan so'ng OVAga xos antikorlarning BALF kontsentratsiyasi ko'rsatilgan. OVA ni o'pkaga yuborish IgGni oshirdi, ammo BALFda IgA ga kam ta'sir ko'rsatdi. Boshqa tomondan, OVA / BK / c-PGA kompleksi BALFda IgA sekretsiyasini sezilarli darajada keltirib chiqardi. Bundan tashqari, OVA/BK/ c-PGA kompleksi kiritilgandan so'ng sarum IgG induktsiyasi OVA qabul qilinganidan keyin sezilarli darajada yuqori bo'lgan (3-rasm). Sarum IgG har qanday infektsiyaning kuchayishini oldini olish uchun muhimdir (Huber va boshq., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). Natijalar shuni ko'rsatadiki, OVA/BK/c-PGA kompleksi yuqori shilliq qavat IgA induksiyasi orqali respirator infektsiyalarning oldini olishi va yuqori sarum IgG induktsiyasi bilan respirator infektsiyani kuchayishi mumkin. Bundan tashqari, OVA / BK / c-PGA kompleksi tomonidan IgE induksiyasi kuzatilmadi va bu natija OVA / BK / c-PGA kompleksi tomonidan allergik reaktsiyaning kam xavfini ko'rsatdi.

OVA/BK/c-PGA kompleksi nafaqat IgG1 va IgG2b, balki IgG2a va IgG3 ni ham keltirib chiqarishi mumkin (5-rasm). IgG1 va IgG2b gumoral immun javobga vositachilik qiluvchi Th2-tip immunoglobulinlar, IgG2a va IgG3 esa hujayra immun javobiga vositachilik qiluvchi Th1-tip immunoglobulinlar sifatida tanilgan (Firacative va boshq., 2018). . Shuning uchun OVA/BK/c-PGA kompleksi gumoral va hujayrali immun javoblarni keltirib chiqarishi mumkin. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, ushbu tizim infektsiyalarga, shuningdek saratonga qarshi vaktsinalar uchun foydali bo'lishi mumkin. Profilaktik ta'sir, induktsiya qilinadigan BALT, Treg populyatsiyasi va IL{17}} induktsiyasida antigen tomonidan qo'zg'atiladigan Th1- va Th2-tipdagi sitokin reaktsiyalari kelajakda infektsiyalar yoki saratonlarning haqiqiy antijenlari yordamida baholanishi kerak. o'rganish.

Immunitet reaktsiyasining OVA/BK/c-PGA kompleksi tomonidan kuchli induktsiya o'pkada kompleksning yuqori darajada saqlanishi va OVA ning o'pka shilliq qavatidagi APClarga samarali etkazib berilishi bilan bog'liq bo'lishi kerak. Natijalarimiz shuni tasdiqladiki, qabul qilinganidan 6 kun o'tgach, Alexa{2}}OVA/BK/c-PGA kompleksi o'pkada qolib, Alexa647- OVAga qaraganda ancha yuqori floresansni ko'rsatdi (2-rasm). Murakkab shakllanish OVA ning tarqalishini oldini oladi va OVA ni o'pka shilliq qavatidagi proteazlar tomonidan degradatsiyadan himoya qilishi mumkin. Bundan tashqari, OVA/BK/c-PGA kompleksi OVA ni RAW264.7 makrofag hujayralari va DC2.4 dendritik hujayralarga samarali yetkazib bera oldi (1-rasm). Ushbu natijalar OVA/BK/c-PGA kompleksi alveolyar APClar tomonidan qabul qilinishini va o'pkaga yuborilgandan keyin yuqori immunitet reaktsiyasini keltirib chiqarishini ko'rsatdi. Ma'lum bo'lishicha, c-PGA bilan qoplangan nanopartikullar gamma-glutamil transpeptidaz vositachiligidagi endotsitotik yo'l bilan olingan (Du va boshq., 2015). Shuningdek, biz c-PGA bilan qoplangan nanozarrachalar c-PGA-ga xos endotsitotik yo'l bilan olinganligini tasdiqladik (Kurosaki va boshq., 2009). OVA/BK/c-PGA kompleksi xuddi shu mexanizmlar orqali o'pkadagi APClar tomonidan qabul qilinishi mumkin. Biroq, o'ziga xos immunitetni keltirib chiqarishda OVAni qabul qilish va keyingi antigen taqdimoti uchun qaysi hujayralar mas'ul ekanligi hali ham aniq emas. Kelajakda batafsil immun induksiya mexanizmlari bo'yicha qo'shimcha tadqiqotlar o'tkazilishi kerak.

Vaktsinalarning samaradorligini oshirish uchun ko'plab yordamchi moddalar ishlab chiqilgan; ammo, adjuvantlar inyeksiya joyida yallig'lanish reaktsiyalarini keltirib chiqarishi haqida xabar berilgan (Tamura va boshq., 1988; McKee va boshq., 2007). Shuning uchun o'pkaga adjuvantlarni yuborish pnevmoniya kabi jiddiy yon ta'sirga olib kelishi mumkin. OVA / BK / c-PGA kompleksini o'pkaga yuborishdan so'ng, BALFda LDH darajasi oshmadi (7-rasm) va HE-bo'yalgan bo'limda gistologik anomaliyalar kuzatilmadi (8-rasm). Xabar qilinishicha, c-PGA immuno-yallig'lanish reaktsiyalarini ko'rsatmaydigan biomoslashuvchan va biologik parchalanadigan polimerdir (Prodhomme va boshq., 2003; Ye va boshq., 2006). BK xavfsiz to'rtlamchi ammoniy birikmasi bo'lib, u klinikada mikroblarga qarshi qo'shimcha sifatida keng qo'llaniladi (Marple va boshq., 2004). Ushbu hisobotlar OVA/BK/c-PGA kompleksining xavfsizligini ham qo'llab-quvvatlaydi. Boshqa tomondan, hatto nazorat guruhida ham 24 soatdan ko'ra, o'pkadan keyin 3 soatda yuqori LDH darajalari kuzatildi. Ushbu natijalar o'pkaga qo'llash natijasida engil tirnash xususiyati paydo bo'lganligini ko'rsatadi. OVA/BK/c-PGA kompleksini klinik qo'llashdan oldin qo'shimcha xavfsizlik tadqiqotlari talab qilinadi.

Ushbu tadqiqotda biz o'pkaga yuborilgandan so'ng antigen oqsili, BK va c-PGA bilan tuzilgan yangi vaktsinani etkazib berish vektori orqali yuqori shilliq qavat immun tizimining indüksiyasini ko'rsatdik. Tizim turli respiratorli infektsiyalarga qarshi emlash uchun ishlatilishi mumkin.

Oshkor qilish bayonoti

Muallif(lar) tomonidan potentsial manfaatlar to'qnashuvi haqida xabar berilmagan.

Moliyalashtirish

Ushbu ish Yaponiya Fanni targ'ib qilish jamiyati (JSPS) KAKENHI tomonidan grantlar [JP20K12649 va JP20K07156] tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Ma'lumotnomalar

1.Ainai A, Suzuki T, Tamura SI va boshqalar. (2017). Grippga qarshi vaktsina nomzodi sifatida inaktivatsiyalangan gripp virusi vaktsinasini burun ichiga yuborish. Virusli immunol 30: 451–62.

2.Amorij JP, Saluja V, Petersen AH va boshqalar. (2007). Spray-muzlatib quritish orqali tayyorlangan inulin-stabillashtirilgan grippga qarshi subunit vaktsinasini o'pkaga yuborish BALB/c sichqonlarida tizimli, shilliq gumoral va hujayra vositachiligidagi immun javoblarni keltirib chiqaradi. Vaktsina 25: 8707-17.

3. Bienenstock J. (1980). Bronx bilan bog'langan limfoid to'qima va shilliq qavatdagi immunoglobulin o'z ichiga olgan hujayralar manbai. Atrof-muhit salomatligi istiqboli 35:39–42.

4.Chen JR, Liu YM, Tseng YC va boshqalar. (2020). Grippga qarshi yaxshiroq vaktsinalar: sanoat istiqboli. J Biomed Sci 27:11.

5. Du X, Xiong L, Dai S va boshqalar. (2015). c-PGA bilan qoplangan mezoporoz kremniy nanopartikullari kovalent biriktirilgan uyali singdirish va hujayra ichidagi GSH-javob chiqarish uchun prodruglar. Adv Healthc Mater 4: 771–81.

6. Firacative C, Gressler AE, Shubert K va boshqalar. (2018). O'pka infektsiyasining sichqoncha modelida kriptokok neoformansning T yordamchisi (Th)1- va Th2-bog'langan antigenlarini aniqlash. Ilmiy vakili 8:14.

7. Giri PK, Sable SB, Verma I va boshqalar. (2005). Eksperimental silga qarshi shilliq qavat vaktsinasini ishlab chiqish uchun intranazal va teri osti immunizatsiya yo'lini qiyosiy baholash. FEMS Immunol Med Microbiol 45:87–93.

8. Horiguchi M, Oiso Y, Sakai H va boshqalar. (2015). Fosfoinositid 3-kinaz ingibitorini o'pkaga yuborish surunkali obstruktiv o'pka kasalligini alveolyar regeneratsiya orqali davolovchi davolash usuli hisoblanadi. J Tekshirish nashri 213:112–9.

9. Huber VC, McKeon RM, Brackin MN va boshqalar. (2006). Grippga qarshi himoya immunitetiga vaktsina bilan qo'zg'atilgan immunoglobulin G1 (IgG1) va IgG2a antikorlarining alohida hissasi. Clin vaktsinasi Immunol 13: 981-90.

10. Ito R, Ozaki YA, Yoshikawa T va boshqalar. (2003). O'limga olib keladigan gripp pnevmoniyasining oldini olishda emlangan sichqonlarning nafas olish yo'llarining turli joylarida anti-gemagglutinin IgA va IgG antikorlarining roli. Vaktsina 21: 2362–71.

11.Kopf M, Schneider C, Nobs SP. (2015). O'pkada joylashgan makrofaglar va dendritik hujayralarning rivojlanishi va faoliyati. Nat Immunol 16: 36-44.

12.Kurosaki T, Kitahara T, Fumoto S va boshqalar. (2009). Genlarni etkazib berish tizimlari uchun pDNK, polietilenimin va gamma-poliglutamik kislotaning uchlik komplekslari. Biomateriallar 30:2846–53.

13.Kurosaki T, Kitahara T, Nakamura T va boshqalar. (2012). Antigen oqsilini APClarga yo'naltirish tizimidan foydalangan holda samarali saraton vaktsinasini ishlab chiqish. Pharm Res 29:483–9.

14. Marple B, Roland P, Benninger M. (2004). Intranazal eritmalarda konservant sifatida ishlatiladigan benzalkonium xloridning xavfsizligini ko'rib chiqish: qarama-qarshi ma'lumotlar va fikrlarga umumiy nuqtai. Otolaringol Bosh bo'yin Surg 130: 131-41.

15.McKee AS, Munks MW, Marrack P. (2007). Adjuvantlar qanday ishlaydi? Yangi avlod yordamchilari uchun muhim fikrlar. Immunitet 27: 687–90.

For more information:1950477648nn@gmail.com