Yosunlar qo'shimchasining glutation kontsentratsiyasiga va sichqonlarning jigari va buyragidagi glutation fermentlarining faolligiga ta'siri
Mar 17, 2022
Annotatsiya: Yosunlar eikosapentaenoik kislota (EPK) va dokosaheksaenoik kislota (DHA) kabi uzun zanjirli ko'p to'yinmagan yog'li kislotalarning potentsial va tabiiy manbai hisoblanadi. Diatom Pinnularia Borealis yuqori darajadagi EPK to'playdi va xun takviyelerini tijorat ishlab chiqarish uchun manba sifatida ko'rib chiqilishi mumkin. Ushbu tadqiqotda biz P. Borealis bilan xun takviyesi antioksidant himoyani kuchaytirishi va yurak-qon tomir kasalliklari uchun xavf omillarini yaxshilashi mumkinmi degan savolni so'radik. Biz sichqonlarni (Mus musculus) 7 kun davomida turli konsentratsiyali (1 foiz, 3 foiz va 5 foiz) liyofillangan diatom eritmalari bilan boqdik. Keyin biz glutation tarkibini va glutation redoks tizimi fermentlarining faolligini, umumiy xolesterin va triatsilgliserin kontsentratsiyasini va malondialdegid konsentratsiyasini o'lchadik.jigarvabuyrak. Biz xolesterin va triatsilgliserin konsentratsiyasini aniqladikjigarva buyraklar Pinnularia Borealisning eng yuqori konsentratsiyasi bilan oziqlangan sichqonlarda eng past ko'rsatkich bo'lib, suv o'tlarining himoya xususiyatlarini ko'rsatadi. Bundan tashqari, Pinnularia Borealisning eng past konsentratsiyasi antioksidant qobiliyatini yaxshilash uchun etarli edi. Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, P. Borealis EPK ga boy oziq-ovqat qo'shimchalari uchun manba sifatida ishlatilishi mumkin, ammo organizmga etkazib beriladigan miqdor cheklangan bo'lishi kerak.
Kalit so‘zlar:suv o'tlari; EPA; qo'shimchalar; glutation; glutation fermentlari; oksidlovchi stress; buyrak; jigar
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK FONKSIYASINI YAXSHILADI
Kirish
Erkin radikallar va ROS organizmlar uchun katta qiyinchiliklar tug'diradi, chunki ular nuklein kislotalar, oqsillar va lipidlarga zarar etkazishi mumkin. Shunday qilib, organizmlar endogen enzimatik va ferment bo'lmagan antioksidantlarni o'z ichiga olgan samarali antioksidant himoya tizimini ishlab chiqdi. Ammo C vitamini, E vitamini, karotenoidlar va fenollar kabi antioksidantlar ham dietadan olinishi mumkin. Bundan tashqari, in vitroda tez oksidlanadigan ko'p to'yinmagan yog'li kislotalar (PUFA) in vivo oksidlanish zararini kamaytirishi mumkin [1]. PUFAlarga boy parhez yurak-qon tomir kasalliklari va saratonning ayrim turlarini rivojlanish xavfini kamaytiradi. Shuningdek, u plazmadagi xolesterin kontsentratsiyasini kamaytirishi mumkin va shu bilan yurak-qon tomir va Altsgeymer kasalliklari xavfini kamaytiradi [1,2] va psixiatrik kasalliklar, ko'rish, astma va revmatoid artritda foydali rol o'ynaydi [3]. Inson tanasi ko'p turdagi yog' kislotalarini sintez qilishi mumkin, ammo muhim yog' kislotalari, masalan, -linolenik kislota (omega-3, ō-3) va linoleik kislota (ō-6) bo'lishi kerak. dietadan olinadi. Linolenik kislotaning ikkita hosilasi, eikosapentaenoik kislota (ō-3, EPA) va dokozaxeksaenoik kislota (ō{{10}}, DHA) hujayra membranasining muhim tarkibiy qismlaridir [4] . EPA va DHA insult, aritmiya va yuqori qon bosimi [3] kabi yurak kasalliklari uchun xavf omillarini yaxshilaydi va psixiatrik kasalliklar, ko'rish, astma va revmatoid artritda foydali rol o'ynaydi [4]. EPK va DHA odatda kundalik ratsiondan, asosan baliq yog'idan olinadi. Biroq, baliqdan ekstraksiya qilishda hid va ekstraktsiya mahsulotlarining beqarorligi kabi muammolarga duch keladi [4]. Shunday qilib, muqobil manbalar talab qilinadi. Diatomlar fotosintetik suv o'tlarining asosiy guruhini ifodalaydi [5-11] va ular muhim ō-3 yog 'kislotalari, EPA, DHA va karotenoidlarning yuqori darajalari bilan mashhur [12,13]. 2011-da, Lang va boshqalar. Diatomlardagi VLC-PUFA profillarini batafsil o'rganish imkonini beruvchi 2000 dan ortiq mikroalglarning yog 'kislotalari profillarini nashr etdi [14]. Ular o'rta zanjirli va juda uzun zanjirli ko'p to'yinmagan yog'li kislotalarga (VLC-PUFA) boy. Asosiy yog 'kislotalari miristik kislota (14:0), palmitik kislota (16:0), palmitoleik kislota (16:1) va eikosapentaenoik kislota (20:5), C18 yog' kislotalari esa odatda iz miqdorida mavjud. 15]. Diatomlar ekologik jihatdan keng tarqalgan bo'lib, butun dunyo bo'ylab dengiz, chuchuk suv va quruqlikdagi yashash joylarida uchraydi va asosiy ishlab chiqarishga va uglerod va ozuqa moddalarining global aylanishiga sezilarli hissa qo'shadi [16]. Pinnularia Borealis havoda yashash joylarida (toshlar, devorlar, tuproq, mox) va keyingi va turg'un suvlarda uchraydigan keng tarqalgan quruqlikdagi kosmopolit turdir [17]. So'nggi yillarda diatomlar biotexnologik qo'llanmalardagi katta salohiyati bilan tobora ko'proq e'tirof etilmoqda, chunki ular tibbiyotda va oziq-ovqat qo'shimchalari sifatida ishlatilishi mumkin bo'lgan yuqori qiymatli birikmalarni ishlab chiqaradi [18].
Ushbu tadqiqotda biz diatom Pinnularia Borealis bilan xun takviyesi sichqonchaning mushaklarida antioksidant himoyani kuchaytirishi mumkinmi degan savolni berdik. Biz oksidlovchi gomeostazni saqlashda hal qiluvchi rol o'ynaydigan glutation antioksidant tizimini, shuningdek oksidlovchi stress belgisi sifatida lipid peroksidlanish mahsuloti bo'lgan malondialdegid kontsentratsiyasini tahlil qildik. Glutation antioksidant tizimi glutation (mos ravishda GSH va GSSH), glutation peroksidazalar va glutation reduktazalarning qaytarilgan va oksidlangan shakllaridan iborat. GSSG (glutation disulfid) - GSH nisbati ortishi oksidlovchi stressning kuchayishidan dalolat beradi [1]. Glutation hujayralar sitoplazmasida sintezlanadijigareng faol organ hisoblanadi [1]. Kamaytirilgan glutation (L-gamma-glutamil-L-sisteinil glisin, GSH) kuchli antioksidant xususiyatlarga ega sutemizuvchilar hujayralarida eng ko'p tarqalgan past molekulyar og'irlikdagi tioldir [19-21]. GSH, shuningdek, vitamin C va E vitamini kabi boshqa oksidlangan antioksidantlarni qayta tiklaydi. Shuningdek, oksidlanish natijasida zararlangan oqsil, lipid va nuklein kislota molekulalarining tuzilishini tiklashda ishtirok etadi [22]. Glutation peroksidazalari (GPx) vodorod peroksidga yuqori yaqinligi bilan vodorod periksni suvga kamaytirish va uni tanadan chiqarib tashlash uchun glutationning kamaytirilgan shaklini ishlatadi [1]. GSH oksidlanish-qaytarilish sikli glutation reduktaza bilan yopiladi, bu glutationning oksidlangan shaklini uning reduksiyalangan shakliga qaytarilishini katalizlaydi [1]. Bu jarayon glutationning kamaytirilgan va oksidlangan shakllarida to'g'ri hujayra nisbatini saqlash uchun muhimdir [23].
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK EKSIZLIGINI YAXSHILADI
Va nihoyat, glutation S-transferaza (GST) GSH ning turli xil endogen va ekzogen elektrofil birikmalariga konjugatsiyasini katalizlaydi [24-26]. GST konjugasiyasi zaharli birikmalarni yo'q qilishga olib keladigan merkapturik kislota yo'lidagi birinchi qadamdir. GST turli xil zararli ksenobiotiklarni, ham ekzogen, ham endogen detoksifikatsiyada, shuningdek, kanserogen biotransformatsiya jarayonlarida muhim rol o'ynaydi [27]. Sutemizuvchilarda GST barcha organlar va to'qimalarda mavjud, ammo fermentning eng yuqori miqdorijigar[21]. Tadqiqotimizning yana bir maqsadi Pinnularia Borealis bilan qisqa muddatli parhez qo'shimchasi yurak-qon tomir kasalliklari uchun xavf omillarini yaxshilashi mumkinligi haqidagi bashoratni sinab ko'rish edi. Buning uchun biz triatsilgliserinlar va umumiy xolesterin kontsentratsiyasini o'lchadikjigarvabuyraklarlaboratoriya sichqonlari.
Materiallar va uslublar
Ushbu tadqiqot Polshaning Kielce shahridagi Yan Kochanowski universitetida o'tkazildi. Barcha eksperimental protseduralar Varshavada (Polsha) Hayvonlarni o'rganish bo'yicha mahalliy qo'mita tomonidan tasdiqlangan (qaror raqami 37/2019). Tajriba tadqiqotning ikki bosqichini o'z ichiga oldi: (1) Pinnularia Borealisni oziq-ovqat qo'shimchasi sifatida ishlatish uchun tayyorlash va (2) 6-haftalik shveytsariyalik sichqonlarda in vivo tadqiqot.
2.1. Pinnularia Borealisni tayyorlash Głowoniowa Nyza˙ g'oridan (Tatra tog'lari, Polsha) yig'ilgan qarag'ay novdalaridan suv o'tlari parchalari qirib tashlangan va steril plastik qoplarga solingan va laboratoriyaga olib borilgan, u erda suv o'tlari 1 dona yangi agardan iborat shisha Petri plastinkalarida o'stirilgan. foiz Bold's Bazal Medium [28]. Madaniyatlar 20 ◦C haroratda 12-soat yorug'lik/12-soat qorong'u tsiklda 300{{5{ da saqlanadi. {60}}}} µEmm2 sw1 l× (40 Vt salqin FL floresan naychalari). Yosunlarning birinchi paydo bo'lishidan taxminan ikki-uch oy o'tgach, mikroskopik tadqiqot o'tkazildi. Material tirik holatda kuzatilgan va Nikon Eclipse E 600 yorug'lik mikroskopi (Nikon, Tokio, Yaponiya) yordamida aniqlangan va fotosuratlar Coolpix 4500 raqamli kamerasi (Nikon, Tokio, Yaponiya) bilan olingan. Hujayralar pH 7,1 da 0,1 M fosfat tamponida 3 foizli glutaraldegidda mahkamlangan, 1 foizli osmiy tetroksidda postosmikatsiya qilingan va keyin Spurr muhitida infiltratsiya qilingan [29]; mikrofotosuratlar TESLA BS 500 transmissiya elektron mikroskopi (TEM) bilan olingan. Pinnularia Borealis [30] ga muvofiq va teskari Nikon Eclipse Ti mikroskopi bilan aniqlangan va Nikon A1 konfokal uskunasi bilan suratga olingan (Nikon, Tokio, Yaponiya). 405,488,561 nm lazer boshlari va aniqlash tizimi 400–820 nm diapazonidagi PMT-DU4 detektori, Plan Apo VC 100XOil teskari linzalari, Nikon C-HgFiE simob yoritgichi va DS0Fi1C-U3 raqamli kamerasi edi. Nikon NIS-Elements-da ma'lumotlarni yig'ish Adobe Photoshop CS5 (Adobe, San-Xose, CA, AQSh) bilan qayta ishlangan raqamli tasvirlarni oldi. Quritilgan Pinnularia Borealisdagi yog 'kislotasi metil efirlari (FAME) profili Guzman va boshqalar usuliga asoslangan PerkinElmer (Waltham, MA, AQSh) kompaniyasining Clarus 600T asbobi yordamida gaz xromatografiya-mass spektrometriyasi (GC-MS) bilan tahlil qilindi. [31]. ōn-3 PUFA tarkibidagi muzlatilgan quritilgan P. Borealis tarkibi quyidagicha edi: ōn-3 PUFA (jami yog 'kislotalari foizida), jami=28 foiz va EPA {{45} }} foiz. Jami 14 ta yog 'kislotasi aniqlandi va o'lchandi: miristik kislota (C14:0), palmit kislotasi (C16:0), palmitoleik kislota (C16:1 n-7), heksadekadienik kislota (C16:2 n{{ 56}}), geksadekatrien kislotasi (C16:3), stearin kislotasi (C18:0), oleyk kislotasi (C18:1 n-9), linoleik kislota (C18:2 n-6), linolenik kislota (C18:3 n-3), araxidonik (C20:4 n-6), eikosapentaenoik kislota (C20:5 n-3), erusik kislota (C22:1 n{{) 79}}) va dokosaheksaenoik kislota (C22:6 n-3).
2.2. Hayvonlarni sinovdan o'tkazish sub'ektlari va to'qimalarni qayta ishlash
2.2.1. Hayvonlar guruhlari va davolash usullari
Boshlang‘ich tana og‘irligi 2{21}},5 g ± 0,5 g bo‘lgan, 6 haftalik bo‘lgan jami 40 ta erkak Shveytsariya sichqonlari Genetika va hayvonlar biotexnologiyasi institutidan sotib olindi. Polsha Fanlar Akademiyasi (Jastrz ˛ebiec, Polsha). Hayvonlar standart laboratoriya sharoitida 2{34}}–22 ◦C doimiy haroratda va 55% ± 10% nisbiy namlikda 12-soatlik yorug'lik aylanishida (12L-12D) saqlangan. ). Barcha shaxslar standart, polikarbonat kataklarga (252 × 167 × 140 mm) o'rnatilgan oziqlantiruvchi halqa bilan zanglamaydigan qopqoqlar bilan qoplangan. Oziq-ovqat (Jomna-Las, Polsha dala stantsiyasi) va suv deliryum mavjud edi. Besh kishi bitta qafasga joylashtirildi. Barcha sichqonlarga 20,5% oqsillar, 10% yog'lar (0,28 g PUFA), 62% uglevodlar, 6,5% minerallar (kaltsiy 1,9%, fosfor 1,6%, magniy 1,2%, natriy) o'z ichiga olgan standart oziq-ovqat berildi (vazn bo'yicha) 0,9% va kaliy 0,9% ) va 1% vitaminlar (retinol 25.000 IU, xolekalsiferol 1.000 IU, tiamin 300 mg, riboflavin 20 mg, piridoksin 15 mg, kobalamin 40 mg askorbin kislotasi 58 mg, xinonlar 5 mg, tokoferol 125 mg, foliy kislotasi 3 mg, biotin 100 mg, nikotin kislotasi 60 mg, pantotenik kislota 35 mg va xolin xlorid 1000 mg). Sichqonlar tadqiqot davomida oziq-ovqat va suvdan bepul foydalanish imkoniyatiga ega edi. Bir haftalik laboratoriya sharoitlariga moslashgandan so'ng, sichqonlar tasodifiy 4 guruhga bo'lingan (har bir guruh uchun 10 ta sichqon). Keyingi 7 kun davomida sichqonlar turli xil parhezlar bilan oziqlangan:
(1) nazorat guruhi standart dietani oldi; (2) ikkinchi guruh liyofillangan P. Borealisning 1 foizli eritmasi (0.16 mg EPK) bilan to'ldirilgan standart parhez bilan oziqlangan; (3) uchinchi guruh liyofillangan P. Borealis (0.48 mg EPK) ning 3 foizli eritmasi bilan to'ldirilgan standart parhez bilan oziqlangan; va (4) to'rtinchi guruh liyofillangan P. borealis (0,8 mg EPK) ning 5 foizli eritmasi bilan to'ldirilgan standart parhez bilan oziqlangan. Liyofillangan P. borealis suv eritmalari kuniga bir marta 50 mkL hajmda og'iz orqali yuboriladi. Sichqonlar tadqiqot davomida oziq-ovqat va suvdan bepul foydalanish imkoniyatiga ega edi. Hayvonlarning vazn ortishi ikki marta (tajriba davomida) kuzatildi va ularning oziq-ovqat iste'moli ham ikki marta o'lchandi. Liyofillangan diatomlarning eritmalari an'anaviy bir kanalli p200 mikropipetasi bilan ta'minlangan (Gilson Pipetteman, Thermo Fischer Scientific, Reinach, Shveytsariya) va pipetka uchi sichqon ichishni boshlaguncha og'izga taklif qilingan.
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK OG'RIG'INI YANGILAYDI
2.2.2. To'qimalar namunalari to'plami
Bir haftalik oziq-ovqat qo'shimchasidan so'ng, sichqonlarning boshi kesildi vajigarva buyraklar kesilgan. ThejigarQolgan qonni olib tashlash uchun sovutilgan fiziologik eritma (4 ◦C) bilan perfuziya qilindi. To'qima bo'laklari (100 mg/1 ml bufer) 10 mM EDTA o'z ichiga olgan pH 7,4 bo'lgan 0,1 M fosfat tamponida TH 220-PCRH-Omni TH gomogenizatori bilan homogenlashtirildi. Gomogenatlar 15 daqiqa davomida 12.000 rpm tezlikda sovitish MPW-351 R bilan laboratoriya santrifugasida santrifüj qilindi. Santrifüjdan so'ng, supernatantlar darhol suyuq azotda muzlatildi va keyingi tahlil qilish uchun t 40 ◦C da saqlanadi. .
2.2.3. Analitik usullar,To'qimalarning supernatantlarida glutation kontsentratsiyasining pasayishi, glutation peroksidaza, glutation reduktaza, glutation transferaza, xolesterin, triatsilgliserinlar, oqsil va malondialdegid kontsentratsiyasi [32] spektrofotometrik tarzda o'lchandi.
2.3. Kamaytirilgan glutation (GSH)GSH kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchining protsedurasiga muvofiq Glutation Assist Kit (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germaniya, Cat. No CS0260) yordamida aniqlandi. Namunalar dastlab 5 foizli 5-sulfosalitsil kislota eritmasi bilan deproteinsizlantirildi va cho‘kma hosil bo‘lgan oqsilni olib tashlash uchun santrifüj qilindi. GSH ni o'lchash kinetik tahlildan foydalaniladi, unda katalitik GSH miqdori 5,5 ditiobis (2-nitrobenzoy kislotasi) (DTNB) ning 5-tio-2nitrobenzoy kislotasiga (TNB) doimiy pasayishiga olib keladi. , sariq rangga ega. Rangning intensivligi 412 nm da spektrofotometrik tarzda o'lchandi.
2.4. Glutation peroksidaza (GPx)Glutation peroksidaza faolligi Glutation peroksidaza hujayra faolligini tahlil qilish to'plami (Sigma-Aldrich, Darmshtadt, Germaniya, Cat. No. CPG1) bilan o'lchandi. Usul GPx tomonidan katalizlangan glutationning (GSH dan GSSG shakliga) oksidlanishiga asoslangan bo'lib, u glutation reduktaza va NADPH yordamida GSSG ni qayta GSHga qayta ishlash bilan bog'langan. NADPH ning NADP plyusga oksidlanishi paytida 340 nm da o'lchangan NADPH absorbansining pasayishi GPx faolligidan dalolat beradi.
2.5. Glutation transferaz (GST)Glutation transferazasi Glutation S-Transferaza (GST) tahlil to'plami (Sigma-Aldrich, Darmshtadt, Germaniya, Cat. No. CS0410) bilan o'lchandi. Tahlil printsipi GST L-glutationning glutationning tiol guruhi orqali 1-xloro-2,4- dinitrobenzol (CDNB) ga konjugatsiyasini katalizlashiga asoslanadi. GS-DNB konjugati 340 nm da yutadi. Yutishning o'sish tezligi namunadagi GST faolligiga to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir.
2.6. Glutation reduktaza (GR)Glutation reduktaza faolligi glutation reduktaza tahlil to'plami (Sigma-Aldrich, Darmshtadt, Germaniya, Cat. No. GRSA) bilan o'lchandi. Faollik 412 nm da DTNB [5,5" ditiobis (2-nitrobenzoik kislota)] ning kamayishi natijasida kelib chiqqan absorbansning ortishi bilan o'lchandi.
2.7. Xolesterin tarkibiXolesterin miqdori Biochemtest testi yordamida [33] usuli bilan aniqlandi. Xolesterin esterlari xolesterin esterazasi (CE) tomonidan erkin xolesterin va yog 'kislotalariga gidrolizlangan. Sinov namunasining yutilishi 505 nm da o'lchandi.
2.8. Triatsilgliserollar tarkibiTriatsilgliserin miqdori Alpha Diagnostic testi [34] yordamida aniqlandi. Tahlil printsipi triatsilgliserollarning lipaz ta'sirida erkin yog' kislotalari va glitseringa gidrolizlanishi, so'ngra ATP bilan fosforlanishiga asoslanadi. Rang intensivligi 520 nm da o'lchandi.
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK DIALIZINI YANGILAYDI
2.9. Malondialdegid (MDA) kontsentratsiyasiMDA kontsentratsiyasi tiobarbiturik (TBA) kislota tahlili yordamida spektrofotometrik tarzda o'lchandi. Tahlilni bajarish uchun {0}}, 5 ml namuna 15% trisxloroasetik kislota (TCA) ning teng qismlaridan hosil bo'lgan reaksiya aralashmasiga (1,{5}} ml) qo'shildi. 0,25 N HCL va 0,375 foiz tiobarbiturik kislota (TBA), 0,25 N HCL ichida va 30 daqiqa davomida 95 ◦C da isitiladi. Sovutish va santrifüjdan so'ng, TBA-malondialdegid qo'shimchasining pushti rangining intensivligi 532 nm [35] da spektrofotometrik tarzda o'lchandi.
2.10. Protein tarkibiProtein miqdori [36] usuli yordamida aniqlandi. Louri oqsilining tahlili mis ionlarining peptid bog'lari (Folin-Ciocalteu reagenti, ya'ni fosfotungstik kislota va fosfomolibdik kislota aralashmasi) bilan gidroksidi sharoitda (Biuret testi) aromatik oqsil qoldiqlarining oksidlanishi bilan reaksiyalariga asoslanadi. asosan triptofan va tirozin). Sistein ham reaktivga reaktivdir. Rangli kompleksning konsentratsiyasi spektrofotometrik tarzda l=750 nm to'lqin uzunligida o'lchandi.
2.11. Statistik tahlilBarcha natijalar standart og'ishlar (SD) bilan ko'rsatilgan. Biokimyoviy ko'rsatkichlar ANOVA dispersiya tahlilidan so'ng Tukey post hoc testi yordamida taqqoslandi. Tana massasi va oziq-ovqat iste'molidagi o'zgarishlar ikki namunali juftlik t-testi yordamida taqqoslandi. Ushbu tahlillar Statistica 9.0 dasturi [37] yordamida amalga oshirildi. Nazorat qiymatlari 100 foiz sifatida qabul qilinganda, ma'lumotlar foiz sifatida ham taqdim etiladi. Statistik ahamiyatlilik p < 0.05="" va="" p="">< 0.01="" da="" oʻrnatildi.="" bundan="" tashqari,="" o'lchangan="" biokimyoviy="" ko'rsatkichlardan="" qaysi="" biri="" tadqiqotlar="" to'plamini="" sezilarli="" darajada="" farqlashini="" aniqlash="" uchun="" monte-karlo="" permutatsiya="" testlari="" bilan="" bevosita="" cca="" muvofiqligi="" tahlillari="" o'tkazildi.="" ushbu="" tahlillar="" canoco="" 5.0="" dasturi="" [38]="" yordamida="" alohida-alohida="" amalga="">jigar va buyraklar.
3. Natijalar
Glutation antioksidant tizimining barcha qismlarining kontsentratsiyasi yoki faolligi dietaga qo'shimcha ovqatlanishga bog'liq edi.jigar va buyraklar. Tajribadan oldin sichqonlarning vazni 20,5 g ± 0,5 g. Turli xil diatom eritmalari bilan bir hafta qo'shilgandan so'ng, sichqonlar tana massasida farq qilmadi [t== 1.75, p=0.088]. Oziq-ovqat iste'moli ham guruhlar o'rtasida farq qilmadi va sichqonlar kuniga o'rtacha 2,5 ± 0,4 g ovqat iste'mol qildilar. Biroq, qo'shimcha bir hafta o'tgach, xolesterin va triatsilgliserin tarkibidagijigarva buyraklar nazorat dietasi bilan solishtirganda pasaygan va glutation reduktaza faolligi va malondialdegid kontsentratsiyasi diatom eritmasi konsentratsiyasidan qat'iy nazar sezilarli darajada oshgan.jigarva buyraklar.
Jigarda GPx faolligi Pinnularia Borealis tarkibining ortishi bilan doimiy ravishda kamaydi (F (3, 36)=3.80, p=0.018) (1A-rasm). Eng katta pasayish (78,18 foiz) yilda qayd etilganjigar5 foizli eritma bilan oziqlangan sichqonlarning (1A-rasm, 1-jadval). Buyrakda naqsh deyarli teskari edi (F (3, 36)=13.08, p=6.2 × 10 6 ) (1A-rasm) va GPx ning eng yuqori faolligi. diatomlarning 3 foizli eritmasini olgan hayvonlarda qayd etilgan (1A-rasm, 1-jadval). Oziq-ovqat qo'shimchalarini qabul qilgandan keyin glutation kontsentratsiyasining o'zgarishi ham bir xil shaklni ko'rsatmadi.jigar(F (3, 36)=5.44, p=0.003) (1B-rasm) yoki buyraklarda (F (3, 36)=23.12, p {{ 11}}.6 × 10mí 8 ) (1B-rasm). 5 foizli eritma bilan oziq-ovqat qo'shimchasini qabul qilishdan 7 kun o'tgach, GSH kontsentratsiyasijigarnazorat qiymatlarining ~ 82 foizigacha kamaydi, lekin bu farq muhim emas edi (1B-rasm, 1-jadval). GSH tarkibidagi sezilarli farq faqat diatom eritmalarining 3 va 5 foizi bilan oziqlangan sichqonlar o'rtasida qayd etilgan. Buyrakda GSH ning eng yuqori miqdori diatomlarning 3 foizli eritmasi bilan oziqlangan hayvonlarda qayd etilgan (1B-rasm, 1-jadval).
Glutatyon reduktaza faolligi diatom eritmasi konsentratsiyasidan qat'iy nazar sezilarli darajada oshdi.jigar(F (3, 36)=29.34, p=8.9 × 10 10) (1C-rasm) vabuyrak(F (3, 36)=9.85, p=7.0 × 10 5 ) (1C-rasm) va umuman olganda, u ancha yuqori boʻlgan.jigarga qaragandabuyrak(p < 0.05).="" 5="" foizli="" eritma="" bilan="" to'ldirilgandan="" keyin="" gr="" faolligi="" nazorat="" qiymatining="" 290="" foizigacha="">jigar(1C-rasm) va nazorat qiymatining 180 foizigachabuyrak(2-rasm, 1-jadval).
dagi GST faoliyatibuyrakoziq-ovqat tarkibidagi Pinnularia Borealis miqdori ortib borishi bilan doimiy ravishda oshdi (F (3, 36)=15.59, p=1.2 × 10 6 ) (1D-rasm). Eng yuqori faollik 5 foizli eritma bilan to'ldirilgandan so'ng, nazorat qiymatining 158 foiziga etganida qayd etildi (1D-rasm). dagi GST faoliyatijigarga nisbatan sezilarli darajada yuqori edibuyrak(p < 0.05).="" garchi="" gst="">jigardietaga bog'liq edi (F (3, 36)=11.62, p=1.8 × 10 5) (1D-rasm), u quyidagi kabi muntazam naqshni ko'rsatmadi. thebuyrak(1D-rasm). Malondialdegid kontsentratsiyasi ham oziq-ovqat tarkibidagi Pinnularia Borealis miqdorining oshishi bilan doimiy ravishda oshib bordi.jigar(F (3, 36)=4.26, p=0.011) (1E-rasm) vabuyrak(F (3, 36)=6.74, p=0.001) (1E-rasm). Ikkala holatda ham MDA ning eng yuqori konsentratsiyasi diatomlarning 5 foizli eritmasi bilan oziqlangandan keyin qayd etilgan (1E-rasm). Ma'lumotlar to'plamining xilma-xilligi uchun muhim bo'lgan o'zgaruvchilar birgalikda umumiy o'zgaruvchanlikning 55,9 foizini tashkil etdi.jigarva 53,9 foizni tashkil etdibuyrak(2 va 3-rasmlar). Buyrakda, nazorat namunalarida yuqori xolesterin va triglitseridlar o'rtasidagi statistik jihatdan muhim bog'liqlik aniqlandi. Diatomlarning 3 foizga qo'shilishi bilan GSH darajasining oshishi ham sezilarli bo'ldi. Xuddi shunday, GRning o'sishi 5 foiz diatomlarning qo'shilishi bilan sezilarli darajada bog'liq edi (3-rasm). Jigarda MDA kontsentratsiyasining oshishi diatomlarning 5 foizli aralashmasi bilan bog'liq. Aloqa statistik jihatdan ahamiyatli edi. Yemdagi diatomlarning past konsentratsiyasida GSH va GR darajasining oshishi ham statistik ahamiyatga ega edi (2-rasm).
Triatsilgliserinlar va xolesterin tarkibidagijigarvabuyrako'xshash edi (1F,G-rasm). Diatomli dietaga qo'shimchalar triatsilgliserinlar kontsentratsiyasiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi.jigar(F (3, 36)=16.22, p=7.8 × 10 7 ) va ichidabuyrak(F (3, 36)=7.89, p=0.0004). Nazorat guruhlari bilan solishtirganda, 3 foizli va 5 foizli diatomli eritmalardan keyinjigartriatsilgliserinlar mos ravishda 75,25 va 65,84 foizga kamaydi.buyrakmos ravishda 92 (ns) va 73,16 foizga. Xuddi shunday, diatomlar bilan dietani boyitish ham xolesterin miqdorini kamaytirdijigar(F (3, 36)=2.57, p=0.07) va ichidabuyrak (F (3, 36)=14.90, p =1.8 × 106 ). Xolesterin miqdorining eng katta pasayishi diatomlarning 5 foizli eritmasi bilan oziqlangan sichqonlarning organlarida qayd etilgan.
4. Munozara
Ushbu tadqiqotda biz Pinnularia Borealis bilan xun takviyesi antioksidant himoyani kuchaytirishi va yurak-qon tomir kasalliklari uchun xavf omillarini yaxshilashi mumkinmi degan savolni so'radik. Biz xolesterin va triatsilgliserin konsentratsiyasini aniqladikjigarvabuyraklarP. Borealisning eng yuqori konsentratsiyasi bilan oziqlangan sichqonlarda eng past bo'lgan, bu suv o'tlarining himoya xususiyatlarini ko'rsatadi. Bundan tashqari, P. Borealisning eng past konsentratsiyasi sichqonlarning antioksidant qobiliyatini yaxshilash uchun etarli edi. Yosunlar eikosapentaenoik kislota (EPK) va dokosaheksaenoik kislota (DHA) kabi uzun zanjirli ko'p to'yinmagan yog'li kislotalarning (PUFA) potentsial va tabiiy manbaidir. Umuman olganda, fototrofik suvo'tlar tarkibidagi lipidlar tarkibi quruq vaznning 10% dan 60% gacha o'zgarib turadi va ular tarkibida 10% -20% ō-3 PUFA mavjud [4]. Yosunlardagi yog 'kislotalari profillari genetik jihatdan aniqlanadi, ammo yog' kislotalarining tarkibi yorug'lik intensivligi va suvning sho'rligiga ham bog'liq [39]. Rykebosch va boshqalar. [40] dengiz suvoʻtlarida: Bacillariophyceae, Chlorophyceae, Chrysophyceae, Cryptophyceae va Florideophyceae tarkibida koʻp miqdorda EPA yoki DHA toʻplanishi haqida xabar berdi. Peltomaa va boshqalar. [39] chuchuk suv oʻtlari dengiz va shoʻr suv oʻtlariga qaraganda ō-3 PUFAlarga boy boʻlishi mumkinligini taxmin qildi va chuchuk suv diatomi Nitzschia sp. tijorat EPK ishlab chiqarish uchun eng istiqbolli diatom shtammi sifatida. Nitzschia laevis jami 75,9 foiz EPKni o'z ichiga oladi va EPKning 37,4 foizi triatsilgliserin shaklida, 22,6 foizi monoatsilgliseridlar shaklida va 15,9 foizi fosfatidilxolin shaklida to'planadi [41]. Ushbu tadqiqotda foydalanilgan P. Borealisda ō-3 PUFA jami yog' kislotalarining 28 foizini va EPA barcha ō-3 PUFAlarning 32 foizini tashkil etdi. Inson EPA ratsiondan, asosan baliq yog'idan olinadi. Bu muhim ozuqaviy ahamiyatga ega bo'lgan muhim yog 'kislotasi bo'lib, ko'plab kasalliklar xavfini yumshatish qobiliyatiga ega. Shunday qilib, PUFA ga ortib borayotgan ehtiyojni qoplash uchun baliq yog'iga muqobil manbalar kerak. Diatom P. Borealis EPK ning yuqori miqdorini (32 foiz) to'playdi va shuning uchun parhez qo'shimchasi sifatida ko'rib chiqilishi mumkin.
Biz turli konsentratsiyali liyofilizatsiyalangan diatom P. Borealis eritmalari bilan parhez qo'shimchalari xolesterin va triatsilgliserin kontsentratsiyasining dozaga bog'liq pasayishiga olib kelganligini aniqladik. Nazorat guruhidagi xolesterin miqdorining katta o'zgarishi sababli, bu ta'sir ko'pchilikda ahamiyatlilik darajasiga etib bormadi.yashashr (p=0.07), lekin izchil tendentsiya aniq edi. Inbuyrak,eng yuqori 5 foiz diatom eritmasi bilan to'ldirilgan sichqonlarda xolesterin konsentratsiyasi ~ 30 foizga kamaydi. Izchil ravishda, triatsilgliserin miqdori ikkalasida ham sezilarli darajada kamaydijigarvabuyrak. Biz xolesterin va triatsilgliserin miqdorining kamayishi o'zlarining himoya ta'siri bilan mashhur bo'lgan PUFAlar bilan dietani qo'shish natijasidir, deb taxmin qilamiz [1]. P. Borealis kserofitik diatom bo'lib, u nafaqat yuqori EPK konsentratsiyasini, balki sog'liq uchun foydali bo'lgan pigmentlar, tolalar va fitosterollar kabi bir qancha bioaktiv birikmalarni ham o'z ichiga oladi [5,8]. Shu kabi natijalar Sano va boshqalar tomonidan olingan. [42], ular 10 hafta davomida yuqori xolesterinli parhez bilan oziqlangan quyonlarda Chlorella Vulgaris suv o'tlari bilan parhez qo'shimchasining sezilarli antilipidemik va antiaterosklerotik ta'sirini kuzatgan. Fallah va boshqalar. [43] Chlorella iste'moli giperkolesterolemiyasi bo'lgan bemorlarda xolesterin darajasini ham kamaytirishi mumkinligini ko'rsatdi. Ushbu potentsial sog'liq uchun foydalar Chlorella tarkibidagi minerallar, xun tolasi, oqsillar va ō-3 PUFA kabi o'ziga xos tarkibiy qismlarga bog'liq. Cherng va boshqalar. [44], shuningdek, Chlorella pyrenoidosa 20 foiz gidrogenlangan kokos moyi (to'yingan yog'li kislotalarga boy) bo'lgan yuqori yog'li parhez bilan oziqlangan kalamush va hamster modellarida dislipidemiyani oldini olish qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi. Bir qator tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, yuqori yog'li parhezlar bilan oziqlangan hayvonlarda dislipidemiya va giperglikemiya [45], insulin qarshiligi [46], jigar steatozi [47], trombotsitlar agregatsiyasi [48] va oksidlovchi stress [49] rivojlanishi ehtimoli ko'proq. Shunday qilib, PUFAlarga boy to'g'ri ovqatlanish ushbu kasalliklar uchun xavf omillarini yaxshilashi mumkin.
CISTANCHE BUYRAK/BUYRAK INFEKTSIONINI YAXSHILADI
Li va boshqalar. [50] koreyslik chekuvchi erkaklarda Chlorella Vulgaris qo'shimchasi plazma antioksidantning ozuqaviy holatini saqlab qolishini va eritrotsitlar antioksidant fermentlarining faoliyatini yaxshilashini ko'rsatdi. Reaktiv kislorod turlari va erkin radikallar lipidlar, oqsillar va DNK uchun zararli bo'lishi mumkin va ular neyrodegenerativ va yurak-qon tomir kasalliklari kabi bir qator inson kasalliklarini qo'zg'atishi mumkin [51]. Ushbu tadqiqotda biz P. Borealis bilan dietani qo'shish oksidlovchi stressni engillashtirishini taxmin qildik, chunki PUFAlar in vivo [1] oksidlovchi zararni kamaytirishi mumkin. Shu bilan birga, oksidlanish stressining belgisi bo'lgan malondialdegid (MDA) kontsentratsiyasi ikkalasida ham eng yuqori edi.jigarvabuyrak, 5 foizli diatom eritmasi bilan to'ldirilgan sichqonlarda (2 va 3-rasm). Malondialdegid asosan PUFAlarning peroksidlanishi natijasida yuzaga keladi va u ilgari o'ylanganidan kamroq xavfli bo'lsa-da, u hali ham toksik, immunogen va mutagen [1]. Biroq, MDA nafaqat lipid peroksidatsiyasidan, balki oziq-ovqatdan ham kelib chiqishi mumkin. Shunday qilib, MDA ning yuqori miqdori oksidlovchi stress bilan bog'liq emas, balki xun takviyasining yuqori EPA tarkibiga bog'liq. Haqiqatan ham, glutation peroksidaza (GPx) faolligi dietani qo'shgandan keyin o'zgarmadi yoki hatto kamaymadi (2-rasm). GPx fermentlari organizmni oksidlovchi shikastlanishdan himoya qiluvchi vodorod periksni kamaytirishni katalizlaydi. Shunday qilib, agar oksidlovchi stress kuchaytirilsa, GPx faolligi oshadi. GPx faolligi tushunarsiz darajada oshdibuyraksichqonlarning 3 foizli diatom eritmasi bilan oziqlangan va u GSH tarkibining ortishi bilan parallel bo'lgan (3-rasm). Ehtimol, shuning uchun GSH kontsentratsiyasi dispersiyaning 23,7 foizini tushuntirdibuyrak(3-rasm). Ushbu natijalar ushbu guruhda oksidlovchi stressning kuchayishini ko'rsatishi mumkin. Biroq, glutation reduktaza (GR) faolligijigarvabuyrak ko'paydidiatom eritmasidan mustaqil ravishda dietani qo'shgandan so'ng (2-rasm). Jigarda GR faolligi dispersiyaning 39,7 foizini tushuntirdi (2-rasm). Ushbu ferment oksidlangan glutationni to'g'ri oksidlanish-qaytarilish potentsialini saqlab qolish uchun qaytarilgan shaklga aylantirdi va oqsillarning -SH guruhlarini oksidlanishdan himoya qildi [22]. Barcha guruhlarda GR faolligining ~2–2.5- barobar ortishi Pinnularia Borealisning eng past eritmasi bilan ham antioksidant mexanizmlar yaxshilanganligini ko'rsatadi. Kamaytirilgan glutation (GSH) kontsentratsiyasi faqat 5 foiz diatom eritmasi bilan to'ldirilgan sichqonlarda kamaydi. Bu pastroq konsentratsiyalar foydaliroq ekanligini ko'rsatishi mumkin. GSH kuchli antioksidant bo'lib, u ham glutation peroksidazalar va glutation transferazlar uchun kofaktor hisoblanadi [1]. Glutatyon transferazlar endogen va ekzogen hujayralar zararli birikmalarini, shu jumladan reaktiv kislorod turlarini detoksifikatsiya qilishni boshlaydigan fermentlar guruhidir. 5 foizli diatom eritmasi bilan to'ldirilgan sichqonlarda glutation transferaza (GST) ning eng yuqori faolligi bu hayvonlardagi eng past GSH miqdorini ham tushuntirishi mumkin. Shunday qilib, biz P. Borealis bilan dietani qo'shish GSH ning redoks tizimi uchun 3 foizgacha eritmada qo'llanilganda foydali bo'ladi degan xulosaga keldik. Yuqori konsentratsiyalar xolesterin yoki triatsilgliserin miqdorining pasayishi bilan qoplanishi mumkin bo'lmagan zararli ta'sirga ega bo'lishi mumkin. Shu bilan birga, dietali PUFAlar hujayra lipidlariga turli darajada qo'shilishi mumkin va shuning uchun hujayra tuzilmalari yoki to'qimalariga qarab turli xil ta'sir ko'rsatishi mumkin [52]. Bu antioksidant tizim parametrlari orasidagi farqni qisman tushuntirishi mumkinbuyrakva jigar. Bundan tashqari, dietadan olingan yog 'kislotalari, birinchi navbatda, endoplazmatik retikulumda to'yinmagan yoki cho'zilgan bo'lishi mumkin [53]. Biz EPK tarkibini o'lchamaganmizjigarvabuyrak,shuning uchun biz to'qimalarning EPK tarkibi nima ekanligini aniq ayta olmaymiz, ammo natijalar tasodifiy emasligiga aminmiz, chunki P. Borealisning eng past konsentratsiyasi antioksidant qobiliyatini yaxshilash uchun etarli edi.
Bundan tashqari, oziq-ovqat qo'shimchalari sifatida ishlatiladigan turli xil PUFAlar teng emasligi haqida dalillar ortib bormoqda, chunki PUFAlar nafaqat pro-, balki antioksidant xususiyatlarga ega va shuning uchun endogen antioksidant mudofaani modulyatsiya qilishi mumkin [52]. PUFAlarning ta'siri shunchaki uglerod zanjirining uzunligi yoki qo'sh bog'lanishlar soni va holati bilan bog'liq emas. O'rganilgan besh xil PUFAlar orasida (araxidonik (20:4 ō-6), linoleik (18:2 ō-6), -linolenik (18:3 ō-3), eikosapentaenoik (20: 5 ō-3) va dokosaheksaenoik (22:6 ō-3)) faqat DHA inson gepatomasi hujayra liniyasi madaniyatida antioksidant mudofaani kuchaytirdi, araxidon kislotasi tufayli oksidlovchi zarar [51,54]. Boshqa in vitro tadqiqotlarida [55] mualliflari ekzogen EPA va DHA eng kuchli antioksidant xususiyatlarga ega ekanligini va ular ROS tozalashda ō-6 PUFAlarga qaraganda ancha samarali ekanligini ko'rsatdi.
Bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, bu oziq-ovqat qo'shimchasi sifatida P. Borealis bo'yicha birinchi tadqiqotdir. Yosunlar kuchli sog'liq uchun foydali bo'lgan ko'plab birikmalarni sintez qilishi mumkin [56]. Koyande va boshqalar. [45] yosunlardagi faol birikmalar antikarsinogen, antioksidant va antihipertenziv xususiyatlarga ega ekanligini ko'rsatdi. Neyrodegenerativ va yurak-qon tomir kasalliklari xavfini bartaraf etishning tabiiy usullaridan biri ō-3 PUFAlarga boy parhez bo'lishi mumkin [38]. Ba'zi suv o'tlari GRAS toifasida oziq-ovqat manbai sifatida tasniflanadi [57] va diatom P. Borealis EPA [58] kabi ko'p to'yinmagan yog'li kislotalarning boy manbai sifatida tan olingan. Hozirgi vaqtda inson EPA ratsiondan, asosan baliq yog'idan olinadi. Bu muhim ozuqaviy ahamiyatga ega va ko'plab kasalliklar xavfini engillashtiradigan muhim yog 'kislotasi. Shunday qilib, PUFAlarga bo'lgan ehtiyojni qoplash uchun baliq yog'iga muqobil manbalar kerak. Diatom P. Borealis EPK ning yuqori miqdorini (32 foiz) to'playdi va shuning uchun parhez qo'shimchasi sifatida ko'rib chiqilishi mumkin.
5. Xulosalar
Tadqiqotimiz natijalari shuni ko'rsatadiki, Pinnularia Borealis sog'liq uchun foydali bo'lgan oziq-ovqat qo'shimchasi sifatida ishlatilishi mumkin. To'g'ri miqdorda etkazib berilsa, u antioksidant himoyani kuchaytirishi va yurak-qon tomir kasalliklari uchun xavf omillarini yaxshilashi mumkin. Yosunlar baliq yog'i uchun yaxshi alternativ bo'lib, ekstraktsiya mahsulotlarining hidi va beqarorligi muammolarini bartaraf etadi.
