JAK ingibitori glomerulyar hujayralardagi COVID{0}}sitokinlar keltirib chiqaradigan JAK-STAT-APOL1 signalini va inson buyragi organoidlarida podotsitopatiyani bloklaydi

Abstrakt

COVID-19 infektsiyasi sabab bo'ladiglomerulyar kapillyarlarning qulashivapodotsitlarning yo'qolishi, a bilan tugaydiganog'ir buyrak kasalligichaqirdiCOVID{0}}bog'langan nefropatiya(KOVAN). COVID-19 ning asosiy mexanizmi noma'lum. Biz taxmin qildikki, COVID{1}} tomonidan qo'zg'atilgan sitokinlar JAK-STAT signalizatsiyasi orqali patogen APOL1 ifodasini ishga tushiradi, natijada podotsitlar va COVAN fenotipi yo'qoladi. Bu erda, biopsiya bilan tasdiqlangan to'qqizta COVAN holatlariga asoslanib, biz birinchi marta AP ekanligini ko'rsatdik.OL1 oqsili podotsitlarda va ko'p miqdorda ifodalanadiglomerulyar endotelialCOVAN buyrak hujayralari (GECs), lekin nazorat guruhida emas. Bundan tashqari, COVAN bilan kasallanganlarning aksariyati (77,8%) ikkitasini olib yurganAPOL1xavf allellari. Biz SARS-CoV-2 tomonidan qo'zg'atilgan rekombinant sitokinlar haydash uchun sinergik ta'sir ko'rsatishini ko'rsatdik.APOL1JAK-STAT yo'li orqali insonning asosiy podotsitlarida, GEClarda vabuyrak mikroorganoidlariikkita tashuvchidan olinganAPOL1xavf allellari, lekin JAK1/2-ingibitori, baritsitinib tomonidan bloklangan. Biz birinchi marta sitokin tomonidan qo'zg'atilgan JAK-STAT-APOL1 signalizatsiyasi buyrak organoid podotsitlarining hayotiyligini pasaytirganini, ammo baritsitinib tomonidan qutqarilganligini ko'rsatdik. Birgalikda bizning natijalarimiz shunday xulosani tasdiqlaydiCOVID{0}}qo'zg'atadigan sitokinlarJAK-STAT-APOL1 signalizatsiyasi orqali COVAN bilan bog'liq podotsitopatiyani qo'zg'atish uchun etarli va JAK-ingibitori bu patogen jarayonni bloklashi mumkin. Ushbu topilmalar JAK-ingibitorlari sitokinlar keltirib chiqaradigan APOL{7}}vositachiligi podotsitopatiyani boshqarishda terapevtik foyda keltirishi mumkinligini ko'rsatadi.

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

BUYRAK INFEKTSIONIDA 25% EXINAKOSID VA 9% AKTEOSID BO'LGAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRAKTINI OLING.

Kirish

Buyrak etishmovchiligi halokatli asoratdirCOVID-19 infektsiyasi. Statsionar bemorlarning 50% va intensiv terapiya boʻlimiga yotqizilgan COVID-19 bemorlarning 70%i buyrakning oʻtkir shikastlanishi (AKI) bilan murakkablashadi, bu esa oʻz navbatida oʻlimni 30-50% ga oshiradi (1, 2). Buyrak biopsiyasi holatlari seriyasi shuni ko'rsatdiki, kollaps glomerulopatiyasi COVID{6}}bilan bog'liq AKI (3)da eng keng tarqalgan gistopatologik tashxis hisoblanadi. COVID{8}}bilan bog'liq bo'lgan kollaps glomerulopatiyasining (qisqartirilgan COVAN) o'ziga xos xususiyati bu Apolipoprotein L1 (APOL1) ning ikkita xavfli allelini tashuvchi afro-amerikaliklar yoki qora tanlilar uchun deyarli eksklyuziv moyillikdir (3, 4). Ikki xavf alleli (G1 va G2 deb nomlanadi) APOL1 genida kodlash variantlari sifatida paydo bo'ldi va Afrika tripanosomiazidan himoya qiladi. Biroq, G1G1, G2G2 yoki G1G2 (yuqori xavfli genotiplar deb ataladi) ni tashish buyrak kasalliklari spektrining xavfini oshiradi va afro-amerikaliklar (5-8) orasida diabetik bo'lmagan buyrak kasalligining ortiqcha xavfini tushuntiradi. Afro-amerikaliklarning taxminan 13 foizi yuqori xavfli APOL1 genotiplariga ega (7). COVID{30}} pandemiyasi davrida tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, biopsiya bilan tasdiqlangan COVAN holatlarining 92% yuqori xavfli APOL1 genotiplarini tashuvchilarda bo'lgan, ularning 61% taqdim etilganda dializga muhtoj edi (3, 9). Ushbu topilmalar APOL1 variantlarini COVID-19 sogʻligʻi natijalaridagi irqiy tafovutga asosiy hissa qoʻshayotganini aniqlaydi. Ushbu ta'sirchan assotsiatsiyaga qaramay, yuqori xavfli APOL1 genotiplarini SARS CoV-2 infektsiyasi bilan bog'laydigan hujayra mexanizmi va COVANning qulab tushadigan glomerulopatiya patogenezi noma'lumligicha qolmoqda.

Yuqori xavfli APOL1 genotipi va COVAN o'rtasidagi kuchli epidemiologik bog'liqlik, COVID{2}}podositlarda va glomerulyar endotelial hujayralarda - buyrak hujayralarida APOL1 G1 yoki G2 ning ekspressiyasiga sabab bo'lgan glomerulopatiya patogenezini qo'zg'atuvchi gipotezaga olib keldi. KOVAN. Ushbu gipoteza sichqon podotsitlari yoki glomerulyar endotelial hujayralardagi APOL1 xavf allellarining transgenik haddan tashqari ko'payishi podotsitopatiya, endotelyopatiya, glomerulopatiya va buyrak etishmovchiligining klinik ko'rinishlariga (10-14) sabab bo'lganligi haqidagi so'nggi hisobotlar bilan tasdiqlangan. Sichqoncha kasalligining ushbu modellari shuni koʻrsatadiki, COVID{10}}induktsiya qilgan APOL1 ifodasi asosidagi mexanizm COVID-19 uchun potentsial terapevtik maqsad boʻladi. Biroq, ikkita muhim noma'lum narsa bor. Birinchisi, APOL1 oqsili ifodasi COVAN bilan og'rigan bemorlarning glomeruliyalarida ko'tariladimi yoki yo'qmi noma'lum. Ikkinchidan, SARS-CoV-2 to'g'ridan-to'g'ri buyrak hujayralarining virusli infektsiyasi yoki bilvosita SARS-CoV-2-sitokin bo'roni ta'siri orqali APOL1 ifodasini keltirib chiqaradimi, noma'lum.

SARS-CoV-2 ni aniqlashda muvaffaqiyatsizlikCOVAN buyrak biopsiyalaribemorlar COVAN buyrak parenximasining to'g'ridan-to'g'ri virusli infektsiyasidan emas, balki sitokin bo'roni ta'siridan kelib chiqadi degan gipotezani bilvosita qo'llab-quvvatlaydi. SARS-CoV-2 virusli zarralarini vaqti-vaqti bilan aniqlash buyrak namunalarida otopsiya qilingan bo'lib, ularda to'qimalarning avtolizlanishining chalkash ta'sirini istisno qilib bo'lmaydi (3, 4, 15, 16). Bir qator yallig'lanishli sitokinlar va kimyokinlar yuqori tartibga solinishi qayd etilgan.COVID bilan kasallangan bemorlar sarasi-19va/yoki COVAN (4, 17, 18). Ushbu ro'yxatga APOL1 ifodasini tartibga solish uchun ilgari ma'lum bo'lgan interferon alfa, beta, gamma va TNF kabi sitokinlar kiradi. Shu bilan birga, roʻyxatga shuningdek, COVID-19 infektsiyasi tomonidan mustahkam tartibga solinadigan bir nechta yalligʻlanishli sitokinlar kiradi. Ushbu sitokinlarning APOL1 ifodasiga va bog'liq podotsitopatiyaga qo'shimcha, sinergik yoki antagonistik ta'sir ko'rsatishi noma'lum.

Joriy tadqiqotda biz APOL1 oqsilining COVAN va nazorat buyraklarida ifodalanganligini va qaerdaligini tekshirish uchun COVAN bilan kasallangan to'qqiz nafar bemor va insonning ikkita nazorat buyragidan olingan buyrak biopsiyalaridan foydalangan holda ushbu bilim bo'shliqlarini ko'rib chiqdik. Biz SARS-CoV-2 bo'lmaganida, insonning asosiy glomerulyar hujayralarida APOL1 ifodasini sinergik tarzda qo'zg'atish va inson buyragi mikro-podositopatiyasini keltirib chiqarish uchun etarli bo'lgan sakkizta sitokinni aniqlash uchun o'n sakkizta COVID{1}}induktsiyali sitokinlarni profilladik. organoidlar. Ushbu tadqiqot nafaqat COVID{7}} sitokin boʻroni APOL1 ifodasi va podotsitopatiyani keltirib chiqarishi haqidagi inson tomonidan yaratilgan eksperimental modeldagi birinchi dalilni taqdim etibgina qolmay, balki patogen taʼsirga vositachilik qiluvchi umumiy signal yoʻlini ham aniqlaydi. Bu tadqiqot qora tanli va ispaniyalik bemorlarda COVID-19ni tekshirish va davolash strategiyalariga taʼsir qilishi mumkin boʻlgan maʼlumotlarga ega. Bu yuqori xavfli APOL1 genotiplarini tashuvchi qora tanli va ispan millatiga mansub odamlarda COVID{10}} terapiyasi sifatida qoʻshimcha interferonlarning xavfsizligi haqida savollar tugʻdiradi (19, 20).

Natijalar

APOL1 ifodasi COVAN bemorlarining podotsitlari va glomerulyar endotelial hujayralarida ko'tariladi. Biopsiya bilan tasdiqlangan COVAN tashxisi bo'lgan bemorlarda podotsitlarda va glomerulyar endotelial hujayralarida (GEC) APOL1 oqsilining ko'payishi yoki yo'qligini tekshirish uchun biz APOL1, sinaptopodin (differensiallangan podotsitlarning aktin bilan bog'langan oqsili) va immunohistokimyoviy birgalikda bo'yashni o'tkazdik. COVAN tashxisi bo'lgan ikkita bemorning buyrak biopsiyalarida CD31 (endotelial hujayra belgisi) (1-rasm). APOL1 ifodasi ikkala holatning ham glomerulida koʻp boʻlgan, u COVID tashxisidan oʻn oy oʻtib biopsiya qilingan (1A-F-rasm) va COVID{14}} tashxisidan toʻqqiz kun oʻtgach biopsiya qilingan 6-chi holat (rasm) 1G-L). Ikkala bemorda ham sinaptopodin-musbat podotsitlarda (o'q; 1B, E, H va K-rasm) va CD musbat glomerulyar endoteliyda (o'q boshi; 1C, F, I va L-rasm) kuchli APOL1 bo'yalgan. ). COVID{25}} infeksiyasi tashxisi qoʻyilgandan keyin 9 kun va 10 oy oʻtgach podotsitlar va GEClarda APOL1 oqsilining mavjudligi-19 APOL1 ifodasi erta paydo boʻlganidan dalolat beradi va COVID qoʻzgʻatganidan ancha keyin ham glomerulyarlarda bir necha oy davom etishi mumkin. 27}} infektsiya bartaraf etildi.

APOL1 ifodasi COVAN holatlarining biopsiya to'qimalarida ko'tariladi, ammo nazorat ostida emas. Ushbu immunohistokimyoviy topilmalarning umumlashtirilishini qo'shimcha baholash uchun biz genotip va IHC uchun mavjud biopsiya to'qimalariga ega jami to'qqizta COVAN holatini aniqladik (2-rasm), shuningdek, ikkita nazorat bemori, shu jumladan COVID bilan kasallangan bemorning otopsi nazorati{{2 }} infektsiyani yuqtirgan, ammo OKI rivojlanmagan (2B va 2C-rasm). COVAN ning klassik gistopatologik xususiyatlariga qo'shni podotsitlar gipertrofiyasi va proliferatsiyasi, ko'pincha glomerulyar proteinuriya bilan bog'liq bo'lgan podotsitlar oqsilining reabsorbtsiya tomchilari bilan glomerulyar kapillyar tutamning qulashi kiradi (Supple Fig 1 va Supple Fig 2). APOL1 IHC bo'yalishi barcha nazorat guruhidagi glomeruliyalarda yo'q edi (AC-rasm), lekin barcha to'qqizta COVAN bemorlarining glomerulida mavjud (2D-X-rasm). APOL1 bo'yalishi podotsitlar, GEClar va ba'zi parietal epitelial hujayralar sitoplazmasida ko'p bo'lgan (2N-rasm, kesilgan doira) (1-rasm, 2-rasm va 3-rasm). APOL1 oqsilini kapillyarlari ochiq bo'lgan glomerulilarda, shuningdek glomerulyar kollaps joylarida ko'rish mumkin edi. Ba'zi kapillyar lümenda APOL1 oqsilining aniq mavjudligi, ehtimol, asosan jigar tomonidan ishlab chiqariladigan aylanma APOL1 ni ifodalaydi (21). Bundan tashqari, APOL1 peritubulyar kapillyarlarda va shikastlangan quvurli epiteliya hujayralarida (yulduzchalar) ham kuzatilgan. Ushbu oxirgi topilmaning o'ziga xosligi va ahamiyati aniq emas. Shunisi e'tiborga loyiqki, to'qqizta COVAN holatidan ettitasi yuqori xavfli APOL1 genotipiga ega (2D-V-rasm). Qolgan ikkita holat, 9-holda va 4-holda, past xavfli G0G0 genotiplari mavjud edi (2W va 2X-rasm). Kam xavfli genotipga ega bo'lishiga qaramay, 9-chi holat APOL1 ifodasi ettita yuqori xavfli holatlar bilan solishtirish mumkin edi (2W-rasm). 4 ta buyrak biopsiyasida faqat ikkita glomeruli bor edi va bu glomerullarda APOL1 ifodasi pastroq edi (2X-rasm). Bu topilmalar birgalikda shuni ko'rsatadiki, buyrakning bazal APOL1 ifodasi glomerulyar jarohati bo'lmagan shaxslarning glomeruliyalarida past bo'ladi, hatto odamda COVID{41}} infektsiyasi bo'lsa ham; holbuki APOL1 ifodasi bizning holatlarimizning 89% da COVAN sharoitida podotsitlar va GEClarda yuqori tartibga solinadi.

1-jadvalda ko'rsatilganidek, biopsiya bilan tasdiqlangan COVAN bo'lgan to'qqiz nafar bemorning etti nafari (77,8%) o'zini afro-amerikalik deb bilishgan. Ushbu etti bemorning oltitasi (85,7%) yuqori xavfli APOL1 genotiplarini (to'rtta G1G1, bitta G1G2, bitta G2G2) olib yurgan. Taqqoslash uchun, afro-amerikaliklarning 13 foizi yuqori xavfli APOL1 genotipiga ega. Qolgan ikkita bemor o'zini oq ispaniyalik deb bilishgan, ammo ayniqsa, ulardan biri yuqori xavfli APOL1 genotipiga ega edi. Hammasi bo'lib, to'qqizta COVAN bemorining ettitasi (77,8%) yuqori xavfli APOL1 genotiplarini olib yurgan. Kasallarning o'rtacha yoshi 51 yoshni tashkil etdi (diapazon 37-60). To'qqizta holatning barchasida buyrakning o'tkir shikastlanishi rivojlandi va turli darajadagi proteinuriya mavjud bo'lib, ular subnefrotikdan nefrotik diapazongacha bo'lgan (1.{28}} g/24 soat). Koʻpgina biopsiyalar COVID{31}} infektsiyasidan kamida 1 oy oʻtgach amalga oshirilgan, 6-holdan tashqari, ijobiy PCR testidan 9 kun oʻtib biopsiya qilingan. Bitta bemorning biopsiyasi to'liq tuzalmaganligi sababli infektsiyadan keyin 10 oy o'tgach amalga oshirilmadi. To'qqizta bemorning barcha biopsiyalarida kollapsli glomerulopatiya, naycha shikastlanishi va interstitsial yallig'lanish namoyon bo'ldi. Hech bir holatda endotelial naychali retikulyar qo'shimchalar kuzatilmadi. Shunisi e'tiborga loyiqki, IHC tomonidan to'g'ridan-to'g'ri SARS-CoV-2 virusli infektsiyasi va in situ gibridizatsiyasi uchun sinovdan o'tkazilgan ikkita COVAN biopsiyasida virus aniqlanmagan (ma'lumotlar ko'rsatilmagan).

Rekombinant COVID{0}}Induktsiyalangan sitokinlar insonning birlamchi glomerulyar endotelial hujayralari va podotsitlarida APOL1 ifodasini sinergik tarzda kuchaytiradi. COVID{2}}sitokin boʻroni inson glomerulyar hujayralarida APOL1 ifodasini qoʻzgʻatish uchun yetarlimi yoki yoʻqligini oʻrganish uchun biz oʻlgan donor buyragidan va birlamchi inson glomerulyar endotelial hujayralaridan (GEC) ajratilgan birlamchi inson podotsitlarini 18 ta sitokin va kimokinlardan birida yetishtirdik. SARS-CoV bilan kasallangan bemorlarning zardobida ko'tarilganligi haqida xabar berilgan-2 (3A-rasm) (4, 17). Podotsitlar identifikatori Wilms tumor1, sinaptopodin, nefrin va podokaliksin kabi bir nechta podotsit belgilari bilan tasdiqlangan (3B-rasm va 4A-B-rasm). GEC identifikatori PECAM1 ga nisbatan ifodasi bilan tasdiqlanganinson embrion buyragi293 cells (HEK) (Figure 3C). Induced APOL1 expression was quantitated by qPCR and immunoblot after 48hr treatment in GECs (Figure 3D and 3F) and podocytes (Figure 3E and 3G). Consistent with prior report (22), we found that interferons (gamma > beta > alpha) robustly induced expression of APOL1 in both GECs and in podocytes. Similarly, we found that TNF also induced a modest APOL1 expression in GECs and podocytes. Unexpectedly, we found that three cytokines-IL-6, IL-1β, and IL-18, which were previously unrecognized as inducers of APOL1 expression, also individually induced modest APOL1 expression in GECs or podocytes. Notably, the combination of all 18 recombinant cytokines produced a synergistic upregulation of APOL1 that was an order of magnitude higher than that produced by any of the interferons alone (Figure 3D). These effects were not only observed with cytokine concentration of 50ng/mL (Figures 3D and 3E) but also at 20ng/mL and 10ng/mL (Supplemental Figure 5). Cytokine conditions inducing >Axborot vositalari bilan ishlov berilgan nazorat bilan solishtirganda 1,5 marta APOL1 transkripti muhimligi uchun qo'shimcha tahlil qilindi. Muhimligi bir nechta taqqoslash uchun Holm-Sidak tuzatish bilan juftlashtirilmagan t-test yordamida baholandi. Xabar qilingan P-qiymatlari sozlangan p-qiymatlaridir. Ushbu natijalar yaxshi tanilgan interferonlar va TNF dan tashqari APOL1 ifodasini qo'zg'atishga qodir bo'lgan fiziologik sitokinlar ro'yxatini kengaytiradi. Muhimi, topilmalar shuni ko‘rsatadiki, COVID{10}induktsiyalangan sitokinlarning sinergiyasi alohida ajratilgan sitokinning ta’siridan ko‘ra APOL1 regulyatsiyasi uchun ko‘proq mos keladi.

JAK-STAT signalizatsiya vositachiligiCOVID-19-sitokinlar keltirib chiqaradigan APOL1 ifodasi. Keyin biz COVID{0}} tomonidan qo'zg'atilgan sitokinlar terapevtik maqsad sifatida ishlatilishi mumkin bo'lgan umumiy hujayra ichidagi signalizatsiya yo'li orqali APOL1 ifodasini kuchaytiradimi yoki yo'qligini tekshirdik. APOL1 ning interferon induksiyasi JAK-STAT1/2 vositachiligida ekanligi avval xabar qilingan edi (22, 23). IL-6 retseptorlari orqali signal uzatish STAT3 tomonidan vositachilik qilgani va IL-1 va TNF ham STAT3 ni bilvosita faollashtirishi xabar qilingan (24, 25). Qizig'i shundaki, Meliambro va boshqalar yaqinda COVAN va OIV bilan bog'liq nefropatiya (HIVAN) holatining biopsiya to'qimalarida fosfo-STAT3 ning nazorat bilan solishtirganda ko'tarilishi haqida xabar berishdi (26). Ushbu asosiy maʼlumotlarga asoslanib, biz JAK1/{19}}STAT1/2/3 yoʻllari APOL1 ifodasini qoʻzgʻatuvchi COVID{23}}sitokinlar taʼsirining asosiy vositachilari ekanligini taxmin qildik. Ushbu gipotezani sinab ko'rish uchun biz ushbu signalizatsiya yo'llarining holatini GEC lizatlaridagi fosforlangan STAT1, 2 va 3 ni individual yoki birlashtirilgan sitokinlarda 48 soat davomida o'stirgandan so'ng o'lchash orqali aniqladik (3F-rasm). I turdagi interferonlar (IFN va IFN) STAT1-3 ning fosforillanishini oshirdi, IFN esa STAT 1 va 3 ning fosforillanishini kuchaytirdi. IL-1 , TNF va IL-6 faqat STAT3 ning fosforillanishini oshirdi. Kombinatsiyalangan sitokinlar STAT1-3 fosforillanishini kuchaytirdi. JAK1 va JAK2 STAT1-3 fosforillanadigan asosiy oqsil kinazlari ekanligini bilib, biz JAK1/2 ning inhibisyoni "barcha sitokinlar" tomonidan induktsiya qilingan APOL1 ifodasini bloklaydi, deb faraz qildik. Ushbu bashoratga muvofiq, biz JAK1/{44}}maxsus inhibitori baritsitinib barcha sitokinlar bilan ishlov berilgan GEClar va birlamchi podotsitlar tomonidan APOL1 mRNK va APOL1 ifodasini sezilarli darajada kamaytirishini aniqladik (3D G-rasm). Bu natijalar birgalikda JAK-STAT signalizatsiyasi COVID-19-sitokinlar keltirib chiqaradigan APOL1 ifodasini vositachilik qiladigan asosiy yoʻl ekanligini koʻrsatadi.

COVID{0}}induktsiyalangan sitokinlar JAK-STAT yoʻli orqali inson iPSC-dan olingan buyrak mikroorganoidlarida APOL1 ifodasini qoʻzgʻatish uchun yetarli. Inson buyragi mikroorganoidi inson buyragi kasalliklarini modellashtirish va klinik tarjimani osonlashtirish uchun tasdiqlangan platformadir. Biz birlamchi inson podotsitlari va GEClardan olingan natijalar umumlashtirilishi va inson tomonidan olingan buyrak mikroorganoid modeli tomonidan tasdiqlanganligini so'radik. Shuning uchun biz ushbu modeldagi APOL1 regulyatsiyasi, ifodasi va natijalarini tekshirish uchun G1G2 APOL1 genotipining afro-amerikalik tashuvchisining induktsiyalangan pluripotent ildiz hujayralaridan (iPSC) buyrak mikroorganoidlarini yaratdik (4A-rasm). Biz buyrak mikroorganoidlarini IFN 10ng/ml yoki sakkizta sitokinlar birikmasida (IFN, IFN, IFN, IL-18, IL-8, IL{-6, TNF, IL{{18) yetishtirdik. }} ) har biri 10 ng/ml da baritsitinib yo‘qligida yoki borligida, 24 soat davomida 10 mkM. Ushbu sakkizta sitokin oldingi tajribalarda APOL1 ifodasini tartibga solish kuzatilganligi sababli tanlangan. Buyrak mikroorganoidlaridagi podotsitlar va quvurli epiteliya hujayralari marker bilan tasdiqlangan (4B-rasm). Adabiyotga (27) muvofiq, endotelial hujayralar buyrak mikroorganoidlarida kam ifodalangan (ma'lumotlar ko'rsatilmagan). Biz mikroorganoidlarda bazal APOL1 oqsili ifodasi past ekanligini aniqladik. IFN bilan davolash APOL1 ning sezilarli ifodalanishiga olib keldi, eng yuqori intensivlik podotsitlar belgisi, podokaliksin sohalarida birgalikda lokalizatsiya qilindi. Sitokinlar kokteyli boshqa muolajalar bilan solishtirganda mikroorganoid strukturada katta va mustahkam APOL1 ifodasini keltirib chiqardi. IFN plyus baritsitinib va ​​barcha sitokinlar va baritsitinib bilan davolash qilingan guruhlar sitokin ta'sirini to'liq inhibe qilish bilan mos keladigan APOL1 ifodasini ko'rsatmadi. Buyrak mikroorganoid podotsitlarida APOL1 ifodasi COVAN bilan kasallangan bemorlarning podotsitlarida kuzatilganini eslatdi. Biroq, sog'lom quvurli epiteliya hujayralarida sezilarli APOL1 ifodasi kuzatilmagan COVAN buyraklaridan farqli o'laroq, buyrak mikroorganoid E-Cadherin-musbat quvurli epiteliya hujayralari APOL1 ni ifodaladi. Bu farq membrana sitokin retseptorlaridagi farqlar yoki buyrak mikroorganoidlarining yetilmagan kanalchalarida oqsil ifodalanishiga ta'sir qiluvchi epigenetik omillar bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Xulosa qilib aytganda, COVID{45}induktsiyalangan sitokinlar bilan ekilgan iPSC-dan olingan inson buyrak mikroorganoidlari patogen G1G2 APOL1 oqsilining mustahkam yuqori regulyatsiyasini ko'rsatadi va ifoda JAK-STAT signalizatsiyasini inhibe qilish orqali bloklanadi.

Sitokin tomonidan induktsiya qilingan JAK-STAT-APOL1 signalizatsiyasi JAK-ingibitori tomonidan qutqarilgan buyrak mikroorganoid podotsitlarining hayotiyligini pasaytirdi. Nihoyat, buyrak mikroorganizmlarida ifodalangan G1G2 APOL1 podotsitlar hayotiyligini buzadimi, deb so'radik. Biz sitokin tomonidan qo'zg'atilgan APOL1 oqsilining varianti podotsitlar yo'qolishiga olib keladi, deb faraz qildik - bu COVANning o'ziga xos fenotipi. Ushbu gipotezani sinab ko'rish uchun biz G1G2 tashuvchisining iPSC'laridan hosil bo'lgan buyrak mikroorganoidlaridan podotsitlarni ajratib oldik. Podositlar IFN (10ng/ml) yoki sakkizta sitokinlar birikmasida (har biri 10ng/ml) baritsitinib (10mkM) borligida ham, yo‘qligida ham 96 soat davomida yetishtirildi (5A va B-rasm). Sitokin bilan davolash APOL1 ifodasini kuchli tarzda keltirib chiqardi va bu ifoda bizning oldingi tajribalarimiz bilan mos ravishda baritsitinib tomonidan bloklandi (5C-rasm). Shunga mos ravishda, sitokin bilan davolash yashovchanlik tahlili va umumiy hujayrali ATP (5D va 5E-rasm) tomonidan ko'rsatilgandek podotsitlarning sezilarli darajada yo'qolishiga olib keldi. Shunisi e'tiborga loyiqki, baritsitinib sitokin ta'sirida podotsitlar yo'qolishidan butunlay xalos bo'ldi. Bu natijalar birgalikda, COVID{25}}induktsiya qilgan sitokinlar JAK-STAT-APOL1 signalini ishga tushiradi, bu esa o‘z navbatida podotsitlar shikastlanishi va yo‘qolishiga olib keladi, degan xulosani tasdiqlaydi. JAK-inhibisyonining podotsitlar hayotiyligiga himoya ta'siri bu farazni kuchli qo'llab-quvvatlaydi.

Munozara

Joriy tadqiqotning asosiy xulosalari shundan iboratki, interferonlardan tashqari bir nechta COVID{0}}induktsiyalangan sitokinlar JAK-STAT signali orqali patogen APOL1 ifodasini qo'zg'atish uchun sinergik ta'sir ko'rsatadi, natijada podotsitlar shikastlanishi va JAK inhibisyoni tomonidan bloklangan yo'qoladi. Vakalar seriyasiga asoslanib, biz birinchi marta APOL1 oqsili COVID-19 tashxisi qoʻyilgan bemorlarning podotsitlari va GEClarida koʻp ifodalanganligini, ammo sogʻlom nazorat yoki COVID-19-musbat bemorlarning glomeruliyalarida emas, balki koʻp ifodalanganligini koʻrsatamiz. COVAN-salbiy nazorat. Uchta eksperimental modelda biz COVID-19 infektsiyasida yuqori tartibga solingan rekombinant sitokinlar APOL1 ning mustahkam ifodalanishi uchun yetarli ekanligini va kutilmaganda sitokinlar kombinatsiyasi natijasida hosil bo'lgan kuchli sinergizm asosan umumiy hujayra ichidagi signalizatsiya yo'li orqali vositachilik qilganligini ko'rsatamiz. Birgalikda, bizning eksperimental dalillarimiz sitokin tomonidan qo'zg'atilgan JAK-STAT-APOL1 signalizatsiyasi va in vivo COVAN glomerulyar fenotipi o'rtasidagi sababiy bog'liqlikni qo'llab-quvvatlaydi va ushbu terapevtik maqsadni qo'shimcha tekshirishni qo'llab-quvvatlaydi.

Biz bu yerda xabar bergan COVAN bilan og'rigan bemorlar orasida yuqori xavfli APOL1 genotipining (77,8%) ko'payishi, yaqinda o'tkazilgan xalqaro ko'p markazli patologiya tekshiruvi bilan bog'liq bo'lib, COVAN bilan kasallangan bemorlarning 91,7 foizida yuqori xavfli APOL1 genotipi haqida xabar berilgan (3). Umumiy afro-amerikalik populyatsiyada yuqori xavfli APOL1 genotipining chastotasi 13% (28) ni tashkil etishini hisobga olsak, COVANda 77-90% chastotani aniqlash chuqur va ushbu hisobotda bildirilgan 60-70% chastota bilan solishtirish mumkin. OIV bilan bog'liq nefropatiya (OIVAN) (28-31). Qolgan 20-30% COVAN (va HIVAN) holatlarining yuqori xavfli APOL1 genotipiga ega bo'lmagan holatlarining mavjudligi APOL{{20}}mustaqil patomexanizmi yoki ba'zi hollarda buning ehtimolini ko'rsatadi. G0 APOL1 ning COVID-19-qo'zg'atgan suprafiziologik ifodasi ham podotsitopatiyaga olib kelishi mumkin. Ushbu imkoniyatlarni tahlil qilish qo'shimcha tadqiqotlarni talab qiladi. Shunga qaramay, biz ilgari namoyish qilganmizinson embrion buyragi(HEK) APOL1 ning sitotoksikligi ham variantga, ham dozaga bog'liq bo'lgan tetratsiklin-induktsiyali APOL1 ifoda tizimiga ega hujayralar (32, 33). Dozaga bog'liq bo'lgan APOL1 sitotoksikligi, shuningdek, shunga o'xshash hujayraga asoslangan tizimlarda boshqa tadqiqotchilar tomonidan ham xabar qilingan (34). Bundan tashqari, APOL1 transgenik sichqon modellari nafaqat APOL1 xavfi allellari va podotsitlar shikastlanishi o'rtasidagi sababiy bog'liqlikni tasdiqladi, balki podotsitopatiya darajasi APOL1 ifoda darajalari bilan bog'liqligini ko'rsatdi (10, 12-14, 35) . Bizning kashfiyotimiz COVANning to'qqizta holatidan sakkiztasi nazoratga nisbatan kuchli glomerulyar APOL1 ifodasini ko'rsatdi va endogen APOL1 xavf allellarining ifodalanishi inson buyrak mikroorganoidlarida podotsitopatiyaga olib kelishi haqidagi dalillar APOL1 va podotsitopatiya o'rtasidagi sababiy bog'lanishni qo'llab-quvvatlaydi. Aksincha, COVID-19 ijobiy, ammo G0G0 otopsi nazorati ostidagi glomeruliyalarda APOL1 ning yoʻqligi, APOL1 induksiyasisiz COVID{26}} infektsiyasining etarli darajada qoʻzgʻatuvchisi emasligini koʻrsatadi.COVAN kasalligi.