Mahanimbine yaxshilangan xolinergik uzatish va bostirilgan oksidlovchi stress, amiloid darajalari va neyroyallig'lanish orqali sichqonlarda qarish bilan bog'liq xotira etishmovchiligini yaxshilaydi.

2.6. Malondialdegid (MDA) va glutation (GSH) darajasini baholash

Savdoda mavjud bo'lgan to'plamlardan foydalanib, MDA va GSH darajalari miya namunalarida tahlil qilindi (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, AQSH).

Fan va texnika taraqqiyoti davom etar ekan, olimlar xotira, tafakkur va ong kabi insonning sirli va muhim psixologik faoliyati sirlarini ochishga harakat qilmoqda. Ular orasida miya namunalarini o'rganish katta tashvishli soha hisoblanadi, chunki u xotira va miya o'rtasidagi munosabatlarni chuqurroq tushunishga yordam beradi.

Xotirani kuchaytirish uchun biluvchi qo'shimchalarni bosing

Avvalo, miya namunasi nima? Oddiy qilib aytganda, bu neyronlarni (miya hujayralari) va ularning miyadagi aloqalarini ushlash, saqlash va tahlil qilish usulini anglatadi. Oddiy so'z bilan aytganda, bu turli sohalar o'rtasidagi aloqalar va funktsiyalarni ko'rsatishi mumkin bo'lgan miya xaritasiga o'xshaydi.

Keyinchalik, miya namunalari va xotira o'rtasidagi munosabatlar haqida gapiraylik. Ilmiy tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bizning xotiramiz miya tuzilishi bilan chambarchas bog'liq. Yangi bilimlarni o'rganganimizda, miyada yangi neyron aloqalari hosil bo'ladi va bu aloqalar vaqt o'tishi bilan mustahkamlanadi. Miya namunalarini o'rganish orqali olimlar ushbu miya aloqalarini o'rganish uchun ko'p mehnat qilmoqdalar va ular orqali o'rganish va xotirani qanday yaxshilashni tushunishga harakat qilmoqdalar.

Bundan tashqari, miya namunalarini tahlil qilish orqali olimlar ham qiziqarli narsalarni topishlari mumkin. Misol uchun, ular inson miyasidagi gippokamp xotira bilan chambarchas bog'liq bo'lgan soha ekanligini aniqladilar. Buning sababi shundaki, gipokampus inson miyasida ma'lumotni qisqa muddatli xotiradan uzoq muddatli xotiraga aylantirish uchun muhim funktsiyaga ega.

Shu sababli, miya namunalarini o'rganishning ahamiyati nafaqat miya va xotira o'rtasidagi munosabatlarni yaxshiroq tushunishga yordam berish, balki xotira buzilishi yoki kognitiv kasalliklarning asosiy sabablarini aniqlashga yordam berish va shu bilan bog'liq kasalliklarni davolash va oldini olishga yordam berishdir.

Va nihoyat, biz xotira bo'yicha miya namunaviy tadqiqot yordamiga ijobiy nuqtai nazar bilan qarashimiz kerak. Hali hal qilinishi kerak bo'lgan ko'plab ilmiy muammolar mavjud bo'lsa-da, ilm-fan va texnologiyaning uzluksiz takomillashib borishi bilan kelajakda yanada ko'proq yutuqlar bo'lishiga ishonamiz. Keling, birgalikda kelajakka intilaylik va ilmiy izlanishlar orqali miyamizni aqlliroq qilishga intilaylik! Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak. Cistanche xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche antioksidant, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirga ega, bu miyadagi oksidlovchi va yallig'lanish reaktsiyalarini kamaytirishga yordam beradi va shu bilan asab tizimining sog'lig'ini himoya qiladi. Bundan tashqari, Cistanche nerv hujayralarining o'sishi va tiklanishiga yordam beradi va shu bilan neyron tarmoqlarning ulanishi va funktsiyasini oshiradi. Ushbu effektlar xotirani, o'rganish qobiliyatini va fikrlash tezligini yaxshilashga yordam beradi, shuningdek, kognitiv disfunktsiya va neyrodegenerativ kasalliklarning paydo bo'lishining oldini oladi.

MDA va GSH darajalari mos ravishda nanomol/milligram protein va mikromol/milligram protein bilan o'lchandi. Miya to'qimalarida oqsil miqdorini baholash uchun Bredford texnikasiga amal qilindi.

2.7. Asetilkolin (ACh) va Asetilkolinesteraza (AChE) faolligini baholash

Miya gomogenatidagi ACh va AChE darajalari tijoratlashtirilgan to'plamlar (BioAssay System, Hayward, CA, AQSH) yordamida tahlil qilindi, ular mos ravishda EnzyChromTM AsetilkolinAssay to'plami va QuantiChromTM Asetilkolinesteraza tahlili to'plami edi.

Rang hosil bo'lishining intensivligi mos ravishda 570 va 412 nm da mikroplastinka o'quvchida aniqlandi. Olingan ACh darajasi µM, AChE faolligi esa U/L sifatida ifodalangan.

2.8. -Amiloid darajasini o'lchash

Cloud Clone Corp (Katy, TX, AQSH) kompaniyasining ELISA to'plamlari miya homogenatlarida A 1-40 va A 1-42 darajasini baholash uchun ishlatilgan. Rang shakllanishini o'lchash uchun 450 nm ga o'rnatilgan mikroplastinka o'quvchi ishlatilgan.

Namunadagi A 1-40 va A 1-42 kontsentratsiyasi rang intensivligiga teskari bog'liq edi. Natijalar pg/mLof umumiy protein miqdorida ifodalangan.

2.9. Sichqoncha miyasida sekretaza (BACE-1) faoliyatini baholash

Gomogenatdagi BACE{0}} faolligi tijoratlashtirilgan to'plam (SensoLyte® -Secretase Assay Kit, AnaSpec, Fremont, CA, AQSH) yordamida aniqlandi. To'plamni aniqlash peptidga asoslangan bo'lib, u BACE-1 tomonidan parchalanadi va signal 490/520 nm da qo'zg'alish/emissiya bilan aspektofotometr yordamida aniqlanadi.

2.10. Umumiy sikloksigenaza (COX) faolligini o'lchash

Miya homogenatida umumiy COX faolligi Elishay to'plami (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, AQSH) yordamida baholandi. Rang shakllanishi umumiy COX faolligiga to'g'ridan-to'g'ri proportsional edi. 590 nm chastotada absorbansni o'qish uchun mikroplata o'quvchi ishlatilgan.

2.11. BACE-1 va COX-2 gen ifodasi

Izolyatsiya qilingan miya RNKida BACE-1 va COX-2 ifodasi RT-PCR yordamida tahlil qilindi. Uchta asosiy bosqich: RNK ekstraktsiyasi, RNK tokDNKning konversiyasi va real vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi (RT-PCR).

Qiagen Valensiya, Kaliforniya, AQSh tomonidan taqdim etilgan to'plamlarning barcha bosqichlari. Birinchidan, RNK RNKda saqlangan miya namunasidan olingan. Ushbu bosqichda taxminan 100 mg miya to'qimasi namunasi 1 ml QIAzol lizis reagentida TissueRuptor yordamida gomogenlashtiriladi va xona haroratida 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi.

Miya lizati va QIAzol lizis reagenti aralashmasi xloroform bilan qo'shiladi va 15 soniya davomida kuchli chayqatiladi, so'ngra xona haroratida 2-3 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi.

Aralash 12, 000 × g da 15 daqiqa davomida 4 ◦C da santrifüj qilindi va uch faza rangsiz fazani (yuqori faza) hosil qildi, u RNK dan iborat va 1 hajm 70% etanol qo'shilgan holda to'plangan. bu.

Keyin 700 mkl namuna aylanma ustunga o'tkazildi va xona haroratida 8000 × g 15 soniya davomida santrifüj qilindi; oqim bekor qilindi. 700 µL RW1 buferi (to‘plamda taqdim etilgan) qo‘shilgandan va 8000× g da 15 soniya davomida santrifüjlangandan so‘ng, oqim o‘chirildi. Bosqich 500 mkL RPE buferi qo‘shilishi bilan davom ettirildi (to‘plamda taqdim etilgan) va 15 s 8000× g da sentrifugalash.

RNKdagi har qanday organik ifloslanishni yuvish uchun bu qadam ikki marta takrorlandi. Nihoyat, RNK 50 mL RNKazsiz suv qo'shib, 8000 × g da 1 daqiqa davomida santrifüj qilindi.

RNK kontsentratsiyasi ananodrop (nanodrop 2000c, Thermofisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) yordamida o'lchandi. Keyin olingan RNK cDNKga aylantirildi, u RT-PCRni amalga oshirish uchun ishlatilgan.

Birinchidan, 6 µL teskari transkripsiya asosiy aralashmasi bilan 14 µLof shablon RNK qo‘shildi (1 µL Quantiscript teskari transkriptaza, 4 µL Quantiscript RT buferi, 1 µL RT primer aralashmasi). Aralashtirgandan so'ng, u 42 ◦C da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi, so'ngra Quantiscript teskari transkriptaza inaktivatsiyasi uchun 3 daqiqa davomida 95 ◦C da inkubatsiya qilindi.

Hosil bo'lgan mahsulot cDNK edi va nihoyat, RT-PCR o'tkazildi. RT-PCR shartlari 5 daqiqa davomida 95 ◦C, keyin 10 daqiqa davomida 95 ◦C da 40 tsikl va 30 daqiqa davomida 60 ◦C sifatida o'rnatildi.

BACE-1 va COX-2 genlarining ifodasi ikki uy xo'jaligi geniga (-aktin va GAPDH) nisbatan miqdoriy aniqlandi va normallashtirildi. Nukleotidlar ketma-ketligining primerlari sichqonchaning BACE-1 (old50-GCATGATCATTGGTGGTATC-30: teskari 50-CCATCTTGAGATCTTGAC-CA-30) ​​va COX-2 ga asoslangan. (oldinga 50-GTGTGCGACATACTCAAGCAGGA) cDNK ketma-ketligi. -30: teskari 50-TGAAGTGGTAACCGCTCAGGTG-30), GAPDH (oldinga 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: teskari 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30) va -aktin (oldinga 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: teskari 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30).

Floresan o'lchovlari olindi va ularni baholash uchun Rotor-Gene 6000 dasturidan foydalanildi (Qiagen, Hilden, Germaniya).

Natijalar qiyosiy KT (ostona tsikli) yondashuvidan foydalangan holda B-aktin va GAPDH bo'lgan uy xo'jaligi genini normallashtirishdan keyin ifoda darajalari sifatida taqdim etildi. (1) tenglama namunaning genekspressiyasini hisoblash uchun ishlatilgan.

Har bir namunaning KT qiymati har bir gen (maqsadli gen va mos yozuvlar gen) uchun yaratilgan standart egri chiziq asosida olingan.

∆∆CT=∆CT namunasi - ∆CT nazorati (1)

qayerda

∆CT namunasi: maqsadli genning CT qiymati - mos yozuvlar genining CT qiymati

∆CT nazorati: maqsadli genning KT qiymati - mos yozuvlar genining CT qiymati

2.12. Statistik tahlil

Eksperimental ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etildi. Bir tomonlama ANOVA protsedurasi (Graph Pad versiyasi 9, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, AQSh) va Tukey-Kramerpost hoc testi statistik o'zgarishlarni tasniflash uchun ishlatilgan. Muhimlik 0.05 ehtimollik qiymati sifatida aniqlandi.

3. Natijalar

3.1. Keksa sichqonlarda Mahanimbine tomonidan yaxshilangan xotira

Sichqoncha modelidagi mahanimbinning fazoviy o'rganish va xotira qobiliyati MWM testi yordamida tekshirildi. Qochish kechikishi (EL), qochish masofasi (ED) va maqsadli kvadrantda sarflangan vaqt o'lchandi.

Bundan tashqari, tayanch-harakat faolligi sichqonlarning o‘rtacha suzish tezligi asosida ham ko‘rib chiqildi. 2A-rasmdan ko‘rinib turibdiki, keksa nazorat guruhi bugun 1-kun 3-dan (22.05 ± 1,70 s, 21,35 ± 1,85 s, 19,96 ± 2,34 s; mos ravishda, p <0,001);

Bu shuni ko'rsatdiki, keksa sichqonlar MWM testida o'rganish va xotira funktsiyalarida sezilarli tanqislikni aniqladi. Shu bilan birga, turli dozalarda (1 va 2 mg / kg) maxanimbin bilan og'iz orqali davolash keksa sichqonlarning EL darajasida yuqorida aytib o'tilgan o'zgarishlarning o'zgarishini ko'rsatdi.

1 mg/kg mahanimbin guruhi uchun EL qiymatlari 22.01 ± 1,60 s, 15,88 ± 1,54 s (p < 0.01) va 8 edi. 1, 2 va 3-kunlar uchun ,26 ± 0,93 s (p < 0.001), mos ravishda yoshi nazorati bilan solishtirganda, EL esa 2 mg/kg mahanimbin guruhi uchun qiymatlar 16.09 ± 0,33 s(p <0,05), 17,14 ± 0,57 s (p <0,05), 10,57 ± 0.86 s (p < 0,01), mos ravishda, keksa nazoratga parallel bo'lganda. 3-kuni mahanimbinning ikkala guruhining EL (1 va 2 mg / kg) yosh nazoratdan sezilarli darajada farq qilmadi.

Shakl 2. Mahanimbinning (A) qochish kechikishiga ta'siri, yashirin platformani topish uchun ketadigan vaqt. (B) Qochish masofasi, boshlang'ich nuqtadan yashirin platformani topgunga qadar bo'lgan masofa; (C) yashirin platformani topish uchun o'rtacha tezlik, hayvonning suzish tezligi; (D) prob testi, keksa sichqonlarning Morris suv labirint testidan foydalangan holda maqsadli kvadrantda o'tkazgan vaqti. Keksa sichqonlarda mahanimbin bilan qochishning kechikishi va qochish masofasida sezilarli yaxshilanishlar kuzatildi.

Bundan tashqari, davolanish keksa sichqonlarning maqsadli kvadrantida o'tkaziladigan vaqtni oshirdi. Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalangan (n {0}}). Bir tomonlama ANOVA (1-kun: F(3,20)=11.74, p < 0.001, 2-kun: F(3,20)=17.38,p < 0.001 va 3-kun: F(3,2{{69) }})=14.88, p < 0.001-kuni qochish uchun: F(3,20) {{ 26}}.22, p < 0.001, 2-kun: F(3,20)=28.62, p < 0,001 va 3-kun: F(3,20) {{40 }}.15, qochish masofasi uchun p < 0.001 1:F(3,20)=1.939, p > 0.05, 2-kun: F(3,20)=3.467, p > 0,05 va 3-kun: F(3,20)=2,497, o'rtacha tezlik uchun p > 0,05 F(3,20)=7,185, prob testi uchun p <0,01 Tukey-Kramer bir nechta taqqoslash testi.** p <0,01 va *** p <0,001 yosh nazorat bilan solishtirganda, # p <0,05, ## p <0,01 va ### p <0,001da keksa nazorat bilan solishtirganda.

Shakl 2B mahanimbinning boshlang'ich nuqtadan yashirin platformani topgunga qadar bosib o'tgan masofaga ta'sirini ko'rsatadi. Keksa nazorat guruhi 1, 2 va 3-kunlarda yashirin platformani topishdan oldin eng uzoq masofani bosib o'tdi (4,79 ± 0.73 m, 4.34 ± {{10}}.11 m va 4.38 ± 0.59 m; p < {{2{24}}}}.00 mos ravishda yosh nazorati bilan bog'liq bo'lsa (1,36 ± 0,31 m, 1,35 ±; 0,24 m va 0,78 ± 0,14 m);

1 mg/kg mahanimbin bilan oziqlangan keksa sichqonlar EDni sezilarli darajada kamaytirdi (2,17 ± 0, 11 m (p < 0. 01), 2,1 0 ± { {13}}, 24 m (p < 0.001), 0,89 ± 0,18 (mos ravishda p < 0,001) 1-kungacha 3-kun uchun qarilik nazorati mos keladi.

EDda sezilarli parallel pasayish 1, 2 va 3 kunlarda 2 mg/kg mahanimbin yuborilgan sichqonlarda kuzatildi (2.43 ± 0.28 (p < 0.01) , 2,78 ± 0,32(p < 0.001), 1,47 ± 0,30 (p <0,001);

Topshiriq davomida o'rtacha suzish tezligiga kelsak, guruhlar o'rtasida farqlar kuzatilmadi (2C-rasm). Bu mahanimbin keksa sichqonlarda motor funktsiyasi bilan bog'liq hech qanday lokomotor faollikni o'zgartirmaganligini ko'rsatadi.

Haqiqiy topshiriqdan 24 soat o'tgach, hayvonlarning xotirasini saqlashni baholash uchun zond sinovi (3-kun0) o'tkazildi. Keksa nazorat guruhi (2D-rasm) maqsadli kvadrantda kamroq vaqt o'tkazdi (10,10 ± 1,14% (p <0,001)) va maqsadli kvadrantga nisbatan ancha qisqargan vaqtni ko'rsatdi. yosh nazorat (19,53 ± 2,56%), keksa sichqonlar esa 1 mg/kg (20,27 ± 4,84%, p <0,01) va 2 mg/kg (17,85 ± 1,56%, p <0,05) maxanimbin bilan og'iz orqali og'iz orqali ishlov berilganda sezilarli darajada ko'rsatilgan. keksa nazorat bilan solishtirganda maqsadli kvadrantda ko'proq vaqt o'tkazish.

3.2. Mahanimbinning keksa sichqoncha miyasida MDA va GSH darajalariga ta'siri

Yosh nazoratdagi (3A-rasm) MDA darajalari yosh nazoratga (4,37 ± 0,09) nisbatan ancha yuqori (11,54 ± 0,88 mkM;p < 0.001) edi. mM). Keksa sichqonlarning miya gomogenatida MDA darajasining oshishi LPO faolligining yuqoriligini aks ettirdi, bu miya to'qimalarida oksidlovchi stressning ko'tarilishini ko'rsatdi.

Aksincha, mahanimbin (1 mg/kg, po) qo'llanilishi keksa sichqonlarda miya MDA darajasini sezilarli darajada kamaytirdi (7,56 ± 0, 35 mkM; p < 0.001). qari nazoratiga. 2 mg/kg mahanimbin (9,65 ± 0,51 mkM) bilan sezilarli o'zgarishlar qayd etilmadi.

Miya gomogenatidagi glutation (GSH) miqdori mahanimbinning antioksidant potentsialini ko'rsatdi. GSH ning statistik tahlili (3B-rasm) yosh nazorat guruhi (0.0028 ± 0.0004 mkmol/) oʻrtasida sezilarli pasayish kuzatildi. mg; p <0,001) yosh nazorat bilan bog'langanda (0,0447 ± 0,0029 mkmol/mg).

Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, mahanimbin (1 va 2 mg/kg, po) bilan davolash GSH darajasini o'zgartirdi, bu sezilarli darajada yuqori (0.0372 ± 0.{{8} {{10}} 38 mkmol/mg, mos ravishda p < 0,001 va 0,0282 ± 0,0041 mkmol/mg, p < 0,001);

3.3. Mahanimbine keksa sichqonchaning miyasida xolinergik faollikni yaxshilagan

4A-rasmda sichqonchaning miyasidagi ACh darajalari ko'rsatilgan. ACh yosh nazoratga (34,82 ± 0) mos keladigan yosh nazoratida (17,79 ± 1,54 mkM) nisbatan kamaygan (p < 0.001). 31 µM). Mahanimbinni qabul qilish (1 va 2 mg/kg), ammo sezilarli darajada oshdi (35,61 ± 0,85 mkM, (p < 0.001); 39,42 ± 0,88 mkM (p < 0,001); mos ravishda) miyadagi ACh darajasi keksalar nazorati bilan bog'liq.

4B-rasmda mahanimbinning miyadagi ACHE faoliyatiga ta'siri ko'rsatilgan. Yosh nazorat guruhida (204,80 ±1,55 U/L) AChE faolligi yosh nazorat (51,06 ± 1,36 U/L) bilan parallel ravishda sezilarli darajada oshdi (p <0,001).

Shunga qaramay, AChElevel 1 mg/kg (62.03 ± 4.64 U/L; p < 0.001) va 2 mg/kg (43.73 ± 4.76 U) bilan davolashda aniq inhibe qilingan. / L; p < 0,001) mahanimbin yoshi bilan bog'liq. Umuman olganda, mahanimbinning yuqori dozasini (2 mg / kg, po) qo'llash xolinergik faollik uchun yaxshi natijalar berdi, chunki u ACh darajasini oshirdi va AChE faolligini bostirdi.

For more information:1950477648nn@gmail.com