Marganets (II) komplekslari DNKning shikastlanishini kuchaytirish va CGAS-STING yo'lini faollashtirish orqali o'smaga qarshi immunitetni rag'batlantiradi.

Interferon genining siklik GMP-AMP sintaza-stimulyatorini faollashtirish (cGAS-STING) saraton kasalligini davolash uchun istiqbolli immunoterapevtik strategiyadir. Marganets (II) komplekslari MnPC va MnPVA (P=1, 10-fenantrolin, C=xlor va VA=valpik kislota) cGAS-STING yo'lini faollashtirishi aniqlandi. . Komplekslar nafaqat DNKni shikastlabgina qolmay, balki giston deasetilazlarni (HDAC) va poliadenozin difosfat-riboza polimerazasini (PARP) inhibe qilib, DNK shikastlanishini tiklashga to'sqinlik qildi va shu bilan DNK bo'laklarining sitoplazmaga oqib chiqishiga yordam berdi. DNK bo'laklari tug'ma immun javob va o'simta hujayralari va qo'shni immun hujayralari o'rtasida ikki tomonlama aloqani boshlagan cGAS-STING yo'lini faollashtirdi. Faollashtirilgan cGAS-STING I turdagi interferonlarni ishlab chiqarishni va yallig'lanishga qarshi sitokinlar (TNF-a va IL-6) sekretsiyasini yanada oshirdi, dendritik hujayralar va makrofaglarning o'simta infiltratsiyasini kuchaytirdi, shuningdek, sitotoksik T hujayralarini rag'batlantirdi. in vitro va in vivo saraton hujayralarini o'ldirish uchun. DNKni shikastlash qobiliyatini oshirganligi sababli, MnPC va MnPVA Mn2+ ionlariga qaraganda kuchliroq immunokompetentlik va o'smaga qarshi faollik ko'rsatdi va shu bilan saraton kasalligini davolashda kimyoimmunoterapevtik vositalar sifatida katta salohiyatni namoyish etdi.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

Kirish

O'smalarning qaytalanishi, metastazlari va dori-darmonlarga chidamliligi an'anaviy o'smaga qarshi dorilar uchun katta qiyinchiliklar tug'diradi.1 Immunoterapiya bemorlarning immun tizimini qo'llash yoki kuchaytirish orqali o'simta hujayralarini yo'q qilishning samarali strategiyasidir.2,3 So'nggi o'n yil ichida bir nechta saraton immunoterapiyalari, shu jumladan immun nazorat nuqtasi ingibitorlari, onkolitik virus va kimerik antigen retseptorlari T (CAR-T) hujayralari adaptiv o'smaga qarshi immunitetni oshirish uchun klinik amaliyotda qo'llanilgan.4-6 Shu bilan birga, birlamchi va adaptiv dori qarshiligi, immunitetning etarli darajada faollashuvi va o'simtaga xos yo'qolishi. Antigen nishonlari ko'pincha immunoterapiya samaradorligini pasaytiradi.7,8 Moslashuvchan o'smaga qarshi immunitet kuchli tug'ma immunitetga bog'liq.8 O'simtaga qarshi adaptiv immunitetni shakllantirish va qo'llab-quvvatlashdan tashqari, tug'ma immunitet tizimi xost hujayralarini himoya qilish uchun eng asosiy to'siq sifatida asosiy mas'uliyatni o'z zimmasiga oladi. o'simta hujayralarini tanib olish.9 Afsuski, o'simta rivojlanishi jarayonida xatarli hujayralar immunitetni nazorat qilishdan qochib, oxir-oqibat "sovuq" o'smalarga aylanadi.10,11 Shunday qilib, tug'ma immunitetni faollashtirish va uning adaptiv o'smaga qarshi immunitet bilan o'zaro ta'sirini osonlashtirish immunitetni kuchaytirishi mumkin. o'smalarga javob berish va immunoterapiyaning terapevtik ta'sirini yaxshilash. Interferon genlarining siklik GMP-AMP sintaza-stimulyatorlari (cGAS-STING) saraton immunoterapiyasi uchun istiqbolli maqsadlar sifatida paydo bo'lgan tug'ma immunitetning muhim tarkibiy qismlarini tashkil qiladi.12,13 cGAS-STING yo'lining faollashishi bir qator quyi oqimlarni keltirib chiqaradi. signalizatsiya hodisalari, shu jumladan TANK-bog'laydigan kinaz 1 (TBK1) va interferon tartibga soluvchi omil 3 (IRF3) ni stimulyatsiya qilish va jalb qilish, ular I turdagi interferonlar (IFN-Is) va yallig'lanishga qarshi omillar IL-6 va sekretsiyasini keltirib chiqaradi. TNF-a. 13,14 IFN keyinchalik dendritik hujayralarning (DC) etukligi va migratsiyasini rag'batlantiradi, tabiiy qotil (NK) hujayra vositachiligidagi sitotoksik ta'sirni va o'simtaga xos T hujayralarini kuchaytiradi, shu bilan xatti-harakatlarni tartibga solish uchun tug'ma va adaptiv immunitetni tartibga soladi. 15,16 Hozirgi vaqtda kichik molekulali og'iz agonisti MSA-2,17 tabiiy agonist siklik dinukleotidlar (CDNs)18 va ba'zi nano-tizimlar19-23 ning terapevtik jarayoni sichqon o'simtalari modellarida sinovdan o'tkazildi. cGAS-STING yo'liga aralashish. Marganets (Mn) ko'plab fiziologik jarayonlarda, shu jumladan o'smaga qarshi immunitet reaktsiyalarida muhim rol o'ynaydigan ozuqaviy mikroelementdir.24,25 Yaqinda Mn2+ ionlari ikki zanjirli DNK (dsDNA) sensorining sezgirligini oshirish uchun topildi. cGAS va ikkilamchi messenjer cGAMP ishlab chiqarishni ishga tushiradi, shu bilan cGAMP-STING bilan bog'lanish yaqinligini oshirish orqali STING faolligini oshiradi.12,26 Bundan tashqari, Mn{47}} ionlari CD funktsiyasini rag'batlantirish orqali o'simta rivojlanishini bilvosita inhibe qiladi8+ In vivo IFN ishlab chiqarishni rag'batlantirish orqali T hujayralari. 27 Shunga qaramay, Mn2+ ionlarining in vivo jonli ravishda toʻgʻridan-toʻgʻri qoʻllanilishi oʻsimta mikromuhitida samarali kontsentratsiyani kafolatlay olmaydi23 va ortiqcha Mn2+ ionlari qaytarilmas neyrotoksiklik va yurak-qon tomir toksikligi kabi tizim toksikligini keltirib chiqarishi mumkin.28 Mn komplekslari koʻproq. ligandlarning himoya taʼsiri tufayli biomolekulalar uchun barqaror va inert boʻlib, Mn2+ ionlarining toksikligini yumshata oladi. Biroq, hozirgacha cGAS-STING yo'lini faollashtirish uchun Mn kompleksi ishlatilmagan. Epigenetik modifikatsiyalar gen ekspressiyasini teskari tarzda o'zgartiradi, bu saratonning boshlanishi va rivojlanishiga va o'smaga qarshi immunitetni bostirishga yordam beradi. Epigenetik modifikatsiyaning teskari tabiati malign hujayralarni normal holatga qaytishiga imkon beradi.29,30 Giston deasetilazalar (HDAC) oqsil atsetilatsiyasi, xromatin dinamikasi, oqsil almashinuvi va DNKning shikastlanishiga javob beradi. HDAC ingibitorlari kuchli epigenetik modulyatorlar sinfi bo'lib, ularning maqsadi xromatin bo'lib, ko'pchilik yoki barcha o'sma turlariga ta'sir qiladi.31 HDAClarning inhibisyoni hech bo'lmaganda qisman giston atsetilatsiyasiga yordam beradi, natijada DNKning ikki zanjirli uzilishining shakllanishi va tiklanishi o'zgaradi ( DSB),32,33, bu saraton hujayralarida dori qarshiligini yo'qotishga hissa qo'shishi mumkin.34 HDAC ingibitorlari tomonidan qo'zg'atilgan bo'shashgan xromatin tuzilishi kimyoterapevtik agentlarning DNKga kirishini osonlashtirishi mumkin va shu bilan DNKning shikastlanishini kuchaytiradi,35 bu faollashuv uchun foydalidir. cGAS STING yo'li. Ba'zi HDAC inhibitörleri, masalan, valpik kislota (VA) - saraton hujayralarini DNKga zarar etkazuvchi terapiyaga sezgir qiluvchi I va II toifali HDAClarga (HDAC1/2) ta'sir qiladi.36

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Poliadenozin difosfat-riboz polimerazalar (PARPs) saratonning kimyoterapiyaga chidamliligi bilan bog'liq muhim oqsillardir. Bu fermentlar DNKning bir zanjirli uzilishlarini (SSB) ta'mirlash uchun juda muhimdir37 va apoptoz, immun javob, gen transkripsiyasi va yallig'lanish kabi bir nechta hujayra jarayonlarida ishtirok etadi. cGAS-STING yo'lini faollashtirish uchun cGAS tomonidan e'tirof etilgan sitozolik DNKning boyitilishiga olib keladi.41,42 PARP faolligini inhibe qilish uchun platina, ruteniy va oltinni o'z ichiga olgan bir qator saratonga qarshi metall komplekslari topildi.43, 44 Bu erda biz MnPC va MnPVA ikkita MnII komplekslarining immunostimulyatsiya va antitumor xususiyatlarini xabar qilamiz. Komplekslarning kimyoviy va kristall tuzilmalari 1-rasmda ko'rsatilgan. Bu komplekslarda 1,{12}}fenantrolin (P) toksik bo'lmagan DNK interkalatori, VA esa HADC ning inhibitoridir.31 VA atsetilatsiyani rag'batlantirishi mumkin. DNK bilan konjugatsiyalangan giston oqsillari, bo'shashgan xromatin ichida DNKning mavjudligini kuchaytiradi va harakatsiz o'simta bostiruvchi genlarni qayta faollashtiradi. DNKning shikastlanishini qo'zg'atish va o'smaga qarshi immunitetni rag'batlantirish orqali antiproliferativ faollikka ega komplekslar. Bir qator eksperimentlar shuni ko'rsatdiki, MnPC va MnPVA DNKni samarali shikastlagan, o'simta va immun hujayralarida cGAS-STING yo'lini faollashtirgan va IFN va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning sekretsiyasini oshirgan. Xususan, MnPVA HDAC1 / 2 va PARP1 faolligini inhibe qildi, shuning uchun cGAS-STING yo'lini MnPC ga qaraganda samaraliroq faollashtirdi. Barcha natijalar ham in vitro, ham in vivo tasdiqlangan. Bizning ma'lumotlarga ko'ra, MnPC va MnPVA eng ko'p funktsiyali MnII komplekslari bo'lib, ular asosan DNK shikastlanishi bilan boshlangan cGAS-STING yo'li orqali o'smaga qarshi immunitetni faollashtirish orqali o'simta hujayralarini bostiradi.

1-rasm MnPC va MnPVA ning kimyoviy va kristall tuzilmalari. Aniqlik uchun vodorod atomlari kiritilmagan.

Natijalar va muhokama

Kimyoviy va fizik xossalari

MnPC va MnPVA adabiyot usullari45,46 bo'yicha tayyorlangan va elementar tahlil, IQ spektroskopiyasi (S1†-rasm), elektron paramagnit rezonans (S2,† EPR-rasm) va rentgen kristallografiyasi bilan to'liq tavsiflangan. Kristal strukturaning parametrlari va tanlangan bog'lanish uzunligi va burchaklari S1 va S2 jadvallarida keltirilgan (ESI† ga qarang). Bu komplekslardagi Mn atomi koordinata soni 6 ga teng buzilgan oktaedral geometriyani ko'rsatdi. MnPC P21/c kosmik guruhi bilan monoklinik kristall sistemada kristallangan; MnII ikkita bidentat 1,{{10}}fenantrolin ligandlari va ikkita Mn-Cl bog'lari bilan to'rtta Mn-N bog' hosil qildi. Mn-N bog'lanish uzunligi 2,281 va 2,369 Å orasida o'zgarib turadi, ya'ni Mn-N1, Mn-N2, Mn-N3 va Mn-N4 bog'lanish uzunligi 2,369(4), 2,281(3), 2,341(3) ga teng. ) va mos ravishda 2,287(3) Å va N1–Mn–N2, N1–Mn–N4 va N2– Mn–N3 burchaklari 71,15(11) daraja , 97.86(11) daraja va 89.00(11) daraja. Bu tuzilma Abbos va boshqalar tomonidan bildirilganidan biroz farq qiladi, 45 bu erda MnPC P1 kosmik guruhi bilan triklinik kristalli tizimda kristallangan. Shunga ko'ra, bu holatlarda tegishli bog'lanish uzunliklari va burchaklari farqlanadi. Xabar qilingan tuzilishga o'xshab, 46 MnPVA monoklinik kristall tizimida C2/c kosmik guruhi bilan kristallangan, N2O4 donor to'plamiga ega. MnII mos ravishda 1,10-fenantrolinning ikkita N atomi va bitta suv molekulasining to'rtta O atomi va ikkita VA ligandlari bilan muvofiqlashtirilgan. VA dan biri monodentat ligand sifatida reaksiyaga kirishgan, ikkinchisi esa bidentat ligand edi. Mn– N1 va Mn–N2 ning bogʻlanish uzunligi mos ravishda 2.265(19) va 2.298(2) Å, Mn–O1, Mn–O2, Mn–O3 va Mn–O5 niki esa 2.2476(19), 2.260 (2), 2.0639 (18) va 2.1471 (17) Å. Kuchli N, Nxelatlovchi ligand sifatida 1,{79}}fenantrolin Mn komplekslarini demetallanishga qarshi barqarorlashtiradi. MnPC va MnPVA ning fosfat tamponli sho'r suvda (PBS, 0,5% v/v DMSO, pH 7,4 va 37 daraja) va hujayra madaniyati muhitida (10% FBS o'z ichiga olgan) barqarorligi UV ko'rinadigan spektroskopiya bilan o'rganildi (S3†-rasm). ). Vaqtga bog'liq bo'lgan UV spektrlari bu komplekslarning 72 soat ichida barqarorligini ko'rsatadi.

1-jadval MnPC va MnPVA ning IC50 qiymatlari (mM) 72 soatda turli hujayra chiziqlariga nisbatan, MnCl2, VA, CDDP va P mos yozuvlar sifatida. Ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish sifatida ko'rsatilgan (SD, n=3)

Antiproliferativ faollik

Insonning uch manfiy ko'krak saratoni (MDA-MB-231), odamning oshqozon osti bezi saratoni (PANC-1), odamning gepatotsellyulyar saratoni (HepG2), sichqonchaning ko'krak saratoni (4T1) hujayralariga qarshi birikmalarning antiproliferativ faolligi chiziqlari va insonning normal buyrak naychali epiteliysi (HK-2) hujayra chizig'i MTT tahlili bilan baholandi. Malumot birikmalari sifatida MnCl2, VA, sisplatin (CDDP) va 1{10}}fenantrolin (P) ishlatilgan. 72 soatda yarim maksimal inhibitiv kontsentratsiyalar (IC50) 1-jadvalda keltirilgan. MnPC va MnPVA barcha sinovdan o'tgan saraton hujayralari qatorlariga, xususan MDA-MB-231 va PANC-1ga nisbatan kuchli antiproliferativ faollikni ko'rsatdi. CDDP ga sezgir boʻlmagan hujayralar mos ravishda 8- va 11- barobar yuqori faollikni koʻrsatadi. MnPC va MnPVA ning HepG2 va 4T1 ga qarshi antiproliferativ faolligi CDDP ga o'xshaydi. Qizig'i shundaki, MnPC ham, MnPVA ham HK-2 hujayralariga nisbatan kam toksiklikni ko'rsatdi, IC50 qiymatlari CDDPga qaraganda bir oz yuqoriroq. Aksincha, MnCl2, VA va P bu hujayra liniyalarida deyarli toksik bo'lmagan, bu adabiyotlar bilan mos keladi.13,36 Ushbu natijalarga ko'ra, quyidagi tadqiqotlar MnPC va MnPVA ning MDA-MB ga ta'siriga qaratilgan. -231 ta katak.

Hujayralarni qabul qilish va DNKning shikastlanishi

Komplekslarning MDA-MB-231 hujayralarida Mn bo'yicha to'planishi 24 soat davomida ICP-MS koinkubatsiyasi bilan o'lchandi. 2A-rasmda ko'rsatilganidek, to'planish MnPVA > MnPC > MnCl2 tartibiga rioya qilib, ularning antiproliferativ faolligiga mos keladi. MDA-MB-231 hujayralarida DNK bilan bog'langan Mn ni ICP-MS yordamida aniqladik. 2B-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA MnCl2 ga qaraganda ko'proq DNKni bog'lash qobiliyatini namoyish etdi, ehtimol ularning yuqori hujayrali o'zlashtirilishi tufayli. Fosforlangan giston g-H2AX DNKning ikki zanjirli uzilishlarining (DSBs) sezgir belgisidir.47 Mn komplekslari keltirib chiqaradigan DNK shikastlanishini baholash uchun immunoblotting yordamida gH2AX ifodasini aniqladik. 2C-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA 24 soatda MDA-MB-231 hujayralarida g-H2AX ifodasini oshirdi. Ma'lumki, P ning metall komplekslari samarali DNK interkalatorlaridir; 48,49 Biroq, P ning o'zi DNKning shikastlanishiga deyarli olib kelmagan (S4†-rasm). 4T1 o'simtasi bo'lgan sichqonlarning o'simta to'qimalarida g-H2AX ifodasi, shuningdek, 16 kun davomida har 2 kunda bir marta har bir birikma (kg uchun 1,3 mg Mn) bilan immunomavjudlikka qarshi davolash orqali tekshirildi. MnPC va MnPVA o'simta to'qimalarida DNKni samarali ravishda shikastlagan, MnCl2 va PBS esa g-H2AXga deyarli ta'sir qilgan (S5†-rasm). MDA-MB{42}} hujayralaridan madaniy muhit supernatantiga chiqarilgan dsDNK Mn komplekslari bilan ELISA to'plamini havo bilan ishlov berish orqali aniqlandi. 2D-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC yoki MnPVA bilan ishlov berilgan hujayra madaniyati muhitidagi dsDNK tarkibi boshqa guruhlardagiga qaraganda yuqoriroq edi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA genomik DNKning beqarorligini va sitozolik DNK darajasini oshirishi mumkin. DNK shikastlanishining tabiati birinchi navbatda buzoq timus DNK-etidiy bromid (EB) tizimining flüoresans o'zgarishlarini o'lchash yo'li bilan o'rganildi. EB interkalator bo'lib, DNK bilan bog'langanda flüoresansning sezilarli o'sishini ta'minlaydi, flüoresans siljishda esa pasayadi.50 MnPC va MnPVA floresans intensivligini o'rtacha darajada kamaytirdi (S6-rasm, bu komplekslar o'zaro bog'lanishi mumkinligini ko'rsatadi. P. ning planar tuzilishi tufayli bog'langan EBni almashtirish uchun DNK yivlariga. Biroq, o'zaro ta'sir mustahkam kovalent bog'lanish emas. Ba'zi Mn komplekslari hujayra ichidagi reaktiv kislorod turlarini (ROS) hosil qilishi va oksidlovchi stressni keltirib chiqarishi mumkin,51 va shuning uchun biz MDA-MB-231 hujayralarida ROSni 2′,7′ -dikloro-fluoresein diasetat yordamida konfokal tasvirlash orqali aniqladik. DCFH-DA) 18 soat davomida Mn kompleksiga ta'sir qilishdan keyin ROS floresan zond sifatida. 3-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA nazorat yoki MnCl2, ayniqsa MnPVA bilan solishtirganda hujayra ichidagi ROS flüoresansini kuchaytirdi, bu ular hujayra DNKsiga oksidlovchi zarar etkazishi mumkinligini ko'rsatdi. DNKning shikastlanishi nafaqat saraton hujayralarini o'ldirishga yordam beradi, balki cGAS-STING yo'lini faollashtirish orqali o'smaga qarshi immunitetni rag'batlantiradi.14,52

2-rasm. ICPMS tomonidan aniqlangan hujayraning qabul qilinishi (A) va DNK bilan bog'langan Mn (B), g'arbiy blot (C) bilan aniqlangan DNK shikastlanish belgisi g-H2AX ifodasi va hujayradan tashqari dsDNK Elishay to'plami (D) yordamida aniqlangan. MDA-MB -231 hujayralari 24 soat davomida mos ravishda MnCl2, MnPC, MnPVA va VA (6 mM) bilan ishlov berildi.

Hujayra siklini to'xtatish va apoptoz

Uyali DNKning shikastlanishiga javob (DDR) hujayra siklining nazorat nuqtasini ushlab turishni boshqaradigan signalizatsiya bilan bog'liq.53 Mn komplekslarining MDA-MB-231 hujayralarining hujayra tsikliga ta'siri ow sitometriya bilan tahlil qilindi. 4A-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA nazorat va MnCl2 bilan solishtirganda G2 fazasining to'liq qulashiga sabab bo'lgan holda G1 fazasini to'xtatishni biroz oshirdi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA tomonidan qo'zg'atilgan DNK shikastlanishi DNK sintezining keyingi bosqichini jiddiy ravishda blokirovka qilgan. Demak, MnPC va MnPVA ning antiproliferativ mexanizmi MnCl2 dan farq qiladi. MDA-MB-231 hujayralarining o'lim rejimi komplekslar bilan 72 soat davomida ishlov berilgandan so'ng va aneksin V-FITC va propidiy yodid (PI) bilan bo'yalgandan keyin ow sitometriya orqali tekshirildi. 4B va S7-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat va MnCl2 bilan solishtirganda, MnPC va MnPVA tomonidan qo'zg'atilgan apoptoz (erta + kech) tezligi mos ravishda 84.0% va 87,4% ga yetdi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA kuchli proapoptotik qobiliyatga ega, bu ularning antitumor faolligi bilan chambarchas bog'liq.

cistanche qo'shimchasi foydalari - immunitetni oshiradi

Mitoxondriyal membrana potentsiali

Mitoxondriyalar tug'ma immunitetning markaziy ishtirokchilaridir va mitoxondriyal DNK (mtDNK) tug'ma immun tizimining agonisti sifatida tan olingan.54 Ma'lum qilinishicha, sitozolik DNK ham, mtDNK ham naqshni aniqlash retseptorlari bilan bog'langan va cGAS-STING signalizatsiya yo'lini ishga tushirgan. 55 MnPC va MnPVA ishtirokida mitoxondriyadan mumkin bo'lgan mtDNK chiqarilishini o'rganish uchun biz mitoxondriyal membrananing yaxlitligini konfokal tasvirlash orqali JC-1 yordamida agregatlar hosil qiluvchi va qizil rangli yoki qizil rangli nurlarni ko'rsatadigan floresan zond sifatida tekshirdik. DJm darajasi yuqori bo'lgan oddiy mitoxondriyalar, monomer sifatida mavjud bo'lib, DJm darajasi past bo'lgan shikastlanganlarda yashil flüoresans beradi. 56 5-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA JC-1 bilan bo'yalgan MDA-MB-231 hujayralarida qizil flüoresansning intensivligini sezilarli darajada kamaytirdi. MnPC va MnPVA bilan ishlov berilgan hujayralar uchun "yashil (G) va qizil (R)" flüoresans nisbati mos ravishda 4,91 va 5,66 ni tashkil qiladi, bu nazorat (2,35) va MnCl{18}}bilan ishlov berilgan hujayralar ( 1.75). Kuzatishlar shuni ko'rsatadiki, mitoxondriyal membrananing yaxlitligi MnPC va MnPVA tomonidan buzilgan, bu cCAS-STING yo'lini ishga tushirish uchun mtDNKning sitozolga oqib ketishini osonlashtirishi mumkin.

3-rasm 18 soat davomida inkubatsiyadan so'ng MDA-MB{3}} hujayralarida Mn komplekslari (12 mM) tomonidan hosil qilingan ROSning floresan konfokal tasviri va DCFH-DA (10 mM) bilan 30 daqiqa davomida bo'yalgan.

4-rasm. 24 soat davomida turli birikmalar (6 mM) bilan inkubatsiyadan so‘ng MDA-MB-231 hujayralarining hujayra siklini to‘xtatish (A) va inkubatsiyadan keyin oqim sitometriyasi orqali MDA-MB-231 hujayralarining apoptotik tahlili turli birikmalar bilan (6 mM) 72 soat (B).

HDAClarning faoliyati va ifodasi

HDAC ingibitorlari xromatin strukturasini o‘zgartirish va DNKni tiklashga xalaqit berish orqali saraton hujayralarini DNKga zarar etkazuvchi terapiyaga sezgir qiladi.33,35 I sinf HDAC inhibitori sifatida VA tanlab HDAC1 va HDAC2 fermentlarini nishonga oladi, genomik barqarorlikni yo‘q qilish va o‘simtani inhibe qilish uchun DNKning shikastlanish signalini modulyatsiya qiladi. in vivo proliferatsiya. 31 VA ning MnPVA tarkibiga kiritilishi HDAC inhibisyonunu va DDR induksiyasini yanada samaraliroq kuchaytirishi mumkin. Shuning uchun biz Mn komplekslarining 48 soat davomida koinkubatsiyadan so'ng MDA-MB-231 hujayralarida umumiy HDAC faolligiga ta'sirini aniqladik. 6A-rasmda ko'rsatilganidek, MnPVA umumiy HDAC faolligini sezilarli darajada inhibe qildi, inhibitiv faollik VA dan taxminan 1,5 baravar yuqori. Biz HDAC1/2 oqsillarining MDA-MB-231 hujayralarida ifodalanishini immunoblotlash yo‘li bilan o‘rgandik. 6B va C-rasmda ko'rsatilganidek, MnPVA nazorat bilan solishtirganda HDAC1 va HDAC2 ifodasini pasaytirdi. MnPC HDAC faolligini inhibe qilgan bo'lsa-da, HDAC1/2 oqsillarining ifodalanishiga deyarli ta'sir ko'rsatmadi. Kutilmaganda, ma'lum bo'lgan HDAC inhibitori sifatida VA ushbu konsentratsiyada (6 mM) HADC1 / 2 ning aniq inhibisyonini ko'rsatmadi, bu HADCda VA inhibisyonini kuchaytirishda Mn muvofiqlashtirishning muhim rolini ta'kidladi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPVA HDAC1/2 ning samarali inhibitori bo'lib, u DDRni rag'batlantiradi va cGAS-STING yo'lini qo'zg'atadi va shu bilan antitumor immunitetini rag'batlantiradi. Biz 4T1 o'simtasi bo'lgan sichqonlarning o'simta to'qimalarida HDAC ifodasini har bir birikma bilan immunoforesans bilan davolash orqali aniqladik. 6D-rasmda ko'rsatilganidek, MnPVA HDAC1 ifodasini pasaytirgan, MnPC va MnCl2 esa HDAC1 ga ozgina yoki deyarli ta'sir qilgan.

Cistanche tubulosa-Antitumorning foydalari

PARP1 va apoptotik oqsillarni ifodalash

PARPlar DNK lezyonlarini tiklashda asosiy rol o'ynaydi. PARP ingibitorlari DNK ta'mirlanishiga to'sqinlik qiladi, bu esa DNK fragmentlarining sitozolga eksport qilinishiga olib keladi, bu esa cGAS vositachiligida tug'ma immunitet reaktsiyasini qo'zg'atadi.42 DNK zanjirining uzilishi uchun sensor oqsili sifatida PARP1 DNK shikastlanish joylariga joylashadi va uni tiklashda ustunlik qiladi. DNK, shuning uchun saraton terapiyasi uchun muhim nishonga aylanadi. Kaspazalarning, ayniqsa kaspaza-3 faollashuvi apoptozning o'ziga xos belgisi sifatida qaraladigan PARP1 ning parchalanishi orqali apoptozni boshlashi mumkin. MDA-MB-231 hujayralar western blot usuli bilan tekshirildi. 7-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA kaspaza-3 ifodasini sezilarli darajada oshirdi va nazorat va boshqa birikmalar bilan solishtirganda PARP1 ni ajratdi. PARP1 ning faollashtirilgan kaspaza-3 orqali boʻlinishi DNK bilan bogʻlovchi domenni katalitik domendan ajratadi va shu bilan PARP faollashuvi va DNK lezyonlarining tiklanishiga yoʻl qoʻymaydi. Bundan tashqari, PARP1 ning inhibisyonu o'simta infiltratsiya qiluvchi T-limfotsitlar darajasini oshirishi va tug'ma immunitet reaktsiyalarini tartibga solishi mumkin. DNKni tiklash disfunktsiyasi apoptozni qo'zg'atishi mumkin bo'lgan global DNK aberratsiyasini boshlash potentsialiga ega. Proapoptotik Bax va antiapoptotik Bcl-xL oqsillari apoptozda muhim rol o'ynaydi.38 Shuning uchun biz western blot yordamida 48 soat davomida turli birikmalar bilan ishlov berilgandan so'ng MDAMB{23}} hujayralarida ularning ifodasini aniqladik. MnPC va MnPVA Bax ifodasini sezilarli darajada oshirdi va Bcl-xL ifodasini pastga tushirdi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA PARP bilan bog'liq kaskad effekti sifatida apoptotik oqsillarni tartibga solish orqali apoptozni rag'batlantirishi mumkin. VA yuqori dozalarda HDAC1 / 2 ifodasini inhibe qilish orqali o'simta hujayralari apoptozini qo'zg'atishi mumkin bo'lsa-da,58 bu holatda bu apoptotik oqsillarga sezilarli ta'sir ko'rsatmadi, bu Mn komplekslarining ustunligini bildiradi.

5-rasm MnCl2, MnPC va MnPVA (6 mM) bilan mos ravishda 36 soat davomida inkubatsiya qilingandan va JC-1 lyuminestsent probi bilan bo'yalgandan so'ng MDA-MB{2}} hujayralarining floresan tasvirlari.

cGAS-STING yo'lining faollashishi

Ma'lumki, PARP1 ingibitori saraton hujayralarida cGAS-STING signalizatsiya kaskadli javobini keltirib chiqarishi mumkin.40,59 cGAS virusli, apoptotik, ekzosomal, mitoxondrial, mikronukleusli DNKni o'z ichiga olgan turli sitozolik dsDNKlar qatorini taniydigan tug'ma immun sensordir. , va retroelement kelib chiqishi.60,61 MnPC va MnPVA tomonidan qo'zg'atilgan sitozolik DNKning boyitishi cGAS-STING yo'lini faollashtirish uchun qulay sharoit yaratdi, bu keyinchalik TBK1, IRF311 ni jalb qilish va faollashtirish orqali quyi oqim signalizatsiya hodisalarini boshlaydi. Shuning uchun biz ushbu oqsillarning MDA-MB-231 hujayralarida ifodalanishini har bir birikmaga 24 soat davomida taʼsir qilgandan keyin immunoblotlash orqali aniqladik. 8A-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA cGAS, p-STING, p-TBK1 va p-IRF3 ifodasini sezilarli darajada oshirdi. Bundan tashqari, biz komplekslarning inson monositik leykemiya THP-1 hujayralarida cGAS-STING yo'liga ta'sirini immunoblotting orqali tekshirdik. 8B-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA cGAS, p-STING, p-TBK1 va p-IRF3, ayniqsa MnPVA ning sezilarli darajada yuqori regulyatsiyasini keltirib chiqardi, bu ular cGAS-STING yo'lini faollashtirganligini ko'rsatdi, bu esa blokirovka qilish uchun tug'ma immunitetni boshlaydi. THP-1 hujayralariga zarar bermasdan o'simtadan chiqib ketadi va adaptiv immunitetni rag'batlantiradi (jadval S3†). Aksincha, MnCl2 faqat p-STING yoki p-TBK1 darajasini oshirdi va nazorat bilan solishtirganda cGAS va p-IRF3 ifodasiga deyarli ta'sir ko'rsatmadi, bu uning past konsentratsiyalarda DNK shikastlanishi va PARP1 parchalanishini keltirib chiqara olmasligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. , va shuning uchun p-IRF3 faollashuvi kabi quyi oqim signalizatsiya hodisalarini ishga tushira olmaydi. Ushbu natijalarga asoslanib, biz MnPC va MnPVA o'simta hujayralari ichida yadro va mitoxondriyal DNK shikastlanishini keltirib chiqardi va DNK bo'laklarini sitoplazmaga chiqardi, keyin esa cGAS-STING yo'lini faollashtirdi. Faollashtirilgan cGAS-STING saraton hujayralarida qarish va apoptoz signalizatsiya yo'llarini to'g'ridan-to'g'ri faollashtirishi mumkin62, bu ikki tomonlama antitumor immun javobiga olib keladi. Shunga qaramay, MDA-MB-231 va THP-1 hujayralarida STING, TBK1 va IRF-3 ifodasi deyarli ta'sir ko'rsatmadi (S8†-rasm).

6-rasm (A) HDAC faolligi, (B) HDAC1/2 oqsillarining ifodasi va (C) har bir birikma (6 mM) bilan inkubatsiya qilinganidan keyin MDA-MB-231 hujayralarida GAPDHga nisbatan mos keladigan protein tarkibi 48 soat mos ravishda Elishay to'plami va western blotting yordamida aniqlanadi; (D) 16 kun davomida har 2 kunda bir marta har bir birikma (kg boshiga 1,3 mg Mn) bilan davolashdan so'ng sichqonchaning 4T1 o'simta to'qimalarida HDAC1 ifodasining immunofluoresans tasvirlari. *p < 0.05, **p < 0.01 va ***p < 0.001.

Interferonlar va yallig'lanishga qarshi sitokinlar

TBK1 va IRF3 faollashuvi IFN-b, TFN-a va IL-6 kabi IFN va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ekspressiyasi va sekretsiyasini keltirib chiqarishi mumkin.59,63 Shunday qilib, THP tomonidan chiqarilgan hujayradan tashqari IFN-I{ {8}} hujayralar va MDAMB-231 hujayralari tomonidan chiqarilgan IFN-b, TNF-a va IL-6 24 soat davomida turli birikmalar bilan Elishay assay inkubatsiyasidan oldin o‘lchandi. 9-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA nazorat, MnCl2 va VA ga nisbatan IFN-I sekretsiyasini keskin oshirdi. Shu bilan birga, ular IFN-b va TNF-a sekretsiyasini ham qo'zg'atdilar. Biroq, IL-6 darajasi faqat o'rtacha darajada oshdi. IFN-I (IFN-a va IFN-b) o'simtalarga qarshi immunitetda ko'plab immunostimulyator rol o'ynaydi, masalan, tug'ma va adaptiv immunitetni bog'lash orqali o'simta hujayralarini o'ldirish uchun DCs va o'simtaga xos T hujayralarining kamolotini va antigen taqdimotini rag'batlantirish.13 TNF -a siklik dinukleotid (CDN) vositachiligidagi o'tkir saraton nekrozida va immun infiltratsiyani sozlashda ishtirok etadi.59 Natijalar MnPC va MnPVA o'simtalarga qarshi immun javoblarni rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatadi va ular o'smalarning dori qarshiligini engib o'tishlari mumkinligini ko'rsatadi. kimyoimmunoterapevtik mexanizm.

Suyak iligidan olingan hujayralarning (BMDC) etukligi

BMDCs miyeloid progenitors va yetilmagan makrofaglar, granulotsitlar va dendritik hujayralar (DC) dan tashkil topgan miyeloid kelib chiqishi heterojen hujayralarni ifodalaydi; ular T-hujayra faollashuvi va o'simta bilan bog'langan makrofag (TAM) faollashuvini bostirish orqali immun javobida ishtirok etadi.64 Asosiy antigen taqdim qiluvchi hujayralar (APC) sifatida DC lar tug'ma va adaptiv immun tizimlari o'rtasidagi aloqa uchun ko'prik vazifasini bajaradi. 22

7-rasm 48 soat davomida turli birikmalar (6 mM) ta'siridan so'ng MDA-MB-231 hujayralarida DNK ta'mirlanishi va apoptoz bilan bog'liq oqsillarning ifodalanishi va a-tubulinga nisbatan mos keladigan protein tarkibi. *p < 0.{{10}}5, **p <0,01 va ***p <0,001.

8-rasm. MDA-MB -231 (A) va THP -1 (B) hujayralari 6 va 3 mM turli xil birikmalar bilan ishlov berilgandan so'ng, g'arbiy blot orqali aniqlangan cGAS-STING yo'lida ishtirok etgan oqsillarning ifodasi mos ravishda 24 soat davomida va GAPDH ga nisbatan mos keladigan protein tarkibi. *p < 0.{{10}}5, **p <0,01 va ***p <0,001.

9-rasm THP-1 hujayralarida (A) IFN-I, (B) IFN-b, (C) IL-6 va (D) MDA-MB{{da TNF-a sekretsiyasi. 24 soat davomida turli birikmalar (6 mM) bilan ishlov berilgandan so'ng 7}} hujayralar. Maʼlumotlar oʻrtacha ± SD (n {{10}}) sifatida koʻrsatilgan; *p < 0.05, **p < 0,01 va ***p < 0,001.

Yetuk va faollashtirilgan DClar T-limfotsitlarga o'ziga xos antigenni taqdim etishi va o'smalarga qarshi moslashuv reaktsiyasini boshlashi mumkin.65 MnPC va MnPVA bilan faollashtirilgan cGAS-STING yo'li BMDClarning kamolotini keltirib chiqarishi mumkinligini tekshirish uchun biz BMDC'lardagi sirt belgilarini sinovdan o'tkazdik. 24 soat davomida turli birikmalar bilan inkubatsiya qilingan MDA-MB-231 hujayralarining supernatanti bilan ow sitometriyali havo bilan ishlov berish. 10A-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat bilan solishtirganda, MnPC va MnPVA CD86 va CD80 etilish belgilarining birgalikda ifodalanishini sezilarli darajada oshirib, mos ravishda 36,62% va 43,15% ga etdi. Biroq, MnCl2 nazoratdan o'rtacha darajada oshib ketdi. Bundan tashqari, II toifadagi asosiy gistologik moslashuv kompleksi (MHC-II) konstitutsiyaviy ravishda T hujayralariga antigenik peptidlarni taqdim etadigan APClar tomonidan ifodalanadi. Natijada, adaptiv immun javoblar boshlanadi, saqlanadi va tartibga solinadi.8 10B va C-rasmda ko'rsatilganidek, MnPC va MnPVA MHC-II ifodasini taxminan 1 ga oshirdi.5-nazorat reaktsiyasi . Ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, bu komplekslar sitotoksik T-limfotsitlarning immun reaktsiyalarini qo'zg'atishi mumkin bo'lgan BMDClarning kamolotini sezilarli darajada qo'zg'atgan.

10-rasm (A) CD86 va CD80 ning birgalikda ifodalanishi, (B) BMDClarda CD11c+CD86+CD80+ miqdoriy tahlillari, (C) MHC-II ifodasi BMDC yuzasida va (D) 24 soat davomida turli birikmalar (6 mM) bilan inkubatsiya qilingan MDA-MB-231 hujayralarining supernatanti bilan ishlov berilgandan so‘ng oqim sitometriyasi orqali aniqlangan MHC-II ning o‘rtacha intensivligi.

PBMCs bilan saraton hujayralarining birgalikda madaniyati

Komplekslarning immunomodulyatsion ta'sirini qo'shimcha baholash uchun MDA-MB{1}} hujayralarining dori bilan faollashtirilgan inson periferik qon mononuklear hujayralari (PBMCs) ishtirokida hayotiyligi MTT tahlili bilan adabiyot usuliga muvofiq baholandi.66 Saraton hujayralari yoki PBMC'li saraton hujayralari nazorat sifatida o'rnatildi. 11-rasmda ko'rsatilganidek, PBMCs yo'qligida MnPC va MnPVA hujayra hayotiyligini mos ravishda 64,98% va 62,02% ga bostirdi. Mn kompleksi bo'lmagan PBMCs bilan hujayralarning birgalikdagi madaniyati faqat bazal sitotoksiklikni ko'rsatdi, o'rtacha hujayra hayotiyligi 81,49%. Biroq, PBMC mavjud bo'lganda, MnPC va MnPVA hujayra hayotiyligini mos ravishda 38,19% va 36,98% ga bostirdi. Ushbu konsentratsiyada (6 mM) ko'pchilik PBMClar hali ham tirik (S9†-rasm). Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA MDA-MB-231 hujayralariga sitotoksik ta'sir ko'rsatish uchun PBMClarning immun javobini faollashtirishi va shu bilan saraton hujayralariga nisbatan sezilarli sinergik ta'sir ko'rsatishi mumkin.

O'tkir toksiklik va in vivo saratonga qarshi faollik

MnII komplekslarining o'tkir toksikligi ayol Balb/c sichqonlarida baholandi. Har bir kompleksni tomir ichiga yuborishdan keyin o'rtacha o'lim dozasi (LD50) va tana vaznining o'zgarishi aniqlandi. MnPC va MnPVA ning LD50 16.0 mos ravishda 8 ± 2,16 va 25,16 ± 3,19 mg kg-1 ni tashkil etdi (S1-rasm0†), bu esa bundan ancha yuqori. CDDP (4.{{60}}6 ± 1.02 mg kg-1 ).67 MnPC va MnPVA bilan davolash qilingan sichqonlarda tana vaznida sezilarli o'zgarishlar kuzatilmadi. Natijalar MnPC va MnPVA sutemizuvchilar uchun past toksik ekanligini ko'rsatadi. Qizig'i shundaki, VA ni Mn kompleksiga ulash umumiy toksiklikni susaytirdi yoki biomoslashuvni oshirdi. Bundan tashqari, in vivo MnPC va MnPVA ning saratonga qarshi faolligini baholash uchun 4T1 ko'krak saratoniga ega sichqoncha modellari yaratilgan. 12-rasmda ko'rsatilganidek, sichqonlarni PBS, MnCl2, MnPC va MnPVA (kg boshiga 1,3 mg Mn) bilan 16 kun davomida davolagandan so'ng, MnPC va MnPVA MnCl2 ga qaraganda o'simta o'sishini samaraliroq inhibe qildi. 16-kuni MnPC va MnPVA bilan davolash qilingan sichqonlar uchun o'rtacha o'simta hajmi (A, B) mos ravishda 554,78 ± 43,76 va 348,01 ± 39,61 mm3 gacha, PBS- va MnCl uchun esa kamaygan.2- davolash qilingan sichqonlar mos ravishda 1182,01 ± 95,87 va 784 ± 64,93 mm3 edi. PBS-, MnCl 2-, MnPC- va MnPVA bilan davolash qilingan sichqonlar uchun o'rtacha o'simta og'irligi (C) mos ravishda 1,41 ± 0,13, 0,95 ± 0,19, 0,82 ± 0,19 va 0,59 ± 0,1 g ni tashkil etdi. Shubhasiz, MnPVA ning o'simtani inhibe qiluvchi ta'siri MnPC va MnCl2 dan ustun edi, bu MnPVA tomonidan HDAClarning ifodalanishini samarali inhibe qilish bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, tana vazni (D), omon qolish va umumiy organ anatomiyasida hech qanday aniq patologik anormallik yoki shikastlanish kuzatilmadi (S11†-rasm). Ushbu natijalar MnII komplekslari saraton kasalligini davolash uchun istiqbolli dori nomzodlari ekanligini ko'rsatadi.

11-rasm. 48 soat davomida aralash faollashtirilgan PBMC (6 mM) bilan birgalikda inkubatsiya qilingandan so'ng MDA-MB-231 hujayralarining o'rtacha hayotiyligi (%). Ma'lumotlar o'rtacha ± SD (n=3) sifatida ko'rsatilgan; **p < 0.01 va ***p < 0,001.

In vivo saratonga qarshi immun javob

MnII komplekslarining in vivo immunitetni stimulyatsiya qilish qobiliyati 4T1 o'smalari bo'lgan Balb/c sichqonlarida sinovdan o'tkazildi. O'simta, taloq va o'simtani oqizuvchi limfa tugunlari (LN)dagi immun hujayralarining holati ow sitometriya yordamida tahlil qilindi. va sitotoksik T-limfotsitlarning (CTL) induktsiyasi etuk bo'lmagan DC larni faollashishini talab qiladi,8,9 ular CD11c+ CD80+ CD86+ hujayralari sifatida belgilangan.68 13A va B-rasmda ko'rsatilganidek. , MnPVA bilan davolash qilingan sichqonlarda CD80+ va CD86+ (ref. 69) birgalikda stimulyator retseptorlari ifodasi bilan belgilangan etuk DC ulushi LNlarda yuqoriroq (45,59%) edi. mos ravishda PBS, MnCl2 va MnPC bilan ishlov beriladi. Makrofaglar immun tizimining ajralmas qismlari bo'lib, o'simta mikromuhitini modulyatsiya qiladi.70 Vazifalariga ko'ra, makrofaglar o'simtasimon M1 va protumoral M2 fenotipik faollashuv holatlariga bo'linadi.71 M1 makrofaglari TNF-a, IL-12 bilan belgilanadi. , CD80, CD86 va o'simta hujayralarini to'g'ridan-to'g'ri o'ldirish70, M{32}}kabi TAMlar esa makrofag mannoz retseptorlari 1 (MMR yoki CD206)ning yuqori ifodalanishi va o'simta hujayralarining o'sishini rag'batlantirishi bilan tavsiflanadi. shuningdek kuchli immunosupressiv faollikni namoyon etadi. Ma'lumki, HDAC ingibitorlari makrofaglarning qutblanishida harakatdagi shiflikni kuchaytirishi va DNK ta'mirlanishining oldini olishdan tashqari M1 fenotipini kuchaytirishi mumkin.72 Shuning uchun biz sitometriya yordamida taloq va o'smadagi makrofaglarning qutblanishini aniqladik. Mn komplekslari bilan keyingi davolash. 13C–E va S12A–C-rasmda ko'rsatilganidek, MnPVA bilan ishlov berilgan sichqonlarda CD206+ bilan belgilangan M2 fenotipi sezilarli darajada bostirildi va CD86+ bilan belgilangan M1 fenotipi sezilarli darajada oshdi. Natijalar shuni ko'rsatadiki, MnPVA makrofaglarning M2 dan M1 fenotipigacha polarizatsiyasini samarali tarzda qo'zg'atgan. MnCl2 va MnPC ham CD86 ifodasini oshirdi, lekin PBS bilan solishtirganda faqat CD206 ni ozgina ta'sir qildi. Ayni paytda, etuk DC va makrofaglar tomonidan chiqariladigan IFN-b, IL-6 va TNF-a Elishay tomonidan o'lchandi. 13F va G-rasmda ko'rsatilganidek, MnPVA IFN-b va TNF-a darajasini PBS, MnCl2 va MnPCga qaraganda samaraliroq kuchaytirdi, bu esa o'simta hujayralarini o'ldirish uchun T hujayralarini keltirib chiqarishi mumkin. Biroq, IL-6da sezilarli o'zgarish kuzatilmadi (S13†-rasm).

12-rasm MnPC, MnPVA va MnCl2 ning 4T1 o'simtali sichqonlarga terapevtik ta'siri, PBS nazorati sifatida. (A) Kesilgan o'smalarning rasmlari, (B) o'simta hajmi, (C) o'simta og'irligi va (D) PBS, MnCl2, MnPC va MnPVA bilan davolashdan keyin sichqonlarning tana vazni, mos ravishda, bir marta kg uchun 1,3 mg Mn. 16 kun davomida har 2 kunda. **p < 0}}.01 va ***p < 0.001.

13-rasm Etuk DC lar (CD80+CD86+ CD11c+ da yopilgan) va o'simtani o'tkazuvchi limfa tugunlari (A va B) bo'yicha miqdoriy tahlillar, makrofaglarning qutblanishi (CD{6}}CD{ Oqim sitometriyasi bilan aniqlangan sichqonning 4T1 o'simta to'qimalarida (C-E) CD11b+ da yopilgan {7}} va sichqonlar zardobidagi IFN-b (F) va TNF-a (G) ning ELISA tahlillari bilan davolashdan keyin. har bir birikma (kg boshiga 1,3 mg Mn) 2 kunda bir marta 16 kun davomida. Maʼlumotlar oʻrtacha ± SD (n=3) sifatida taqdim etilgan. *P < 0.05; **P < 0.01; ***P <0,001.

MnPC va MnPVA tomonidan DC va makrofaglarda cGAS-STING yo'li faollashgandan so'ng, ajratilgan IFNs-I va proinamatuar sitokinlar sitotoksik limfotsitlarni ishga tushirishi mumkin edi.59 Shuning uchun biz sitotoksik T hujayralarining (CD{{3}) faollashuvini qo'shimcha baholadik. ) va mos ravishda o'simta va taloq to'qimalarida yordamchi T hujayralari (CD4+ ). 14A va S12D–F†-rasmda ko'rsatilganidek, o'smalardagi CD{7}} T hujayralari (ko'k kvadrat) MnPVA bilan davolash qilingan sichqonlarda PBS (3,53%) bilan davolash qilinganlarga nisbatan samarali faollashtirilgan (9,18%). ), MnCl2 (4,48%) va MnPC (6,05%); CD4+ T hujayralari (qizil kvadrat) ham biroz faollashdi va natijalar komplekslar bilan davolash qilingan taloqdagi natijalarga qarama-qarshi edi. 14B-rasmda faollashtirilgan (CD69+) o'simtaga kiruvchi CD8+ T hujayralarining chastotalari keskin oshganligi ko'rsatilgan. Bu natijalarning barchasi MnPVA cGAS-STING yo'lining faollashuvi tufayli in vivo jonli ravishda kuchli immunitet reaktsiyalarini rag'batlantirishga qodir ekanligini ko'rsatadi.

14-rasm CD8+ (ko‘k kvadrat) va CD4+ T (qizil kvadrat) katakchalari (A) va CD8+ T hujayralari orasidagi CD69+ kichik to‘plamining foizlari ( B) sichqonchaning 4T1 o'simta to'qimalarida har bir birikma bilan (1 kg uchun 1,3 mg Mn) 2 kunda bir marta 16 kun davomida oqim sitometriyasi bilan aniqlanadi.

Harakat mexanizmi

15-rasmda ko'rsatilganidek, Mn komplekslari uchun harakat taklif qilindi. O'simta hujayralarida MnPC yoki MnPVA yadro va/yoki mitoxondriyal DNKni shikastlab, g-H2AX ning yuqori regulyatsiyasiga olib keladi; shu bilan birga, kompleks HDAC1/2 va PARP1 faolligini inhibe qildi va shu bilan DNKni tiklash qobiliyatini buzdi va DNKning shikastlanishini kuchaytirdi. Yig'ilgan DNK bo'laklari yadro va/yoki mitoxondriyadan sitoplazmaga chiqarildi va STINGni faollashtirish uchun cGAS tomonidan tanildi. STING, o'z navbatida, TBK1 va IRF3 ning fosforlanishini va yadroga translokatsiyasini rag'batlantirdi, IFN, IL-6 va TNF-a ishlab chiqarishni qo'zg'atdi. Keyinchalik bu IFNlar va proinomatator sitokinlar yadrodan sitozolga va keyinchalik o'simta mikromuhitiga ajratildi, bu erda ular DC va makrofaglarning kamolotga erishishi va antigen taqdimotini rag'batlantirdi va saraton hujayralarini o'ldirish uchun sitotoksik T hujayralarini faollashtirdi. Shunga o'xshash hodisalar makrofaglar kabi immun hujayralarida ham sodir bo'lgan va cGAS-STING-TBK1 yo'li faollashgan. cGAS-STING yo'lining faollashuvi tug'ma immunitet reaktsiyalarini va o'simta hujayralari va qo'shni immun hujayralari o'rtasida ikki tomonlama aloqani boshlab, o'smalarni o'ldirish ta'sirini kuchaytirdi.21 Shunday qilib, Mn komplekslari kimyoterapiya va immunoterapiya o'rtasidagi sinergiya tufayli kuchli antitumor faolligini ko'rsatdi. . Ushbu jarayonlarning aksariyati in vitro yoki in vivo isbotlangan.

15-rasm Marganets komplekslari uchun taklif qilingan ta'sir mexanizmi.

Xulosa

Ko'payib borayotgan dalillar shuni ko'rsatadiki, ko'plab metall komplekslari o'simta hujayralariga to'g'ridan-to'g'ri sitotoksik ta'sir ko'rsatishdan tashqari, immunosupressiv mikro-muhitni qayta qurish uchun ham o'simta, ham immun hujayralar bilan o'zaro ta'sir qiladi.73 Ushbu tadqiqotda biz MnPC va MnPVA ikkita MnII kompleksini rag'batlantirish orqali saratonni to'xtatish uchun potentsial kimyoimmunoterapevtiklar sifatida taqdim etamiz. tug'ma immunitet reaktsiyalari, shuningdek, DNKning qo'sh zanjirlarini buzish. Ushbu ko'p funktsiyali komplekslar saraton hujayralarini nafaqat DNKga zarar etkazish, balki harakatsiz immunitet reaktsiyalarini qayta faollashtirish orqali ham o'ldiradi. Birinchidan, ular DNKni sindirish vazifasini bajaradi, DNKning oksidlovchi shikastlanishini keltirib chiqaradi va DNK parchalarini hosil qiladi; ikkinchidan, ular HDAC va PARP1 ingibitorlari sifatida ishlaydi, DNK shikastlanishini tiklashni oldini oladi va DNK lezyonlarini kuchaytiradi; uchinchidan, ular cGAS-STING yo'lining agonistlari bo'lib, DC va makrofaglarning kamolotini rag'batlantirish uchun IFN va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning sekretsiyasini keltirib chiqaradi va o'simta hujayralarini o'ldirish uchun o'simtaga xos T hujayralarini yanada rag'batlantiradi.

cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi

Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing

【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Umuman olganda, MnPC va MnPVA cGAS-STING yo'lini samarali faollashtirdi va in vitro va in vivo saraton hujayralarining o'sishini chekladi. VA ni MnII kompleksiga bog'lash uning HDAClarga inhibisyonini keskin kuchaytirdi va kompleksning antiproliferativ faolligini kuchaytirdi va Mn komplekslarining hosil bo'lishi MnCl2 va 110-fenantrolinning antiproliferativ faolligini sezilarli darajada oshiradi. Jiang va boshqalardan beri. Birinchi marta Mn2+ ning cGAS-STING yo'liga rag'batlantiruvchi faolligi haqida xabar berilgan,12 Mn komplekslarida bunday xususiyat topilmagan. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, MnPC va MnPVA ning cGAS-STING yo'lini rag'batlantirish qobiliyati o'simtali va immun hujayralardagi MnCl2 yoki Mn2+ga qaraganda ancha yuqori, chunki ular cGASni faollashtirish uchun sitoplazmada ko'proq DNK fragmentlarini qo'zg'atgan. -STING yo'li. Topilmalar shuni ko'rsatadiki, yanada kuchli cGAS-STING agonistlarini DNKni shikastlovchi yoki DNKni tiklashni blokirovka qiluvchi ligandlar bilan MnII komplekslarini qurish orqali olish mumkin.

Ma'lumotnomalar

1 SL Shiao, AP Ganesan, HS Rugo va LM Coussens, Genes Dev., 2011, 25, 2559–2572.

2 A. Ribas va JD Volchok, Fan, 2018, 359, 1350-1355.

3 P. Sharma va JP Allison, Science, 2015, 348, 56-61.

4 M. Yi, D. Jiao, X. Xu, Q. Liu, X. Xan va K. Vu, Mol. Saraton, 2018 yil, 17, 129.

5 O. Xemminki, JM Dos Santos va A. Xemminki, J. Hematol. Onkol., 2020, 13, 84. 6 S. Yu, A. Li, Q. Liu, T. Li, X. Xan va K. Vu, J. Gematol. Onkol., 2017, 10, 78.

7 P. Sharma, S. Hu-Lieskovan, JA Wargo va A. Ribas, Cell, 2017, 168, 707-723.

8 A. Li, M. Yi, S. Qin, Y. Song, Q. Chu va K. Vu, J. Gematol. Onkol., 2019, 12, 35.

9 A. Said, X. Ruan, J. Su va S. Ouyang, Adv. Sci., 2020, 7, 1902599.

10 LL van der Woude, MAJ Gorris, CG Figdor va IJM de Vries, Trends Cancer, 2017, 3, 797–808.

11 DS Chen va I. Mellman, Tabiat, 2017, 541, 321–330.

12 C. Vang, Y. Guan, M. Lv, R. Chjan, Z. Guo, X. Vey, X. Du, J. Yang, T. Li, Y. Van, X. Su, X. Huang va Z. Jiang, Immunitet, 2018, 48, 675–687.

13 Y. Song, Y. Liu, HY Teo, ZB Hana, Y. Mei, Y. Zhu, YL Chua, M. Lv, Z. Jiang va X. Liu, hujayra. Mol. Immunol., 2021, 18, 1571-1574.

14 Q. Chen, L. Sun va ZJ Chen, Nat. Immunol., 2016, 17, 1142-1149.

15 F. McNab, K. Mayer-Barber, A. Sher, A. Wack va A. O'Garra, Nat. Rev. Immunol., 2015, 15, 87-103.

16 X. Liu, X. Chjan, X. Vu, D. Ma, J. Vu, L. Vang, F. Liu, D. Yan, C. Chen, Z. Mao va B. Ge, Tabiat, 2018, 563 , 131–136.

17 BS Pan, SA Perera, JA Piesvaux, H. Woo, DF Wyss, S. Xu, DJ Bennett va GH Addona, Science, 2020, 369, 935.

18 RD Luteijn, SA Zaver, BG Gowen, SK Wyman, NE Garelis, L. Onia, SM McWhirter, GE Katibah, JE Corn, JJ Woodward va DH Raulet, Nature, 2019, 573, 434–438.

19 L. Hou, C. Tian, ​​Y. Yan, L. Zhang, H. Zhang va Z. Zhang, ACS Nano, 2020, 14, 3927–3940.

20 M. Gao, YQ Xie, K. Lei, Y. Zhao, A. Kurum, S. Van Herck, Y. Guo, X. Hu va L. Tang, Adv. Ther., 2021, 4, 2100065.

21 Q. Luo, Z. Duan, X. Li, L. Gu, L. Ren, X. Zhu, X. Tian, ​​R. Chen, X. Chjan, Q. Gong, Z. Gu va K. Luo, Adv. . Funktsiya. Mater., 2021, 32, 2110408.

22 H. Tian, ​​G. Vang, V. Sang, L. Xie, Z. Chjan, V. Li, J. Yan, Y. Tian, ​​J. Li, B. Li va Y. Dai, Nano Bugun, 2022 yil, 43, 101405.

23 C. Vang, Z. Sun, C. Zhao, Z. Chjan, X. Vang, Y. Liu, Y. Guo, B. Chjan, L. Gu, Y. Yu, Y. Xu va J. Vu, J. Nazorat ostidagi nashr, 2021, 331, 480–490.

24 H. Haase, Immunitet, 2018, 48, 616-618.

25 KJ Horning, SW Caito, KG Tipps, AB Bowman va M. Aschner, Annu. Rev. Nutr., 2015, 35, 71–108.

26 X. Sun, Y. Chjan, J. Li, KS Park, K. Xan, X. Zhou, Y. Xu, J. Nam, J. Xu, X. Shi, L. Vey, YL Ley va JJ Moon, Nat. Nanotexnol., 2021, 16, 1260–1270.

27 M. Lv, M. Chen, R. Zhang, V. Zhang, C. Vang, Y. Zhang, X. Vey, Y. Guan, YC Liu, Q. Mei, V. Xan va Z. Jiang, hujayra Res. ., 2020, 30, 966–979.

28 SL O'Neal va W. Zheng, Curr. Atrof-muhit. Health Rep., 2015, 2, 315–328.

29 E. Li, Nat. Rev. Genet., 2002, 3, 662–673.

30 M. Guo, Y. Peng, A. Gao, C. Du va JG Herman, Biomark. Res., 2019, 7, 23.

31 A. Duenas-Gonsales, M. Candelaria, C. Peres-Plascecia, E. Peres-Cardenas, E. de la Cruz-Hernandez va LA Herrera, saraton kasalligini davolash. Rev., 2008, 34, 206–222.

32 HV Diyabalanage, ML Granda va JM Hooker, Cancer Lett., 2013, 329, 1-8.

33 T. Robert, F. Vanoli, I. Chiolo, G. Shubassi, KA Bernstein, OA Botrugno, D. Parazzoli, A. Oldani, S. Minucci va M. Foiani, Nature, 2011, 471, 74-79.

34 JH Li, ML Choy, L. Ngo, SS Foster va PA Marks, Proc. Natl. akad. Sci. AQSh, 2010, 107, 14639–14644.

35 KL Jin, JY Park, EJ Noh, KL Hoe, JH Lee, JH Kim va JH Nam, J. Gynecol. Onkol., 2010, 21, 262–268.

36 M. Gottlicher, S. Minucci, P. Zhu, A. Schimpf va S. Giavara, EMBO J., 2001, 20, 6968-6978.

37 JS Brown, B. O'Carrigan, SP Jekson va TA Yap, Cancer Discovery, 2017, 7, 20-37.

38 AN Weaver va ES Yang, Front. Onkol., 2013, 3, 290.

39 FJ Bock va P. Chang, FEBS J., 2016, 283, 4017–4031.

40 S. Cerboni, N. Jeremiah, M. Gentili, U. Gehrmann, C. Conrad, S. Amigorena, F. Rieux-Laucat va N. Manel, J. Exp. Med., 2017, 214, 1769–1785.

41 C. Pantelidou, O. Sonzogni, M. De Oliveria Taveira, AK Mehta, AJL Guerriero, GM Wulf va GI Shapiro, Cancer Discovery, 2019, 9, 722-737.

42 J. Shen, W. Zhao, Z. Ju, L. Vang, Y. Peng, M. Labrie, TA Yap, GB Mills va G. Peng, Cancer Res., 2019, 79, 311-319.

43 NA Yusoh, H. Ahmad va MR Gill, ChemMedChem, 2020, 15, 2121–2135.

44 F. Mendes, M. Groessl, AA Nazarov, YO Tsybin, G. Sava, I. Santos, PJ Dayson va A. Casini, J. Med. Chem., 2011, 54, 2196–2206.

45 S. Abbos, F. Rashid, E. Ulker, S. Zaib, K. Ayub, S. Ulloh, MA Nadim, S. Yusuf, R. Ludvig, S. Ali va J. Iqbol, J. Biomol. Tarkibi. Dyn., 2021, 39, 1068–1081.

46 L. Tabriziy, P. MakArdl, M. Ektefan va X. Chiniforoshan, Inorg. Chim. Acta, 2016, 439, 138–144.

47 H. Zhang, T. Yang, Y. Vang, Z. Vang, Z. Zhu, ZJ Guo va XY Vang, Dalton Trans., 2021, 50, 304-310.

48 R. Jastrza˛b, M. Nowak, M. Skroba´ nska, A. Toli´ nska, M. Zabiszak, M. Gabryel, L. Marciniak va MT Kaczmarek, Koord. Kimyo. Rev., 2019, 382, ​​145–159.

49 Y. Cheng, L. Lv, L. Zhang, Y. Tang va L. Zhang, J. Mol. Struct., 2021, 1228, 129745. 50 Z. Zhu, Z. Vang, C. Zhang, Y. Vang, H. Zhang, Z. Gan, ZJ Guo va XY Vang, Chem. Sci., 2019, 10, 3089–3095.

51 C. Slator, Z. Molfi, V. Makki va A. Kellett, Redox Biol., 2017, 12, 150-161.

52 TJ Hayman, M. Baro, T. MacNeil, C. Phoomak, TN Aung, T. Sandoval Schaefer, BA Burtness, DL Rimm va JN Contessa, Nat. Kommun., 2021, 12, 2327.

53 RM Chabanon, M. Rouanne, CJ Lord, JC Soria, P. Pasero va S. Postel-Vinay, Nat. Rev. Saraton, 2021, 21, 701-717.

54 AP Wes va GS Shadel, Nat. Rev. Immunol., 2017, 17, 363- 375.

55 AP West, W. Khoury-Hanold, M. Staron, MC Tal, CM Pineda, SM Lang, M. Bestwick, BA Duguay, N. Raimundo, DA MacDuff, SM Kaech, JR Smiley, RE Means, A. Iwasaki va GS Shadel, Tabiat, 2015, 520, 553–557.

56 S. Jin, Y. Hao, Z. Zhu, N. Muhammad, Z. Zhang, K. Vang, Y. Guo, ZJ Guo va XY Vang, Inorg. Chem., 2018, 57, 11135–11145.

57 NJ Curtin va C. Szabo, Nat. Rev. Drug Discovery, 2020, 19, 711–736.

58 J. Chen, FM G'azavi, V. Bakkar va Q. Li, Mol. Saraton, 2006 yil, 5, 71.

59 SM Harding, JL Benci, J. Irianto, DE Discher, AJ Minn va RA Greenberg, Tabiat, 2017, 548, 466–470.

60 EJ Sayour va DA Mitchell, J. Immunol. Res., 2017, 17, 3145742.

61 BJ Francica, A. Ghasemzadeh, AL Desbien, D. Theodros, KE Sivick, AB Sharabi, ML Leong, SM McWhirter, TW Dubensky Jr, DM Pardoll va CG Drake, Cancer Immunol. Res., 2018, 6, 422–433.

62 C. Vanpouille-Box, S. Demaria, SC Formenti va L. Galluzzi, Saraton hujayrasi, 2018, 34, 361-378.

63 SR Vu, MB Fuertes, L. Korrales, S. Spranger, MJ Furdyna, MY Leung, KA Fitsjerald, ML Alegre va TF Gajewski, Immunitet, 2014, 41, 830-842.

64 C. Belli, D. Trapani, G. Viale, P. D'Amico, BA Duso, P. Della Vigna, F. Orsi va G. Curigliano, saraton kasalligini davolash. Rev., 2018, 65, 22–32.

65 BU Schraml, J. van Blijswijk, S. Zelenay, PG Whitney, A. Filby, SE Acton, NC Rogers, N. Moncaut, JJ Carvajal va C. Reis e Sousa, Cell, 2013, 154, 843-858.

66 AA van de Loosdrecht, E. Nennie, GJ Ossenkoppele, RHJ Beelen va MMAC Langenhuijsen, J. Immunol. Methods, 1991, 141, 15–22.

67 S. Zhang, X. Zhong, H. Yuan, Y. Guo, D. Song, F. Qi, Z. Zhu, XY Vang va ZJ Guo, Chem. Sci., 2020, 11, 3829–3835.

68 Y. Li va E. Seto, Sovuq bahor bandargohi istiqboli. Med., 2016, 6, a026831.

69 C. Chen, Y. Tong, Y. Zheng, Y. Shi, Z. Chen, J. Li, X. Liu, D. Zhang va H. Yang, Kichik, 2021, 17, e2006970.

70 A. Mantovani, F. Marchesi, A. Malesci, L. Laghi va P. Allavena, Nat. Rev. Clin. Onkol., 2017, 14, 399–416.

71 B. Ruffell va LM Coussens, Saraton hujayrasi, 2015, 27, 462-472.

72 W. U, N. Kapate, CW t. Shilds va S. Mitragotri, Adv. Dori vositalarini yetkazib berish rev., 2020, 17, 251–266.

73 B. Englinger, C. Pirker, P. Heffeter, A. Terenzi, CR Kowol, BK Keppler va V. Berger, Chem. Rev., 2019, 119, 1519–1624.