Intraserebroventrikulyar-xinolin kislotasi kalamush modelida diosmin bilan bog'liq neyroproteksiya va xotirani yaxshilash haqida mexanik tushuncha: mitoxondrial funktsiyalar va antioksidantlarning tirilishi 3-qism

2. Materiallar va usullar

2.1. Eksperimental hayvonlar. .is tadqiqotiga IAEC tomonidan № li protokol asosida ruxsat berilgan. ASCB/IAEC/14/20/145. AlbinoWistar kalamushlari (jinsiy, vazni 200 g dan 250 g gacha, yoshi 8 oydan 9 oygacha) sun'iy harorat (23 ± 2 daraja), 12:12 soat qorong'i/yorug'lik ketma-ketligi ostida odatdagi o'lchamdagi polipropilen kubsimon korpuslarda saqlangan. muassasa hayvonlar uyi ichida namlik (40 ± 10%). .e kemiruvchilar o'z xohishiga ko'ra standart oziqlantiruvchi oziq-ovqat (Ashirwad Manufacturers, Punjab) va tozalangan suv bilan oziqlangan.

Erkak va ayol o'rtasidagi munosabatlar va xotira har doim katta e'tiborni tortdi. Ma'lumki, erkak gormonlari jismoniy rivojlanish, salomatlikni saqlash, jinsiy rivojlanish va jinsiy funktsiyani rag'batlantirishda muhim rol o'ynaydi. Bundan tashqari, yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, erkak gormonlari xotira bilan chambarchas bog'liq.

Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, erkaklar ma'lum xotira vazifalarini ayollarga qaraganda yaxshiroq bajaradilar. Misol uchun, erkaklar odatda fazoviy xotirada ayollarga qaraganda yaxshiroq ishlaydi va buning sababi erkak gormonlarining hipokampusga ta'siri. Gippokamp - bu fazoviy xotirani qayta ishlaydigan miya maydoni. Erkak gormonlari gipokampus funktsiyasini rag'batlantirishi va shu bilan erkaklarning fazoviy xotirasini yaxshilashi mumkin.

Biroq, ayol gormonlari ham xotiraga ijobiy ta'sir ko'rsatadi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ayol gormonlari miyada xotira bilan bog'liq genlarning ifodalanishiga yordam beradi va hipokampusdagi neyronlar soni va funktsiyasini oshiradi va shu bilan ayollar xotirasini yaxshilaydi. Bundan tashqari, ayol gormonlari stressni engillashtiradi, neyron hujayralari o'limini inhibe qiladi, miya neyronlarini himoya qiladi va ayollar xotirasini yanada yaxshilaydi.

Bu shuni ko'rsatadiki, erkak gormonlari ham, ayol gormonlari ham xotirani yaxshilashga ijobiy ta'sir ko'rsatadi. Erkaklar va ayollar turli xil xotira ko'rsatkichlariga ega, ularning har biri o'zining afzalliklari va kamchiliklariga ega, ammo bu erkaklar ayollarga qaraganda yaxshiroq xotiraga ega yoki ayollar erkaklarnikiga qaraganda yaxshiroq xotiraga ega degani emas. Shuning uchun biz jinsni xotira o'lchovi sifatida ishlatmasligimiz kerak. Har bir inson o'z foydasiga to'liq o'ynashi va doimo xotirasini yaxshilashi kerak.

Nihoyat, erkakmi yoki ayolmi, biz jismoniy salomatligimiz va ruhiy holatimizga e'tibor qaratishimiz va xotiramizni yaxshilash yo'lini to'g'ri tanlashimiz kerak. Masalan, doimiy ravishda yangi narsalarni o'rganish, muntazam yashash odatlarini rivojlantirish va hissiy barqarorlikni saqlash xotirani yaxshilashga ijobiy ta'sir ko'rsatadi. Keling, xotirani yaxshilash va o'zimiz uchun yaxshi kelajak yaratish usullarini doimiy ravishda o'rganish va mashq qilish uchun birgalikda harakat qilaylik. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak. Cistanche xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche an'anaviy xitoy tibbiyoti bo'lib, ko'plab noyob effektlarga ega, ulardan biri xotirani yaxshilashdir. Cistanche samaradorligi uning tarkibidagi turli faol moddalar, jumladan, tanin kislotasi, polisakkaridlar, flavonoid glikozidlar va boshqalardan kelib chiqadi. Ushbu ingredientlar miya sog'lig'ini ko'p jihatdan yaxshilashi mumkin.

Xotirani yaxshilashning 10 ta usulini bilish tugmasini bosing

Hayvonlarning barcha protseduralari faqat CPCSEA, GOI, Nyu-Dehli ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshiriladi. .e hayvonlarni qo'riqlovchilar va qo'riqchilar hayvonlar kogortalariga osonlashtirilgan turli terapevtik rejimlar haqida ko'r edi. Hayvonlar bo'yicha tergov sinovlari o'tkazildi, tanishish davomiyligi kamida o'n besh hafta davom etdi.

Hayvonlar yordamida barcha tekshiruvlar kuniga 0900- va 1600-soat oralig'ida amalga oshirildi.2.2. Dori va kimyoviy moddalar. Diosmin (DSM: 520-27-4), xinolin kislotasi (QA: 89-00-9) va standart analitlar Merck (Hindiston) dan sotib olingan.

Natriy dihidrogen fosfat (NaH2PO4), natriy gidroksidi (NaOH), kaliy fosfat ikki asosli (K2HPO4), nitrobluetetrazolium (NBT), fenazin metosülfat (5-metilfenaziniy metilsulfat), etilenditin (SAB), etilendiamin (SA) 5}}[4-(2-gidroksietil)piperazin-1-il]etansulfonik kislota (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(karboksimetil) amino]etoksi]etan (EGTA), riboflavin, natriy siyanid (NaCN), natriumazid (NaN3), tetrasodiy pirofosfat, vodorod peroksid (H2O2), NADH disodiy (DPNH), NADPH tetrasodiy (koenzim II qaytarilgan tetrafospho kislotasi), Folin va Ciocalteu fenol (FCR) va sulfosalitsil kislotasi (5-SSA) reaktivi (HiMedia Laboratories, Maxarashtra, Hindiston); diglisin, muzli sirka kislotasi (CH3COOH), Ellman reaktivi (3-Karboksi-4-nitrofenildisulfid, DTNB), azabenzol (C5H5N) va natriy laurilsulfat (SLS) (LobaChemie, Mumbay, Hindiston); 4,6-Digidroksi-2-merkaptopirimidin (2-TBA), disodiy karbonat (Na2CO3) va (2-merkaptoetil)trimetilamoniy yodid asetat (TCI kimyoviy moddalari, Hindiston); rux sulfat (ZnSO4), Rochelle tuzi (kaliy natriy L(+)-tartrat), 2-(1-Naftilamino)etilamin dihidroxlorid, azotli natriy (NaNO2) va p-aminobenzensulfanilamid (SiscoResearch Laboratories, India) ); butil spirti (Fisher Scientific, Hindiston) ishlatilgan.2.3. Xinolin kislotasining intraserebroventrikulyar in'ektsiyasi.

Hayvonlar in'ektsiya uchun steril suv yordamida intraperitoneal (ip) ketamin (90 mg / kg) va ksilazin (10 mg / kg) kokteylini yuborish orqali behushlik bilan ta'minlandi. .etanani egilgan holatda issiq isitish yostig'iga yotqizishdi va stereotaksik jarrohlik asbobi o'rnatish joyiga bosh qo'yishdi. .e bosh terisi o'rta sagittal nuqtadan kesildi va terini bir-biridan ajratib, bosh suyagi ochildi.

Ikki lateral qorinchalarning har biri o'zboshimchalik bilan tanlangan va bosh suyagida parietal suyak zerikib ketgan (stereotaksik koordinatalar -0, bregmadan anteroposteriordan 8 mm, midsagittal chokdan ± 1,5 mm mediolateral va dorsoventral bo'shliqdan ±3,6 mm. ) burr teshigi qilish uchun [21].

Birinchi kuni xinolinatsid (QA) eritmasi yangi (240 nmol) PBS (Na+-K+ [PO4]2- tamponlangan sho'r suv, pH 7,4) ichida hosil bo'ldi va asta-sekin Gamilton mikroshprisi yordamida oqim tezligida AOK qilindi. Kalamushlarning chap yoki o'ng miya qorinchasida 1 µl/daqiqada 5 dan 6 minutgacha davom etadi, in'ektsiya hajmi 5 µl ICV-vosita [22].

To'liq preparatni inokulyatsiya qilgandan so'ng, preparatning miya omurilik suyuqligida tarqalishini ta'minlash va uning regurgitatsiyasini oldini olish uchun mikroigna 4-5 daqiqa davomida joyidan chiqarilmadi. .e ekvivalent hajmdagi (10 µl) PBS-avtomobil bir xil ishlaydigan shamratlarda ICV yuborilgan, ammo QA yuborilmagan.

Giyohvand moddalarni kiritishdan so'ng, teshiklar yopishtiruvchi vosita (rux fosfat, PYRAX®) yordamida tiklandi va terini tikish amalga oshirildi. Kontaminatsiyani (bakterial o'sishni) oldini olish uchun Neosporin® pro-nata qo'llanildi.

Operatsiyadan keyingi sepsisdan qochish uchun Orizolin (Zydus Cadila), 30 mg/kg (ip) dozasi qo'llanildi. Har bir kalamushga operatsiyadan keyingi gipotermiyani oldini olish uchun iliq muhit (37 ± 0,5 daraja) taqdim etildi. Har bir kalamushga operatsiyadan keyin yetti kun davomida yarim qattiq ovqat (qafas ichida) va suv bepul berildi va alohida qafasga (30 × 23 × 14 sm3) joylashtirildi.

2.4. Eksperimental protokol. DSM kalamushlarga intraperitoneal (ip) yo'l orqali normal fiziologik eritmada 0,5% dimetilsulfoksid vosita (doza-hajmi 5 ml/kg) yordamida tana vazniga (bw) 5{4}}va 100 mg/kg dozalarda yuborilgan [17].

Hayvonlar tasodifiy 5 ta klasterga bitta ko'r-ko'rona rejimda (n � 5) ajratildi: (i) sham (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv) QA + DSM100 va (v) QA + DNP. Kalamushlar 1-kuni QA (QA-ICV) intraserebroventrikulyar kiritilishi yoki soxta operatsiyaga duchor bo'ldi.

DSM 21 kun ketma-ket har kuni 120 daqiqadan so'ng QA-ICVdan so'ng birinchi kundan boshlab qo'llanildi. Donepezil (DNP) ushbu tadqiqotda standart dori sifatida ishlatilgan va ketma-ket 21 kun davomida QAICV yuborilgan kalamushlarga (3 mg/kg, ip) AOK qilingan.

Thesham va QA nazorat guruhidagi hayvonlarga 1 kundan 21 kungacha transport vositasi (steril 0, 5% dimetilsulfoksid normal fiziologik eritmada 5 ml/kg dozada) yuborildi. 1.2.5-rasm. Lokomotor faoliyati.

Barcha kalamush klasterlarida 5 daqiqa davomida aktofotometr qurilmasi yordamida o'rtacha tayanch-harakat faolligi hujjatlashtirilgan. Alohida hayvon aktofotometrga 3 daqiqa iqlimlashtirish uchun joylashtirildi. Keyin kalamushlarga 5 daqiqa vaqt berildi va natijalar 5 daqiqada hisoblab chiqildi [11].2.6. Rotarod testi.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 soniyadan so'ng novda minutiga to'qqizta aylanish tezligida (rpm) aylanadi.

Qabul qilish sinovlaridan so'ng, silindrsimon milga alohida kalamush o'rnatildi va aylanish tezligi 50 sekunddan ortiq davom etadigan 6 rpm (dastlabki tezlik) dan 30 rpm (yakuniy tezlik) 10 soniya doimiy tanaffusda oshirildi. .e aylanuvchi silindrsimon mildan tushishning o'rtacha kechikishi (sekundlarda) natijalarda ko'rsatilgan.2.7.

Oyoq izi tahlili. Sichqonlarda oyoq izlarini tahlil qilish tamoyili yurish anormalliklarini baholashdir.

Oyoq izlari uchun kalamush oyoqlari to'rt xil rangdagi toksik bo'lmagan oziq-ovqat bo'yoqlariga botirildi va egilgan yo'lakda (70 sm × 10 sm × 8 sm) yugurishga ruxsat berildi. Uchish-qo'nish yo'lagi bazasi oq rangli tsellyuloza qatlami bilan o'ralgan edi. .e kalamushlar aniq oyoq izlarini olish uchun uchish-qo'nish yo'lagi oxiridagi xira tepalikka harakatlanishdi. .e bo'yoq sinovdan so'ng iliq suv yordamida har bir hayvondan muloyimlik bilan olib tashlandi. .e oyoq izlari skanerdan o'tkazildi va "qadam uzunligi" standart o'lchagich yordamida o'lchandi. Qadam uzunligi bir xil kalamush panjasining ketma-ket joylashuvi orasidagi masofani hisoblash orqali aniqlandi [11].

2.8. Yangi ob'ektni aniqlash vazifasi (NORT). Kumar va Bansal tomonidan berilgan standart protokolga amal qilindi [23].

ORT - bu kemiruvchilarni impulsiv zondlash orqali ekspluatatsiya qilinadigan ishchi xotira turini baholash uchun foydalaniladigan foydasiz va dushman bo'lmagan eksterotseptiv arxetip. Tekshiruv tomida ochiq fanera kubik idishda (80 sm × 42 sm × 62 sm) o'tkaziladi, sokin joyda joylashgan va idishdagi barqaror yorqinlikni boshqarish uchun 60 Vt LED bilan yoritilgan.

Silindr (oq), piramida (qizil) va kub (qora) shaklidagi (12 sm balandlikda) yog'och buyumlar (bir xil uchliklarda) qattiq va kemiruvchilar tomonidan harakatsiz bo'lishi uchun etarlicha og'irlikda edi. NORT 16-kuni 3 bosqichda (S) amalga oshirildi: iqlimlashtirish (S1), sotib olish (S2) va yangi ob'ektni tanib olish tekshiruvi (S3) bosqichi.

S1 davomida, ketma-ket uch kun oldin, kalamushlar tomonidan kemaning bo'sh pol asosini (5 daqiqa) aniqlash uchun sinovlar o'tkazildi. S1 ni tugatgandan so'ng, individual hayvon o'rganish bosqichida (S2) har qanday qattiq narsalar to'plamiga odatlangan.

Egizaklarga o'xshash narsalar idishning ixtiyoriy ravishda tanlangan ikkita qarama-qarshi burchagiga (yon devordan 9 sm dan 11 sm gacha bo'lgan masofa) joylashtirilgan. Alohida-alohida, kemiruvchi ikkita qattiq buyumga qarama-qarshi bo'lgan idishning markaziga joylashtirilgan va 5 daqiqa davomida ikkita o'xshash narsani topishga ruxsat berilgan. 2-3 sm dan kamroq masofada yoki unga teng bo'lgan ob'ekt yaqinidagi tumshuqni yo'naltirish yoki tumshuq bilan buyum bilan jismoniy aloqa qilish tergov harakati sifatida qabul qilingan.

S2 dan so'ng kemiruvchi 60 daqiqalik intertrial chuqurchaga (ITR) o'rnatilgan uy kafesiga joylashtirildi.

S2 da taklif qilingan har qanday yakka qattiq buyum boshqa qattiq buyum bilan almashtirildi va kemiruvchilar yana egizak narsalarga taqdim etildi, ya'ni tanish buyum va boshqa buyumning nusxasi. Muayyan sozlamalar yoki narsalarga moyillik tomonidan qo'zg'atilgan noto'g'ri fikrni yo'qotish. .e idish va qattiq buyumlar har bir tekshiruvdan so'ng hidli belgilarni oldini olish uchun ehtiyotkorlik bilan artib olindi (15% etil spirti va quruq mato). .e S2 va S3 dagi har bir elementni aniqlash uchun sarflangan vaqt sekundomer yordamida hujjatlashtirilgan. .e S2 (I1 � Ii1 + Ii2) dagi ikkita mos keluvchi elementni tekshirish uchun sarflangan vaqt va S3 (I2 � Ii3 + Ib) da ikkita o‘xshash bo‘lmagan, ya’ni tanish va boshqacha narsalarni tekshirish uchun sarflangan muddat qayd etilgan. .e turli ob'ektlarni tekshirish uchun sarflangan vaqt va tanish bo'lgan narsalarni tekshirish davomiyligi (Ib–Ii3 � DI) xotiraning saqlanishini ochib beradi.

DI (diskriminatsiya indeksi)/S3 tanish va yangi bandni tekshirishning davomiyligi(lar)i (o‘zgartirilgan DI) to‘liq tergovdagi tafovutlar bo‘yicha tomonlarni yaxshilaydi va tanishlardan farqli o‘laroq, turli moddalarga moyillikni bildiradi {DI � (Ib–Ii3) )/(Ii3 + Ib)}. Esda tutuvchi xotira kemiruvchilarning S3 da tanish/novelitemlarni ajratib ko'rsatish qobiliyatini miqdoriy baholash yo'li bilan baholandi va DI (S3da umumiy tekshirish davri uchun o'zgartirilgan) deb belgilangan [24].

2.9. MorrisWater Maze (MWM). Kumar va Bansal [25] tomonidan berilgan standart protokolga amal qilindi. MWM fazoviy xotirani suzish sinovlari orqali baholaydi, bunda kemiruvchilar yashirin podiumga qochish yo'lini topadi.

Qora rangli dumaloq idish (diametri 2 m, balandligi 0,6 m) 0,3 m chuqurlikda suv (25 ± 1 daraja) bilan to'ldirilgan edi. Suv ombori tankning yuqori perimetriga perpendikulyar ravishda mahkamlangan ikkita neylon tolalar yordamida soat yo'nalishi bo'yicha 4 ta o'xshash mintaqaga (R1, R2, R3 va R4) ajratilgan.

Dais (10,5 sm × 10,5 sm) R4 suv ombori hududida suv ostida (suv ostida 1 sm) joylashtirilgan. .e dais nuqtasi sotib olish davri davomida buzilmagan holda saqlanib qoldi.

Har bir kalamushga har kuni to'rtta ketma-ket sotib olish raundlari (5 daqiqa ITR) taqdim etildi. .e kemiruvchi tank devoriga qaragan suv havzasiga asta-sekin qo'yib yuborildi, bu joy R1-R4, R2-R1, R3-R2 va R{{ dan har bir sinovdan farq qiladi. 7}} R3 mos ravishda 1 dan 4 kungacha va suv osti podiumini aniqlash uchun 120 soniya ruxsat berildi. .e kemiruvchilar podiumda 20 soniya dam olishni davom ettirdilar.

Platformani 120 soniya ichida aniqlay olmaslik ratsonni platformaga qo'lda joylashtirishni ko'rsatdi va keyin ularga platformada 20 soniya ruxsat berildi. Qochishning kechikish vaqti (ELT) - bu suv havzasidagi yashirin zinapoyalarni aniqlash vaqti (lar).

Fazoviy o'rganish birinchi kun va to'rtinchi kun ELT bilan belgilangan. Tekshiruv sinovida (5-kun) kemiruvchilar suv omborini 120 soniya davomida tekshirdilar, ammo podiumdan mahrum bo'lishdi. .e butun suv omborida (4 ta hudud) sarflangan o'rtacha davomiylik qayd etilgan. .e R4 da (TSTQ: maqsadli kvadrantda sarflangan vaqt) yashirin podiumni tekshirishda sarflangan o'rtacha davomiylik mos yozuvlar xotirasi indeksi sifatida qabul qilindi. .Laboratoriyadagi vizual belgilar vazifasini bajaradigan buyumlarga nisbatan tankning qiyosiy o'rnatilishi va tergovchining pozitsiyasi buzilmagan [26].

2.10. Biokimyoviy parametrlarni baholash. Xulq-atvor tekshiruvlarini tugatgandan so'ng, teratlarning to'liq miyasi yig'ilib, maydalangan muz kublari ustiga joylashtirildi, so'ngra qoldiqlarni va qonni olib tashlash uchun muzlatilgan sterillangan sho'r suv (izotonik 308 mOsmol / l NaCl) bilan cho'mildi.

Butun miyaning gomogenizatsiyasi 215 mM D-mannitol, 20 mM 2-[4-(2-gidroksietil) tarkibidagi muzlashdan ajratuvchi buferda (pH 7,4) bir zumda amalga oshirildi. )piperazin-1-il]etansulfon kislotasi, 1 mM 1,2-bis[2-[bis(karboksimetil)amino]etoksi]etan, 75 mM saxaroza va 0,1% BSA. .e gomogenat 5 daqiqa davomida 13000 × g kuch yordamida 4 darajada santrifüj qilindi. .e pellet rad etildi va supernatant ikki qismga bo'lindi va 5 daqiqa davomida 13000 × g kuchda yangidan (4 daraja) rifufuga qilindi. .e xom mitoxondrial pellet ajratildi va yana 1,2-bis[2-[bis(karboksimetil)amino]etoksi]etan bilan 12500 × g haroratda 11 daqiqa (4 daraja) bilan ajratish tamponida santrifüj qilindi. .e ifloslanmagan mitoxondriyalardan tashkil topgan yarim qattiq kon 75 mM saxaroza, 20 mM 2-[4-(2-gidroksietil)piperazin{{36} bo'lgan ajralish tamponida (pH 7,4) qayta to'xtatildi. il] etansülfonik kislota va 215 mM D-mannitol [27].

Keyinchalik standart usullar yordamida biokimyoviy belgilarni aniqlash uchun butun miya gomogenatining mitoxondrialfraktsiyasidan foydalanildi.2.11. Mitoxondrial kompleksni baholash.

2.11.1. NADH: Ubiquinone oksidoreduktaza faolligi. Murakkab I (NADH dehidrogenaza) faolligi darajasi King va Govard [28] texnikasiga amal qilgan holda (nmol NADH oksidlangan/minut/mg oqsil) miqdori aniqlandi. .NADH dan NAD+ ning eoksidlovchi hosil bo'lishi sitoxrom c qisqarishi bilan birga keladi. .e tahlil aralashmasi 2 mM diglisinbufer yordamida eritilgan sitokrom c (10,5 mM), 6 mM -nikotinamid adenindinukleotid (DPNH) va diglisin buferidan (0,2 M, pH 8,5) iborat.

Reaksiyani boshlash uchun tahlil tarkibiga eriydigan mitoxondrial fraktsiya kiritilgan. .e lmax − 550 nm da optik zichlikning (OD) o'zgarishi 120 soniya davomida kuzatildi.

2.11.2. Suksinat: Ubiquinone oksidoreduktaza faolligi.. Suksinat dehidrogenaza (kompleks II) faolligining tezligi King [29] usuliga rioya qilgan holda miqdoriy aniqlangan (nmol suksinat oksidlangan/daqiqa/mg oqsil).

Suksin kislotasi oksidlanishi soxta elektron qabul qiluvchi kaliy siyanoferrat (K3Fe (CN) 6) tomonidan qo'zg'atiladi. .e tahlil aralashmasi suksin kislotasi (0.63 M), 1% BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M) va Na+-K+ dan iborat. [PO4]2- bufer (0,23 M, pH 7,6). Reaksiyani boshlash uchun tahlil tarkibiga eriydigan mitoxondrial fraktsiya kiritilgan. .e OD atlmax � 420 nm oʻzgarishi 120 soniya davomida kuzatildi.2.12. Oksidlanish stressi biomarkerlarini aniqlash2.12.1. iobarbiturik kislota reaktiv moddalari (TBARS).

TBARSni baholash uchun (nmol/mg protein) [30], tahlil birikmasi (yakuniy miqdori ~4 ml) 0.10 ml gomogenlashgan miya, 1,51 ml 4,{{ 7}}dihidroksi-2-merkaptopirimidin (0,8%), 200 mkl SLS (8,18%), 1,49 ml muz sirka kislotasi (21%, pH 3,51) va 0,71 ml deionlangan suv 96 gradusda suv hammomida qizdirilgan. 60 daqiqa.

15:1 nisbatda butil spirti/azabenzol (5,1 ml) 4,000 × gpower (10 daqiqa) da santrifüj qilingan tahlil aralashmasiga qo'shildi va supernatant ajratildi.

Ikki nurli UV1700 spektrofotometri (Shimadzu, Yaponiya) yordamida xromofor malondialdegid-4,6-dihidroksi-2-merkaptopirimidin OD to'lqin uzunligida (lmax � 532 nm) va ×15.0 da baholandi. 4,{10}}digidroksi-2-merkaptopirimidin qo‘shimchalarini hisoblash uchun 105/M/sm (molyar so‘nish koeffitsienti) qo‘llanildi.

2.12.2. Glutation (Lc-Glutamil-L-Sisteinil-glisin) darajasining pasayishi. L-glutation (GSH) tarkibini baholash uchun Ellman [31] protsedurasi amalga oshirildi. .e gomogenat (1,1 ml) va 1 ml 4% 2-gidroksi-5-sulfobenzoy kislotasi (5-SSA) ni o‘z ichiga olgan sinov aralashmasi 2500 × g quvvatda 11 daqiqa davomida santrifüj qilindi (4 daraja) .

Keyinchalik, 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- bufer (51,2 mM, pH 7,77) va {{10}},21 ml 3-karboksi{{13} }}nitrofenil disulfid (0,12 mM, pH 7,89) yuqorida ajratilgan supernatant (0,12 ml) bilan aralashtiriladi.

Tripeptid (mg protein uchun µmolGSH) egizak nurli UV1700 spektrofotometri (lmax − 412 nm) yordamida miqdori aniqlandi. � 1,36 ×104/M/sm.2.12.3.

Glutation peroksidaza faolligi. .e glutation peroksidaza (GPx) faolligi (EC 1.11.1.9) Mohandas va boshqalarning texnikasini qo'llash orqali baholandi. [32]. .eanalyze aralashmasi 100 mkl 10% gomogenat, 100 mkl natriy azid (1,11 mM), 100 mkl EDTA (1,13 mM), 40 mkl glutatyon-disulfidezadan iborat (GSR, 1 IU/ml) (EC1.8.1.7), 10 µl H2O2 (0,28 mM), 40 µl Lc-glutamil-L-sisteinil-glisin (1,2 mM), 100 µl koenzim II qaytarilgan tetrasodiy tuzi (0,22 mM) ) va 0,12 M 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-bufer (pH 7,4) 2000 mkl. .e koenzim II-qaytarilgan tetrasodiyning lmax ± 340 nm da yo'qolishi 25 daraja haroratda hujjatlashtirilgan. GPx darajasi 6,22 × 103/M/sm e � dan foydalangan holda nmol NADPH oksidlangan/minut/mg oqsili sifatida hisoblangan.

For more information:1950477648nn@gmail.com