Abstrakt

MaqsadDoriga chidamli osteosarkoma bo'lgan yalang'och sichqonlarda tug'ma immunitet funktsiyasi, o'simta o'sishi va o'simta hujayralari apoptozi bo'yicha Cistanche feniletanol glikozidlarining (CPhGs) mexanizmini o'rganish.UsullariOdam osteosarkomasi MG-63 doriga chidamli hujayra liniyasi gradient kontsentratsiyasi usuli bilan o'rnatildi va dori-darmonga chidamli osteosarkomaning yalang'och sichqoncha modeli yaratildi (jami 36 sichqon, har bir guruhga 6). Model guruhiga gavaj orqali oddiy sho'r suv berildi; metotreksat (MTX) guruhi har uch kunda MTX (20 mg/kg) intraperitoneal in'ektsiyasini oldi; kombinatsiyalangan guruh har uch kunda MTX ning qorin bo'shlig'iga in'ektsiyasini, o'rtacha dozali CPhGlarning kunlik gavajini (250 mg / kg) oldi; yuqori, o'rta va past dozali CPhGs guruhlariga navbati bilan yuqori (500 mg / kg), o'rta (250 mg / kg) va past (125 mg / kg) dozalarda CPhGlarning kunlik gavajlari berildi. Yalang'och sichqonlarda o'sma hajmining o'zgarishi kuzatildi, vaqt o'tishi bilan o'rtacha o'simta hajmining egri chiziqlari chizildi va o'simta inhibisyon tezligi hisoblab chiqildi; yalang'och sichqonlarda IL-2 va TNF- sarum darajalari Elishay tomonidan aniqlangan; o'simta hujayralari apoptozi oqim sitometriyasi bilan o'lchandi; Western blot apoptoz bilan bog'liq oqsillar Bcl-2, Bax va o'simta to'qimalarida p-AKT, p-mTOR, p-PI3K ifodasini aniqlash uchun ishlatilgan.NatijalarModel guruhi bilan solishtirganda, barcha davolash guruhlarida o'simta hajmi va vazni sezilarli darajada kamaydi (P <0,001); model guruhi va MTX guruhi bilan solishtirganda, barcha CPhGs guruhlari va kombinatsiyalangan guruhning yalang'och sichqonlarida IL-2 va TNF-ning sarum darajalari sezilarli darajada oshdi (P <0.01); model guruhi bilan solishtirganda, barcha davolash guruhlarida Bax ifodasi sezilarli darajada yuqori tartibga solingan (P <0.001) va yuqori va o'rta dozali CPhGs guruhlarida Bcl-2 ifodasi va kombinatsiyalangan guruh sezilarli darajada pastga tushirilgan (P <0.001); model guruhi va MTX guruhi bilan solishtirganda, barcha CPhGs guruhlari va kombinatsiyalangan guruhning yalang'och sichqonlarida o'simta apoptozi darajasi sezilarli darajada oshdi, p-AKT, p-mTOR va p-PI3K darajalari sezilarli darajada kamaydi (P <0,05).XulosaCPhG'lar dori-darmonlarga chidamli osteosarkomaga ega bo'lgan yalang'och sichqonlarda immunitet funktsiyasini sezilarli darajada yaxshilashi va PI3K / AKT / mTOR signalizatsiya yo'lini va Bax va Bcl-2 apoptotik oqsillarini ifodalash orqali o'simta hujayralari apoptozini rag'batlantirishi va shu bilan o'simta o'sishini samarali ravishda inhibe qilishi mumkin.

Kalit so'zlarosteosarkoma;Cistanche feniletanol glikozidlari; MG-63; o'simta hujayralari; apoptoz; harakat mexanizmi; PI3K/AKT/mTOR signalizatsiya yo'li

 

CISTANCHE TUBULOSA FOYDALARI

 

 

 

 

 

 

Osteosarkoma (OS)o'smirlar orasida eng ko'p uchraydigan birlamchi suyak o'smasi bo'lib, nogironlik va o'lim darajasi juda yuqori. Hozirgi vaqtda yuqori dozali metotreksat (MTX) yakka o'zi yoki jarrohlikdan so'ng boshqa kimyoterapevtik vositalar bilan birgalikda OS bilan og'rigan bemorlarning omon qolish darajasini samarali oshirishi mumkin [1]. Biroq, ba'zi OS bemorlari dorilarga chidamliligi tufayli kimyoterapiyaga befarq bo'lib, o'smaning rivojlanishiga olib keladi. Bundan tashqari, o'smali bemorlarda T-limfotsitlar to'plamlari ko'pincha immunitetning nomutanosibligi holatida bo'ladi va kimyoterapiya qisqa muddatda immunitetning buzilishi va immunosupressiyani yanada kuchaytirishi mumkin [2]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, inson immunitetini oshirish OS ning biologik xususiyatlari nuqtai nazaridan OS bilan kasallangan bemorlarning prognozini yaxshilashi mumkin [3]. Kimyoterapiyaga qarshilik OS bilan og'rigan bemorlarda davolanishning muvaffaqiyatsizligiga olib keladigan eng keng tarqalgan va hal qilib bo'lmaydigan muammolardan biri bo'lib, immunosupressiya ham o'smaning tez rivojlanishini keltirib chiqaradigan asosiy omillardan biridir [4].

Fosfatidilinositol 3-kinaz (PI3K) / protein kinaz B (AKT) / sutemizuvchilarning rapamisin (mTOR) signalizatsiya yo'lining maqsadi inson saratonidagi eng muhim onkogen yo'llardan biri hisoblanadi. Ushbu yo'l ko'pincha OTda haddan tashqari faollashadi, bu OT hujayralarining ko'payishi, invaziyasi, metastazlari va angiogenezini qo'zg'atishi, apoptozni inhibe qilishi va keyinchalik OTning kimyoterapevtik preparatlarga chidamliligiga olib kelishi mumkin [5]. Tadqiqotlar Cistanche feniletanol glikozidlari (CPhGs) ning asosiy komponenti ekanligini tasdiqladi.Cistanche deserticola, immun funktsiyasini kuchaytirishi va gepatomli sichqonlarda o'simta o'sishini inhibe qilishi mumkin [6].In vitroTadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CPhGlar HepG2 gepatom hujayralarining ko'payishini sezilarli darajada inhibe qilishi va ularning apoptozini keltirib chiqarishi mumkin [7]. Hujayra apoptozini qo'zg'atish hozirgi antitumor dorilarning asosiy mexanizmi va so'nggi yillarda OS davolashda tadqiqot nuqtasi hisoblanadi. Yalang'och sichqonlar anatomiya, fiziologiya va biologiya bo'yicha odamlar bilan juda ko'p o'xshashliklarga ega va transplantatsiya qilingan o'smalar uchun yuqori darajada mos keladi, bu esa ma'lum geterologik o'simta hujayralarini ksenotransplantatsiya qilish imkonini beradi, shuning uchun o'simta modellarini yaratishda keng qo'llaniladi [8-9]. Ushbu tadqiqot dori-darmonga chidamli osteosarkomaning yalang'och sichqoncha modelini yaratish, CPhGlarning immunitet funktsiyasiga ta'sirini va ushbu modeldagi PI3K / AKT / mTOR yo'liga ta'sirini, shuningdek, uning o'simta o'sishi va farmakologik mexanizmiga inhibitiv ta'sirini kuzatish, shuning uchun klinik davolash g'oyalarini kengaytirish va OS ning asosiy tadqiqotlari uchun ma'lumotnomalarni taqdim etish.

 

CISTANCHE TUBULOSA SUYIK O'SISH UCHUN FOYDALARI

 

CISTANCHE SOTILADI

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel:+86 15292862950

 

 

1 Materiallar va usullar

1.1 Eksperimental hayvonlar

O'ttiz oltita SPF darajasidagi yalang'och sichqonlar (6-8 haftalik, og'irligi 19-25 g) Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd.dan hayvonlar sertifikati No202367524 bilan sotib olingan. Ushbu tajriba Shimoliy-G'arbiy Minzu universiteti (Xbmu-3m-202306) laboratoriya hayvonlari etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

1.2 Hujayra liniyasi

MG-63 hujayra Shanxaydagi Xitoy Fanlar Akademiyasining Hujayra bankidan sotib olindi.

1.3 Dorilar va reaktivlar

Homila sigir zardobi, yuqori glyukozali DMEM muhiti, 0,25% Tripsin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., partiya raqamlari mos ravishda PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1); CPhGs (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., partiya raqami SY20231212605); anti-p-mTOR antikor, anti-p-PI3K antikor, anti-p-AKT antikor, anti-Bcl-2 antikor, anti-Bax antikor (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., partiya raqamlari HA600094, HA721673, ET1607-73, ET5031, mos ravishda); TNF- va IL-2 uchun ELISA to'plamlari (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., partiya raqamlari mos ravishda EK282, EK202).

1.4 Asboblar

CT14RD ish stoli yuqori tezlikda sovutilgan santrifüj (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD toza skameyka (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC hujayra inkubatori (Sanyo, Yaponiya); AE31 floresan teskari mikroskop (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 mikroplata o'quvchi (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); PowerPoc gel elektroforez tizimi, ChemiDoc™ gel tasvirlash analizatori (Bio-Rad, AQSh).

 

1.5 Eksperimental usullar

1.5.1 Odam osteosarkomasi MG-63 dori-darmonga chidamli hujayralar qatorini yaratish (MG-63/MTX)

MG-63 hujayra 80% hujayra qoʻshilishi bilan logarifmik oʻsish fazasiga yetishtirildi. 100 ng / ml MTX o'z ichiga olgan oldindan tayyorlangan hujayra madaniyati muhiti qo'shildi va vosita 48 soatdan keyin o'zgartirildi. Hujayralar yana 80% qo'shilish darajasiga yetganda, MTX o'z ichiga olgan muhitning bir xil konsentratsiyasi qo'shildi. Yuqoridagi amallar MG-63 osteosarkoma hujayralarini 100 ng/ml MTX o'z ichiga olgan muhitda barqaror o'sishiga imkon berish uchun takrorlandi. Keyin muhitdagi MTX kontsentratsiyasi xuddi shu usul bilan 200 ng/ml, 500 ng/mL, 1000 ng/mL, 2000 ng/ml, 5000 ng/ml va 10000 ng/ml dan foydalanib, asta-sekin oshirildi. 5 oylik madaniyatdan so'ng, keyingi tajribalar uchun 10000 ng/ml MTXda barqaror o'sadigan osteosarkoma dori-darmonga chidamli hujayra liniyasi (MG-63/MTX) tanlandi.

 

 

1.5.2 Doriga chidamli osteosarkomaga ega bo'lgan yalang'och sichqoncha modelini yaratish

Osteosarkoma hayvon modeli adabiyotga asoslanib yaratilgan [10]. MG-63/MTX xujayralari 4×10⁶/100 mkl hujayra suspenziyasiga tayyorlandi va shish paydo boʻlishini kuzatish uchun 100 mkl yalangʻoch sichqonlarning qoʻltiq ostiga teri ostiga yuborildi.

1.5.3 Hayvonlarni guruhlash va aralashuvi

O'simta tug'diruvchi yalang'och sichqonlar tasodifiy ravishda model guruhiga, MTX guruhiga, MTX CPhGs (MTX-CPhGs) guruhi, yuqori dozali CPhGs (CPhGs-H) guruhi, o'rta dozali CPhGs (CPhGs-M) guruhi va past dozali CPhGs (CPhGs) guruhiga bo'lingan. Gavage modellashtirishdan keyin 6-kuni boshlangan. Model guruhidagi sichqonlarga gavaj orqali har kuni 10 mkL/g normal sho'r suv berildi; MTX guruhi har uch kunda 20 mg/kg MTX intraperitoneal inyeksiyasini oldi; MTX-CPhGs guruhi har uch kunda bir marta 20 mg / kg MTX intraperitoneal in'ektsiyasi bilan birgalikda 250 mg / kg CPhGs kunlik gavaj oldi; CPhGs-H guruhi kuniga 500 mg / kg CPhGs gavajini oldi; CPhGs-M guruhi kuniga 250 mg / kg CPhGs gavajini oldi; CPhGs-L guruhi kuniga 125 mg / kg CPhGs gavajini oldi. Barcha yalang'och sichqonlar 15 kun davomida doimiy ravishda davolandi.

1.5.4 Doriga chidamli osteosarkomaga ega bo'lgan yalang'och sichqonlarda o'simta hajmi va vaznini o'lchash

Har bir guruhdagi yalang'och sichqonlarning o'simta hajmi kuzatildi va qayd etildi va o'simta o'sishi egri chizilgan. Oxirgi administratsiyadan yigirma to'rt soat o'tgach, sichqonlar bachadon bo'yni dislokatsiyasi bilan qurbon qilindi, o'smalar ajratildi va tortildi va o'smaning inhibisyon darajasi hisoblab chiqildi. Formulalar quyidagicha: O'simta hajmi=1/2 (uzun o'simta diametri × qisqa o'simta diametri²) O'simtani inhibe qilish darajasi=[(model guruhidagi o'sma og'irligi - davolash guruhining o'rtacha o'simta og'irligi)/model guruhining o'rtacha o'simta og'irligi] × 100%

1.5.5 Elishay yordamida sarum IL-2 va TNF- darajasini aniqlash

Har bir guruhdagi yalang'och sichqonlardan sarum ajratildi va ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Elishay tomonidan zardobdagi IL-2 va TNF- darajalari aniqlandi.

1.5.6 Oqim sitometriyasi yordamida o'simta hujayralari apoptozini aniqlash

Har bir guruhdagi o'simta to'qimalari maydalangan, maydalangan, filtrlangan, santrifüj qilingan va qizil qon tanachalari lizislangan va bitta hujayrali suspenziyalarni santrifüj naychalarida tayyorlash uchun. Hujayra kontsentratsiyasi 1 × 10⁶/ml ga o'rnatildi, hujayralar 100 mkl bog'lovchi buferda qayta suspenziya qilindi, 5 mkL AV-FITC va PI qo'shildi, qorong'ida 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi, santrifüj qilindi, qayta suspenziya qilindi va 400 mkl bog'lovchi bufer qo'shildi. Aralashtirgandan so'ng, namunalar oqim sitometriyasi bilan aniqlandi.

1.5.7 Western blot yordamida p-AKT, p-mTOR, p-PI3K va apoptotik oqsillarni Bcl-2, Bax aniqlash

Har bir guruhdagi o'simta to'qimalari maydalangan va gomogenizatorga joylashtirilgan, oqsil lizis buferi bilan lizislangan va gomogenlashtirilgan. Lizisdan so'ng, supernatant 12000 r / min da santrifüjlash orqali yig'ildi. Proteinni ajratish uchun elektroforetik jel tayyorlandi, so'ngra membranani uzatish va blokirovka qilish. Membranalar bir kechada 4 daraja haroratda birlamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilingan, yuvilgan va xona haroratida ikkilamchi antikorlar bilan 1 soat davomida inkübe qilingan. Shakerda TBST buferi bilan yuvilgandan so'ng, ishlab chiqish uchun ECL luminesans eritmasi qo'shildi. Fiksatsiyadan so'ng, jel tasvirini tahlil qilish amalga oshirildi va protein bandining kulrang qiymatlari Image J dasturi yordamida tahlil qilindi.

1.6 Statistik tahlil

Statistik tahlil GraphPad Prism 7 va SPSS 25.0 dasturlari yordamida amalga oshirildi. O'lchov ma'lumotlari o'rtacha ± standart og'ish (x ± s) sifatida ifodalangan. Oddiy taqsimot va bir hil dispersiyaga ega bo'lgan guruhlar o'rtasida taqqoslash uchun bir tomonlama ANOVA ishlatilgan va noan'anaviy taqsimot ma'lumotlari uchun parametrik bo'lmagan test ishlatilgan. O'simta inhibisyon tezligini tahlil qilish uchun juftlashtirilgan t-test ishlatilgan. P <0,05 statistik ahamiyatga ega deb hisoblandi.

 

 

1-rasm. MG-63 va MG-63/MTX hujayralarini morfologik taqqoslash (×200)

2 Natijalar

2.1 Osteosarkoma MG-63 doriga chidamli hujayra liniyasi (MG-63/MTX)

Asl MG-63 hujayralar oʻrtacha kattalikdagi, asosan shpindelsimon, vaqti-vaqti bilan tartibsiz, yirik yadrolari va aniq yadrolari boʻlgan (1-A-rasm) yopishib oʻsgan. MG-63/MTX hujayralari choʻzilgan, shpindel yoki tartibsiz, yaqqol psevdopodiyaga ega (1-B-rasm).

2.2 Har bir guruh sichqonlarida o'simta o'sishini taqqoslash

Gavajning 6-kundan boshlab davolash guruhlaridagi o'simta hajmi model guruhidagiga qaraganda sezilarli darajada kichikroq edi. Gavajning 21-kuni har bir guruhdagi 3 ta yalang'och sichqonlarning o'smalari solishtirildi (2-A-rasm). Barcha davolash guruhlarida o'simta hajmi model guruhidagidan kichikroq edi (P <0,001). CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L va MTX-CPhGs guruhlarida o'simta hajmi MTX guruhidagidan kichikroq edi (P <0,001). CPhGs guruhlari orasida o'simta hajmi asta-sekin dori kontsentratsiyasining oshishi bilan kamaydi va model guruhidan farq sezilarli bo'ldi (2-B-rasm). Natijalar shuni ko'rsatdiki, CPhGlar dori-darmonlarga chidamli o'simtali sichqonlarda o'simta o'sishini sezilarli darajada inhibe qilishi mumkin va inhibitiv ta'sir CPhG konsentratsiyasi bilan ijobiy bog'liqdir.

Model guruhi bilan solishtirganda, MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L va MTX-CPhGs guruhlarida o'rtacha o'simta og'irligi sezilarli darajada kamaydi (P <0,001). MTX guruhi bilan solishtirganda, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L va MTX-CPhGs guruhlarida o'simtani inhibe qilish darajasi sezilarli darajada oshdi va CPhGs-H, CPhGs-M va CPhGs-L guruhlarida o'simtani inhibe qilish darajasi dozaga bog'liq ravishda oshdi (dori konsentratsiyasining ortishi bilan T1).

2.3 Doriga chidamli o'simtaga ega yalang'och sichqonlarda CPhGlarning sarum IL-2 va TNF darajalariga ta'siri

Model guruhi bilan taqqoslaganda, MTX guruhida sarum TNF- darajasi sezilarli darajada oshdi (P <0,05), MTX-CPhGs guruhida sarum TNF- va IL-2 darajalari sezilarli darajada oshdi (P <0,01). Bundan tashqari, CPhGs-H, CPhGs-M va CPhGs-L guruhlarida sarum TNF- darajalari model guruhidagiga qaraganda sezilarli darajada yuqori (P <0,001), CPhGs-M guruhida qon zardobidagi IL-2 darajasi oshdi (P <0,01) va qon zardobida IL-2 darajalari (CPLG va CPLG guruhlarida sezilarli darajada oshdi) < 0,001). MTX guruhi bilan solishtirganda, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L va MTX-CPhGs guruhlarida sarum TNF- va IL-2 darajalari sezilarli darajada oshdi (P <0.001) (2-jadval). Bu shuni ko'rsatadiki, CPhG'lar TNF- va IL-2 ifodasini tartibga solish orqali dori-darmonlarga chidamli OS o'simtasi bo'lgan sichqonlarda tug'ma immunitet funktsiyasini yaxshilashi mumkin.

 

Shakl 2. Yalang'och sichqonlardagi o'sma hajmini aralashuvdan keyin har bir guruhdagi o'smalar bilan solishtirish (x ± s, n =3, mm3)

Eslatma: Model guruhi; MTX guruhi; CPhGs-L guruhi; past dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; CPhGs-M guruhi; o'rta dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; CPhGs-H guruhi; yuqori dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; MTX-CPhGs guruhi; Model guruhi bilan solishtirganda, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

Jadval 1. Cistanche feniletanoid glikozidlarining o'simtali yalang'och sichqonlarda o'simta vazniga ta'siri (n=3)

Guruh	O'simtaning o'rtacha vazni (g)	Inhibisyon darajasi (%)
Model	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs - L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs - M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs - H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX-CPhGlar	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Izoh: "Model" guruhi manba jadvalida hech qanday tormozlash tezligiga ega emas (em tire sifatida ko'rsatilgan). Agar xohlasangiz, ahamiyat belgilarini ham qo'shishim mumkin (masalan, *, ## va boshqalar) xuddi rasmdagi kabi izoh sifatida.

2.4 Doriga chidamli o'simtaga ega yalang'och sichqonlarda CPhGlarning o'simta hujayralari apoptoziga ta'siri

Model guruhi bilan taqqoslaganda, MTX va CPhGs-L guruhlarida o'simta apoptozi darajasi sezilarli darajada oshdi (P <0,05), CPhGs-H, CPhGs-M va MTX-CPhGs guruhlarida esa sezilarli darajada oshdi (P <0,001). MTX guruhi bilan solishtirganda, CPhGs-H, CPhGs-M va MTX-CPhGs guruhlarida o'simta apoptozi darajasi oshdi (P <0.001) (3-rasm, 3-jadval). Yuqoridagi natijalar shuni ko'rsatadiki, CPhGlar dori-darmonlarga chidamli o'simtaga ega bo'lgan yalang'och sichqonlarda o'simta hujayralari apoptozini rag'batlantirishi mumkin.

2.5 CPhGlarning dori-darmonlarga chidamli o'simtaga ega yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-AKT, p-mTOR va p-PI3K ifodasiga ta'siri.

Model guruhi bilan solishtirganda, MTX guruhidagi dori-darmonlarga chidamli yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-AKT ifodasi sezilarli darajada kamaydi (P <0,001). MTX-CPhGs, CPhGs-H va CPhGs-M guruhlarida yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-AKT, p-mTOR va p-PI3K ifoda darajalari sezilarli darajada kamaydi (P <0.001), CPhGs-L guruhida p-AKT ifodasi kamaydi (P <0.01 va p-PI3K ifodasi sezilarli darajada kamaydi). 0,001). MTX guruhi bilan solishtirganda, MTX-CPhGs va CPhGs-H guruhlarida yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-AKT, p-mTOR va p-PI3K ifoda darajalari ham sezilarli darajada kamaydi (P <0,001), CPhGs-M guruhida p-AKT ifodasi biroz kamaydi (P <-0, p-PI30 va p-PI3K ifodasi sezilarli darajada kamaydi). (P <0.001), CPhGs-L guruhidagi p-AKT ifodasi kamaydi (P <0.01) va p-mTOR va p-PI3K ifodasi sezilarli darajada kamaydi (P <0.001) (4-A-4-D-rasm).

 

2-jadval. Har bir guruhdagi sarum TNF- va IL-2 ifoda darajalari (n=3)

Guruh	TNF- (pg/ml)	IL-2 (pg/ml)
Model	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX-CPhGlar	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs - H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs - M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs - L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Eslatmalar (rasmda ko'rsatilganidek):Model=modellar guruhi; MTX=metotreksat guruhi; CPhGs–L/M/H=past/o‘rta/yuqori dozali Cistanche feniletanoid glikozidlar guruhi; MTX–CPhGs=kombinatsiya guruhi. Modelga nisbatan ahamiyati: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 CPhGlarning dori-darmonlarga chidamli o'simtali yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida Bcl-2 va Bax ekspressiyasiga ta'siri.

Model guruhi bilan solishtirganda, barcha davolash guruhlarida dori-darmonga chidamli yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida Bax ifodasi sezilarli darajada oshdi (P <0,001), MTX guruhida Bcl-2 ifodasi oshdi (P <0,05) va MTX-CPhGs, CPhGs-H va CPhGs-M guruhlarida Bcl-2 ifodasi sezilarli darajada kamaydi (P<10.0). MTX guruhi bilan solishtirganda, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L va MTX-CPhGs guruhlari o'simta to'qimalarida Bcl-2 ifodasi sezilarli darajada kamaydi (P <0.001) va CPhGs-H va CPhGs-M guruhlarida Bax ifodasi sezilarli darajada oshdi (P <01)-A40, (P <0,-A4,). 4-F). Bundan tashqari, CPhG'lar Bcl-2 va Bax ekspressiyasini tartibga solish orqali dori-darmonga chidamli o'simtaga ega yalang'och sichqonlarda o'simta hujayralari apoptozini rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatadi.

 

 

3 Munozara

OS bilan og'rigan bemorlarda kimyoterapiyaga qarshilik va immunosupressiya OSni klinik davolashda qiyinchilik tug'diradi. Hozirgi vaqtda o'smaga qarshi dori vositalarining asosiy mexanizmi o'simta hujayralari apoptozini rag'batlantirishdan iborat bo'lib, bu kimyoterapiya samaradorligini bevosita aks ettiradi; boshqa tomondan, tana immuniteti bemorlarning kimyoviy terapevtik preparatlarga toqat qilishlari uchun kuchli kafolatdir. Shu sababli, dori-darmonlarga chidamli OS hujayralarining apoptozini samarali targ'ib qilish va kimyoterapiya tufayli immunitet buzilishini kamaytirishni o'rganish juda muhimdir.

Shakl 3. Har bir sichqon guruhidagi o‘simta to‘qimasi hujayralarining apoptoz darajasi (n=3, %)

Eslatma: A. Model guruhi; B. Metotreksat (MTX) guruhi; C. Metotreksat Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlari (MTX-CPhGs) guruhi bilan birlashtirilgan; D. Yuqori dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlari (CPhGs-H) guruhi; E. O'rta dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlari (CPhGs-M) guruhi; F. Past dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlari (CPhGs-L) guruhi.

Jadval 3. Har bir guruhdagi o'simta to'qimasi hujayralarining apoptoz darajasi (n=3)

Guruh	Apoptoz darajasi (%)
Model	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX-CPhGlar	29.21 ± 0.77***###
CPhGs - H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs - M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs - L	22.49 ± 3.02**

Eslatmalar (rasmda ko'rsatilganidek):Model=modellar guruhi; MTX=metotreksat guruhi; CPhGs–L/M/H=past/o‘rta/yuqori dozali Cistanche feniletanoid glikozidlar guruhi; MTX–CPhGs=kombinatsiya guruhi. Modelga nisbatan ahamiyati: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolaBuyrakni isituvchi va mohiyatni to'ldiruvchi, ichaklarni namlovchi, oksidlanishga qarshi va immunitetni yaxshilaydigan farmakologik ta'sirga ega. Chjan va boshqalar. [11] 1988 yilda ning suvli ekstrakti haqida xabar berdiCistanche deserticolaimmun funktsiyasini yaxshilash va sichqonlarda timus kabi immunitet organlarining rivojlanishini rag'batlantirishi mumkin. Keyingiin vivotadqiqotlar shuni aniqladikiCistanchepolisakkaridlar o'pka saratoniga va sarkomaga qarshi ta'sirga ega edi [12]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CPhGs ning asosiy komponentiCistanche deserticolaAntioksidlanish, qarishga qarshi, neyroproteksiya, immunitetni oshirish, jigarni himoya qilish va spermatogen kasalliklarni davolash kabi farmakologik ta'sirga ega [13], shuningdek, jigar saratoni, o'pka saratoni, ko'krak saratoni va tuxumdon saratoni kabi turli xil malign o'smalarga antitumor va immunitetni kuchaytiruvchi ta'sir ko'rsatadi [14]. Bizning oldingi tadqiqotimiz buni aniqladiCistanche deserticoladorilarga chidamli OS hujayralarining apoptozini rag'batlantirishi mumkinin vitroMRP1 va mutant P53 oqsillari ifodasini kamaytirish orqali [15]. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, davolash guruhlaridagi o'simta hajmi va og'irligi model guruhidagilarga qaraganda kichikroq va turli CPhGs kontsentratsion guruhlari va MTX-CPhGs guruhidagi o'simta hajmi ham MTX guruhidagiga qaraganda kichikroq bo'lib, o'simtani inhibe qilish tezligi oshgan. Bu shuni ko'rsatadiki, CPhGlar dori-darmonga chidamli OS o'simtasi bo'lgan sichqonlarda o'simta o'sishini sezilarli darajada inhibe qilishi mumkin va inhibitiv ta'sir CPhGs kontsentratsiyasi bilan ijobiy bog'liqdir, bu asosan Hou va boshqalar tomonidan o'tkazilgan tadqiqotga mos keladi. [16] H22 gepatomli sichqonlarda CPhGlarning teri ostiga ko'chirilgan o'smalariga inhibitiv ta'siri bo'yicha.

Immun funktsiyasi shish paydo bo'lishi va rivojlanishi bilan chambarchas bog'liq. IL-2 immun tizimidagi hujayra oʻsish omilining bir turi boʻlib, u T hujayralarining koʻpayishi va differentsiatsiyasini ragʻbatlantirish orqali tananing immun funktsiyasini yaxshilaydi va oʻsmaga qarshi faollikga ega immun hujayralarni ishlab chiqaradi [17]. TNF - retseptorlari bilan bog'lanib, o'simta hujayralari apoptozini qo'zg'atadi, xostning immunitetini oshiradi, o'simta qon tomir endotelial hujayralariga ta'sir qiladi, tomir o'tkazuvchanligini oshiradi, dasturlashtirilgan o'limga olib keladi va keyinchalik o'simta qon ketishi va nekrozga olib keladi [18]. Har bir guruhning sichqonlarida zardob IL-2 va TNF-ekspressiyasini tahlil qilish shuni ko'rsatdiki, turli CPhGs kontsentratsion guruhlari va MTX-CPhGs guruhining o'simtali model sichqonlarida TNF- va IL-2 zardobidagi ekspression darajalari sezilarli darajada oshgan. Bu shuni ko'rsatadiki, CPhGlar TNF- va IL-2 ifodasini tartibga solish orqali dori-darmonlarga chidamli OS o'simtasi bo'lgan sichqonlarda immun funktsiyasini yaxshilashi, dori-darmonlarga chidamli osteosarkoma hujayralarining ko'payishini inhibe qilishi va shu bilan antitumor ta'sir ko'rsatishi mumkin.

 

Shakl 4. Yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 va Bax oqsillarining elektroforez natijalari diagrammasi (x ± s, n =3, mm3)

Eslatma: Model, modellar guruhi; MTX, metotreksat guruhi; MTX-CPhGs, metotreksat Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi bilan birlashtirilgan; CPhGs-L, past dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; CPhGs-M, o'rta dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; CPhGs-H, yuqori dozali Cistanche deserticola feniletanol umumiy glikozidlar guruhi; A. p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2 va Bax oqsillarining Western Blot natijalari; B. p-mTOR; C. p-PI3K; D. p-AKT; E. Bcl-2; F. Bax; Modellar guruhi bilan taqqoslaganda, * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001; MTX guruhi bilan taqqoslaganda, # P <0.05, ## P <0.01, ### P <0.001.

 

PI3K/AKT/mTOR signalizatsiya yo'lida AKT fosforillanishi to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita apoptoz bilan bog'liq bo'lgan bir qator omillarni, masalan, Bcl-2 oilasi, apoptoz oqsilining X-bog'langan inhibitori (XIAP), sichqonchaning ikki daqiqali 2 (MDM-2) va Bcl-2 bilan bog'liq X oqsili (Bax) [Bax] kabi bir qator tartibga solish mumkin. Anormal faollashtirilgan PI3K/AKT/mTOR signalizatsiya yo'li ABCB1 va ABCC1 membrana tashuvchilarining ekspressiyasini ko'paytirishi mumkin, shu bilan kimyoterapiya samaradorligini pasaytiradi va OS ning kemoterapevtik dorilarga chidamliligini oshiradi [20]. Turli xil an'anaviy xitoy tibbiyot monomerlari prosiyanidin B2, quercetin, luteolin va boshqalar kabi PI3K/AKT/mTOR signalizatsiya yo'lini inhibe qilish orqali OS hujayralari apoptozini rag'batlantirishi mumkin.Lactarius delicosuspolisaxaridlar [21]. Ushbu tadqiqot MTX ning yagona ta'siri ostida p-AKT oqsilining ifodasi sezilarli darajada kamayganligini, p-mTOR va p-PI3K protein ifodasi esa sezilarli farqni ko'rsatmaganligini aniqladi, bu MTXning dori-darmonga chidamli o'simtaga ega yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida PI3K / AKT / mTOR signalizatsiya yo'liga ozgina ta'sir qilishini ko'rsatadi. Shu bilan birga, turli xil CPhGs kontsentratsion guruhlari va MTX-CPhGs guruhidagi dori-darmonlarga chidamli OS o'simtasi bo'lgan yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida p-AKT, p-mTOR va p-PI3K oqsillarining ekspressiyasi model guruhidagiga qaraganda past, shuningdek MTX guruhidagiga qaraganda ancha past bo'lib, CPhG ning dori-darmonlarga chidamli / PI3K signal yo'lida sezilarli inhibitiv ta'sirga ega ekanligini ko'rsatdi. OS hujayralari. O'simta hujayralari apoptozini oqim sitometriyasini aniqlash dori aralashuvidan so'ng har bir guruhdagi o'simta apoptozi darajasi sezilarli darajada oshganligini ko'rsatdi. Bax va Bcl-2 oqsili ifodasini aniqlash shuni ko'rsatdiki, dori-darmonlarga chidamli OS o'simtasi bo'lgan yalang'och sichqonlarning o'simta to'qimalarida Bax ekspressiyasi turli CPhGs kontsentratsiyasi guruhlari va MTX-CPhGs guruhida sezilarli darajada oshdi, MTX-CPhGs, CPhGs-H va CPHG guruhlaridagi model sichqonlarning o'simta to'qimalarida Bcl-2 ifodasi sezilarli darajada kamaydi. Bu shuni ko'rsatadiki, ma'lum bir CPhG kontsentratsiyasi dori-darmonlarga chidamli OS hujayralarining apoptoziga yordam berishi mumkinin vivoPI3K / AKT / mTOR signalizatsiya yo'lini inhibe qilish, Bcl-2 ifodasini pastga tartibga solish va Bax ifodasini yuqoriga ko'tarish.

Xulosa qilib aytganda, CPhGlar dori-darmonlarga chidamli OS hujayralarining apoptozini rag'batlantirishi va o'simta o'sishini inhibe qilishi mumkin.in vivo, va uning mexanizmi PI3K / AKT / mTOR signalizatsiya yo'lini inhibe qilish va Bcl-2 va Bax ifodasini tartibga solish orqali erishish mumkin. Shu bilan birga, CPhG'lar TNF- va IL-2 ifoda darajalarini ko'tarib, dori-darmonga chidamli OS o'simtasi bo'lgan sichqonlarda immun funktsiyasini yaxshilaydi va shu bilan sinergik antitumor ta'sir ko'rsatadi. Biroq, uning klinik qo'llash potentsiali hali ham qo'shimcha tadqiqotlar va tadqiqotlarga muhtoj.

 

Ma'lumotnomalar

1 Chjan C, Xu J, Zhu K va boshqalar. Tiz atrofidagi yuqori darajadagi osteosarkoma uchun sementlangan megaprotezlarning omon qolishi, asoratlari va funktsional natijalari [J]. Int Orthop, 2018, 42 (4): 927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X va boshqalar. Osteosarkoma sichqonlarining periferik qonidagi T-limfotsitlar quyi to'plamlarining xususiyatlari va ahamiyati [J]. Transl Cancer Res, 2022, 11 (6): 1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L va boshqalar. Osteosarkoma uchun immunoterapiyaning hozirgi holati va istiqbollari [J]. Oldini olish va davolash bo'yicha saraton tadqiqotlari, 2022, 49 (7): 721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Vang CZ, Liu YF, Chjan XQ va boshqalar. Immun hujayralarining o'simtaga qarshi ta'sirini tartibga soluvchi astragalosid Ⅳ mexanizmi bo'yicha tadqiqotlar davom etmoqda[J]. Xitoy an'anaviy xitoy tibbiyoti arxivi, 2024, 42 (11): 145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Chjan J, Yu XH, Yan YG va boshqalar. Osteosarkomada PI3K/Akt signalizatsiyasi [J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T va boshqalar. Cistanche [J] ning jigar saratoniga qarshi ta'siri bo'yicha tadqiqot. Kanserogenez, teratogenez va mutagenez, 2018, 30 (3): 194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX va boshqalar. Cistache deserticola feniletanol glikozidining in vitro [J] HepG2 hujayralarining proliferatsiyasi va apoptoziga ta'siri. Shinjon tibbiyot universiteti jurnali, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R va boshqalar. NK hujayralariga ega bo'lmagan yalang'och sichqonlarning yaratilishi va ularning inson o'simtasi ksenograftlari uchun qo'llanilishi [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22 (4): 1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Chjan XW va boshqalar. Yalang'och sichqonlarda me'da osti bezi saratoni ksenograftining hayvon modeli [J]. Zamonaviy biomeditsinadagi taraqqiyot, 2012, 12 (9): 1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Vang N, Sun MM va boshqalar. Bir nuqtada akupunktur bilan osteosarkoma modeli sichqonlarida turli ta'sirlar va akupunktur nuqtalarining muvofiqligi [J]. Xitoy an'anaviy xitoy tibbiyoti va farmatsevtika jurnali, 2020, 35 (5): 2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Chjan HQ, Chjan AX, Du NS va boshqalar. Cistanche deserticolaning sichqonlarning immun funktsiyasiga ta'siri [J]. Integratsiyalashgan an'anaviy va g'arbiy tibbiyotning Xitoy jurnali, 1988, (12): 736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Chjan HQ, Xu AH, Li DD. Cistanche polisaxaridlarining o'smalar va o'simtali sichqonlarga farmakologik ta'siri [J]. Integratsiyalashgan an'anaviy va g'arbiy tibbiyotning Xitoy jurnali, 1997, (S1): 155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KJt__Sv6v2y -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplatform=NZKPT&langu}DOI:106} Xue HY, Jiao CY, Yao J. Cistanches Herba [J] glikozidlarining farmakologik ta'sirining hozirgi holati. Xitoy klinik farmakologiya jurnali, 2018, 34 (4): 486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Vu JQ. Cistanche deserticola [J] dan mahrum bo'lgan feniletanoid glikozidlarning o'simtaga qarshi ta'siri. Hozirgi biotexnologiya, 2023, 13 (3): 399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW va boshqalar. Cistanche deserticola ning kemoterapiyaga chidamli osteosarkoma hujayralariga ta'siri va MRP1 va P53 [J] ifodasi. Li-shizhen an'anaviy xitoy tabobati jurnali, 2021, 32 (3): 551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Xou XT, Liu T, Su DQ. Cistanche deserticola dan feniletanol glikozidlarining H22 o'simtali sichqonlarga o'simtaga qarshi ta'siri [J]. Toksikologiya jurnali, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Chjan XY, Vang D, Fu CX va boshqalar. Interleykin-2 [J] bilan o'smalarni davolash bo'yicha tadqiqotlar davom etmoqda. Onkologiya taraqqiyoti, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. O'simta nekrozi omili va saraton sohasidagi tadqiqot yutuqlari [J]. Xitoy farmakologik byulleteni, 2020, 36 (9): 1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Chjou X, Xay GF, Chjan T va boshqalar. PI3K / AKT / mTOR yo'li va saraton kasalligini davolashda uning maqsadli ingibitorlarini tadqiq qilish jarayoni [J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32 (5): 127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. An'anaviy xitoy tibbiyoti tomonidan o'simtaning ko'p dori-darmonlarga chidamliligi va o'zgarishi mexanizmini tadqiq qilish jarayoni[J]. Xitoy farmatsevtika jurnali, 2024, 59 (7): 561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW va boshqalar. PI3K / Akt / mTOR signalizatsiya yo'lini tartibga solish orqali osteosarkomani davolashda Xitoy tibbiyoti monomerlari: sharh [J]. Xitoyning eksperimental an'anaviy tibbiyot formulalari jurnali, 2023, 29 (3): 254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.