In vitro va in vivo prosiyanidinlarning neyroprotektiv ta'siri va mexanizmlari 1-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Annotatsiya:Ushbu tadqiqot baholandineyroprotektivprosiyanidinlarning (PC) ta'siri va mexanizmlari. In vitro, kalamush feokromotsitoma hujayralari (PC12 xujayralari) 24 soat davomida shaxsiy kompyuterlar (1,2 yoki 4 ug / ml) yoki N-asetil-L-sistein (NAC) (20 mkM) ta'siriga uchradi va keyin 200 mkM H bilan inkubatsiya qilindi, O, 24 soat. Faqat H2O2 bilan solishtirganda, shaxsiy kompyuterlar antioksidant faollikni sezilarli darajada oshirdi (masalan, glutatyon peroksidaza (GSH-Px), superoksid dismutaza (SOD), katalaza (CAT), reaktiv kislorod turlari (ROS) va malondialdegid (MDA) darajasining kamayishi va yadroviy faollikning oshishi. omil-eritroid 2-faktor 2(Nrf2) to‘planishi bilan bog‘liq va xinon oksidoreduktaza 1(NQO1), gem oksigenaza 1 (HO-1), glutamat-sistein ligaza o‘zgartiruvchi subbirlik (GCLM) va glutamat-sistein ligaza katalitik subunit (GCLC). In vivo jonli ravishda, zebrafish lichinkalari (ABstrain) urug'lantirilgandan keyin 3 kun o'tgach (pdf) NAC (30 uM) yoki shaxsiy kompyuterlar (4, 8 yoki 16 ug/mL) yoki yo'q bo'lganda ta'sirlangan. 4 kun davomida 300 mkM H, O mavjudligi. Faqat H, O bilan solishtirganda, shaxsiy kompyuterlar yaxshilanganantioksidantharakatlar (masalan, GSH-Px, CAT va SOD), ROS va MDA darajalarining pasayishi va Nrf2/ antioksidant javob elementining (ARE) faollashuvi va NQO1, HO-1, GCLM va GCLC ning ko'tarilgan ifoda darajalari. .Xulosa qilib aytganda, ushbu natijalar shaxsiy kompyuterlar Nrf2/ARE yo'lini faollashtirish va oksidlovchi zararni yumshatish orqali neyroprotektiv ta'sir ko'rsatishini ko'rsatdi.

Kalit so‘zlar:prosiyanidinlar; neyroprotektiv; zebrafish; PC12 hujayralari; Nrf2/ARE yo'li

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Neyrodegenerativ kasallik sekin va asta-sekin degeneratsiyani anglatadineyronlarinson miyasida turli xil motor va/yoki kognitiv muammolarga olib keladi va oxir-oqibat neyronlarning o'limiga olib keladi[1]. Keksa odamlar sonining ko'payishi bilan qarilik neyrodegenerativ kasalliklari tez sur'atlar bilan o'sib bormoqda [2,3]. Neyrodegeneratsiyaning asosiy mexanizmlari haligacha noaniq bo'lsa-da, ko'plab dalillar shuni ko'rsatadiki, reaktiv kislorod turlarining (ROS) ortiqcha ishlab chiqarilishi va/yoki antioksidant mudofaa tizimining buzilishi natijasida kelib chiqadigan oksidlovchi stress bu kasalliklarda asosiy rol o'ynaydi [4-6]. Neyrodegeneratsiya jarayonida hujayra ichidagi ROS ishlab chiqarish va antioksidant mudofaa tizimining ROSni tozalash va / yoki ROS vositachiligidagi zararni tiklash qobiliyati o'rtasida muvozanat mavjud emas. ROS ning ortiqcha ishlab chiqarilishi makromolekulyar zararga olib keladi. Shuning uchun hujayraning makromolekulyar shikastlanishining to'planishi nekrozga olib keladi [8,9. Shunday qilib, ortiqcha ROSni yo'q qilish uchun antioksidantlarni qo'shish neyrodegenerativ kasalliklarning oldini olishga yordam beradi. Tabiiy bioaktiv birikmalar kam yoki hech qanday nojo'ya ta'sirlar bilan xavfsizdir. Shuning uchun tabiiy resurslardan antioksidant birikmalarni topishga e'tibor ortib bormoqda.

Cistanche immunitetni yaxshilashi mumkin

Prosiyanidinlar (PC) flavonoidlarning tabiiy fenolik birikmalari bo'lib, katexin va monomerlarning oligomerlarini o'z ichiga oladi.epikatexin[10-12]. Shaxsiy kompyuterlar tabiiy oziq moddalar va antioksidantlardir va ularning antioksidant ta'siri vitamin C va E vitaminiga qaraganda kuchliroqdir [13]

Shu bilan birga, in vivo va in vitro oksidlanish zarariga nisbatan shaxsiy kompyuterlarning neyroprotektiv ta'siri va mexanizmi noaniqligicha qolmoqda.

Zebrafish - Hindiston bilan chegaralangan chuchuk suvli tropik kiprinid baliqlari. Qizig'i shundaki, odamning kasallik bilan bog'liq genlarining taxminan 87 foizi zebrafishdagi homolog genlar bilan bog'langan [14]. Eksperimental sichqoncha modellariga nisbatan, zebrafishlardan namunaviy tizim sifatida foydalanish qisqaroq eksperimental davrlar, arzonlashtirilgan xarajatlar va qulayroq gen manipulyatsiyasi bilan bog'liq [15]. In vitro modellari nuqtai nazaridan, kalamushfeokromotsitomahujayralar (PC12 hujayralari) morfologiyasi, tuzilishi va funktsiyasi jihatidan neyronlarga o'xshaydi [16]. Ularning xususiyatlari birlamchi madaniyatli neyronlarning xususiyatlariga juda mos keladi va madaniyatda oson va barqaror saqlanishi nuqtai nazaridan eksperimental afzalliklarga ega [17]. Bundan tashqari, PC12 hujayralari nerv hujayralarini o'rganish uchun in vitro modellar sifatida keng qo'llanilgan [18-20]. Vodorod periks (H, O2) hujayra membranalari orqali o'tishi va oksidlovchi stressni boshlashi mumkin bo'lgan ROS turidir [21]. Ko'pgina hisobotlar H2O oksidlovchi stress [22-24] modellarini yaratish uchun ishlatilishi mumkinligini ko'rsatdi. Ushbu tadqiqotda biz PC12 hujayralari va zebrafishlarda shaxsiy kompyuterlarning neyroprotektiv ta'siri va mexanizmlarini baholadik.

2. Natijalar

2.1.Kompyuterlarning H2Oga ta'siri2-PC12 hujayralarining davolash qilingan zarari

PC12 xujayralari 24 soat davomida 200 mkM H, O ga ta'sir qildi va hujayra hayotiyligi 56,5 foizga kamaydi (la-rasm). Hujayralarni 1,2 yoki 4 ug/ml dozada shaxsiy kompyuterlar bilan oldindan davolash hujayra hayotiyligiga hech qanday ta'sir ko'rsatmadi, 1,2 va 4 ug/ml PC bilan davolash esa PC12 hujayralarini H2O2-sitotoksikligini yaxshilash orqali sezilarli darajada himoya qildi. hujayra hayotiyligi (1b,c,s-rasm).<0.05 versus="" h,="" o2-treated="" group).="" however,="" pcs="" treatment="" alone="" at8ug/ml="" decreased="" cell="" viability="" (figure="" 1b).="" n-acetyl-l-cysteine="" (nac),="" whichis="" is="" known="" to="" protect="" against="" h2o2-induced="" oxidative="" damage,="" was="" used="" as="" a="" positive="">

2.2. Kompyuterlarning H2O2 bilan ishlov berilgan PC12 hujayralarining oksidlovchi stressiga ta'siri

ROS va malondialdegid (MDA) darajalari oksidlovchi shikastlanishning jiddiyligini ko'rsatadi. 24 soat davomida 200 mkM H2O2 ta'sirida bo'lgan PC12 xujayralari ROS va MDA darajasini oshirdi va 2 va 4 ug/ml shaxsiy kompyuterlarni oldindan davolash ROS va MDA darajasini inhibe qildi (2a-c, p-rasm).<0.05 versus="" h,="" o2-induced="" group).="" to="" further="" evaluate="" the="" antioxidant="" effects="" of="" pcs="" in="" h,o,-induced="" pc12="" cells,="" we="" measured="">glutationperoksidaza (GSH-Px), katalaza (CAT) va superoksid dismutaz (SOD) faolligi va H, O bilan davolash GSH-Px, CAT va SOD faolligini bostirishini kuzatdi. Biroq, H2O{3}}induktsiyasi 2 va 4 ug/ml da shaxsiy kompyuterlar bilan oldindan ishlov berish orqali qutqarildi (2d-f,p-rasm).<0.05 versus="" h2o2-treated="">

2.3.Kompyuterlarning yadroviy omil-Eritroidga ta'siri 2-H2Odagi bog'liq omil 2(Nrf2)/ARE yo'li2-Ko'rilgan PC12 hujayralari

Biz Nrf2 darajasi yuqoriga ko'tarilganligini va Keapl ifodasi HO, davolashdan oldin shaxsiy kompyuterlarni (2 va 4 ug / ml) oldindan davolashdan so'ng, H2O2 qo'zg'atilgan guruhdagi ushbu darajalarga nisbatan pastga tushirilganligini aniqladik (3a-c-rasm). , p<0.05 versus="" h,o,-induced="" group）.="" furthermore,="" pcs="" （4="" μg/ml）="" facilitated="" nuclear="" localization="" of="" nrf2="" under="" h,o,-lesioning="" conditions="" (figure=""><0.05 versus="" h2o2-induced="" group).addition-ally,="" western="" blotting="" showed="" that="" heme="" oxygenase="" 1="" (ho-1),="" quinone="" oxidoreductase="" 1(nqo1),="" glutamate-cysteine="" ligase="" catalytic="" subunit(gclc),="" and="" glutamate-cysteine="" ligase="" modifier="" subunit="" (gclm)="" levels="" were="" upregulated="" following="" pcs(2="" and="" 4="" ug/ml)treatment="" compared="" with="" h2o2="" alone="" (figure="" 3g-k,=""><0.05 versus="" h2o2-induced="">

Shakl 3. Kompyuterlarning H, O{2}}davolangan PC12 hujayralarida Nrf2/ARE yo'liga ta'siri. (a) Western blot usulida aniqlangan Nrf2 va Keap1 oqsillari darajasi; (b) Nrf2 / GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazorat qilish nisbati); (c) Keap1/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazorat qilish nisbati); (d) Western blot usulida aniqlangan yadro Nrf2 va sitoplazmatik Nrf2 ning oqsil ifoda darajalari; (e) yadro Nrf2/LaminB oqsilining nisbiy ifodasi (nazoratga nisbati); (f) sitoplazmik Nrf2/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazorat qilish nisbati); (g) Western blotting yordamida aniqlangan HO-1, NOO1, glutamat-sistein ligaza katalitik subbirligi (GCLC) va GCLM oqsil darajalari; (h) HO -1/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazoratga nisbati); (i) NQO1/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazoratga nisbati); (j) GCLC/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazoratga nisbati); (k) GCLM/GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazorat qilish nisbati). Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi. Barcha tajribalar uch marta o'tkazildi. Yuqoridagi har xil harflar bilan qiymatlar sezilarli darajada farq qiladi (p<0.05, one-way="">

2.4. Nrf2/ARE signalizatsiyasi shaxsiy kompyuterlar vositasida antioksidant ta'sir qilish uchun javobgardir.

Shakl 4a, b da ko'rsatilganidek, Nrf2 siRNK Nrf2 ifodasini inhibe qildi. Shu bilan birga, Nrf2 siRNA bilan davolash kompyuterlarning H2O2-bilan oksidlovchi zararga qarshi himoya ta'sirini yo'q qildi, bu Nrf2-siRNK bilan transfektsiyalangan guruhdagi hujayra hayotiyligining pasayishi bilan tasdiqlanadi (4c-rasm). Bir vaqtning o'zida, MDA tarkibi va SOD faolligi bo'yicha shaxsiy kompyuterlarning harakatlari H2O2-zararlanish sharoitida Nrf2 nokauti bilan o'zgartirildi (4d,e-rasm).

4-rasm. Nrf2/ARE signalizatsiyasi H2O2-davolangan PC12 hujayralarida shaxsiy kompyuterlar vositasida antioksidant ta'sir qilish uchun javob beradi.(a)Nrf2 protein ifodasini Western blotting yordamida aniqlash orqali nokaut samaradorligi aniqlandi;(b)Nrf2/ GAPDH oqsilining nisbiy ifodasi (nazorat qilish nisbati); (c) hujayra hayotiyligi; (d) MDA darajalari; (e) SOD faolligi. Ma'lumotlar mavzu± SD sifatida ifodalanadi. Barcha tajribalar uch marta o'tkazildi. Yuqoridagi turli harflar bilan qiymatlar sezilarli darajada farq qiladi, (p<0.05, **p="" <="" 0.01="" relative="" to="" control="" group,="" one-way="">

2.5. H2O2 bilan davolashdan keyin zebrafish lichinkalarining harakatchanligiga shaxsiy kompyuterlarning ta'siri

H2O2-induktsiya qilingan oksidlanish shikastlanishi zebra baliqlari lichinkalarining umumiy suzish masofasini kamaytirdi. Shaxsiy kompyuterlarni davolash (4, 8 va 16 ug/ml) H2O2-qo'zg'atadigan harakatlanish etishmovchiligini qutqardi, bu H2O2 guruhiga nisbatan harakat masofasining ortishi bilan tasdiqlanadi (5a,b,p-rasm).<0.05 versus="" h2o2-treated="" group).="" nac,="" which="" is="" known="" to="" protect="" against="" h2o2-induced="" oxidative="" damage,="" was="" used="" as="" a="" positive="" control.="" moreover,="" pcs(16ug/ml)or="" nac（30="" μm）="" alone="" did="" not="" affect="" the="" locomotor="" behavior="" of="" normal="" zebrafish="">

5-rasm. H2O2-zebrafish lichinkalarining harakatchanligiga shaxsiy kompyuterlarning ta'siri. (a) Har bir guruhdagi zebrafish lichinkalarining suzish izlarining odatiy namunalari; (b) har bir guruhdagi zebrafish lichinkalarining o'rtacha umumiy masofasi. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ko'rsatilgan. Barcha tajribalar uch marta takrorlandi. Yuqoridagi har xil harflar bilan qiymatlar sezilarli darajada farq qiladi (p<0.05, one-way="">

2.6. H2O2 bilan ishlov berilgan zebrajish lichinkalarining oksidlovchi stressiga shaxsiy kompyuterlarning ta'siri

ShKni (4,8 va 16 ug/ml) zebrafish lichinkalari bilan davolash hujayra ichidagi ROS hosil bo'lishining H2O2-ko'payishini kamaytirdi (6a,b, p-rasm).<0.05 versus="" h,="" o,-treated="" group).="" lipid="" peroxidation="" assays="" also="" indicated="" that="" pcs(4,8,="" and="" 16="" ug/ml)="" dose-dependently="" blocked="" h2o2-induced="" increases="" in="" mda="" levels="" in="" zebrafish="" larvae="" (figure="" 6c,=""><0.05 versus="" ho2-induced="" group).="" furthermore,="" gsh-px="" activity="" was="" reversed="" by="" pc's="" (4,8,="" and="" 16="" μg/ml）="" treatment="" （figure=""><0.05 versus="" h2o2-treated="" group）.="" additionally,="" pcs（8="" and="" 16="" μg/ml）increased="" h2o2-induced="" reductions="" in="" cat="" and="" sod="" activities（figure="" 6e,f,p=""><0.05 versus="" h2o2-induced="">

Shakl 6. H2O2-zebrafish lichinkalaridagi oksidlovchi stressga shaxsiy kompyuterlarning ta'siri. (a) Zebrafish lichinkalarining vakillik floresan fotomikrograflari; (b) ROS darajalari tasvirlash dasturi orqali o'lchandi; (c) MDA darajalari; (d) GSH-Px faolligi; (e) CAT faolligi; (f) SOD faolligi. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi. Barcha tajribalar uch marta o'tkazildi. Yuqoridagi turli harflar bilan qiymatlar sezilarli darajada farqlanadi (p < 0.05,="" bir="" tomonlama="">

2.7.Kompyuterlarning H2Odagi Nrf2/ARE yoʻllariga taʼsiri2-Zebrafish Laroae bilan davolash

H2O{1}}davolangan zebrafish lichinkalarida shaxsiy kompyuterlarni davolashning himoya ta'siri Nrf2/ARE yo'llari ishtirok etgan bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi. Nrf2, HO-1, NQO1, GCLC va GCLM ifoda darajalari (7a-e,p-rasm)<0.05 versus="" h,="" o,-induced="" group)were="" up-regulated="" following="" pcs(16="" ug/ml)="" treatment="" compared="" to="" levels="" after="" h2o,="" treatment="">

Figure 7. Effects of PCs on the Nrf2/ARE pathway in H>O,-davolangan zebrafish lichinkalari. (a) Nrf2 darajalari;(b)GCLC darajalari;(c)GCLM darajalari;(d)HO-1 darajalari;(e)NQO1 darajalari. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi. Yuqoridagi har xil harflar bilan qiymatlar sezilarli darajada farq qiladi (p<0.05, one-way="" anova="">

Ushbu maqola Molecules 2021, 26, 2963 dan olingan. https://doi.org/10.3390/molecules26102963 https://www.mdpi.com/journal/molecules