To'rtta feniletanoid glikozidning H2O ga neyroprotektiv ta'siri2-Nrf2/ARE yo'li orqali PC12 hujayralarida induktsiya qilingan apoptoz

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Mayquan Li 1, Tao Xu 1, Fey Chjou 1, Mengmeng Vang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao va Baiyi Lu 1,*

1.Kirish

Antioksidant gomeostazning nomutanosibligi bo'lgan oksidlovchi stress lipid peroksidatsiyasini, oqsil va DNKning shikastlanishini, hujayra qarishini va hujayra o'limini keltirib chiqaradi. Bu jarayon, ehtimol, Altsgeymer kasalligi (AD), Parkinson kasalligi (PD) va ishemiya/reperfuziya [1] kabi bir qancha neyrodegenerativ kasalliklarga yordam beradi. Asosiy reaktiv kislorod turlaridan (ROS) biri bo'lgan vodorod peroksid (H2O2) lipid peroksidlanishi va DNKning shikastlanishiga olib kelishi ma'lum. Bundan tashqari, H2O2 gidroksil erkin radikallarining endogen manbai bo'lib, hujayra oksidlovchi stressining fon darajasiga hissa qo'shadi [3,4]. Shuning uchun oksidlovchi stressdan kelib chiqqan apoptozning oldini olish uchun terapevtik strategiyalar neyrodegenerativ kasalliklarni davolashda potentsialga ega bo'lishi mumkin.

Yadro omili eritroid 2-bog'liq 2 omil (Nrf2), oksidlovchi stress bilan kuchli bog'liq bo'lgan transkripsiya omilidir. Nrf2 faollashishi ko'plab antioksidant va detoksifikatsiya genlarining, jumladan gem oksigenaza -1 (HO-1), NAD(P)H xinon oksidoreduktaza 1, yallig'lanishga qarshi [13] va immunomodulyator [14] transkripsiyasini keltirib chiqaradi. ] bioaktivliklar. Osmanthusfragrans bir nechta Osiyo taomlarining umumiy tarkibiy qismi bo'lib, uzoq vaqtdan beri iste'mol qilingan. Biz ilgari O.fragrans gullari ekstrakti fazoviy o'rganish va xotirani kuchaytirganini, oksidlovchi zararni inhibe qilganini va ICR sichqonchasi modelida d-galaktoza bilan qo'zg'atilgan qarishda neyroprotektiv faollikni namoyish qilganini ko'rsatdik [15]. Salidrosid, akteozid va izoakteozid O.fragrans gullari ekstraktining antioksidant faolligiga asosiy PhG javobidir [16].

PhGlarning neyroprotektiv ta'siri bo'yicha tadqiqotlar kerakli natijalarga erishdi. Salidrosid MPP plus [17,18] da ta'sirlangan PC12 hujayralarining hujayra apoptozini sezilarli darajada kamaytirdi. Akteozid shuningdek, MPP plyus tomonidan qo'zg'atilgan apoptoz va PC12 hujayralarida oksidlovchi stressni [19] va A p{6}}induktsiyalangan SH-SY5Y hujayra shikastlanishini [20] engillatdi. Echinacoside SH-SY5Y hujayralarida [21] o'simta nekrozi faktori-a (TNFa) tomonidan qo'zg'atilgan apoptoz, sichqonlarda MPTP tomonidan qo'zg'atilgan dopaminerjik toksiklik [22], kalamush kortikal hujayralarining glutamat bilan shikastlangan birlamchi madaniyatida [23] va { {19}}PC12 hujayralarida OHDA sabab bo'lgan zarar [24]. Natijalar shuni ko'rsatdiki, PhGs sitoprotektiv ta'sir ko'rsatadi va neyrodegenerativ kasalliklarni davolash uchun potentsial agentlardir. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, PhG ning antioksidant xususiyatlari ushbu birikmalar uchun boshqa ko'plab bioaktivliklarga asoslanadi [25]. Biroq, kam sonli tadqiqotlar oksidlovchi toksiklikka qarshi PhG ning molekulyar mexanizmini o'rgangan.

Bizning tadqiqotimizda biz to'rtta tipik PhGni quyidagicha tanladik: salidrozid (feniletanoid monosaxaridlar), akteozid (feniletanoid disaxaridlar), izoakteozid (feniletanoid disaxaridlar) va echinacoside (feniletanoid trisaxaridlar). Biz H2O2-induktsiyalangan PC12 hujayra modelida PhGlarning himoya ta'siri va molekulyar mexanizmini o'rganish uchun differentsiatsiyalangan PC12 hujayralari [26] yordamida neyronlarning o'lim modelini ishlatdik. Biz PhGs Nrf2 / ARE yo'lini Kelchga o'xshash ECH bilan bog'liq protein 1 (Keap1) bilan bog'lash orqali faollashtirganini ko'rsatdik. Bu jarayon antioksidant fermentlarni kuchaytirdi va PC12 hujayralarining oksidlovchi stressga chidamliligini oshirdi.

Neyrodegenerativ kasalliklarni davolash:Cistanche dan PhGlar

2. Natijalar

2.1. PhGs bostirilgan H2O2-PC12 hujayralarida sitotoksiklik

H2O2 va PhG (0.1,1,5 va 10 g/ml) ning PC12 hujayralariga sitotoksik ta'siri sinovdan o'tkazildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, H2O2 kontsentratsiyaga bog'liq va vaqtga bog'liq holda PC12 hujayra hayotiyligini yo'qotdi (1A-rasm). PC12 xujayralarining 200 H2O2 ga 2 soat davomida ta'sir etishi hujayra hayotiyligi 57,4 foizni tashkil etdi. Hujayralarni PhG bilan 0.1,1, 5 va 10 mL/ml da oldindan davolash hujayra hayotiyligiga ta'sir ko'rsatmadi (1B-rasm) va PC12 hujayralari H2O2-induktsiyasini yaxshilash orqali sezilarli darajada himoyalangan. hujayra hayotiyligi mos ravishda 9.549-22.141 foiz, 12.092-25.289 foiz, 1.470-9.289 foiz va 3.411-11.441 foiz ( 1C-rasm). Biroq, salidrozid (0,1 ^ g / ml), izoakteozid (0,1, 1, 5 va 10 ^ g / ml), echinacoside (0,1,1 va 5 ^ g / ml) oldindan davolash HzOz tomonidan qo'zg'atilgan hujayrada sezilarli farq ko'rsatmadi. jarohat. Hujayralarni PhGs bilan oldindan davolash H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan morfologik xususiyatni ham yaxshiladi (1D-rasm).

1-rasm.PhGs PC12 hujayralarida H2O{1}}induktsiya qilgan sitotoksiklikni bostirdi. Hujayra hayotiyligi MTT tahlili bilan aniqlandi. PC12 hujayralarida turli konsentratsiyalarda H2O2 (A) va PhGs (B) ning sitotoksik ta'siri. (C) H2O ni susaytirgan PhGs2-hujayra hayotiyligining pasayishiga olib keldi. PC12 hujayralari 24 soat davomida PhGs (0.1 va 10 mg/mL) bilan inkubatsiya qilindi va keyin yana 2 00 pM H2O2 bilan inkubatsiya qilindi. PhGlar olib tashlanganidan keyin h. D) Morfologik kuzatish. Davolanishdan so'ng hujayralar fazali kontrastli mikroskop (x100), CK: normal guruh, H2O2: H2O2 bilan ishlov berilgan guruh, HL: salidrozidning past dozasi bilan davolangan guruh, HH: salidrozidning yuqori dozasi bilan davolangan guruh, ML: akteozidning past dozasi bilan davolash qilingan guruh tomonidan kuzatildi. MH: akteozidning yuqori dozasi bilan davolash qilingan guruh, IL: izoakteozidning past dozasi bilan davolash qilingan guruh, IH: izoakteozidning yuqori dozasi bilan davolash qilingan guruh, SL: echinakozidning past dozasi bilan davolangan guruh, SH: ekinakozidning yuqori dozasi bilan davolash qilingan guruh. ** davolanmagan guruhga nisbatan p <0,01; #="" p=""><0,05, h2o2="" bilan="" ishlov="" berilgan="" guruhga="" nisbatan;="" ##="" p=""><0,01, h2o2="" bilan="" ishlov="" berilgan="" guruhga="">

2.2. PhGs bostirilgan H2O2-ROSning hujayra ichidagi toʻplanishi, lipid peroksidlanishi (MDA) va PC12 hujayralarida superoksid dismutaza (SOD) faolligining oshishi

PC12 hujayralariga 2 00 pM H2O2 2 soat davomida ta'sir qilish ROS darajasini, MDA tarkibini oshiradi va SOD faolligini kamaytiradi (2-rasm). PhGsni oldindan davolash ROS darajasini, salidrozid va akteozidni zaiflashtirdi va izoakteozid va echinacoside oldindan davolashning yuqori dozasi ROS darajasini sezilarli darajada susaytirdi (p <0.01). salidrosidni="" oldindan="" davolash="" mda="" tarkibiga="" hech="" qanday="" ta'sir="" ko'rsatmadi,="" ammo="" akteozidni="" oldindan="" davolash="" mda="" tarkibini="" sezilarli="" darajada="" susaytirdi="" (p=""><0,05). izoakteozid="" va="" echinakozidni="" oldindan="" davolash="" mda="" tarkibini="" sezilarli="" darajada="">

2-rasm.PhGs ROS va MDA to'planishini blokirovka qildi va PC12 hujayralarida SOD faolligini oshirdi. PC12 xujayralari 24 soat davomida PhGs (0.1 va 10 4g/mL) bilan inkubatsiya qilindi va keyin boshqa vaqt uchun 200 |^M H2O2 bilan inkubatsiya qilindi. PhGlar olib tashlanganidan 2 soat o'tgach. (A) PhGs ROS va MDA to'planishini blokirovka qildi. (B) PhGs MDA to'planishini blokirovka qildi. (C) PhGlar SOD faolligini oshirdi. CK: normal guruh, Model: H2O2 bilan ishlov berilgan guruh, Salidroside: salidrozid bilan ishlov berilgan guruh, Akteozid: akteozid bilan ishlov berilgan guruh, Izoakteozid: izoakteozid bilan ishlov berilgan guruh, Echinacoside: echinacoside bilan ishlov berilgan guruh. ** p < 0.01="" davolanmagan="" guruhga="" nisbatan;="" #="" p=""><0,05, h2o2="" bilan="" davolash="" qilingan="" guruhga="" nisbatan,="" ##="" p=""><0,01, h2o2="" bilan="" davolash="" qilingan="" guruhga="">

2.3.PhGs teskari H2O2-PC12 hujayralarida induktsiya qilingan apoptoz

H2O2 bilan davolash (200 |1M) 2 soat davomida PC12 hujayralarida apoptozni sezilarli darajada oshirdi, umumiy apoptoz darajasi 16,02 foizgacha (3-rasm). Biroq, 24 soat davomida PhGs (0,1 va 10 g / ml) bilan oldindan davolash konsentratsiyaga bog'liq ravishda apoptoz tezligini pasaytirdi (p <0,01). salidrosid,="" akteozid,="" izoakteozid="" va="" echinakozid="" hujayra="" apoptozi="" foizini="" 4.750-6.627="" foiz,="" 4.{20}}.800="" foiz,="" 6.593-10.047="" foiz="" va="" 0.047="" foizga="" sezilarli="" darajada="" kamaytirdi.="" 1.530-7.510="" foiz,="" mos="">

3-rasm. PhGs PC12 hujayralarida H2O2-induktsiya qilingan apoptozni qaytardi. PC12 xujayralari 24 soat davomida PhG (0.1 va 10 g/ml) bilan inkubatsiya qilindi va keyin yana 2 soat davomida 2{16}}0 pM H2O2 bilan inkubatsiya qilindi. PhGs olib tashlandi. Keyin apoptoz PI/FITC floresan probi yordamida oqim sitometriyasi bilan o'lchandi. CK: normal guruh, Model: H2O2 bilan ishlov berilgan guruh, Salidroside: salidrozid bilan ishlov berilgan guruh, Akteozid: akteozid bilan ishlov berilgan guruh, Izoakteozid: izoakteozid bilan ishlov berilgan guruh, Echinacoside: echinacoside bilan ishlov berilgan guruh. ** davolanmagan guruhga nisbatan p <0,01; ##="" p=""><0,01, h2o2="" bilan="" ishlov="" berilgan="" guruhga="">

2.4. PhGs teskari H2O2-H2O-1, NQO1, GCLC va GCLM ning oqsil ifodalanishining past tartibga solinishi

HO{0}}, NQO1 va glutamat-sistein ligaza (GCL) muhim hujayrali antioksidant fermentlar, HO-1, NQO1 va GCL ning katalitik yoki modifikatsiyalovchi subbirliklari (GCLC yoki GCLM) Nrf{5}}boshqariladigan quyi oqim genlari [27]. Davolanishdan keyin HO -1, NQO1, GCLC va GCLM ning oqsil ifodasi kuzatildi. H2O2 bilan yoki H2O2 bo'lmagan holda HO-1 va NQO1 ning oqsil ifodasi o'rtasida aniq farq aniqlandi (6A-C-rasm) (p < 0.01).="" phgs="" (0.1="" va="" 10="" p^g/ml)="" h2o2-h2o-1="" oqsil="" ifodalanishining="" h2o-1="" induktsiyasini="" bekor="" qildi="" ({{32}="" da="" salidroziddan="" tashqari)="" },1="" pg/ml),="" nqo1="" (0,1="" pg/ml="" da="" akteoziddan="" tashqari)="" (p="">< {{40}}.01).="" h2o2="" shuningdek,="" gclc="" va="" gclm="" proteini="" ifodasini="" pasaytirdi="" (p="">< 0.05)="" (6a,d,e-rasm).="" phgs="" (0.1="" va="" 10="" pg/ml)="" teskari="" h2o2-gclc="" protein="" ekspressiyasini="" (0,1="" pg/ml="" dagi="" echinakoziddan="" tashqari)="" (p="">< 0,01)="" va="" gclmni="" pastga="" regulyatsiyasiga="" olib="" keldi.="" (0,1="" pg/ml="" da="" salidroziddan="" tashqari)="" (p=""><0,01). keyin="" h2o-1="" kimyoviy="" ingibitorlari="" antioksidant="" fermentlarning="" h2o2-induktsiyasidan="" kelib="" chiqadigan="" sitotoksiklikdan="" himoyalanishini="" tartibga="" solishdagi="" rolini="" baholash="" uchun="" ishlatilgan.="" phgs="" (0,1="" va="" 10="" pg/ml)="" h2o2-sitotoksikligining="" oldini="" oldi,="" ammo="" bunday="" himoya="" ta'siri="" 20="" pmda="" h2o-1="" inhibitori="" znpp="" (p=""><0,01) tomonidan="" qaytarildi="" (6f-rasm,="" p=""><0,01)>

2.5. Keap1 ifodasi va molekulyar o'rnatish tahlili

Fiziologik sharoitda Keap1 Nrf2 ning Neh2 domeniga bog'lanib, Nrf2 ni ubiquitinatsiya va keyinchalik 26S proteazomasi tomonidan parchalanishi uchun Cul{5}}asosidagi E3 ubiquitin ligazasiga yo'naltirish orqali Nrf2 ning repressor oqsili sifatida ishlaydi [28]. PhGsning Keap1 bilan bog'lanish qobiliyati ularning antioksidant ta'siri ostidagi mexanizmni o'rganish uchun molekulyar o'rnatish tahlili orqali baholandi.

Antioksidant ta'sir: CistanchePhGlar

3. Munozara

Biz PC12 hujayralarida H2O2 induktsiyalangan sitotoksisite bo'yicha PhGlarning neyroproteksiyasini tekshirdik. Natijalar shuni ko'rsatadiki, PhGsni oldindan davolash HzOz dan kelib chiqqan sitotoksiklikni sezilarli darajada bostirdi, hujayra ichidagi ROS darajasini susaytirdi, hujayra ichidagi antioksidant fermentlar darajasini yaxshiladi va oxir-oqibat PC12 hujayralarida H2O{6}}induktsiya qilingan sitotoksiklikni qaytardi. Bundan tashqari, PhGs Nrf2 ning transkripsiya faollashuvini oshirdi, HO-1, NQO1, GCLC va GCLM ning HzOz tomonidan induktsiyalangan protein ifodasini pastga regulyatsiyasini bekor qildi. Bundan tashqari, PhGs Keap1 oqsilidagi Nrf2 bog'lanish joyi bilan potentsial o'zaro ta'sir ko'rsatdi.

H2O2-induktsiyalangan PC12 hujayra shikastlanishida, lipidning oksidlanish degradatsiyasiga ishora qiluvchi lipid peroksidatsiyasi membranalarning o'tkazuvchanligini oshirib, hujayra shikastlanishiga olib keldi [29]. MDA hosil bo'lishi lipid peroksidlanish ko'rsatkichi sifatida keng qo'llaniladi [30]. H2O2 ROS ishlab chiqarishni kuchaytirdi va SOD, katalaza va GPx kabi antioksidant himoya fermentlarini tugatdi. Bu jarayon oksidlovchi stressga olib keladi [31], bu ko'pchilik neyrodegenerativ kasalliklarning sabablari va rivojlanishida asosiy rol o'ynaydi. Oldingi tadqiqotlarga muvofiq, biz H2O2 bilan davolashdan so'ng ROS darajasining oshishi, hujayra ichidagi antioksidant fermentlarning kamayishi va PC12 hujayralarining apoptozi kuchayganini kuzatdik. PhGsni oldindan davolash hujayra ichidagi ROS ning HzOz tomonidan qo'zg'atilgan o'sishini sezilarli darajada susaytirdi, hujayra ichidagi antioksidant fermentlarni yaxshiladi va oxir-oqibat PC12 hujayralarida HzOz dan kelib chiqqan sitotoksiklikni bekor qildi.

Kuang va boshqalar. [32] echinacoside mitoxondriyal apoptotik yo'l orqali PC12 hujayralarida H2O2-induktsiya qilingan sitotoksiklikka sezilarli neyroprotektiv ta'sir ko'rsatganligini xabar qildi. Ushbu tadqiqotda biz echinacoside, salidroside, acteosid va isoacteosid PC12 hujayralarining antioksidant faolligini oshirish orqali neyroprotektiv ta'sir ko'rsatishini aniqladik, chunki ular Nrf2 ning transkripsiya faolligini oshirdi va HO -1, NQO1, GCLC va GCLM. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, Nrf2 maqsadli genlari, xususan, HO -1 astrositlar va neyronlarda faollashishi yallig'lanish, oksidlanish shikastlanishi va hujayra o'limidan kuchli himoya qiladi. HO{10}} tizimi markaziy asab tizimida juda faol ekanligi va uning modulyatsiyasi neyrodegenerativ kasalliklar patogenezida hal qiluvchi rol oʻynaydi [33]. So'nggi tadqiqotlar, shuningdek, Nrf2 ning PD [9] va Keap1 ning ADda Nrf2 ni qayta faollashishi uchun samarali maqsad sifatida [34] rivojlanishi va xavfidagi rolini aniqladi. Natijalar Nrf2 uchun neyrodegenerativ kasalliklarda terapevtik maqsad sifatida yangi dalillarni qo'llab-quvvatlaydi.

Molekulyar docking tahlili shuni ko'rsatdiki, PhGs Keap1 bilan quyidagi bog'lanish qobiliyatiga ega: echinacoside > isoacteosid > acteosid > salidroside. Ushbu natijalarga muvofiq, PhGsni oldindan davolash Nrf2 yadro translokatsiyasiga olib keldi, yadroda quyidagi Nrf2 ifodasi mavjud: echinacoside > isoacteoside * acteosid > salidroside. Biz glikozidlar soni PhG va Keap1 ning mumkin bo'lgan bog'lanish rejimiga ta'sir qilgan deb taxmin qildik va bog'lanish rejimi Nrf2 ning Keap1 dan chiqishiga sabab bo'ldi. Bu jarayon Nrf2 va quyi oqim genlarining faollashishiga olib keldi va natijada PC12 hujayralarini H2O2 -induksiyalangan oksidlovchi stressdan himoya qiladi.

Sistanxning neyroprotektiv ta'siriPhGlar

4. Materiallar va usullar

4.1. Kimyoviy birikmalar va reaktivlar

Salidrosid (CAS № {0}}), akteozid (CAS № 61276-17-3), izoakteozid (CAS raqami: 61303-13-7) va echinakozid (CAS № {{3}) }) YYuanye Biotexnologiya kompaniyasidan (Shanxay, Xitoy) sotib olingan. 10 mg/ml lik eritma hosil qilish uchun PhGlar PBSda eritilib, -20 darajada saqlangan. H2O2 Aladdin® (Shanxay, Xitoy) dan sotib olingan. RPMI-1640 oʻrta va homila sigir zardobi Hyclone (Logan, UT, AQSH), 0,5 foizli tripsin EDTA, penitsillin va streptomitsin Keyi shahridan (Xanchjou, Xitoy) sotib olindi. MDA, SOD diagnostika to'plamlari, MTT va DCFH-DA Beyotime Biotexnologiya institutidan (Nankin, Jiangsu, Xitoy) sotib olingan. Annexin V-FITC/PI ikki tomonlama bo'yash to'plami Solarbio Life Sciences (Pekin, Xitoy) dan sotib olingan. Nrf2, Histon H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM va p-aktin, sichqonchaga qarshi turp peroksidi (HRP) IgG va quyonga qarshi HRP-IgG antikorlari Abcamdan sotib olindi. (London, Buyuk Britaniya). HO-1 va ZnPP ingibitorlari Sigma Chemical Co. (Sent-Luis, MO, AQSh) dan sotib olingan. RNAiso Plus, gDNK o'chirgichli PrimeScript™ RT reaktiv to'plami va SYBR® Premix Ex Taq™ II Takara (Shiga, Yaponiya) dan sotib olingan. Lipofectamine® RNAiMAX Transfection Reagent Thermo Fisher Scientific (Waltham, Buyuk Britaniya) dan sotib olingan. Nrf2 siRNA ketma-ketligi quyidagicha edi: oldinga, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; va teskari, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Ayni paytda, nazorat siRNA ketma-ketliklari quyidagicha edi: oldinga, UUCUCCGAACGUGUCACGU; va teskari, ACGUGACACGUUCGGAGAA.

4.2. Hujayra madaniyati

Sichqoncha adrenal feokromotsitoma liniyasi (PC12 hujayralari) Biokimyo va hujayra biologiyasi instituti, SIBS, (CAS, Shanxay, Xitoy) dan olingan. Hujayralar 10% xomilalik sigir zardobi (Hyclone), 100 U/ml penitsillin va 0,1 mg/ml streptomitsinni o'z ichiga olgan RPMI-1640 (Giklon)da 37 daraja haroratda 5 foiz CO2 bilan saqlangan. Media har kuni o'zgartirildi.

4.3. Hujayra hayotiyligini tahlil qilish

PC12 xujayralari 96-quduq plastinkalariga 2 x 104 hujayra/quduqqa ekilgan. Biriktirilgandan so'ng, hujayralar 20 daqiqa davomida inhibitor bilan yoki inhibitörsiz inkubatsiya qilindi, 24 soat davomida PhGs bilan yoki ularsiz inkubatsiya qilindi va keyin PhGlar chiqarilgandan keyin yana 2 soat davomida H2O2 bilan inkubatsiya qilindi. Inkubatsiyadan so'ng hujayralar 37 daraja 4 soat davomida 5 mg / ml MTT bilan ishlov berildi va ommaviy axborot vositalari ehtiyotkorlik bilan olib tashlandi. Omon qolgan hujayralar tomonidan hosil bo'lgan formazan kristallari ko'k rang hosil qilish uchun 150 rL DMSOda eritildi [35] va absorbans plastinka o'quvchida 570 nm da o'lchandi. Nazoratchilar faqat DMSO bilan bir xil konsentratsiyali muhitdan foydalanganlar. Hujayra hayotiyligi nazorat ulushi sifatida normallashtirildi.

PhG kontsentratsiyasi (0.1,1,5 va 10 Rg/ml) PhG larning sitotoksiklik tahliliga va echinakozidning bildirilgan sitoprotektiv ta'siriga qarab tanlangan [32]. Hisobotga ko'ra, 10 Rg / ml dan past bo'lgan sitotoksik ta'sir ko'rsatilmagan va echinacoside HzOz-shikastlangan hujayra modelida sitoprotektiv ta'sir ko'rsatishi haqida xabar berilgan.

4.4. Apoptoz tahlili

Apoptoz Annexin V-FITC/PI qo'sh binoni to'plami (Solarbio) bilan aniqlandi. PC12 xujayralari 6-quduq plastinkalariga 2 x 105 hujayra/quduqqa ekilgan. Biriktirilgandan so'ng, hujayralar 24 soat davomida PhGs (0,1 va 10 Rg / ml) bilan ishlov berildi va PhG'lar chiqarilgandan keyin yana 2 soat davomida H2O2 bilan inkubatsiya qilindi. Inkubatsiyadan so'ng hujayralar sovuq PBSda yuvildi, 10 daqiqa davomida 1500 rpm da ikki marta santrifüj qilindi va 500 rL bog'lovchi buferda qayta suspenziya qilindi. FITC etiketli Annexin V (5 rL) va propidium yodid.

Qisqartmalar

GCLC glutamat-sistein ligaza-katalitik subunit

GCLM glutamat-sistein ligaza-katalitik modifikator bo'linmasi

H2O2 vodorod periks

HO-1 gemoksigenaza 1

Keap1 Kelch ECH assotsiatsiyasi oqsili 1

NQO1 NAD(P)H xinon oksidoreduktaza 1

Nrf2 yadro omili eritroid 2-bog'liq 2 omil

PhGs salidrosid, akteozid, izoakteozid va echinacoside

ROS reaktiv kislorod turlari

ZnPP sink protoporfirin

Cistanche deserticola ekstrakti: Cistanche PHG

Ma'lumotnomalar

1. Quyosh, AY; Chen, YM Oksidativ stress va neyrodegenerativ kasalliklar. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]

2. Maheshvari, A.; Mikro, MM; Aggarval, A.; Sharma, RK; Nandan, D. H2O2 in vitro tomonidan qo'zg'atilgan moyak germ hujayralari apoptoziga jalb qilingan yo'llar. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]

3. Halliwell, B. Reaktiv kislorod turlari va markaziy asab tizimi. J. Neyroxim. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]

4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Altsgeymer kasalligida asab degeneratsiyasida temir bilan bog'liq erkin radikal peroksidlanishning mumkin bo'lgan roli haqida. Ann. NY akad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]

5. Chjan, DD Nrf2-Keap1 signalizatsiya yo'lining mexanik tadqiqotlari. Dori Metab. Vahiy 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]

6. Itoh, K.; Tong, KI; Yamamoto, M. Elektrofillarga moslashuvchan javobni tartibga solishda Nrf2-Keap1 yo'lini faollashtiruvchi molekulyar mexanizm. Erkin Radik. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]

7. Kong, AN; Ovuor, E.; Yu, R.; Xebbar, V.; Chen, C.; Xu, R.; Mandlekar, S. Ksenobiotik fermentlarning xarita kinaz yo'li va antioksidant yoki elektrofil javob elementi (ARE / EpRE) tomonidan induksiyasi. Dori Metab. Vahiy 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]

8. Buendia, I.; Mixalska, P.; Navarro, E.; Gameyro, I.; Egea, J.; Leon, R. Nrf2-ARE yo'li: neyrodegenerativ kasalliklarda oksidlovchi stress va neyroyallig'lanishga qarshi yangi maqsad. Farmakol. U erda. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]

9. Skibinski, G.; Xvan, V; Ando, ​​DM; Daub, A.; Li, AK; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, MM; Shabby, BA; Finkbeiner, S. Nrf2 proteostazni modulyatsiya qilish orqali LRRK 2- va a-sinuklein tomonidan qo'zg'atilgan neyrodegeneratsiyani yumshatadi. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]

10. Ximenez, C.; Riguera, R. O'simliklardagi feniletanoid glikozidlar: tuzilishi va biologik faolligi. Nat. Prod. Rep. 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]

11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; O‘rxon, I.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Verbascum xanthophoeniceum Grisebning antioksidant va xolinesterazlarning inhibitiv faoliyati. va uning feniletanoid glikozidlari. Oziq-ovqat kimyosi. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]

12. Li, N.; Vang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. ning neyroprotektiv ta'siriCistanches HerbaO'rtacha Altsgeymer / s kasalligi bo'lgan bemorlarga terapiya. Dalilga asoslangan to‘ldiruvchi. Muqobil. Med. 2015, 2015, 103985. [CrossRef] [PubMed]

13. Liu, YL; U, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Chju, YY; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL. Monochasma savatieri Franch kompaniyasining antimikrobiyal, yallig'lanishga qarshi faoliyati va feniletanoid glikozidlarining toksikologiyasi. sobiq Maksim. J. Etnofarmakol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]

14. Dong, Q.; Yao, J.; Fang, JN; Ding, K. Ikki sovuq suvda olinadigan polisaxaridlarning strukturaviy tavsifi va immunologik faolligiCistanche deserticola YC Ma. Uglevod. Res. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]

15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Chjou, F.; Xu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C.; Zhao, Y. Osmanthusfragrans gul ekstrakti va akteozid ICR sichqonchasi modelida d-galaktoza sabab bo'lgan qarishdan himoya qiladi. J. Med. Oziq-ovqat 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]

16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, V.; Lu, B.; Cai, Z.; Chjou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Feniletanoid glikozid profillari va Osmanthusfragrans Lourning antioksidant faoliyati. UPLC/PDA/MS va simulyatsiya qilingan hazm qilish modeli bo'yicha gullar. J. Agrik. Oziq-ovqat kimyosi. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]

17. Li, X.; Ha, X.; Li, X.; Quyosh, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside NO yo'lini inhibe qilish orqali PC12 hujayralarida MPP plus-induktsiyali apoptozdan himoya qiladi. Miya Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]

18. Chjan, L.; Ding, V.; Quyosh, H.; Chjou Q.; Xuan, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside PI3K / Akt yo'lini faollashtirish orqali PC12 hujayralarini MPP plus tomonidan qo'zg'atilgan apoptozdan himoya qiladi. Oziq-ovqat kimyosi. Toksikol. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]

19. Sheng, GQ; Chjan, JR; Pu, XP; Ma, J.; Li, CL Verbaskozidning PC12 hujayralarida 1-metil-4- fenilpiridinyum ioni tomonidan qo'zg'atilgan neyrotoksiklikka himoya ta'siri. Yevro. J. Farmakol. 2002, 451,119-124. [CrossRef]

20. Vang, X.; Syu, Y.; Yan, J.; Chjao, X.; Quyosh, X.; Chjan, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside inson neyroblastomasi SH-SY5Y hujayralarini beta-amiloid tomonidan qo'zg'atilgan hujayra shikastlanishidan himoya qiladi. Miya Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]

21. Min, D.; Jin, YZ; Yong, J.; Zheng, BL; Yao, HW Echinacoside SHSY5Y neyron hujayralarini TNFa tomonidan qo'zg'atilgan apoptozdan qutqaradi. Chin. Farmakol. Buqa. 2005, 505,11-18.

22. Chjao, Q.; Gao, JP; Li, WW; Cai, DF Parkinson kasalligining subakut MPTP sichqoncha modelida Echinacoside ning neyrotrofik va neyrorescue ta'siri. Miya Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

23. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Li, KY; Kim, YC Callicarpa dicotomasidan feniletanoid glikozidlarning in vitro neyroprotektiv faoliyati. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

24. Liu, YG; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Ye, XS sintetik feniletanoid glikozid hosilalari potentsial neyroprotektiv vositalar sifatida. Yevro. J. Med. Kimyo. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]

25. Fu, G.; Pang, H.; Vong, YH Tabiiyki feniletanoid glikozidlar: yangi terapevtiklar uchun potentsial sabablar. Curr. Med. Kimyo. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]

26. Greene, LA; Tischler, AS Nerv o'sishi omiliga javob beradigan kalamush adrenal feokromotsitoma hujayralarining noradrenerjik klonal liniyasini yaratish. Proc. Natl. akad. Sci. AQSh 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]

27. Liang, QN; Sheng, YC; Jiang, P.; Ji, LL; Xia, YY; Min, Y.; Vang, ZT. Yangi sutdan ajratilgan va yosh sichqonlar jigarida glutation antioksidant tizimining farqi va uning izolin bilan bog'liq gepatotoksisitedagi ishtiroki. Ark. Toksikol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]

28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okava, X.; Oxtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Oksidlanish stress sensori Keap1 Nrf2 ning proteasomal degradatsiyasini tartibga solish uchun Cul{2}}asoslangan E3 ligaza uchun adapter sifatida ishlaydi. Mol. Hujayra. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]

29. Kornelius, C.; Krupi, R.; Kalabreza, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z.; Calabrese, IJ; Cuzzocrea, S. Travmatik miya shikastlanishi: Oksidativ stress va neyroproteksiya. Antioksid. Redoks signali. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]

30. Xou, Z.; Luo, V.; Quyosh, X.; Xao, S.; Chjan, Y.; Xu, F.; Vang, Z.; Liu, B. Vodorodga boy sho'r suv, engil travmatik miya shikastlanishidan keyin oksidlovchi zarar va kognitiv nuqsonlardan himoya qiladi. Miya Res. Buqa. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]

31. Ansoriy, MA; Roberts, KN; Scheff, SW TBI ning kalamush modelida korteksdagi kontuziyadan kelib chiqqan oksidlovchi stress va sinaptik oqsillarning vaqt kursi. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]

32. Kuang, R.; Quyosh, Y.; Yuan, V.; Ley, L.; Zheng, X. Feniletanoid glikozidlardan biri bo'lgan echinacoside ning PC12 hujayralarida H2O2-induktsiya qilingan sitotoksiklikka himoya ta'siri. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]

33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Ibrohim, NG; Karuzo, C.; Zella, D.; Fabio, G. Oziq-ovqat polifenollari tomonidan Nrf2 / ARE yo'lini modulyatsiya qilish: Kognitiv va neyrodegenerativ kasalliklar uchun ozuqaviy neyroprotektiv strategiya. Mol. Neyrobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]

34. Kerr, F.; Sofoladadesakin, O.; Ivanov, DK; Gatliff, J.; Gomez, PB; Bertrand, HC; Martinez, P.; Kallard, R.; Snoeren, I.; Cochem, HM Direct Keap1-Nrf2 buzilishi Altsgeymer kasalligi uchun potentsial terapevtik maqsad sifatida. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]

35. Xansen, MB; Nielsen, SE; Berg, K. Hujayra o'sishini / hujayralarni o'ldirishni o'lchash uchun aniq va tezkor bo'yash usulini qayta tekshirish va yanada rivojlantirish. J. Immunol. Usullar 1989, 119, 203-210. [CrossRef]

36. Matbuot, C. Giyohvand moddalarni aniqlashda virtual skrining; Crc Press: Boka Raton, FL, AQSh, 2005 yil.

37. Muegge, I.; Martin, YC; Xayduk, PJ; Fesik, SW. FK506 bog'lovchi oqsiliga zaif ligandlarni ulashda PMF skorini baholash. J. Med. Kimyo. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]

38. Kunts, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Landrij, R.; Ferrin, TE Makromolekulalar-ligandlar o'zaro ta'siriga geometrik yondashuv. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [CrossRef]

39. MD, E.; Murray, CW; Auton, TR; Paolini, GV; Mee, RP. Empirik skoring funktsiyalari: I. Retseptor komplekslaridagi ligandlarning bog'lanish yaqinligini baholash uchun tezkor empirik skoring funktsiyasini ishlab chiqish. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11,425-445.

© 2018 mualliflar tomonidan. Litsenziya egasi MDPI, Bazel, Shveytsariya. Ushbu maqola Creative Commons Attribution (CC BY) litsenziyasi (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z) shartlari va shartlari asosida tarqatilgan ochiq maqoladir.