Norvogonin PC12 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan oksidlovchi stress va apoptozni susaytiradi

Batafsil ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com

Abstrakt

Ma'lumot uchun: Norvogonin skelet tuzilishida uchta fenolik gidroksil guruhiga ega bo'lgan tabiiy flavon bo'lib, ajoyib xususiyatlarga ega.antioksidant faollik. Biroq, norvogoninning neyroprotektiv ta'siri noaniqligicha qolmoqda. Bu erda biz norvogoninning PC12 hujayralarida gipoksiya natijasida kelib chiqadigan oksidlovchi zararga qarshi himoya qobiliyatini tekshirdik. Usullari: Hujayra hayotiyligi va apoptoz mos ravishda MTT tahlili va Annexin V-FITC/PI bo'yash orqali tekshirildi. Reaktiv kislorod turlari (ROS) miqdori DCFH-DA tahlili yordamida o'lchandi. Laktat dehidrogenaza (LDH), malondialdegid (MDA) vaantioksidant fermentdarajalari tijorat to'plamlari yordamida aniqlandi. Tegishli genlar va oqsillarning ifodasi mos ravishda real vaqtda miqdoriy PCR va Western blotting yordamida o'lchandi. Natijalar: Biz norvogonin hujayra hayotiyligini oshirish, LDH chiqarilishini kamaytirish va hujayra morfologiyasidagi o'zgarishlarni yaxshilash orqali PC12 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan shikastlanishni engillashtirganini aniqladik. Norvogonin ham rol o'ynaganantioksidantntROSni tozalash, MDA ishlab chiqarishni kamaytirish, superoksid dismutaza (SOD), katalaza (CAT) va glutatyon peroksidaza (GPx) faoliyatini saqlab turish va HIF-1 va VEGF ifoda darajalarini kamaytirish orqali. Bundan tashqari, vogonin kaspaza -3, sitoxrom c va Baxning ifoda darajalarini inhibe qilish orqali hujayra apoptozini oldini oldi, shu bilan birga Bcl-2 ifoda darajalarini va Bcl-2/Bax nisbatini oshirdi. Xulosa: Norvogonin ROSni so'ndirish, antioksidant fermentlarning faoliyatini saqlab turish va mitoxondriyal apoptoz yo'lini inhibe qilish orqali PC12 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan shikastlanishni susaytiradi.

Kalit so'zlar: Norvogonin,Antioksidant faollik, gipoksiya, oksidlovchi stress,Apoptoz

Fon

Aerob organizmlar energiya ishlab chiqarish uchun kislorodga (O2) muhtoj. Gipoksiya to'qimalarda hujayra funktsiyasini ta'minlash uchun etarli darajada O2 ta'minoti yo'qligi deb ta'riflanadi va ko'pincha ba'zi fiziologik vaziyatlarda, masalan, balandlik [1] va insult [2] kabi ko'plab patologik holatlarda yuzaga keladi. Miya, ayniqsa, kislorod iste'moli, to'yinmagan yog'li kislotalarga boy va past kislorod iste'moli tufayli gipoksiyadan kelib chiqadigan shikastlanishga ayniqsa sezgir.antioksidant qobiliyati[3]. Ko'paygan dalillar gipoksiya miyaga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkinligini ko'rsatdi [4-6].

Linlin Jing, Rongmin Gao, Ji Chjan, Dongmei Chjan, Jin Shao, Zhengping Jia va Huiping Ma

Farmatsevtika bo'limi, PLA ning 940-chi qo'shma logistika qo'llab-quvvatlash kasalxonasi, Lanzhou 730050, Gansu, Xitoy

Oksidlanish stressi va apoptoz gipoksiya sabab bo'lgan shikastlanishga ikki hissa omil sifatida qaraladi [7, 8]. Gipoksiyaga ta'sir qilish oksidlovchi stressni engillashtiradigan hujayra ichidagi reaktiv kislorod turlarini (ROS) ishlab chiqarishni ko'paytirishi haqida xabar berilgan. Superoksid anioni (O2−˙), vodorod peroksid (H2O2) va gidroksil radikali (HO•) kabi haddan tashqari ROS lipidlar, membranalar, oqsillar va DNKga hujum qilib, hujayraning strukturaviy va funktsional o'zgarishlariga olib keladi va keyinchalik hujayra shikastlanishiga olib keladi. 9].

Antioksidant uchun NZ cistanche uchun bosing

Shu bilan birga, haddan tashqari ishlab chiqarilgan ROS, shuningdek, mitoxondriyal o'tkazuvchanlik o'tish g'ovaklarining (mPTP) ochilishini osonlashtiradi [10] va proapoptoz oqsillarini tashqi mitoxondriyal membranaga o'tkazadi, bu esa mitoxondriyal membranalarning depolarizatsiyasini va sitoxrom c [11] chiqarilishini keltirib chiqaradi. Ushbu o'zgarishlar oxir-oqibatda mitoxondrialga bog'liq apoptozni keltirib chiqaradi [12]. Shunday qilib, haddan tashqari ROSni inhibe qilish yoki yo'q qilish qobiliyatiga ega antioksidantlar o'zlarining himoya ta'sirini oksidlovchi stressni va gipoksiya tufayli kelib chiqqan apoptozni susaytirish orqali amalga oshirishi mumkin, deb ishoniladi. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, vitamin C [13], izoflavon [8] va nitroksid radikallari [14] kabi antioksidant qo'shimchalar in vitro va in vivo jonli ravishda gipoksiyadan kelib chiqadigan shikastlanishni cheklashi mumkin. Flavonoidlar o'simliklarning ikkilamchi metabolitlarining katta va xilma-xil sinfidir. Ular har doim erkin radikallarni tozalash va lipid peroksidatsiyasini inhibe qilish qobiliyatiga ega ajoyib tabiiy antioksidant sifatida qabul qilinadi.

Hozirgi vaqtda inson salomatligiga foydali ta'siri tufayli ushbu birikmalar sinfiga ko'proq e'tibor qaratilmoqda. Flavonoidlar yallig'lanishga qarshi, antinosiseptiv va neyroprotektiv faollik kabi keng ko'lamli farmakologik ta'sirga ega ekanligi ko'rsatilgan, bularning barchasi ularning antioksidant faolligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin [15]. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, flavonoidlar gipoksiya bilan bog'liq muvaffaqiyatsizlikka qarshi mukammal himoya ta'sirini ko'rsatadi. Masalan, rutin gipoksiya natijasida kelib chiqqan retinal ganglion hujayralarining o'limiga qarshi kuchli neyroprotektiv ta'sirga ega [16]. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, rutin H9c2 hujayralarida oksidlovchi stress va apoptozni inhibe qilish orqali kobalt xlorid tomonidan qo'zg'atilgan gipoksiya shikastlanishini engillashtirishi mumkin [17]. Bundan tashqari, Liu va boshqalar nobiletin (3′,4′,5,6, 7,{13}}geksametoksi flavon) H9c2 hujayrasida Akt/GSK-3 yoʻlini faollashtirish orqali miyokard I/R shikastlanishini susaytirishini taklif qiladi. [18]. Bundan tashqari, akasetin kalamush kardiyomiyositlari va H9C2 kardiyomiyoblastlarini Nrf2 signalizatsiya yo'lining AMPK vositachiligida faollashishi orqali gipoksiya / reoksigenatsiya natijasida kelib chiqqan shikastlanishdan himoya qilishi mumkin [19].

Norvogonin (5,7,8-trigidroksi flavon, 1-rasm) gripp va saratonni davolashda ishlatiladigan an'anaviy xitoy o'ti bo'lgan Scutellaria baicalensis Georgi (xitoycha "Huang Qin") ildizidan ajratilgan farmakologik faol flavon. [20, 21]. Biroq, tabiiy o'simliklardagi past darajalari tufayli norvogoninning biologik faolligi bo'yicha cheklangan tadqiqotlar haqida xabar berilgan. Ushbu muammoni hal qilish uchun norvogoninning bir nechta sintez usullari haqida xabar berilgan [22, 23].

Bizning oldingi tadqiqotimiz, shuningdek, to'rt bosqichda xrizindan norvogonin olishning oddiy usulini yaratdi [24]. Ushbu tadqiqotlar norvogoninning biologik faolligini keyingi baholashga ijobiy ta'sir ko'rsatdi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, norvogonin antioksidant [25], saratonga qarshi [26, 27], antiviral [28] va antimikrobiyal faollikka ega [29], shuningdek, siyanidning rag'batlantirilgan ROS ishlab chiqarishini inhibe qiladi [30]. Biroq, norvogoninning gipoksiyadan kelib chiqqan shikastlanishdan himoya qilish qobiliyati bormi, noma'lumligicha qolmoqda. Ushbu tadqiqotning maqsadi norvogoninning PC12 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan oksidlovchi stress va apoptozga qarshi himoya ta'sirini o'rganish edi.

Usullari

Materiallar va reaktivlar

Norvogonin (tozaligi 98 foizdan katta yoki unga teng) bizning avval xabar qilingan usulimizga muvofiq sintez qilingan [24]. Rutin (tozaligi 96 foizdan katta yoki teng) Ci Yuan Biotechnology Co., Ltd. (Xian, Shannxi, Xitoy) dan sotib olingan. Norvogonin va rutin steril dimetil sulfoksidda (DMSO) eritilib, -20 darajada saqlanadi va foydalanishdan oldin darhol hujayra madaniyati muhitida suyultiriladi. Dulbecco modifikatsiyalangan Eagle muhiti (DMEM), homila sigir zardobi (FBS), streptomitsin va penitsillin Solarbio co., Ltd. (Pekin, Xitoy) dan sotib olingan.

Malondialdegid (MDA), laktat dehidrogenaza (LDH), superoksid dismutaza (SOD), katalaza (CAT) va glutatyon peroksidaza (GPx) to'plamlari Nankin Jiancheng biomuhandislik institutidan (Jiangsu, Xitoy) olingan. 2′,7′-dixlorid-hidrofloressein diasetat (DCFH-DA) va (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium bromid) tetrazolium (MTT) Sigma-Aldrich Co (Sent-Luis, MO, AQSh) dan olingan. Gipoksiya qoʻzgʻatuvchi omil-1 (HIF-1), qon tomir endotelial oʻsish omili (VEGF), B hujayrali limfoma-2 (Bcl-2), Bcl{{17 uchun birlamchi antikorlar }} bog'langan X proteini (Bax), Kaspaza-3, Cytochrome C va -aktin hammasi Abcamdan (Kembrij, Buyuk Britaniya) sotib olingan. Ikkilamchi antikorlar ZsBio kompaniyasidan (Pekin, Xitoy) olingan.

Beyotime biotexnologiya institutidan (Jiangsu, Xitoy) apoptozni tahlil qilish to'plami olingan. Barcha kimyoviy moddalar va erituvchilar analitik darajada bo'lib, Xitoyda tijorat yetkazib beruvchidan olingan. Hujayra madaniyati PC12 xujayralari Xitoy Fanlar Akademiyasining Hujayra bankidan (TCR 9, Shanxay, Xitoy) sotib olindi va DMEMda 10 foiz (v/v) FBS, 100 U/ml penitsillin va 100 U/ml streptomitsinlar bilan saqlangan. 5 foiz CO2 bo'lgan namlangan inkubatorda 37 daraja. Norvogoninning sitotoksikligini baholash uchun PC12 hujayralari (4 ~ 6-o'tish) turli konsentratsiyalarda (10− 8, 10− 7, 10− 6, 10− 5, 10− 4 mol/L) norvogonin bilan oldindan inkubatsiya qilingan. 1 soat, keyin esa 24 soat davomida kulturalanadi. Gipoksiya ta'siri Hujayra gipoksiyasining shikastlanish modelini qo'zg'atish uchun PC12 xujayralari namlangan kamerada 24 soat davomida 37 gradusda gipoksiya muhitiga (1 foiz O2, 5 foiz CO2 va 94 foiz N2) ta'sir ko'rsatdi. Normoksik nazorat hujayralari 24 soat davomida 5 foizli CO2 inkubatorida 37 darajada ekilgan.

Norvogoninning gipoksiyadan kelib chiqqan shikastlanishga qarshi himoya ta'sirini baholash uchun PC12 hujayralari turli konsentratsiyalarda (10- 8, 1 0 - 7, 10 - 6, 10 - 5 mol/ L) gipoksiyani davolashdan 1 soat oldin norvogonin. Hujayra hayotiyligi Hujayra hayotiyligi yuqorida tavsiflanganidek MTT tahlili bilan o'lchandi [31]. Qisqacha aytganda, PC12 xujayralari (1 × 105 hujayra / ml) 96 quduqli madaniyat plitalariga ekilgan. Keyin quduqlarga norvogoninning turli konsentratsiyasi qo'shildi. Tekshirish quduqlari uchun teng hajmdagi DMSO qo'shildi. Hujayra madaniyati muhitida DMSO ning yakuniy konsentratsiyasi 0,1 foizni tashkil qiladi. Normoksik yoki gipoksiya sharoitida inkubatsiyadan so'ng, har bir quduqqa 10 mL MTT (5,0 mg / ml) qo'shildi, so'ngra 37 daraja 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. Keyin MTT bilan supernatant olib tashlandi va formazan mahsuloti 100 mkl DMSOda eritildi. Absorbans SpectraMax i3 mikroplata o'quvchi (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, AQSH) da 570 nm da o'lchandi. Natijalar nazorat guruhining nisbiy foizi sifatida ifodalangan. Shisha qoplamalarga ekilgan gematoksilin va eozin (HE) bo'yalgan PC12 xujayralari yuqorida aytib o'tilganidek, norvogonin bilan ishlov berishdan oldin 24 soat davomida inkubatsiya qilindi.

Muhit olib tashlandi va shisha qoplamalar sovuq PBS bilan yuvildi, so'ngra xona haroratida 10 daqiqa davomida metanol bilan fiksatsiya qilindi va keyin 5 daqiqa davomida uch marta sovuq PBS bilan yuvildi. Nihoyat, hujayralar HE bo'yash protokoli [32] bo'yicha bo'yalgan. Hujayra tahlillari hujayra morfologik o'zgarishlarini tekshirish uchun OLYMPUS IX73 mikroskopi (100×) yordamida amalga oshirildi. Raqamli tasvirlar mikroskop bilan bog'langan DXM 1200 C raqamli kamerasi (Nikon) yordamida olingan. PC12 hujayralarida ROS tarkibidagi hujayra ichidagi ROS darajasi DCFH-DA tahlili [33] yordamida aniqlandi. Qisqacha aytganda, PC12 xujayralari (1 × 105 hujayra/ml) 6-quduq plastinkalariga ekilgan. Gipoksiya bilan davolashdan so'ng, PC12 xujayralari PBS bilan yuvildi va keyin 10 mkM DCFH-DA o'z ichiga olgan madaniyat muhitida 30 daqiqa davomida 37 daraja qorong'ida inkubatsiya qilindi. Hujayralar Olympus teskari floresan mikroskopi (Tokio, Yaponiya) bilan kuzatildi va qo'zg'alish to'lqin uzunligi 488 nm va emissiya to'lqin uzunligi 525 nm bo'lgan Becton Dickinson FACScan oqim sitometri (BD Biosciences, CA, AQSh) tomonidan tahlil qilindi. ROS darajasi nazoratning nisbiy foizi sifatida ifodalangan. LDH oqishi, MDA tarkibi va antioksidant ferment faolligi PC12 hujayralari (1 × 105 hujayra / ml) 90 mm idishga ekilgan. Yuqorida aytib o'tilganidek, gipoksiya bilan davolashdan so'ng, har bir idishdan 50 mkL madaniyat supernatanti yig'ildi va vositadagi LDH faolligi tijorat tahlil to'plamlari (Jiancheng biotexnologiya instituti, Nankin, Xitoy) yordamida aniqlandi va U / ml sifatida ifodalandi. PC12 xujayralari ikki marta sovuq PBS bilan yuvilgandan so'ng yig'ib olindi va homogenlashtirildi. Umumiy oqsil kontsentratsiyasi BCA protein tahlili to'plami bilan o'lchandi. MDA tarkibi va antioksidant ferment faolligi tijorat tahlil to'plamlari (Jiancheng biotexnologiya instituti, Nankin, Xitoy) yordamida aniqlangan.

MDA tarkibi nmol/mg protein sifatida taqdim etildi. SOD, CAT va GPx faoliyati U/mg protein sifatida taqdim etildi. Hujayra apoptozisi (Annexin-V / PI bo'yash) Gipoksiya bilan davolashdan so'ng, PC12 hujayralari yig'ib olindi, ikki marta sovuq PBS bilan yuvildi va keyin bog'lovchi bufer bilan to'xtatildi. Hujayralar ishlab chiqaruvchining (Beyotime, Shanxay, Xitoy) protokoliga binoan Annexin V-FITC va PI eritmasi bilan ishlov berildi. Ma'lumotlar to'plash Becton Dickinson FACScan oqim sitometri (BD Biosciences, CA, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Miqdoriy real vaqtda PCR tahlili PC12 hujayralarining umumiy RNKsi Trizol reagenti (Takara, Dalian, Xitoy) yordamida ekstraksiya qilindi va PrimeScript TM RT reagent to'plami (AK4301,) yordamida cDNKga aylantirildi.

Takara, Dalian, Xitoy). HIF-1, VEGF, Bcl-2, Bax, kaspaza-3, sitoxrom C va glitseraldegid-3-fosfatdehidrogenaza (GAPDH) genini kodlovchi cDNK miqdoriy real ko‘rsatkich bilan kuchaytirildi. 7300 real vaqtda aniqlash tizimi (Applied Biosystems, CA, AQSh) yordamida vaqtli PCR. Amaldagi primerlar 1-jadvalda ko'rsatilgan. PCR tsiklining shartlari 30 soniya davomida 95 daraja, keyin 5 soniya uchun 95 daraja va 31 soniya uchun 60 daraja 40 tsikl. mRNK darajalari 2-DDCt usuli yordamida hisoblab chiqildi va mos yozuvlar geni bo'lgan GAPDH ga normallashtirildi. Western blot PC12 xujayralari yig'ilib, RIPA agentlarida homogenlashtirildi. Umumiy oqsillarning kontsentratsiyasi BCA protein tahlili to'plami yordamida aniqlandi. 30 ug namunalar 12 foizli SDS-PAGE elektroforezida hal qilindi va keyin poliviniliden ftorid (PVDF) membranalariga o'tkazildi (Millipore, Billerica, MA, AQSh).

Membranalar xona haroratida 1 soat davomida TBST buferida 5 foiz yog‘siz quruq sut bilan bloklangan va asosiy antikorlar bilan inkubatsiya qilingan: anti-HIF-1 (1:300, ab179483, Abcam, Buyuk Britaniya), anti-VEGF (1:1000, ab46154, Abcam, Buyuk Britaniya), anti-Bcl-2 (1:1000, ab59348, Abcam, Buyuk Britaniya), anti-Bax (1:500, ab32503, Abcam, Buyuk Britaniya), antikaspaz-3 (1:300, ab44976, Abcam, Buyuk Britaniya), anti sitoxrom C (1:1000, ab13575, Abcam, Buyuk Britaniya) va anti- -aktin (1:2000, ab8227) , Abcam, Buyuk Britaniya) kechasi 4 daraja. Keyin membranalar yuvildi va xona haroratida 1 soat davomida ikkilamchi antikorlar (1: 2000, ZsBio, Pekin, Xitoy;) bilan inkubatsiya qilindi. Immunoreaktiv chiziqlar kengaytirilgan xemiluminesans (ECL) reagentlari yordamida ingl. Tarmoqlarning nisbiy intensivligi -aktin ichki nazoratiga normallashtirildi va Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, AQSh) yordamida tahlil qilindi.

Statistik tahlil

Natijalar kamida uchta mustaqil tajribadan olingan o'rtacha ± SD sifatida ifodalangan. Guruhlar orasidagi farq bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida tahlil qilindi, so'ngra Student-Nyuman-Keuls post hoc testi o'tkazildi. P-qiymati < 0.05="" statistik="" jihatdan="" ahamiyatli="" deb="">

Natijalar

Norvogonin PC12 hujayralarini gipoksiyadan kelib chiqqan shikastlanishga qarshi himoya qiladi

Birinchidan, norvogoninning proliferativ faolligini istisno qilish uchun uning normal PC12 hujayralarida sitotoksikligi MTT tahlili yordamida aniqlandi. 2a-rasmda ko'rinib turibdiki, 1 × 1 0 - 8 -1 × 1 0 - 5 mol / L (P > 0,05) konsentratsiyasida norvogonin bilan davolashdan keyin hujayra proliferatsiyasi sezilarli darajada o'zgarmadi. ). Biroq, norvogonin kontsentratsiyasi 1 × 10− 4 mol / L (P <0,05) ga="" oshirilganda="" hujayra="" hayotiyligi="" sezilarli="" darajada="" kamaydi.="" natijalar="" shuni="" ko'rsatdiki,="" norvogonin="" 1="" ×="" 10−="" 8="" -1="" ×="" 10−="" 5="" mol/l="" konsentrasiyalarda="" pc12="" hujayralarida="" toksiklik="" yoki="" proliferativ="" faollik="">

Keyin biz norvogoninning gipoksiyadan kelib chiqqan PC12 hujayralarining shikastlanishiga qarshi himoya ta'sirini ko'rib chiqdik. 2b-rasmda ko'rsatilganidek, nazorat guruhi bilan solishtirganda, gipoksiya guruhidagi hujayra hayotiyligi 58,71 foizga kamaydi (P < 0.="" 0="" 1).="" 1="" ×="" 10−="" 8,="" 1="" ×="" 10−="" 7="" va="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol/l="" norvogonin="" bilan="" oldindan="" ishlov="" berilgan="" gipoksiya="" bilan="" davolash="" bilan="" solishtirganda,="" dozaga="" bog'liq="" himoyalangan="" pc12="" gipoksiyadan="" kelib="" chiqqan="" shikastlanishga="" qarshi="" hujayralar,="" hujayra="" hayotiyligini="" mos="" ravishda="" 58,71="" dan="" 62,79="" foizga="" (p=""><0,05), 66,68="" foizga="" (p=""><0,01) va="" 69,88="" foizga="" (p=""><0,01) tiklaydi.="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol="" l="" rutin="" bilan="" oldindan="" ishlov="" berish="" ham="" himoya="" ta'sirini="" ko'rsatdi,="" bu="" hujayra="" hayotiyligini="" gipoksiya="" bilan="" davolashga="" nisbatan="" 63,78="" foizga="" sezilarli="" darajada="" oshirdi.="" 1="" ×="" 10-5="" mol="" l="" norvogonin="" bilan="" oldindan="" ishlov="" berilgan="" hayotiylik="" 63,43="" foizga="" kamaydi,="" bu="" hali="" ham="" gipoksiya="" guruhidagiga="" qaraganda="" ancha="" yuqori="" (p=""><0,05). ushbu="" natijalar="" norvogoninning="" 1="" ×="" 10−="" 8="" -1="" ×="" 10−="" 5="" mol/l="" konsentrasiyalarida="" sezilarli="" sitoproteksiyaga="" ega="" ekanligini="" va="" eng="" samarali="" kontsentratsiyasi="" 1="" ×="" 10−="" 6="" mol/l="" ekanligini="" ko‘rsatdi.="" keyin="" ushbu="" doza="" quyidagi="" tajribalarda="" optimal="" doza="" sifatida="">

Norvogoninning himoya qobiliyati morfologik o'zgarishlar bilan ham tasdiqlangan. 2c-rasmda ko'rsatilganidek, gipoksiya bilan davolashsiz PC12 hujayralari muntazam shakllar (fusiform), bir xil o'lchamlar bilan yaxshi o'sdi. Gipoksiya ta'siridan so'ng, PC12 xujayralari qisqarish, yumaloq shakl, desquamatsiya va hujayra zichligining pasayishini ko'rsatdi. Gipoksiya ta'siridan oldin norvogonin yoki rutin bilan oldindan ishlov berilgan hujayralar yaxshilandi, desquamatsiya hujayralari soni kamaydi va hujayra shakli an'anaviy tarzda tiklanadi. Bundan tashqari, norvogoninning himoya qobiliyati hujayra membranasining yaxlitligini yo'qotish bilan bog'liq bo'lgan LDH oqishi bilan tasdiqlangan. 2d-rasmda ko'rsatilganidek, madaniy muhitda LDH faolligi gipoksiya ta'siridan keyin sezilarli darajada oshdi (P <>

Norvogonin yoki rutin bilan oldindan davolash LDH oqishini keskin kamaytirdi, bu norvogonin va rutin hujayra membranasi yaxlitligini tikladi. Norvogonin PC12 hujayralarida gipoksiyadan kelib chiqqan oksidlovchi stressni inhibe qiladi ROS va MDA gipoksiya tomonidan qo'zg'atilgan hujayrali oksidlovchi stressning ikkita muhim ko'rsatkichidir. Shakl 3a va b da ko'rsatilganidek, gipoksiya ta'siridan keyin PC12 hujayralarida ROS va MDA ning sezilarli darajada ortishi kuzatildi. Norvogonin yoki rutinni oldindan davolash ROS va MDA ishlab chiqarishni sezilarli darajada inhibe qildi.

SOD, CAT va GPx kabi antioksidant fermentlar hujayralardagi oksidlovchi stressga qarshi asosiy himoya tizimi hisoblanadi. 3c-e-rasmda ko'rsatilganidek, gipoksiya ta'siri PC12 hujayralarida SOD, CAT va GPx faoliyatini sezilarli darajada inhibe qildi. Norvogonin yoki rutin bilan davolash bu o'zgarishlarni bekor qildi va antioksidant fermentlarning faoliyatini tikladi. Bu natijalarning barchasi norvogonin PC12 hujayralarini gipoksiya tufayli kelib chiqqan oksidlovchi stressdan himoya qilishini ko'rsatdi.