srcyrlTil
Bosh sahifa / Bilim / Kontent

Bilim

DBL katexolining oksidlovchi oligomerizatsiyasi, melanotsitlar uchun potentsial sitotoksik birikma, yangi ionli Diels-Alder tipidagi qo'shimchalarning paydo bo'lishini ochib beradi 2-qism

May 18, 2023

Ikki protonning yo'qolishi bilan dimerdan hosil bo'lgan birikmalar ham bor edi. Ushbu birikmalar 17 min, 18 min, 20 min va 21 daqiqada 353,1021 molekulyar massa bilan elutsiya qilindi, bu C20H16O6 (353,1013 amu) uchun nazariy massadan 1,5 ppm ichida. Ushbu birikmalarning CID spektri sezilarli darajada farq qiladi, bu reaksiya aralashmasida bir nechta izomerlar hosil bo'lishini ko'rsatadi (8-11-rasmlar).

Tegishli tadqiqotlarga ko'ra, cistanche "hayotni uzaytiradigan mo''jizaviy o't" deb nomlanuvchi oddiy o'tdir. Uning asosiy komponenti antioksidant, yallig'lanishga qarshi va immunitet funktsiyasini rag'batlantirish kabi turli xil ta'sirga ega bo'lgan sistanoziddir. Cistanche va terini oqartirish o'rtasidagi mexanizm cistanche glikozidlarining antioksidant ta'sirida yotadi. Inson terisida melanin tirozinaz tomonidan katalizlangan tirozinning oksidlanishi natijasida hosil bo'ladi va oksidlanish reaktsiyasi kislorod ishtirokini talab qiladi, shuning uchun organizmdagi kislorodsiz radikallar melanin ishlab chiqarishga ta'sir qiluvchi muhim omilga aylanadi. Cistanche antioksidant bo'lgan sistanozidni o'z ichiga oladi va organizmda erkin radikallar hosil bo'lishini kamaytiradi, shu bilan melanin ishlab chiqarishni inhibe qiladi.

desert cistanche benefits

Oqartirish uchun Cistanche Tubulosa ustiga bosing

Qo'shimcha ma'lumot uchun:

% 7b% 7b1}}/WhatApp:86 13632399501}

20 daqiqada elutsiyaning cho'qqisi asosiy ishlab chiqarish sifatida faqat suv yo'qotilishini ko'rsatdi (10-rasmda m/z 335 ion). 21 daqiqada elutsiya cho'qqisi COCH2 guruhini (m / z 311 ionlari) yo'qotish bilan asosiy cho'qqini ko'rsatdi. Bu birikma DBL quinon dimerining oksidlangan shakli bo'lishi kerak. Boshqa tomondan, 18 daqiqada elutsiya cho'qqisi 335 (suv yo'qolishi), 311 (COCH2 yo'qolishi) da asosiy parchalanish ionlarini va m / z 293 (suv va COCH2 yo'qolishi) da kichik ionni ko'rsatdi. E'tibor bering, oxirgi parchalanish ioni DBL quinon dimer uchun mumkin emas va faqat benzodioxan dimerining oksidlangan shakli uchun mumkin. Ushbu natijalardan reaksiyada ikki xil turdagi dimerlar - benzodioksan dimer va DBL xinon dimer hosil bo'ladi degan xulosaga keldi.

cistanche and tongkat ali reddit

cistanche gnc

Ushbu oksidlangan dimerlar boshqa oddiy konjugatsiyalanmagan xinonlar kabi ko'rinadigan absorbsiyani namoyon qiladi. Bu 420 nm maksimal absorbsiyaga mos keladi, bu DBL katexol-tirozinaza reaktsiyasi aralashmasida to'plangan xinonoid birikma bilan bog'liq. DBL xinon dimeri aromatizatsiya qilishi va xinon metidga oksidlanishi mumkin. Holbuki, benzodioksan dimer xinongacha oksidlanishdan o'tadi va keyinchalik yon zanjirning to'yinmagan birikmasiga izomerlanadi. Shunday qilib, m / z 355 bo'lgan dastlabki dimerlar m / z 353 bilan dimerlarning oksidlangan shakliga aylanadi.

Reaksiya aralashmasining massa spektrida dimerik mahsulotlardan tashqari trimerik birikmalar ham kuzatilishi mumkin edi. Shunga qaramay, m/z 529.1486 da ikkita ota-ona ionlari mavjud bo'lib, biri 20 daqiqada, ikkinchisi 22 daqiqada elutsiya qilinadi (5-rasm paneli C). Ularning massasi nazariy protonlangan trimerik birikma (C30H26O9) massasidan 3 ppm oralig'ida. Ularning CID spektrlari 12 va 13-rasmlarda ko'rsatilgan. Bitta izomerning CID 351 da asosiy ionni berdi, bu dimerning to'liq oksidlangan shakliga mos keladi. Boshqa izomer bu ishlab chiqarishning ancha kam miqdorini berdi. Trimerlarning tuzilishini parchalanish naqshiga qarab farqlash mumkin emas edi. Shunga qaramay, reaksiya aralashmasida turli xil trimerik mahsulotlar ham hosil bo'lishi aniq edi. Shunday qilib, ushbu maqolada keltirilgan natijalar DBL katexolining oksidlovchi polimerizatsiyaga juda sezgir ekanligini tasdiqlaydi, chunki bizning guruhlarimizdan birining oldingi ishida taklif qilingan [11].

cistanche in urdu

Dimerlar va trimerlarning hosil bo'lishini reaksiyada hosil bo'lgan xinonoid mahsulotlarning reaktivliklari bilan izohlash mumkin (14-rasm). DBL katekolining oksidlanishi uning mos keladigan xinonini hosil qiladi, u yuqori darajada hidrofobikdir va ota-katexol bilan osonlikcha tsiklik yuklanish reaktsiyasini ko'rsatishi mumkin. DBL xinonining asosiy katexolga ionli Diels-Alder qo'shilishi 14-rasmda ko'rsatilganidek, ikki turdagi qo'shimchalarni hosil qiladi. Xinonoid karbonil guruhlarning to'yinmagan yon zanjir bilan reaksiyasi benzodioksan dimerini hosil qiladi. Aksincha, dienon yon zanjiri to'yinmagan yon zanjirga qo'shilishi oddiygina DBL xinon dimeri sifatida belgilangan piran tipidagi qo'shimchani hosil qiladi. Bu ikkala birikma ham oson oksidlanish va keyingi reaksiyaga kirishib, shunga o'xshash Diels-Alder reaktsiyalari orqali trimerik birikmalar hosil qilishi mumkin. Diels-Alder reaktsiyasining biologik hodisasi juda kam uchraydigan bo'lsa-da, uning bir necha holatlarda davom etishi haqida xabar berilgan [20-23]. Misol uchun, yaqinda bizning guruhlarimizdan biri N-asetil dopa metil esterining xinoni tez siklo yuklanishini, ehtimol ionli Diels-Alder reaktsiyasi orqali shunga o'xshash benzodioksan dimerini hosil qilishini ko'rsatdi [20]. Mavjud tadqiqotlar, shuningdek, yon zanjirli to'yinmagan katexollarning quinonoid kimyosida bunday ionli Diels-Alder qo'shimchalarining tarqalishini qo'llab-quvvatlaydi. Ushbu siklizatsiya reaktsiyalarining barchasi fermentativ bo'lmagan va shuning uchun stereoselektiv bo'lmagan bo'lib, bir nechta izomerik mahsulotlarni ishlab chiqarishga olib keladi. Enzimatik ravishda hosil bo'lgan xinonoid turlarining fermentativ bo'lmagan siklizatsiyasi paytida bunday ko'plab mahsulotlarni ishlab chiqarish ushbu laboratoriyada bir nechta dehidrodopa va dehidrodopamin hosilalari uchun yaxshi hujjatlashtirilgan [16-20].

cistanche bienfaits

RK va uning kamaytirilgan mahsuloti rhododendronning kuchli melanotoksikligi hozirda yaxshi tasdiqlangan [1-8,24]. Tiollarning kamayishi va hujayra nukleofillariga qo'shilishi kabi ba'zi reaktsiyalar boshqa sitotoksik xinonlar uchun ham umumiy bo'lsa-da, RK va rhododendronning noyob genotoksikligi ularning nafaqat tegishli xinonoid hosilalarini ishlab chiqaradigan bir nechta redoks reaktsiyalarini namoyish qilish qobiliyati bilan bog'liq bo'lishi mumkin. balki bir nechta yon zanjirli to'yinmagan quinonoid turlari. Bundan tashqari, ko'plab dimerik va trimerik birikmalar ishlab chiqariladi, ularning barchasi reaktiv kislorod turlarini ishlab chiqarishga, hujayra tiollarining kamayishiga va hujayra makromolekulalari, shu jumladan oqsillar va DNK bilan reaksiyaga kirishish qobiliyatiga ega [11,24]. Shunday qilib, bir nechta oksidlanish-qaytarilish reaktsiyalarini ko'rsatadigan birikmalar oddiy xinonoid birikmalarga qaraganda zaharliroq bo'ladi. Leykoderma va boshqa miyelotoksik ta'sirlarni keltirib chiqaradigan qo'zg'atuvchi sifatida RK yoki rhododendronning bir yoki boshqa mahsulotlarini aniqlash juda qiyin. Ushbu natijalarni hisobga olgan holda, biz melanin bilan bog'liq har qanday kasalliklarni davolash uchun bir nechta redoks reaktsiyalarini ko'rsatishga qodir bo'lgan ushbu birikmalar va boshqa tegishli katekollardan foydalanishdan ehtiyot bo'lamiz.

3. Materiallar va usullar

Materiallar: DBL katexoli Fujifilm-Wako Pure Chemicals kompaniyasidan (Osaka, Yaponiya) xarid qilingan. Qo'ziqorin tirozinazasi (o'ziga xos faollik 5771 birlik / mg protein) Sigma Chemical Co., Sent-Luis, MO dan sotib olingan. HPLC sinfidagi metanol va ammoniy formati (99 foiz) Acros, Morris Plains NJ shahridan olingan. Millipore, Milford, MA dan sotib olingan Milli Q sintez A10 suvni tozalash tizimi HPLC sinfidagi suvni tayyorlash uchun ishlatilgan. Mass-spektrometriya uchun mobil fazali erituvchilar (chumoli kislotasi, asetonitril) Fisher Chemical kompaniyasidan (Fair Lawn, NJ, AQSh) sotib olingan va Optima LC/MS Grade edi. Boshqa barcha kimyoviy moddalar analitik darajada bo'lgan va Fisher va/yoki VWR dan sotib olingan.

cistanche portugal

Ferment tahlillari: Belgilangan pHda 50 mM natriy fosfat tamponida DBL katexoli (odatda 0,2 mM), taxminan 5-10 mkg qo'ziqorin tirozinazasini o'z ichiga olgan reaksiya aralashmasi (1 ml) xona haroratida va spektral haroratda inkubatsiya qilindi. Oksidlanish bilan bog'liq o'zgarishlar diodli qator spektrofotometr yordamida kuzatildi. Ba'zi reaktsiyalar kislotali sharoitda o'tkazildi. DBL katexolining natriy periodat bilan kimyoviy oksidlanishi belgilangan pH qiymatlarida mol-mol nisbatida o'tkazildi. Aniq shartlar har bir rasm afsonasi ostida berilgan.
Ommaviy spektral tadqiqotlar uchun namuna tayyorlash: 100 nmol DBL katexoli va 5 mkg tirozinazni o‘z ichiga olgan reaksiya aralashmasi xona haroratida 1 ml suvda ikki daqiqa va reaksiyaning bir alikvotida inkubatsiya qilindi. (100 mL) (900 ml) 1 foizli trifloroasetik kislota bilan so'ndiriladi. Bu suyultirilgan aralashmaning massa spektrometrik tahlili o'tkazildi. Suyultirilgan reaksiya to'g'ridan-to'g'ri massa spektrometriga yuborildi. RP-nLC/ESI-MS shartlari: aniqlash va aniqlash uchun EASY-nLC 1200 (Thermo Fisher, San-Xose, CA, AQSH) bilan onlayn bog‘langan Orbitrap Fusion Lumos massa spektrometri (Thermo Fisher, San-Xose, Kaliforniya, AQSh) ishlatilgan. mahsulotlarni tavsiflaydi. nLC tizimi 15 daqiqada 0-70 foiz B chiziqli gradient yordamida 300 nL/min teng tezlikda ishladi. Mobil faza A 96,1:3.9 0.1% suvdagi chumoli kislotasi/0,1% asetonitrildagi chumoli kislotasi. Mobil faza B 80,0:20.0 0, suvdagi chumoli kislotasi .1 foiz, atsetonitrildagi 0,1 foiz chumoli kislotasi. Namuna Thermo Fisher Scientific PepMap RSLC C18 EASY-Spray zarrachasida ajratishdan oldin Thermo Fisher Scientific Acclaim PepMap 100 C18 HPLC ustunida (zarrachalar hajmi 3 mkm, 75 µm × 2 sm, 100 Å) birinchi bo‘lib tuzsizlantirildi. , 75 mkm × 15 sm, 100 Å).
Orbitrap Fusion Lumos massa spektrometri kichik molekula rejimida ishladi. Global sozlamalar quyidagicha edi: NSI ion manbai turi, musbat kuchlanish 1900 V va Ion uzatish trubkasi harorati 275 ◦C. MS skanerlash uchun ionlar Orbitrapda 30,000 ruxsati bilan aniqlandi. Massa diapazoni normal edi va skanerlash diapazoni 100–1000 m/z ga oʻrnatildi. RF linzalari 30 foizga o'rnatildi va AGC maqsadi va maksimal in'ektsiya vaqti mos ravishda 4,0 × 105 va 50 ms edi. Ma'lumotlarga bog'liq bo'lgan MS2 CID skanerlari maqsadli massa filtri bilan birgalikda amalga oshirildi, unda maqsadli massalar quyidagi protonlangan turlarga to'g'ri keldi: DBL (179,0708 m/z), DBL-xinon (177,0551 m/z), DBL-xinon dimer (355,1182 m / z), DBL-xinon trimeri (529,1499 m / z), DBL-suv qo'shimchasi (197,0813 m / z) va 2H (353,1026 m / z) yo'qotish bilan DBL-dimer. Har bir massaga ± 10 ppm massa bardoshlik bilan 2,0 × 103 intensivlik chegarasi o'rnatildi. ddMS2 CID uchun ionlar ion tuzog'ida tez skanerlash tezligi va 2 m/z izolyatsiya oynasi bilan ajratilgan. Ionlar CID orqali 40 foiz qattiq to'qnashuv energiyasi bilan parchalandi. CID faollashtirish uchun Q parametri 0,25 ga o'rnatildi. AGC maqsadi va maksimal inyeksiya vaqti 1,0 × 104 va 500 ms ga o'rnatildi. Ma'lumotlarga bog'liq bo'lgan yig'ish uchun aylanish vaqti 3 soniyaga o'rnatildi.
Muallif hissalari:Kontseptsiya, MS, SI va KW; metodologiya, MS, JE, RM va KU; rasmiy tahlil, MS va JE; tergov, MS, JE, RM va KU; resurslar, MS, SI va KW; ma'lumotlar kuratsiyasi, MS, JE, RM va KU; yozish - asl qoralama tayyorlash, MS; yozish - ko'rib chiqish va tahrirlash, MS, SI, KW va JE; vizualizatsiya, MS; nazorat, MS va JE; loyiha ma'muriyati, MS Barcha mualliflar qo'lyozmaning nashr etilgan versiyasini o'qib chiqdilar va rozi bo'ldilar.
Moliyalashtirish: Ushbu tadqiqot tashqi moliyalashtirilmagan.
Manfaatlar to'qnashuvi:Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilmaydi.

cistanche supplement review

Qisqartmalar

CID To'qnashuv natijasida parchalanish
DBL 3, 4-dihidroksibenzalaseton
LC/MS Yuqori bosimli suyuqlik xromatografiyasi/mass-spektrometriyasi
RK Raspberry keton

Ma'lumotnomalar

1. Beekwilder, J.; van der Meer, I.; Sibbesen, O.; Broekgaarden, M.; Qvist, I.; Mikkelsen, JD; Hall, RD Tabiiy malina ketonining mikrobial ishlab chiqarilishi. Biotexnologiya. J. 2007, 2, 1270–1279. [CrossRef] [PubMed]

2. Fukuda, Y.; Nagano, M.; Futatsuka, M. 4-(p-gidroksifenil)-2-butanon ishlab chiqarish bilan shug'ullanuvchi ishchilarda kasbiy leykoderma. J. Occup. Salomatlik 1998, 40, 118–122. [CrossRef]

3. Nishigori, C.; Aoyama, Y.; Ito, A.; Suzuki K.; Suzuki, T.; Tanemura, A.; Ito, M.; Katayama, I.; Oiso, N.; Kagohashi, Y.; va boshqalar. Tibbiyot mutaxassislari (ya'ni, dermatologlar) uchun rododenol keltirib chiqaradigan leykodermani davolash bo'yicha qo'llanma. J. Dermatol. 2015, 42, 113–128. [CrossRef] [PubMed]

4. Sasaki, M.; Konda, M.; Sato, K.; Umeda, M.; Kavabata, K.; Takaxashi, Y.; Suzuki, T.; Matsunaga, K.; Inoue, S. Rhododendron, depigmentatsiyani qo'zg'atuvchi fenolik birikma, tirozinazaga bog'liq mexanizm orqali melanotsit sitotoksisitesini ta'minlaydi. Pigment hujayrali melanoma Res. 2014, 27, 754–763. [CrossRef] [PubMed]

5. Kasamatsu, S.; Xachiya, A.; Nakamura, S.; Nakamura, S.; Yasuda, Y.; Fuximori, T.; Takano, K.; Morivaki, S.; Xase, T.; Suzuki, T.; va boshqalar. Aktiv oqartiruvchi material - rhododendronni qo'llash natijasida yuzaga keladigan depigmentatsiya ma'lum bir chegarada tirozinaza faolligi bilan bog'liq. J. Dermatol. Sci. 2014, 76, 16–24. [CrossRef] [PubMed]

6. Ito, S.; Yamashita, T.; Ojika, M.; Wakamatsu, K. Rhododendronning tirozinaz bilan katalizlangan oksidlanishi 2-metil-xroman-6,7-dionni, taxminiy yakuniy zaharli metabolitni hosil qiladi: melanotsitlar toksikligiga ta'siri. Pigment hujayrali melanoma Res. 2014, 27, 744–753. [CrossRef] [PubMed]

7. Ito, S.; Gervat, V.; Kolbe, L.; Yamashita, T.; Ojika, M.; Wakamatsu, K. Inson tirozinazasi rhododendronning ikkala enantiomerini oksidlashi mumkin. Pigment hujayrali melanoma Res. 2014, 27, 1149–1153. [CrossRef]

8. Ito, S.; Okura, M.; Vakamatsu, K.; Yamashita, T. Rhododendrol-eumelaninning kuchli prooksidant faolligi B16 melanoma hujayralarida sisteinning kamayishiga olib keladi. Pigment hujayrali melanoma Res. 2017, 30, 63–67. [CrossRef]

9. Ito, S.; Okura, M.; Nakanishi, Y.; Ojika, M.; Vakamatsu, K.; Yamashita, T. B16 melanoma hujayralarida rhododendronning (RD) tirozinaz bilan katalizlangan metabolizmi: RD-feomelanin ishlab chiqarish va tiol oqsillari bilan kovalent bog'lanish. Pigment hujayrali melanoma Res. 2015, 28, 295–306. [CrossRef]

10. Ito, S.; Wakamatsu, K. Rhododendronning biokimyoviy mexanizmi - induktsiyalangan leykoderma. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 552. [CrossRef]

11. Ito, S.; Xinoshita, M.; Suzuki E.; Ojika, M.; Vakamatsu, K. Leykoderma qo'zg'atuvchi vosita malina ketonining tirozinaz bilan katalizlangan oksidlanishi (E)-4-(3-okso-1-butenil)-1,2- hosil qiladi. benzoquinon: melanotsitlar toksikligi uchun ta'sir. Kimyo. Res. Toksikol. 2017, 30, 859–868. [CrossRef]

12. Sugumaran, M.; Dali, H.; Kundzich, X.; Semensi, V. Karboksietil-o-benzokinon hosilalarining g'ayrioddiy intramolekulyar siklizatsiyasi va yon zanjirli desaturatsiyasi. Bioorg. Kimyo. 1989, 17, 443–453. [CrossRef]

13. Sugumaran, M.; Ricketts, D. Model sklerotizatsiya tadqiqotlari. 3. Peptidil modeli tirozin va dopa hosilalarining kutikulyar ferment katalizlangan oksidlanishi. Ark. Hasharotlar biokimyosi. Fiziol. 1995, 28, 17–32. [CrossRef]

14. Sugumaran, M. Katexolamin metabolizmi va eumelanin biosintezida xinon metidlarning o-kinonlarga nisbatan reaktivliklari. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1576. [CrossRef]

15. Ito, S.; Sugumaran, M.; Wakamatsu, K. Tirik organizmlarda hosil bo'lgan orto-xinonlarning kimyoviy reaktivliklari: fenollar va katexollarga tirozinaz va fenoloksidaza ta'siridan hosil bo'lgan xinoidli mahsulotlarning taqdiri. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 6080. [CrossRef]

16. Abele, A.; Chjen D.; Evans, J.; Sugumaran, M. Hasharotlarning kutikulyar sklerotizatsiya qiluvchi prekursorining oksidlovchi transformatsiyasi mexanizmlarini qayta ko'rib chiqish, 1,2-dehidro-N-asetildopamin. Hasharotlar biokimyosi. Mol. Biol. 2010, 40, 650–659.

17. Abebe, A.; Kuang, QF; Evans, J.; Robinson, BIZ; Sugumaran, M. Trixrom modeli birikmasining oksidlovchi transformatsiyasi tunikromlarning oʻzaro bogʻlanishi va himoya reaksiyasi haqida yangi tushuncha beradi. Bioorg. Kimyo. 2017, 71, 219–229. [CrossRef]

18. Kuang, QF; Abebe, A.; Evans, J.; Sugumaran, M. Tunikromlarning oksidlovchi transformatsiyasi - 1,2-dehidro-N-asetildopamin va N-asetilsistein bilan model tadqiqotlari. Bioorg. Kimyo. 2017, 73, 53–62. [CrossRef]

19. Abebe, A.; Kuang, QF; Evans, J.; Sugumaran, M. Mass-spektrometrik tadqiqotlar 1,2-dehidro-N-asetildopaning g'ayrioddiy oksidlanish o'zgarishlarini yoritib berdi. Rapid Comm. Massa spektri. 2013, 27, 1785–1793. [CrossRef]

20. Abebe, A.; Chjen D.; Evans, J.; Sugumaran, M. Peptidil dehidrodopa modeli birikmasining yangi post-translatsion oligomerizatsiyasi, 1,2-dehidro-N-asetildopa metil esteri. Bioorg. Kimyo. 2016, 66, 33–40. [CrossRef]

21. Takao, KI; Munakata, R.; Tadano, KI Molekulyar Diels-Alder reaktsiyalaridan foydalangan holda tabiiy mahsulot sintezidagi so'nggi yutuqlar. Kimyo. Rev. 2005, 105, 4779–4807. [CrossRef] [PubMed]

22. Ose, T.; Vatanabe, K.; Mie, T.; Xonma, M.; Vatanabe, H.; Yao, M.; Oikava, X.; Tanaka, I. Makrofag sintazasining tuzilishidan tabiiy Diels-Alder reaktsiyasini tushunish. Tabiat 2003, 422, 185–189. [CrossRef] [PubMed]

23. Stocking, EM; Uilyams, RM Biosintetik Diels-Alder reaktsiyalarining kimyosi va biologiyasi. Angew. Kimyo. Int. Ed. Ingliz. 2003, 42, 3078–3115. [CrossRef] [PubMed]

24. Ito, S.; Agata, M.; Okochi, K.; Wakamatsu, K. Rhododendrol-eumelaninning kuchli prooksidant faolligi ultrabinafsha A nurlanishi bilan kuchayadi. Pigment hujayrali melanoma Res. 2018, 31, 523–528. [CrossRef]

Batafsil ma'lumot uchun: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501

Sizga ham yoqishi mumkin