1-QISM Herba Cistanche suvli ekstrakti Cajalning interstitsial hujayralarini yaxshilash orqali loperamid bilan qo'zg'atilgan ich qotishi kalamushlarida ichak harakatini kuchaytirdi.

Shuay Yan, 1,2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Vang, 1 Xong-li Dong, 1 Shu-guang Chjen, 1 Ben-sheng Vu, 1 va Xay-hua Qian3

1 Suzhou kasalxonasiAn'anaviy xitoy tabobati,Suzhou, Jiangsu 215009, Xitoy

2Nankin universitetiAn'anaviy xitoy tabobati, Nankin, Jiangsu 210023, Xitoy

3 Jiangsu provintsiyasi kasalxonasi anorektal jarrohlik bo'limiAn'anaviy xitoy tabobati, Nankin, Jiangsu 210029, Xitoy

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

2017-yil 24-mayda olingan; 2017 yil 5 oktyabrda qayta ko'rib chiqilgan; 2017 yil 25 oktyabrda qabul qilingan; 2017 yil 28 dekabrda chop etilgan

Akademik muharrir: Samra Bashir

Mualliflik huquqi © 2017 Shuai Yan va boshqalar. Bu Creative Commons Attribution License ostida tarqatiladigan ochiq kirish huquqiga ega maqola boʻlib, asl asardan toʻgʻri iqtibos keltirilsa, har qanday vositada cheksiz foydalanish, tarqatish va koʻpaytirishga ruxsat beradi.

An'anaviy xitoy tibbiyotifunktsional ich qotishini davolashda yaxshi ta'sir ko'rsatishi haqida xabar berilgan. Ushbu ish Herba Cistanche (AEHC) suvli ekstraktlarining STC davolashga ta'sirini isbotlashga va loperamid bilan bog'liq sekin tranzit ich qotishi (STC) modeli orqali mumkin bo'lgan mexanizmlarni aniqlashga harakat qildi. HPLC AEHCdagi bioaktiv komponentlarni aniqlash va tasdiqlash uchun o'tkazildi. AEHC najas miqdori, namlik miqdori va ichak tranzit tezligi, shuningdek, GAS, MTL, SS va CGRP sarum darajalariga qarab STC javoblarini susaytirgani aniqlandi. C-to'plamining oqsil va mRNK darajalari, Cajal (ICC) ning interstitsial hujayralarini etiketlash ham oshdi. Shu bilan birga, faqat SCF ning protein darajasi, ofc-kit ligandlari ortdi. Ma'lumotlarimiz tahlili shuni ko'rsatdiki, AEHC PI3K, SCF va c-kitni o'z ichiga olgan signalizatsiya yo'li orqali ICC funktsiyasini aniq yaxshilashi va GAS, MTL, SS va CGRP kabi yo'g'on ichakning harakatchanlik indekslarini yaxshilashi mumkin. Shunisi qiziqki, AEHC ich qotishida samarali bo'lib chiqdi, shuning uchun aniq mexanizmlarni aniqlash uchun qo'shimcha tajribalar zarur.

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun quyidagi manzilga murojaat qiling:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola juda ko'p effektlarga ega, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Qabziyat - bu doimiy qiyin, kamdan-kam yoki to'liq bo'lmagan defekatsiya bilan tavsiflangan keng tarqalgan funktsional oshqozon-ichak kasalligi va sog'liqni saqlash muammosi [1]. Qabziyatning tarqalishi butun dunyo bo'ylab 0,7 foizdan 81 foizgacha, ayniqsa qariyalarda o'zgarib turadi [2, 3]. Sekin tranzit ich qotishi (STC) surunkali davolashga chidamli ich qotishi bilan og'rigan bemorlarning 13-37 foizida keng tarqalgan oshqozon-ichak shikoyati [4, 5]. Epidemiologik ma'lumotlarga ko'ra, kasallikning yuqori darajasiSTCerkaklarga qaraganda yosh ayollar orasida [6].STCkonservativ davoga kam javob beradigan va neyrodegenerativ buzilish tendentsiyasini ko'rsatib bo'lmaydigan konstipatsiyani keltirib chiqaradi. Funktsional kasallik kabi oddiy emas, u invaziv va agressiv davolanishni talab qiladi [7].

Osmotik yoki sekretor laksatiflar va ko'paytiruvchi vositalar kabi bir qator hozirgi kimyoviy preparatlar universal tarzda qo'llaniladi.

ich qotishini davolash [8], garchi ularning qo'llanilishi yuqori xarajatlar va og'riq, kramplar va shishiradi [9] kabi qorin bo'shlig'ining yon ta'siri tufayli cheklangan. Hozirgi vaqtda oshqozon-ichak trakti faoliyatini tartibga solish ich qotishi bilan davolashning asosiy yo'nalishi hisoblanadi. Sisaprid dastlab oshqozon kasalliklarini davolash uchun rag'batlantiruvchi vosita sifatida ishlab chiqarilgan, ammo keyinchalik yurak aritmiyalari xavfi tufayli bekor qilingan [10].

Tegaserod selektiv 5-gidroksitriptamin retseptorlari antagonisti bo‘lib, ichak peristaltikasi va sekretsiyasini rag‘batlantirishi mumkin [11, 12]. Prukaloprid yangi dihidrobenzofuran karboksamid hosilasi va 5-HT retseptorlari agonisti boʻlib, yuqori selektivlik va oʻziga xoslikka ega boʻlib, oshqozon, ingichka ichak va yoʻgʻon ichak motorikasini kuchaytira oladi va dinamikada tezroq ishlaydi [13-15]. Prostaglandin E1 hosilasi sifatida lubiproston gastrointestinal sekretsiyani rag'batlantirish va ichak orqali o'tish ta'sirini kuchaytirish uchun CIC kanalini tanlab faollashtirishi mumkin [16].

Cistanchetoniklash ta'siriga egabuyrakva davolash ham mumkinich qotishi

Kabızlıkdagi harakatchanlik keng tarqalgan muammodir, ammo uning etiologiyasi hali aniq emas. Shunga qaramay, ishonchli dalillar Cajalning interstitsial hujayralarining (ICC) ich qotishi patogeneziga qo'shgan hissasini ko'rsatdi [17]. ICC asab tugunlari va oshqozon-ichak traktining silliq mushak hujayralari o'rtasida joylashgan. ICC odatda oshqozon-ichak faoliyati uchun yurak stimulyatori hujayralari va neyro-mushak uzatish vositachilari sifatida tan olinadi [18]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, sekin tranzit ich qotishi bo'lgan bemorlarning yo'g'on ichaklaridagi ICC zichligi oddiy bemorlarga nisbatan ancha past bo'ladi [19]. Shunga ko'ra, ICC sonining kamayishi sekin to'lqin faolligining etishmasligiga olib kelishi mumkin, bu esa kontraktil javobga ta'sir qiladi va sekin tranzit ich qotishi bilan og'rigan bemorlarda kechiktirilgan tranzitni keltirib chiqaradi. Shu nuqtada, sekin tranzit ich qotishini davolash uchun farmatsevtika yordamida ICCni yaxshilash juda muhim bo'lishi mumkin.

Turli xil o'simlik dori-darmonlari va an'anaviy xitoylik for- Mula so'nggi paytlarda najas ishlab chiqarishni yaxshilash natijasida surunkali ich qotishni davolash uchun yangi terapevtik vositalar sifatida e'tiborni tortdi [20, 21]. Herba Cistanche surunkali buyrak kasalliklari, ayollarning bepushtligi, kuchli menorragiya va jinsiy quvvatsizlikni davolashda qo'llaniladigan an'anaviy o'simlik dorisidir [22, 23]. Herba Cistanche MES23.5 hujayralarida apoptoz bilan bog'liq omillar va neyrotrofik omillarni ifodalash orqali miya neyron apoptozini oldini oladi [24]. Herba Cistanche, shuningdek, Yang-Qi buyrak-Yang etishmovchiligi sindromini davolashda farmatsevtik salohiyatni namoyish etdi. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot Herba Cistanche H9c2 kardiyomiyositlarida mitoxondriyal nafas olish va glutation antioksidant holatini oshirishini ko'rsatdi [25].

TCM ich qotishi buyraklar bilan yaqin aloqada ekanligiga ishonadi. Tashqi jinsiy a'zolar va anusda ochilgan buyrak siydik chiqarish va defekatsiyani boshqaradi. Chiqindilarni tashish buyrak qi ni targ'ib qilish va buyrak yinini oziqlantirishga tayanadi. Agar buyrak etishmovchiligi bo'lsa yoki hayot darvozasining olovi o'chib qolsa, yo'g'on ichakning sovuq tiqilishi chiqindilarning turg'unligiga olib keladi. Qabziyat shuningdek, quruq ichak harakatidan kelib chiqadi, chunki buyrak mohiyatining etishmasligi etarli miqdorda suyuqlik ishlab chiqarmaydi [26].

HerbaCistancheumumiy birlashtiruvchi o't bo'lib, ta'mi shirin va sho'r va tabiati issiq. Yo'g'on ichak va buyrak meridianlariga taalluqli bo'lib, u buyrak yangini tonlaydi va ich qotishini bartaraf etish uchun ichakni namlaydi. Bu yagona o't va uningXitoyFarmatsevtik preparatlar ajoyib samaradorlik bilan ich qotishni davolash uchun keng qo'llanilgan [27].

Xitoyda, Herba ta'siriCistancheqabziyatning ildizlari qayd etilgan [28, 29] va Shen Nongning Xitoyning Materia Medica asarida "Cistanche turlarining quritilgan shirali poyalari" [30] deb ataladi; ammo, Herba Cistanche ildizlarining ich qotishiga ta'siri haqida ilmiy dalillar hozirgacha mavjud emas, klinik jihatdan samarali dozasi kuniga 20 g.Xitoy farmakopeyasi, va klinik ta'sir dozasi bilan yanada oshmaydi.

Herba Cistanche juda kam bo'lgani uchun [31], uning klinik dozasini davolash uchun standartlashtirish.STCEksperimental tadqiqot nafaqat noto'g'ri dozalash tufayli muvaffaqiyatsiz davolanishni oldini oladi, balki bemorlarni iqtisodiy yo'qotishdan va hatto haddan tashqari foydalanish tufayli dori-darmonlarni noto'g'ri ishlatishdan saqlaydi. Umid qilamiz

natijalar ich qotishi uchun yangi dorilar uchun ilmiy asos yaratishi mumkin. Shu sababli, ushbu tadqiqotda suvli Herba Cistanche ning ichakni rag'batlantirish funktsiyasini va uning ICCga ta'sirini o'rganish muhimdir.

Cistanchedavolay oladiich qotishi

2. Materiallar va usullar

2.1. Herba Cistanche suvli ekstraktini tayyorlash.

Barcha Herba Cistanche Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nankin, Xitoy) dan sotib olindi, ular Xitoyning Sinkiang hududidagi plantatsiyalardan standart etnobotanik amaliyotlar bo'yicha yig'ib olingan, yig'ilgan va qayta ishlangan. O'simlikning kimligi morfologik jihatdan Nankin, Xitoy tibbiyoti Nankin universiteti professori Tu Lin Lu tomonidan aniqlangan. Vaucher namunasi (NUCMCHS-2015628) Nankin, Xitoy tibbiyoti Nankin universiteti, Sog'liqni saqlash fanlari kollejiga topshirildi.

Og'irligi 500 g bo'lgan Herba Cistanche bo'laklari elektr blender yordamida maydalangan va 5000 ml distillangan suvda ekstraksiya qilingan, shundan so'ng suvli ekstrakt aylanma ekstraksiya uskunasi yordamida 100 C da 2 soat davomida tozalangan.

membrana teshiklari (Millipore, Billerica, MA, AQSH) va ekstraktlardan olingan qoldiq 4000 ml suvda eritildi. Qayta oqim ekstraktsiyasidan so'ng, ekstraktlar yig'ildi va yakuniy namunali mahsulotni olish uchun bug'landi. Suvli ekstraktlar a. yordamida quruq granulalarga (1 g/ml) konsentratsiyalangan

keyingi foydalanish uchun. Tajriba uchun 10, 20 va 40 mg/kg tana vazniga kerakli dozalarni berish uchun qattiq namunalar distillangan suvda qayta tiklandi.

2.2. Hayvonlar.

Ushbu tadqiqotda foydalanilgan eksperimental protokol Suzhou kasalxonasi tomonidan axloqiy protseduralar va ilmiy yordam asosida ko'rib chiqilgan va tasdiqlangan.An'anaviy xitoy tabobati- Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitasi, Suzhou, Xitoy (SHTCM-IACUC; tasdiqlash raqami: PNU- 2016-0003). Ag bilan barcha erkak kalamushlar (Sprague Dawley shtammi) Milliy Sog'liqni saqlash instituti ko'rsatmalariga muvofiq Shanxay laboratoriya hayvonlar tadqiqot markazidan sotib olingan. Hayvonlar standart dietaga (AIN{3}} M) va musluk suviga ad libitum bepul kirish imkoniga ega bo'lgan va har kuni 12 soat tabiiy yorug'lik va 12 soat qorong'ilikda zanglamaydigan po'latdan nisbiy namlikda alohida joylashtirilgan.

2.3 Eksperimental loyihalash.

Loperamid oldingi tadqiqotlarga muvofiq kalamushlarda ich qotishi uchun ishlatilgan [32, 33]. Hammasi bo'lib 60 ta kalamush tasodifiy ravishda 5 guruhga bo'lingan (har bir guruh uchun): A: normal guruh (NG), B: model guruhi (Lop plyus transport vositasi bilan davolash qilingan guruh), C: past suvli ekstrakt bilan davolash qilingan ich qotishi kalamushlari guruhi Herba Cistanche (Lop plyus LAEHC bilan davolash qilingan guruh), D: Herba Cistanche o'rtacha suvli ekstrakti bilan ishlov berilgan ich qotishi kalamushlari guruhi (Lop plyus MAEHC bilan davolash qilingan guruh) va E: Herbaning yuqori suvli ekstrakti bilan ishlov berilgan ich qotishi kalamushlari guruhi Cistanche (Lop plus HAEHC bilan davolash qilingan guruh). A guruhi oddiy sho'r suv bilan davolash qilingan (10 ml / kg); B guruhi loperamid bilan davolandi

(4 mg/kg); C guruhi loperamid (4 mg / kg) va Herba Cistanche ning past suvli ekstrakti (1 g / kg) bilan ishlov berildi; D guruhiga loperamid (4 mg/kg) va o‘rta suvli Herba Cistanche ekstrakti (2 g/kg), E guruhiga esa loperamid (4 mg/kg) va yuqori suvli Herba Cistanche ekstrakti (4 g/kg) bilan ishlov berildi. kg). Oddiy guruhdagi barcha kalamushlarga 0,9% natriy xlorid, qolganlariga esa ich qotib qolishi uchun 3 kun ketma-ket kuniga ikki marta 0,9% natriy xlorid tarkibidagi loperamid yuborilgan. Herba Cistanche suvli ekstrakti suvda to'xtatilgan va C, D va E guruhlarida 4 kundan 18 kungacha kuniga bir marta og'iz orqali yuborilgan, A va B guruhlari esa gavaj orqali doimiy hajmdagi suv olishgan.

2.4. Xromatografik holat.

HPLC profili Shimadzu suyuq xromatografik tizimida (Tokio, Yaponiya) amalga oshirildi, u LC-20AT nasosi va

330 nm da 30 C da kuzatildi. Izokratik harakatlanuvchi faza metanol 0,1 foizli chumoli kislotadan (80 : 20, v/v) tashkil topgan va 1,0 ml/min oqim tezligida ishlagan. . Xromatografik ajratish amalga oshirildi

zarracha hajmi 5 m, Pekin Dikma Science and Technology Co., Ltd., Pekin, Xitoy).

2.5. Jismoniy mashqlar, oziq-ovqat iste'moli, suv iste'moli, tanani tahlil qilish

Saqich (20 foiz ko'mir va 10 foiz saqichdan iborat suvli suspenziya) har bir hayvonga 25 ml / kg hajmda og'iz orqali yuborilgan. 30 daqiqadan so'ng, hayvonlar servikal dislokatsiya bilan insoniy ravishda qurbon qilindi va parchalandi. Pilorusdan ko'richakgacha bo'lgan ingichka ichaklarni bosib o'tdi va ko'mir ovqat bilan bosib o'tgan masofa va ingichka ichakning umumiy uzunligi o'lchandi. Alohida kalamush uchun ichak tranziti foizi ingichka ichakning umumiy uzunligiga nisbatan ko'mir ovqati bosib o'tgan masofaning ulushi sifatida hisoblangan. Quyidagi tenglama ichak tranzit tezligini (foiz) hisoblaydi: ko'mir bosib o'tgan masofa/pilordan ko'richakgacha bo'lgan masofa 100 foiz.

2.6. Qon namunasi va to'qimalarni yig'ish. Eksperimental davr oxirida kalamushlar 12 soat ro'za tutishdi, ammo suvga erkin kirishga ruxsat berildi. Keyin barcha kalamushlar 30 daqiqadan so'ng natriy pentobarbital (50 mg / kg) intraperitoneal in'ektsiya yo'li bilan behushlik qilindi va haroratni tartibga soluvchi stolga qo'yildi. Qon namunalari yig'ildi va sarum olish uchun 3500 rpm tezlikda 15 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Yo'g'on ichak zudlik bilan bo'linib, 4 C da oddiy sho'r suv bilan yuviladi va keyin ikki bo'lakka bo'linadi. Bir parcha 10 foizli formalinda fiksatsiya qilingan va keyingi immunohistokimyoviy (IHC) tahlil qilish uchun bo'lingan kerosinda ishlangan, ikkinchisi esa Og'irlik va Soch edi. Jismoniy mashqlar, oziq-ovqat iste'moli, suvdagi o'zgarishlar

tekshirilgunga qadar 80 C da saqlanadi. iste'mol qilish, tana vazni va sochlar har kuni kuzatilgan va tajriba davrida qayd etilgan. Muayyan bosqichlardan keyin biz "mashqlardagi o'zgarishlar" ni kuzatdik: o'z-o'zidan yasalgan quti (balandligi 60 sm, uzunligi 50 sm va eni 80 sm qorong'i periferik devor bilan) ochiq maydon sinovi uchun ishlatiladi; oq zamin qorong'i va sokin xonada qora chiziq bilan olmoslarga (12 sm) bo'lingan; 100 Vt quvvatli lampochka qutining markazidan 1 m balandlikda osilgan; kalamushlar modellashtirishning 4, 6, 12 va 18-kunlarida qutining o'rtasiga joylashtirildi. Kalamushlar 5 daqiqa ichida o'tgan kvadratchalar soni gorizontal harakat balli sifatida ishlatilgan va kalamushlarning 5 daqiqa ichida tik turish vaqti vertikal harakat balli sifatida ishlatilgan. Gorizontal va harakat ballari va vertikal harakat ballari kalamushlarning mashqlar miqdorini ko'rsatadi. Har bir kalamush bir marta o'lchandi [34, 35].

Cistancheyengillashtirishi mumkinich qotishi

2.7. Najas parametrini o'lchash.

Og'iz orqali yuborishning so'nggi kunida har bir SD kalamushdan yangi axlat pelletlari 6 soat davomida dumaloq tubli tiqinli naychalarga yig'ildi va har bir guruhning umumiy og'irliklari qayd etildi. Najasning namligini aniqlash uchun biz elektr balansidan foydalanib, najas granulalarini doimiy vaznga erishguncha quritdik va quruq vaznni o'lchadik. Namlik miqdori

2.8. GAS, MTL, SS va CGRPni baholash.

Sarumdagi gastrin (GAS), motilin (MTL), somatostatin (SS) va kalsitonin geniga bog'liq peptid (CGRP) kontsentratsiyasi savdoda mavjud bo'lgan to'plamlardan foydalangan holda Elishay tomonidan baholandi.

2.9. Gistologik tahlil.

SD kalamushlaridan to'plangan ko'ndalang yo'g'on ichaklar 12 soat davomida 10 foizli formalin bilan mahkamlangan, ko'milgan.

m qalinlikdagi bo'laklar gematoksilin va eozin bilan bo'yalgan (H&E, Sigma-Aldrich, MO, AQSh). Ushbu bo'limlarning morfologik xususiyatlari yorug'lik mikroskopi ostida kuzatildi, shundan so'ng villus uzunligi, kript qalinligi va mushaklarning qalinligi Leica Application Suite (Leica Microsystems, Shveytsariya) yordamida o'lchandi.

2.10. Immunogistokimyoviy tahlil.

Biz Zhu va boshqalarning usullariga amal qildik. (2016) [36]; bo'yalmagan 5 m bo'limlar edi

quyonga qarshi anti-c-kit (1: 100) bilan kechasi 4 C da bo'yalgan. Ikkilamchi antikor va avidin-biotin-peroksidaza kompleksi usuli ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq ishlatilgan. Nonspesifik bog'lanishni bartaraf etish uchun immunoglobulin-salbiy nazorat qo'llanildi. c-kitning ifoda darajalari

2.11. Ichak tranzit tezligini tahlil qilish.

Ichak tranziti nisbati ilgari xabar qilingan protokollarga muvofiq o'tkazildi [36]; qisqacha, 14 kunlik davolanishdan so'ng, barcha SD kalamushlari 12 soat ro'za tutdilar, ammo suvdan erkin foydalanishga ruxsat berildi.

Haqiqiy vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi. Yo'g'on ichakdagi c-kit, SCF va PI3K mRNKlarining gen ifoda darajalari umumiy RNK ekstraktsiyasi to'plami (TIANGEN Biotech,) yordamida aniqlandi.

Pekin, Xitoy) ishlab chiqaruvchining protokollariga muvofiq. Haqiqiy vaqtda PCR ABI StepOnePlus Real-Time PCR tizimi (ABI) yordamida amalga oshirildi. SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Yaponiya) PCR mahsulotlarini aniqlash uchun ishlatilgan. Reaktsiyalar uch nusxada amalga oshirildi. Keyinchalik, 0,5 g og'irlikdagi yangi kalamush yo'g'on ichak to'qimasi homolog edi.

l) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq TRIzol reagenti (Invitrogen, AQSH) yordamida ajratilgan. Ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq cDNKning birinchi zanjirini sintez qilish uchun teskari transkripsiya-PCR to'plami (Takara Biotechnology Co., Inc.) ishlatilgan. Barcha maqsadli parametrlar 1-jadvalda ko'rsatilgan. Velosiped protokoli quyidagi sharoitlarda edi: 5 daqiqa davomida 95 C (DNK denaturatsiyasi), keyin 15 soniya davomida 95 C 40 tsikl, 20 soniya davomida 60 C va 72 C uchun. 40 s. Kuchaytirish davrlarining oxirida erish egri tahlili o'tkazildi.

2.12. Western Blot tahlili.

Yo'g'on ichak namunalari gomogenatlaridagi c-kit va SCF ning protein tarkibi Western blot bilan baholandi. Qisqacha aytganda, homogenatlarning umumiy oqsillari bicinxonin kislotasi tahlili (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, AQSH) yordamida aniqlandi. Natriy dodesil sulfat-poliakrilamid jeli (SDS-PAGE) BioRad elektroforez tizimida (BioRad Laboratories, Hercules, CA, AQSh) oqsillarni ajratish uchun ishlatilgan. Keyin oqsillar poliviniliden diftorid (PVDF) membranalariga o'tkazildi. Xona haroratida 5% yog'siz sutni o'z ichiga olgan TBSda blokirovka qiluvchi bufer bilan 2 soat ishlov berilgandan so'ng, PVDF membranalari 1:1000 suyultirilgan anti-c-kit (Santa Kruz, CA, AQSH), 1:500 suyultirilgan anti-sut bilan bir kechada inkubatsiya qilindi. SCF (Sigma, MO,

AQSh) va mos ravishda 1: 8000 suyultirilgan anti-aktin (Kangchen, Shanxay, Xitoy) antikorlari. Birlamchi antikorning bog'lanishi mos keladigan HRP-konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor yordamida aniqlandi (Beyotime, Jiangsu, Xitoy). Kengaytirilgan xemiluminesans to'plami (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, AQSH) va Odyssey infraqizil tasvirlash tizimi (Gene Company Ltd., Gonkong) xemiluminesansni aniqlash uchun ishlatilgan. Yuklash nazorati sifatida uy sharoitida prolaktin ishlatilgan. Protein ifodasi miqdori aktin darajasiga nisbatan taqdim etiladi.

2.13. Statistik tahlil.

O'lchov ma'lumotlari o'rtacha standart xato (SEM) sifatida xabar qilindi va SPSS tomonidan tahlil qilindi

16.0 dasturiy ta'minot (SPSS, Chicago, IL, AQSH). Barcha parametrlardagi sezilarli farqlarni aniqlash uchun bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) va Dunkanning ko'p diapazonli testlari ishlatilgan. Qadriyatlar statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi

Cistanchekaynatma davolash uchun yaxshi dori hisoblanadiich qotishi

3. Natijalar

3.1. Herba Cistanche tarkibi va funktsional komponentlari.

1-rasmda ko'rsatilganidek, Herba Cistanche ildizlari laksatif ta'sirga bog'liq bo'lgan bir nechta bioaktiv komponentlarning yuqori konsentratsiyasini o'z ichiga oladi. Umumiy echinacoside va total verbascoside kontsentratsiyasi mos ravishda 0,64 mg/g va 0,16 mg/g edi. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) yordamida LPda tegishli ushlab turish vaqtida yuqori ekinakozid va verbaskozid darajalarini ko'rsatadigan ikkita tepalik aniqlandi.

3.2. Umumiy kuzatish.

SP kalamushlari eksperiment davomida o'lmadi, bu hayvonlar modelining xavfsizligi va ishlash qobiliyatini ko'rsatadi. A guruhi bilan solishtirganda, model guruhidagi kalamushlar momiq mo'yna, charchash, quruq axlat va

modellashtirish vaqtining kengayishi bilan yomonlashdi.

3.3. Loperamid bilan qo'zg'atilgan ich qotishi kalamushlarida AEHC ning axlat soni va namlik tarkibiga ta'siri.

Oddiy najas bilan solishtirganda, B, C, D va E guruhlaridagi najaslar quruq, mayda va qattiq bo'lib, davolanishdan oldin yonishsiz edi.

Axir, kalamushlarga loperamid AOK qilingan (dori bilan davolash tana va 3(b) kabi simptomlarni engillashtirdi).

vazni barcha eksperimental guruhlar orasida sezilarli darajada farq qilmadi, garchi E guruhi boshqa guruhlarga qaraganda bir oz pastroq tana vaznini ko'rsatdi (2-rasm (a)). Bundan tashqari, ich qotishi bilan og'rigan SD kalamushlari A guruhiga qaraganda sezilarli darajada kamroq ovqat iste'mol qildilar (), B, C, D va E guruhlari o'rtasidagi farqlar (2-rasm (b)) sezilarli emas edi. “A” va “B” guruhlari o‘rtasida ham suv iste’moli o‘zgarmadi. Bundan tashqari, suv iste’molining sezilarli o‘sishi kuzatilmadi

AEHC bilan davolash hech qanday o'zgarishlarga olib kelmadi. C, D guruhlarida ichak tranzit tezligi ham sezilarli darajada yuqori bo'lsa-daC, D va E guruhlari A guruhiga qaraganda ancha past nisbatlarga ega edi.

3.4. AEHC ning Loperamid bilan qo'zg'atilgan ich qotishi kalamushlarida ingichka ichak tranzit tezligiga ta'siri.

4-rasmdan ko'rinib turibdiki, beshta guruh o'rtasida boshlang'ich ingichka ichak tranzit vaqtida hech qanday farq aniqlanmagan. B guruhi A guruhiga nisbatan ko'mir kukunining harakatlanish nisbati sezilarli darajada pastroq (𝑃 < 0.01).="" c,="" d="" va="" e="" guruhlarida="" ichak="" tranzit="" tezligi="" b="" guruhidagiga="" qaraganda="" sezilarli="" darajada="" yuqori="" bo'lsa-da="" (𝑃=""><0,05), c,="" d="" va="" e="" guruhlari="" a="" guruhiga="" qaraganda="" ancha="" past="">

3.5. AEHC bilan aralashuv yo'g'on ichakning harakatchanlik indeksi funktsiyasini qisman yaxshilaydi.

B guruhidagi kalamushlardan olingan qon zardobidagi GAS va MTL kontsentratsiyasi A guruhidagilarga nisbatan sezilarli darajada kamaydi (𝑃 < {0}}.01,="" javob).="" boshqa="" tomondan,="" c,="" d="" va="" e="" guruhlari="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" b="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" herba="" cistanche="" ekstraktlarini="" qabul="" qilish="" natijasida="" yuqori="" darajadagi="" gas="" va="" mtlga="" ega.="" b="" guruhidagi="" kalamushlarda="" ss="" qiymatlari="" a="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" yuqoriroq="" edi="" (𝑃="">< 0.01);="" c,="" d="" va="" e="" guruhlari="" zaiflashgan="" ss="" darajalariga="" ega="" (𝑃=""><0,05) (5-rasm).="" kabızlığı="" bo'lgan="" kalamushlar="" bilan="" solishtirganda,="" a="" guruhidagi="" normal="" kalamushlarda="" (𝑃=""><0,01) va="" herba="" cistanche="" tomonidan="" boshqariladigan="" c,="" d="" va="" e="" guruhlarida="" cgrp="" darajasi="" doimiy="" edi="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Yo'g'on ichakning gistologik o'zgarishi.

AEHC bilan davolash yo'g'on ichak to'qimalarining strukturaviy o'zgarishiga olib kelishi mumkinligini tekshirish uchun H&E bo'yalganidan keyin beshta guruhdagi kalamushlarning ko'ndalang yo'g'on ichaklarida villus uzunligi, kript qatlami qalinligi va mushaklarning qalinligi o'lchandi. Har bir guruhdagi kalamushlarning yo'g'on ichak patologiyasini solishtirganda, yo'g'on ichak shilliq qavati silliq bo'lib, shilliq ostidagi kichik arteriyalar va mayda tomirlar va ko'p miqdordagi yog 'hujayralari mavjud. Bundan tashqari, mushak qavati silliq mushak hujayralaridan iborat bo'lib, subserosa to'liq edi. Villusning o'rtacha uzunligi B guruhida A guruhiga qaraganda sezilarli darajada qisqaroq edi (𝑃 < {0}}.01).="" biroq,="" c="" guruhidagi="" villusning="" o'rtacha="" uzunligi="" b="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" (6="" va="" 7-rasmlar)="" (𝑃="">< 0,05)="" bilan="" solishtirganda="" 30="" foizdan="" ko'proq="" oshdi.="" shu="" bilan="" birga,="" d="" va="" e="" guruhlarida="" villusning="" o'rtacha="" uzunligi="" b="" guruhi="" bilan="" solishtirganda="" sezilarli="" darajada="" oshadi="" (6(a)="" va="" 6(b)-rasmlar)="" (𝑃=""><0,01). bundan="" tashqari,="" mushak="" qalinligining="" o'zgarishi="" villus="" uzunligiga="" juda="" o'xshash="" edi.="" b="" guruhida="" mushaklarning="">

A guruhi bilan solishtirganda keskin yupqaroq edi. Biroq C, D va E guruhlarida mushak qalinligi darajasi B guruhiga nisbatan 30-35 foizga oshdi (6 va 7-rasmlar). Umuman olganda, bu topilmalar AEHC konstipatsiyalangan kalamushlarning yo'g'on ichakchasidagi villus uzunligi va mushaklarning qalinligini oshirishi mumkinligini ko'rsatadi.

3.7. AHEC davolash ma'muriyati c-Kit va SCF ning oqsil ifodasini oshirdi.

Uning immunoreaktivligi yo'g'on ichakda aniqlandi, chunki barcha guruhlardagi hujayralar c-kit uchun ijobiy sinovdan o'tkazildi. 8-rasmda ko'rsatilganidek, B guruhidagi c-kitning ifoda darajasi A guruhidagidan pastroq edi (𝑃 < 0.05).="" c="" guruhidagi="" c-kit="" ifodasi="" darajasi="" b="" guruhidagidan="" yuqori="" (𝑃="">< 0.{{20}}}5),="" d="" va="" guruhlarda="" esa="" ko'proq="" c-kit="" mavjud="" edi.="" b="" guruhiga="" qaraganda="" e="" (𝑃="">< 0.05).="" 2="" hafta="" davomida="" herba="" cistanche="" suvli="" ekstraktining="" turli="" konsentratsiyasi="" bilan="" davolashdan="" so'ng,="" c-kit="" va="" scf="" ning="" protein="" ifoda="" darajalari="" western="" blot="" tahlili="" orqali="" aniqlandi.="" western="" blot="" tahlili="" shuni="" ko'rsatdiki,="" kalamushlarning="" yo'g'on="" ichaklarida="" loperamid="" bilan="" davolashdan="" keyin="" c-kit="" va="" scf="" ifoda="" darajalari="" sezilarli="" darajada="" past="" bo'lgan="" (9-rasm).="" shakl="" 8(e)="" shuni="" ko'rsatadiki,="" ich="" qotishi="" bilan="" kasallangan="" kalamushlarda="" kamaygan="" c-kit="" kalamushlarga="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃=""><0,05) bilan="" ishlov="" berilgandan="" so'ng="" sezilarli="" darajada="" 31,2="" foizga="" oshgan.="" bundan="" tashqari,="" 100="" va="" 200="" g="" ml="" aehc="" bilan="" davolash="" c-kit="" proteinini="" ifodalash="" darajasini="" oshirdi.="" 100,="" 200="" va="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" bilan="" davolashda="" scf="" oqsilining="" ifodalanishi="" mos="" ravishda="" 20,1,="" 24,7="" va="" 8,4="" foizga="" sezilarli="" darajada="" oshdi="" (9-rasm).="" 3.8.="" aehc="" ning="" c-kit,="" scf="" va="" pi3k="" ning="" mrnk="" ifodasiga="" ta'siri.="" aehc="" bilan="" davolash="" mushaklarning="" qisqarishi="" bilan="" bog'liq="" mrnkni="" tartibga="" solishga="" ta'sir="" qilishi="" mumkinligini="" tekshirish="" uchun="" maxsus="" primerlar="" yordamida="" ich="" qotishi="" kalamushlarining="" yo'g'on="" ichaklarida="" c-kit,="" scf="" va="" pi3k="" ifoda="" darajalarida="" o'zgarishlar="" kuzatildi.="" natijalar="" shuni="" ko'rsatdiki,="" b="" guruhidagi="" c-kitning="" mrnk="" darajalari="" a="" guruhiga="" nisbatan="" sezilarli="" darajada="" past="" (𝑃=""><0,05), c,="" d="" va="" e="" guruhlaridagi="" mrnk="" darajalari="" b="" guruhiga="" qaraganda="" yuqori="" (𝑃=""><0,05) (10-rasm).="" biz="" mrnkni="" ham="">

SCF ifodasi, to'plamning ligandlari. B guruhidagi kalamushlarda SCF ning mRNK ifodasi A guruhiga qaraganda ancha past edi, C, D va E guruhlarida AEHC bilan davolash SCF mRNK ifodasini oshirdi (1-rasm 0). Bundan tashqari, biz AEHC ning PI3K gen ifodasiga ta'sirini ko'rib chiqdik. 14-kuni, PI3K genini ifodalash darajasi C, D va E guruhlarida B guruhiga qaraganda sezilarli darajada yuqori bo'lgan (𝑃 <>