1-qism: Ephedra Fragilisning bioaktiv birikmalari: ekstraktsiyani optimallashtirish, kimyoviy xarakteristikalar, antioksidant va glikatsiyaga qarshi faollik

Qo'shimcha ma'lumot uchun. aloqatina.xiang@wecistanche.com

Abstrakt: Box-Behnken dizayni (BBD) bilan javob yuzasi metodologiyasi (RSM) Ephedra fragilis dan bioaktiv birikmalarning ekstraktsiyasini optimallashtirish uchun ishlatilgan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, 61,93 foiz etanol bilan 44,43 darajada 15,84 soat davomida ekstraktsiya o'zgaruvchilarning ushbu kombinatsiyasi uchun eng yaxshi echimdir. Optimal ekstraksiya sharoitida olingan xom etanol ekstrakti (CEE) polaritesi ortib boruvchi erituvchilar bilan ketma-ket fraksiyalangan. Jami fenolik (TP) va umumiy flavonoid (TF) ning tarkibi, shuningdekantioksidantva antiglikatsiya faolligi o'lchandi. Eng yuqori faollikka ega fraksiyaning fitokimyoviy barmoq izlari profili RP-HPLC yordamida tavsiflangan. Etil asetat fraktsiyasi (EAF) eng yuqori TP va TF tarkibiga ega bo'lib, eng kuchli antioksidant va antiglikatsiya faolligini namoyish etdi. Pearson korrelyatsiya tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, TP va TF tarkibi antioksidant va antiglikatsiya faolligi bilan sezilarli darajada bog'liq. Hammasi bo'lib, E. fragilisning EAF tarkibida oltita birikma, shu jumladan to'rtta fenolik kislota va ikkita flavonoid aniqlangan. Bundan tashqari, molekulyar docking tahlili, shuningdek, aniqlangan bioaktiv birikmalar va ularning ta'sir mexanizmlari o'rtasidagi mumkin bo'lgan bog'liqlikni ko'rsatdi. Bizning natijalarimiz qarish va glikatsiya bilan bog'liq asoratlarni davolash va oldini olishda qo'llanilishi mumkin bo'lgan E. fragilis bioaktiv birikmalarining antioksidant va antiglikatsiya faolligi haqida yangi dalillarni taklif qiladi.

Kalit so'zlar: Ephedra fragilis; javob yuzasi metodologiyasi; Box-Behnken dizayni; biologik faol birikmalar; RP-HPLC; antioksidant va antiglikatsiya faolligi

Qo'shimcha mahsulotlarni o'rganish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Turli manbalardan kelgan tajovuzkorlarning doimiy ta'siri o'sishiga olib kelishi mumkinerkin radikallarinson tanasida ishlab chiqarish, ularni tartibga solish qobiliyatidan oshib ketadi va vaqt o'tishi bilan qarish va diabet bilan bog'liq bir qancha oksidlovchi stress bilan bog'liq kasalliklarning rivojlanishiga yordam beradi[1]. Demak,antioksidantlarqo'shimchalar erkin radikallarning haddan tashqari kontsentratsiyasini olib tashlash orqali optimal biologik tizimni saqlashga yordam beradi [2]. Erkin radikallar glikatsiya jarayonida ishtirok etishi isbotlangan. Glikatsiya, oqsillardagi mavjud aminokislotalar qoldiqlarining aminokislotalari va qaytaruvchi qandlar o'rtasidagi o'z-o'zidan noenzimatik reaktsiya, qarish va giperglikemiya sharoitida yuqori darajada sodir bo'ladi, natijada glikatsiyaning yakuniy mahsuloti (AGE) ishlab chiqariladi va to'planadi 3]. Proteinlarga aralashish va ularning funksionalligini o'zgartirishdan tashqari, AGE ham mumkin

Immunoglobulinlar oilasiga mansub 45 KDa ko'p ligandli hujayrali sirt retseptorlari bo'lgan AGEs (RAGE) retseptorlari bilan aloqada bo'ling [4] va bir nechta quyi oqim hujayra ichidagi signalizatsiya yo'llarini faollashtiradi, bu esa patologik asoratlarni keltirib chiqaradigan erkin radikallar ishlab chiqarishning ko'payishi bilan birga keladi. diabetga [5].

Antioksidantlar va radikallarni tozalash molekulalari bu jarayonlarga qarshi yaxshi himoyachi ekanligi aniq ma'lum [6]. Oksidlanish stressi bilan bog'liq kasalliklarning oldini olish va ularni bartaraf etishda dorivor o'simliklardan foydalanish qadimgi tibbiyot an'anasidir. So'nggi paytlarda ko'plab tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, taninlar, fenolik kislotalar va ikkilamchi antioksidant va antiglikatsiya potentsialiga ega bo'lgan flavonoidlar kabi ikkilamchi metabolitlar diabetes mellitusni davolashda samaraliroqdir [7]. Shu sababli, erkin radikallarni samarali tozalash va ferment bo'lmagan glikatsiyani kamaytiradigan fitokimyoviy moddalarning yangi manbalarini aniqlash katta qiziqish uyg'otadi.

Ephedra fragilis Ephedra jinsining (Ephedracea oilasi) a'zosi bo'lib, oltita qit'adagi ikkala yarim sharda cho'l va yarim qurg'oqchilik sharoitida o'sadigan 60 dan ortiq turlarni o'z ichiga oladi [8]. 5000 yildan ortiq vaqt mobaynida Ephedra jinsidagi ko'plab turlar an'anaviy xitoy tibbiyotida (TCM) bir nechta kasalliklarni davolashda keng qo'llanilgan; Yallig'lanishga qarshi [9, invaziv, antiangiogenik, [10], mikroblarga qarshi, proliferativ, proapoptotik [11], neyroprotektiv [12], gepatoprotektiv va antimikrobiyal kabi ko'plab sog'liq uchun foydalari haqida bir nechta tadqiqotlar mavjud. -oksidlovchi xossalari [13]. Ephedra o'simliklaridagi flavonoidlar, alkaloidlar, fenolik kislotalar va boshqa birikmalar ushbu farmakologik xususiyatlar uchun asosiy fitokimyoviy komponentlar sifatida ko'rib chiqilgan [14]. Farmatsevtika sanoatida teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (RP-HPLC) kimyoviy birikmalarni turli xil hidrofobik xususiyatlariga ko'ra aniqlash va aniqlash uchun analitik usul sifatida keng qo'llaniladi, ammo adabiyotda kimyoviy tahlil qilish uchun bir nechta tadqiqotlar tasvirlangan. Ephedra turlari.

Ushbu bioaktiv birikmalarni turli o'simliklar manbalaridan ajratib olish jarayoni ularning sifat va miqdoriy tahlilidagi birinchi muhim qadamdir [15]. Turli omillar, ya'ni. Ekstraksiya usuli, erituvchi turi va konsentratsiyasi, harorat, vaqt va boshqalar ushbu birikmalarning tarkibi va ekstraktsiya tezligiga sezilarli ta'sir ko'rsatishi mumkin [16]. Shuning uchun o'simlik faol moddalarining yuqori miqdorini olish uchun ekstraktsiya jarayonlarini optimallashtirish talab etiladi. Dastlab 1950-yillarda Box va Wilson tomonidan ishlab chiqilgan javob yuzasi metodologiyasi (RSM) bugungi kunda mustaqil omillar kerakli javobga birgalikda ta'sir ko'rsatadigan jarayonlarni bajarish, takomillashtirish va optimallashtirish uchun eng ko'p qo'llaniladigan vositadir. Tadqiqotchilar tomonidan RSMda eng koʻp tanlangan dizaynlardan biri Box-Behnken dizaynidir (BBD), chunki u cheklangan sinovni talab qiladi va shuning uchun uzoq muddatli tajribalardan qochadi va xarajatlarni kamaytiradi [17-19].

Bugungi kunga qadar adabiyotda E. fragilis bioaktiv birikmalarining ekstraktsiyasini optimallashtirish bo'yicha hech qanday tadqiqotlar mavjud emas. Shu sababli, ushbu tadqiqot BBDni qo'llash orqali E.fragilisdan jami fenolik (TP) va flavonoid (TF) tarkibini ekstraktsiyasini optimallashtirishga qaratilgan. Optimal ekstraksiya sharoitida olingan xom etanol ekstrakti (CEE) ortib borayotgan qutbli erituvchilar bilan ketma-ket fraksiyalangan va ularning antioksidant va antiglikatsiya faolligi turli in vitro sinovlari yordamida tekshirilgan. Nihoyat, teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (RP-HPLC) tomonidan aniqlangan EAEdagi bioaktiv birikmalarning BSA va RAGE bilan maqsadli oqsillar sifatida bog'lanishi mexanizmlarini yanada tushunish uchun siliko tahlilini o'tkazdik.

2. Natijalar va muhokama

2.1. Modellarni o'rnatish

RSM with a BBD was applied to investigate the effect of ethanol concentration (%, Xj), temperature(°C, X2), and time (h, X3)on the extraction yield of TP and TF from E. fragilis. The results of 15 trials after the BBD are given in Table 1. Analysis of variance(ANOVA)(Table 2) indicates that the models were significant as evidenced by F and p-values. The coefficient of multiple determinations (R')of the models were 0.9935 and 0.9939 for TP and TF, respectively, suggesting that only 0.65 and 0.61%of the total variations are not explained by the models. A comparable value of adjusted R2 to R2 represents an excellent statistical model. As given in Table 2, the adjusted R2(0.9818 and 0.983 for TP and TF contents, respectively) is close to R2, which means that the insignificant terms were not included in the models. Moreover, predicted R2(0.9012 and 0.9338 for TP and TF contents, respectively) is in reasonable agreement with adjusted R2 and confirms that the models are highly significant. The"fitness" of the models was also confirmed using the lack of fit test The insignificant p-value for lack of fit (p >Ikki javob uchun {0}}.05) natijalardagi oʻzgarishlarni aniq bashorat qilish uchun modellarning mosligini koʻrsatadi [20]. Yaxshi aniqlik 4 dan yuqori signal-shovqin nisbati sifatida tavsiflanadi, bu ma'qul deb hisoblanadi [21]. Tegishli aniqlik qiymatlari mos ravishda TP va TF tarkibi uchun 29,4772 va 28,729 ni tashkil etadi, bu esa adekvat signalni namoyish etadi. Bir vaqtning o'zida o'zgaruvchanlik koeffitsientining kichikroq qiymatlari (CV foiz ) (TP va TF tarkibi uchun mos ravishda 1,52 va 0,4246 foiz) eksperimental qiymatlarning aniqligi va ishonchliligini ko'rsatadi. Har bir javob omili uchun XI (etanol konsentratsiyasi), X2 (ekstraktsiya harorati) va X3 (ekstraktsiya vaqti) ekstraktsiya omillarining ta'siri diqqat bilan o'rganildi (2-jadval). Har bir koeffitsientning ahamiyati F va p-qiymatlari yordamida sinovdan o'tkazildi, chunki kattaroq F-qiymati va kichikroq p-qiymati har doim turli xil mustaqil o'zgaruvchilar o'rtasida ko'proq muhim yozishmalarga olib keladi [22]. Birgalikda, bu natijalar modellarning takrorlanishi va optimallashtirish uchun mos ekanligini ko'rsatdi.

2.2. Ekstraksiya o'zgaruvchilarining TP tarkibiga ta'siri

2-jadvalda keltirilganidek, ANOVA natijalari TP tarkibiga sezilarli chiziqli (X va X2), kvadratik (Xj, X5 va X) va interaktiv (X1X va X2X3) ta'sir ko'rsatdi. Bular orasida TP tarkibi asosan p da X, X3 ga bog'liq<0.001 followed="" by="" x1="" and="" x1x,="" at=""><0.01. the="" following="" second-order="" polynomial="" equation="" could="" be="" used="" to="" express="" the="" relationship="" between="" tp="" content="" and="">

Moslik etishmasligi qiymati ahamiyatsiz edi (F-qiymati =11.02, p-qiymati=0.0843), bu model yaxshi bashorat bilan yaxshi tuzilganligini koʻrsatadi (R{). {9}}.9935; Adj R2=0.9818)(2-jadval).

Etanol konsentratsiyasi va ekstraktsiya harorati (XjX2) o'rtasidagi o'zaro ta'sirlar juda muhim (p<0.01)effect on="" tp="" content="" (table2).="" as="" ethanol="" concentration="" (x1)="" and="" extraction="" temperature="" (x)increase="" in="" the="" range="" of="" 40-61.80%="" and="" 25-44.30°c="" respectively,="" the="" tp="" content="" increases="" rapidly.="" however,="" beyond="" 61.80%and="" 44.30°c,="" tp="" content="" decreases="" slightly(figure="" 1a).="" however,="" the="" interaction="" of="" the="" extraction="" temperature="" and="" extraction="" time="" (x2x3)showed="" a="" highly=""><0.001) effect="" on="" tp="" content="" (table="" 2).="" as="" shown="" in="" figure="" 1b,="" tp="" content="" slightly="" improved="" with="" increasing="" extraction="" temperature="" (x2)and="" extraction="" time="" (x3)up="" to="" 44.37℃c="" and="" 15.77="" h,="" respectively,="" but="" diminished="" slowly="">

Ushbu ta'sirlar fenolik birikmalar glyukozidlar bilan tabiiy ravishda yuzaga keladigan qutbli molekulalar bo'lib, ularni suvda ko'proq eruvchan qiladi [23]. Fenolik birikmalarning ekstraktsiyasi erituvchining qutbliligiga kuchli bog'liq bo'lganligi sababli, suv-spirtli aralashmasi uni ekstraksiya qilishda faqat alkogolga qaraganda samaraliroqdir [20]. "O'xshash eriydi" tamoyiliga kelsak, etanol kontsentratsiyasining pasayishi erituvchining qutbliligini oshirishga olib keladi, bu esa TPni eritishga yordam beradi [15]. Shunga qaramay, yuqori etanol konsentratsiyasi fenolik birikmalarning erishini oldini olish orqali ekstraktsiya tezligiga ta'sir qilishi mumkin. Xuddi shunday, ekstraktsiya haroratining oshishi to'qimalarni yumshatish orqali maqsadli fenolik birikmalarning tiklanishini kuchaytirdi, hujayra devori yaxlitligini zaiflashtirdi, massa o'tkazuvchanligini va erituvchining o'simlik matritsasiga kirib borishini kuchaytirdi va eruvchanlik va diffuziya tezligini oshirdi; ammo, uzoq ekstraksiya muddati uchun juda yuqori harorat ularning degradatsiyasi ehtimolini oshirishi mumkin [23]. Bundan tashqari, uzoq ekstraktsiya davri kislorod va yorug'lik ta'sirini potentsial uzaytirishi aniqlandi, bu oxir-oqibatda fenolik birikmalar tomonidan tozalanishi mumkin bo'lgan erkin radikallarning paydo bo'lish xavfini oshiradi [23]. Shu sababli, ekstraksiyaning uzaytirilgan vaqti ekstraksiya hosildorligini maksimal darajada oshirishga yordam bermadi [24].

2.3.Extraktsiya o'zgaruvchilarning TF tarkibiga ta'siri

2-jadvaldan ko'rinib turibdiki, X va X3 ning chiziqli effektlari; X va X ning kvadratik effektlari; va X1X2 va XjXg ning o'zaro ta'siri TF tarkibiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi. Barcha muhim omillar orasida TF asosan p da X3, X, X, X, va X1X2 ga bog'liq.<0.001 followed="" by="" x="" andx1x3="" at=""><0.01. the="" fitted="" second-order="" polynomial="" of="" tf="" content="" is="" as="">

Muvofiqlik etishmasligining ahamiyatsiz qiymati (F-qiymati=1.13; p-qiymati=0.5024) taklif qilingan model oʻzgaruvchilarning fazoviy taʼsiriga yaxshi javob berishga mos kelishini koʻrsatdi. bashorat qilish (R2=0.9939; Adj R2= 0.9830) (2-jadval).

TF tarkibi uchun turli xil 3D javob sirt grafiklari yaratilgan va 1D-F-rasmda ko'rsatilgan. Etanol kontsentratsiyasi va ekstraktsiya haroratining (X1X2) o'zaro ta'siri sezilarli darajada ko'rsatdi (p<0.001) effect="" on="" tf="" content.="" from="" figure="" 1d,="" tf="" content="" increased="" at="" first="" and="" then="" decreased="" quickly="" with="" the="" rise="" of="" the="" two="" parameters,="" and="" a="" maximum="" tf="" content="" was="" achieved="" when="" ethanol="" concentration="" (xj)="" and="" extraction="" temperature="" (xo)were="" 61.89%="" and="" 44.23°c,="" respectively.="" this="" phenomenon="" is="" similar="" to="" tp,="" which="" might="" also="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" a="" rise="" in="" the="" extraction="" temperature,="" the="" solubility,="" extraction="" rate,="" and="" diffusion="" rate="" increase,="" which="" ultimately="" helps="" tf="" to="" dissolve="" insolvent="">

Xuddi shunday, etanol konsentratsiyasi va ekstraksiya vaqti (XIX3) o'rtasidagi o'zaro ta'sir xuddi shunday korrelyatsiyani ko'rsatdi (1F-rasm). Etanol konsentratsiyasi (Xj) va ekstraksiya vaqti (X3) ortishi bilan TF ning ekstraktsiya hosildorligi asta-sekin o'sib bordi. Javob rejasining o'rta nuqtasiga yaqin (X va X3 uchun mos ravishda 61,89 foiz va 15,81 soat) TF rentabelligi eng yuqori darajaga yetdi, lekin keyinchalik sekin pasaydi. Bu hodisa, ehtimol, Fikning diffuziya printsipining ikkinchi qonuni bilan bog'liq bo'lib, qattiq matritsadagi eritma konsentratsiyasi va erituvchi o'rtasidagi yakuniy muvozanat ma'lum bir vaqtdan keyin erishiladi va maqsadli birikmalarning ekstraktsiya hosildorligining sekinlashishiga olib keladi [26] .

2.4. Optimallashtirilgan shartlarni tekshirish

Optimallashtirishning maqsadi bir vaqtning o'zida eng yuqori TP va TF tarkibini ta'minlaydigan qazib olish sharoitlarini aniqlash edi. Optimallashtirishni amalga oshirish uchun dizayn ekspert dasturiy ta'minotidan foydalanilgan. BBD optimal etanol konsentratsiyasini, ekstraktsiya harorati va vaqtini E. fragilis bioaktiv birikmalarini olish uchun mos ravishda 61,93 foiz, 44,43 daraja va 15,84 soat bo'lishini taklif qildi. Ushbu optimal nuqtada taxmin qilingan TP va TF tarkibi mos ravishda 15,335 mg GAE/g dw va 2,972 mg OE/g dw edi (3-jadval). Modellarning bashorat qilish qobiliyatini tekshirish RSM dan olingan optimal sharoitlarda eksperimental tarzda amalga oshirildi. Olingan sharoitlarda tajribalar uch nusxada o'tkazildi va o'rtacha TP va TF tarkibi mos ravishda 14,98±0,29GAE/g DW va 2,92±0,09 QE/g dw edi. Tekshirilayotgan javoblarning eksperimental qiymatlari taqqoslanadigan va taxmin qilingan qiymatlar bilan mos edi, bu modellar kutilgan optimallashtirishni aks ettirish uchun etarli ekanligini tasdiqladi.

2.5. Ekstraksiya hosildorligi va fitokimyoviy tahlil

4-jadvalda E.fragilis CEE va uning fraksiyalarining ekstraktsiya hosildorligi ko'rsatilgan. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, turli fraksiyalardagi ekstraksiya hosildorligi 0,78 dan 10,6 foizgacha (w/wo) sezilarli darajada farq qiladi. 4-jadvalda ko'rsatilganidek, CEE(1{{14}) },6 foiz ) eng yuqori foizli rentabellikka ega, undan keyin WF (2,73 foiz), WBF (2,{16}}4 foiz), DMF (0,64 foiz) va EAF (0,93 foiz), HF (0,78 foiz) )eng past foizli hosildorlikka ega bo'ldi.

E. fragilis CEE va uning fraktsiyalarining TP tarkibi kalibrlash egri chizig'ining regressiya tenglamasi orqali aniqlandi (y {0}}.009x-0.{{ 25}}154; R2=0.9973) va quritilgan vaznning grammiga milligramm gallik kislota ekvivalentlarida (GAE) ifodalangan (4-jadval). Odatda, EAF eng yuqori TP tarkibiga ega (32,78±{29}},49 mg GAE/g DW), undan keyin WBF, DMF va CEE (25,02±1,01,19,21±0,22 va 14,98±0,29 mg GAE/g) DW), WF va HF esa eng past tarkibni taqdim etdi (mos ravishda 10,47±0,71 va 8,14±0,17 mg GAE/g DW). E. fragilis CEE va uning fraksiyalarining TF tarkibi alyuminiy xlorid kolorimetrik tahlil yordamida baholandi.quercetinas a standard (y=0.0295x+0.0361; R2=0.9986)(Table 4). Similar to the TP content, the same results were observed in the TF content with the highest and lowest content being detected in the EAF(10.50 ± 0.11 mg OE/g of DW)and HF(1.65± 0.13 mg OE/g of DW), respectively. The TF content is arranged as the following sequence: EAF>WBF>DMF> CEE>WF>HF. Qizig'i shundaki, EAFdagi TP va TF tarkibi CEEga qaraganda 2,18 va 3.59-baravar yuqori bo'lgan, bu Etil asetat CEE fraksiyasida ko'proq mavjud fenolik va flavonoid birikmalarini konsentratsiyalash uchun mos erituvchi bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. TP va TF tarkibiga oid maʼlumotlarimiz Yao va boshqalar maʼlumotlariga mos keladi. [27] ular Pyrola asarifolia dorivor oʻsimlikidan olingan EAF boshqa fraksiyalarga (neft efiri, n-butanol va suv) nisbatan eng yuqori darajada fenolik moddalar va flavonoidlarga ega boʻlganligini xabar qilganlar. Ularning tadqiqotida Bhardwaj va boshqalar. [28]shuningdek, Codonopsis clematidea dorivor oʻsimlikining boʻlinishida qutblanish kuchaygan bir nechta erituvchilardan (n-geksan, xloroform, etil asetat va n-butanol) foydalanganda ham xuddi shunday natijalar qayd etilgan. Ushbu mualliflarning fikriga ko'ra, EAF eng yuqori TP va TF tarkibiga ega, undan keyin n-butanol, xloroform va geksan. Fraksiyalar orasidagi ekstraktsiya hosildorligi, tarkibi va fenol birikmalarining tozaligidagi bu sezilarli o'zgarish, ehtimol, o'simlik materiallarida joylashgan tarkibiy qismlarning qutbliligi, ularning kimyoviy tuzilishi, polimerlanish darajasi va bir-biri bilan o'zaro ta'siri bilan bog'liq [29]. ].

2.6. In vitro antioksidant faollik

2.6.1.DPPH"To'ldirish faoliyati

DPPH" o'simlik ekstraktlarining antioksidant potentsialini o'rganish uchun keng qo'llaniladigan bir nechta barqaror erkin radikallardan biridir [30]. Ekstraktning tozalash potentsiali ko'pincha uning barqaror erkin radikallarni tozalash qobiliyati bilan bog'liq, bu uning vodorod berish qobiliyati bilan bog'liq. .

DPPH * erkin radikalida turli dozalarda CEE/fraksiyalarning, shuningdek, VC ning tozalash qobiliyati o'rganildi. 2A-rasmda ko'rsatilgandek, barcha fraktsiyalar dozaga bog'liq bo'lgan aniq DPPH · tozalash faolligini ko'rsatdi 0,1 dan 1 mg/ml gacha. 1 mg/ml dozada, 64,32,44,1{{22} },67,24,86.63,80,95,51,37 va 99,62 foiz DPPH" radikali mos ravishda CEE, HE, DMF, EAF, WBF, WF va VC tomonidan so'ndiriladi. Barcha fraktsiyalar orasida DPPHni tozalash uchun eng past IC50 EAF (0.116±{{30}}.015 mg/ml) tomonidan ko'rsatilgan. )WBF (0,175 ± 0.03 mg/mL), CEE (0.23 ± 0,065 mg/mL) va DMF (0,297) tomonidan davom ettiriladi ±0,044 mg/mL).WFand ​​HF nisbatan yuqori IC50 qiymatlarini (0,964±0,178 va 1,245±0,105 mg/ml) ko'rsatdi.

Observed differentials in the scavenging activities of the fractions against the DPPH*radical may be assigned to the structural characteristics and the number of phenolic compounds present in each fraction. Similar results were observed in the medicinal plant Liquidambar formosana Hance leaf since the EAF was more effective than the other fractions (dichloromethane, n-butanol, and water fractions)[31]. As a standard molecule, ascorbic acid (VC) displayed the lowest IC50 value (0.039 ±0.009 mg/mL) in comparison to all fractions. The scavenging potential is in decreasing order of VC>EAF> WBF>DMF >CEE>WF>HF.

DPPH radikalini tozalash uchun IC50 qiymati ikkala TP tarkibi bilan sezilarli darajada ijobiy korrelyatsiya qildi (r=0.963;p<0.01) and="" tf="" content(r=""><0.01)as presented="" in="" table="" 5.="" therefore,="" the="" discovered="" antioxidant="" activity="" suggested="" that="" eaf="" can="" be="" a="" source="" of="" numerous="" natural="" compounds="" with="" antioxidant="" properties="" that="" can="" act="" as="" hydrogen="" donors="" to="" terminate="" the="" process="" of="" oxidation="" by="" converting="" the="" free="" radicals="" to="" their="" stable="">

2.6.2.ABTS· plyus tozalash faoliyati

ABTS tozalash tahlili sof birikmalar va tabiiy ekstraktlarning antioksidant qobiliyatini aniqlash va tekshirish uchun indeks sifatida keng qo'llaniladi [32,33]. ABTS* xromoforining koʻk/yashil rangining 734 da oʻsimlik ekstrakti ishtirokida soʻnishi antioksidant faollikni koʻrsatishi mumkin.

2B-rasmda ko'rsatilganidek, ABTS* dagi CEE/fraksiyalarni tozalash egri chizig'i plyus konsentratsiya ortishi bilan o'sish tendentsiyasini ko'rsatdi. 1 mg/ml da CEE, HF, DMF, WBF, EAF, WF va VC ni tozalash darajasi 80.31,40.54,88,76, 9{{2{ {22}}}}.11,82,97, 67,36 va 94,90 foiz mos ravishda. Barcha kasrlar orasida minimal IC{26}} qiymati EAF (0,11{{30}}±0.014 mg/ ml) DMF (0.196±0.023 mg/mL), WBF (0.277±0,031 mg/mL), CEE (0,429) tomonidan davom ettiriladi ± 0,039 mg/ml) va WF (0,654± 0,043 mg/ml), HF esa eng yuqori ICs0 qiymatini (1,314± 0,104 mg/ml) ko'rsatdi. Birgalikda bu topilma Kaewseejan va Siriamornpun [29] bilan mos edi. VC (0,025 ± 0,005 mg / ml) ning inhibitiv qobiliyati bilan taqqoslash, CEE va uning fraktsiyalarining tozalash faolligi biroz zaif ekanligini ko'rsatdi.

5-jadvalda ko'rsatilganidek, ABTS radikalini tozalashning TP tarkibi bilan juda muhim korrelyatsiyasi (r=0.921;p<0.01), and="" a="" significant="" correlation="" with="" tf="" content="" (r=""><0.05), were="" shown.="" this="" finding="" confirms="" the="" results="" obtained="" for="" the="" dpph*scavenging="" assay,="" proving="" the="" capacity="" of="" eaf="" to="" scavenge="" free="">

2.6.3. H2O2 tozalash faoliyati

Oksidlanish stressining asosiy ishtirokchisi bo'lgan H2O2 membrana bo'ylab hujayralar orqali xabarchi molekula sifatida osongina tarqaladi [34]. Birgalikda H2O2 ning o'zi xavfli emas [35], lekin u Fenton reaktsiyasi orqali Fe2 bilan reaksiyaga kirishishi mumkin va yuqori reaktiv gidroksil radikalini (OH*) [36] keltirib chiqaradi. Shunday qilib, u biomolekulalar uchun ROS eng zararli hisoblanadi. Shuning uchun CCE va uning turli fraksiyalarining H2O2 ni tozalash qobiliyatini baholash kerak.

Scavenging activities of CEE/fractions, as well as standard antioxidants, were presented in Figure 2C. Notably, all extracts showed a strong scavenging activity on HO, which increased with the increase of sample doses ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Moreover, the H2O2 scavenging potential decreased in the order of EAF> WBF>DMF>CEE>WF>HF va 1.0 mg/mL da mos ravishda tozalash qobiliyati mos ravishda 84,56,75,24, 67,17,56,18, 50,19 va 34,95 foizni tashkil etdi, bu VC (98,03 foiz) dan ancha past edi.

Barcha fraktsiyalar orasida EAF eng past IC50 qiymatini ko'rsatdi (ICs0= 0.098±0,013 mg/ml) va u ko'rsatkichdan sezilarli darajada yuqori edi. VC (0,024±0,006 mg/ml). Bu biologik tizimlarda antioksidantlar sifatida hal qiluvchi rol o'ynashi keng ma'lum bo'lgan EAFda yuqori fenolik va flavonoid birikmalarining mavjudligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Yaqinda oʻtkazgan tadqiqotimizda biz E.fragilisdan olingan EAFning Tetrahymena pyriformisni H2O2-induktsiyasi natijasida kelib chiqqan oksidlanish zararidan himoya qilish qobiliyatini namoyish etdik [37].

Bizning ma'lumotlar tahlilimiz shuni ko'rsatdiki, DPPH" va ABTS* plus natijalariga kelsak, H2O2 tozalash uchun IC0 qiymatining kuchli ijobiy korrelyatsiyasi ikkala TP tarkibi bilan ham qayd etilgan (r=0.926; p<0.01) and="" tf="" content="" (r=""><0.01)(table 5).="" in="" their="" study,="" sroka="" and="" cisowski="" [38]="" reported="" also="" a="" positive="" correlation="" between="" phenolic="" compounds="" with="" ho2-scavenging="" ability.="" according="" to="" these="" authors,="" the="" ho2-scavenging="" depended="" strongly="" on="" the="" number,="" positions,="" and="" the="" model="" of="" substitution="" of="" oh="" bonded="" to="" the="" aromatic="" ring="" of="" phenolic="">

2.6.4. Quvvatni kamaytirish

Ekstraktning kamaytiruvchi kuchi uning potentsial antioksidant faolligining ko'rsatkichi bo'lib xizmat qiladi [39, A40]. Antioksidant potentsial antioksidantlarning temir xloriddagi temirni (Fe3) temirga (Fe2 plyus) kamaytirish qobiliyati bilan baholanadi. Umuman olganda, qaytaruvchi xususiyatlar o'simlik ekstraktlarida vodorod atomini berish orqali erkin radikallar zanjirini buzish orqali o'z ta'sirini ko'rsatadigan reduktonlarning mavjudligi bilan bog'liq [41].

2D-rasmda E. fragilis ekstraktining kamaytirish quvvati uchun doza-javob egri chizig'i ko'rsatilgan. Ma'lumki, 700 nm da absorbans qanchalik yuqori bo'lsa, qisqartirish qobiliyati shunchalik yuqori bo'ladi. Joriy tadqiqotda CEE va uning beshta fraktsiyasi konsentratsiyaga bog'liq holda sezilarli darajada pasayuvchi kuchni namoyish etdi.

EAF maksimal antioksidant faollikni ko'rsatdi (EC{0}},136± 0.{{10}}13 mg/ml) VC(EC{{4) bilan solishtirganda }}.083± 0.005 mg/mL. Bu WBF (EC50=0.180 ± 0,028 mg/mL), DMF tomonidan yaqindan kuzatildi. (EC50=0,319 ± 0,031 mg/mL), CEE (EC50=0,334±0,029mg/mL) va WF(EC50=0,398±0,064 mg/mL) .HF boshqa fraksiyalarga nisbatan minimal pasayuvchi quvvat faolligini (EC5s0 =0.626±0,068 mg/ml) ko‘rsatib, orqada qoldi. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, EAF samarali va kuchli kamaytiradigan quvvat faolligiga ega bo'lgan turli xil individual birikmalarni o'z ichiga olishi mumkin. Olimlar etil asetat ekstraktlari kuchli antioksidant bo'lib xizmat qilishini aniqladilar [42].

Quvvatni kamaytirish va TP va TF tarkibi o'rtasida ijobiy korrelyatsiya kuzatildi (r=0.975; p<0.01 and="" r="0.987;"><0.01; respectively).these="" correlations="" confirmed="" the="" contribution="" of="" phenolic="" compounds="" in="" the="" reducing="" power="">

2.6.5. Fosfomolibden tahlili

CEE ning TAC va uning fraktsiyalari, shuningdek VC fosfo-molibden tahlili yordamida baholandi va ECs0 sifatida ifodalandi, bu 0.5 absorbsiyani ta'minlovchi kontsentratsiyadir. Usul 695 nm da maksimal yutilish bilan kislotali pH da yashil fosfat/Mo (V) kompleksini hosil qilish uchun ekstraktlar orqali Mo(VI) ni Mo(V) ga kamaytirishga asoslangan edi [43].

As shown in Figure 2E, the total antioxidant capacity of CCE/fractions and VC correlated well with increasing concentrations in the range of 0.1 to 1 mg/mL.Of the CEE fractions, the ECs0 values ranged from 0.159±0.019 to 0.604±0.073 mg/mL, with a descending order of EAF>WBF> DMF> CEE >WF>HF(p<0.05), which="" indicates="" that="" eaf="" and="" hf="" had="" the="" highest="" and="" lowest="" antioxidant="" activity,="" respectively.="" this="" activity="" could="" be="" due="" to="" the="" presence="" in="" eaf="" of="" various="" phenolic="" compounds="" that="" might="" possess="" antioxidant="" activity.="" vc,="" which="" is="" the="" positive="" control,="" displayed="" the="" lowest="" ec5o="" value="" (0.095±="" 0.008="" mg/ml)="" in="" comparison="" to="" all="">

Umumiy antioksidant faollik va TP va TF tarkibi o'rtasida juda muhim korrelyatsiya kuzatildi (ikkalasi uchun r=0.978;p<0.01) and="" is="" shown="" as="" presented="" in="">

2.6.6. -karotin-linoleat model tizimi

-karotin-linoleik kislota modelida yuqori darajada to'yinmagan -karotin molekulalari linoleik kislota oksidlanishi natijasida hosil bo'lgan linoleat erkin radikallari tufayli tez rang o'zgaradi [44]. Antioksidantlar bilan qo'shimchalar linoleat erkin radikallarini zararsizlantirish orqali -karotin oksidlanishini minimallashtirishi va shu tariqa -karotinning sayqallashini inhibe qilishi mumkin [45].

Antioxidant activity of CCE/fractions and BHT, as measured by the β-carotene-linoleate model, are shown in Figure 2F. All tested extracts showed concentration-dependent scavenging activity. The EAF, which contained the highest amount of phenolics and flavonoids contents, showed a significant effect in inhibiting β-carotene bleaching, reaching 74.75%at a concentration of 1mg/mL. WBF, CCE, DMF, HF, and WF inhibited the oxidation of β-carotene by 51.61,58.12,50.09,41.39, and 31.66% respectively, at the same concentration. Overall, decreasing antioxidant activity was depicted as EAF> WBF> CEE>DMF>HF>WF.

EAF BHT (ICs {) bilan solishtirganda minimal IC50 qiymatini (IC50=0,127 ± 0.{{10}}42 mg/ml) ko‘rsatdi. {5}}.049 ± 0.001 mg/ml). WBF. CCE. DME. BIZ. va HF nisbatan yuqori IC{25}} qiymatlari 0,5±0,111 mg/ml, 0,998±0,101 mg/ml, 1,073±0,084 mg/ml,1,402±0,058 mg/ml va mos ravishda 2,209±0,081 mg/ml.

-karotin oksidlanishini tozalash va ikkala TP tarkibi (r= 0.850;p) o'rtasida ijobiy korrelyatsiya kuzatildi.<0.05) and="" tf="" content="" (r=""><0.05)(table 5).="" this="" result="" suggests="" that="" eaf="" may="" contain="" some="" antioxidants="" that="" can="" inhibit="" the="" formation="" of="" hydroperoxide="" and="" stop="" the="" radical-chain="" reaction="">

The involvement of reactive oxygen species (ROS) in several pathological situations has been growing recently. Bioactive compounds are gaining interest thanks to their potent antioxidant activity, but their complexity imposes the development of many methods to evaluate the antioxidant activity and the effectiveness of these chemical compounds. Thus, in this study, CEE and its fractions have been investigated for their antioxidant potential using six assays: DPPH, ABTS, H>O, RP, TAC va -karotin. Shunday qilib, biz CEE va uning fraktsiyalarining kuchli antioksidant faolligi yuqori tozalash faolligini ko'rsatdi va bu ularning fenolik kislota va gallik kislotasi, rutin va quercetin kabi flavonoidlardan tarkib topganligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin.